第5章分子发光分析法(新

1、5.1 概述5.2 荧光分析5.3 化学发光分析 处于高能态的分子或原子，当它们跃迁到基态或较低能态时，以光辐射形式释放能量，由此获得的发射光谱。通过测量分子的特征发射光谱来研究物质结构和化学组成的方法，称为分子发射光谱法或分子发光分析法。有荧光、磷光和化学发光等。 分子发光分析法包括光致发光、电致发光、化学发光和生物发光分析。 荧光：物质吸收光子能量而被激发，然后从激发态的最低振动能级回到基态时所发射的光称为荧光。 化学发光：是指化学反应过程中，发光物质吸收该反应所提供的化学能而被激发，并发射工作的现象。5.2.1 基本原理5.2.2 定量分析方法5.2.3 荧光仪器简介5.2.4 应用与示

2、例5.2.5 荧光分析新技术5.2 荧光分析5.2.1 基本原理图5-1 单重态和三重态的电子分布A基态；B激发单重态；C激发三重态5.2 荧光分析5.2.1 基本原理图5-2 荧光和磷光产生示意图吸收荧光磷光激发单重态激发三重态内转换振动驰豫系间跨越振动驰豫振动驰豫外转换基态5.2 荧光分析5.2.1 基本原理5.2 荧光分析5.2.1 基本原理蒽的激发光谱和荧光光谱5.2 荧光分析5.2.1 基本原理蒽的激发光谱和荧光光谱5.2 荧光分析5.2.1 基本原理蒽乙醇溶液激发光谱和不同激发波长下的荧光发射光谱/nm5.2 荧光分析5.2.1 基本原理吸收激发光的光子数发射荧光的光子数f5.2

3、荧光分析5.2.1 基本原理5.2 荧光分析5.2.1 基本原理OOnm510nm327Aemex，：维生素0.36 404 356 蒽0.29 321 286 萘0.11 278 205 苯/nm/nm femex，5.2 荧光分析5.2.1 基本原理1.0 0.2 苯ff芴联NOHNOMg8-羟基喹啉8-羟基喹啉镁 5.2 荧光分析5.2.1 基本原理5.2 荧光分析5.2.1 基本原理图5-5硫酸奎宁在不同波长激发下的荧光光谱和散射光谱5.2 荧光分析5.2.2 定量分析方法kcEclKIF03 . 20IIF5.2 荧光分析5.2.2 荧光仪器简介1. 无机化合物的分析(1) 直接荧光

4、法(2) 荧光猝灭法(3) 间接荧光法(4) 催化荧光法2. 有机化合物的分析(1) 脂肪族化合物的分析(2) 芳香族化合物的分析NHNOOOOOOHHHHOHOO利血平的结构式1. 时间分辨荧光分析2. 同步荧光分析3. 胶束增敏荧光分析4. 三维荧光光谱测定法5. 荧光免疫检测6. 磷光分析7. 联用技术5.3.1 基本原理5.3.2 化学发光反应的类型5.3.3 化学发光分析仪器5.3.4 化学发光分析技术的应用5.3.1 基本原理1. 化学发光反应的概念与条件hCC DCBA 条件：(1)反应必须快速释放足够大的能量，以引起电子激发；(2)反应历程要有利于激发态产物的形成；(3)激发态

5、分子以辐射跃迁方式而非释放热量的方式返回基态。 概念：某些化学反应体系中的发光物质吸收由反应快速释放的足够大的自由能而进入激发态，然后以辐射的形式将能量释放。5.3.1 基本原理5.3.1 基本原理frCLfrCL )()()(参加反应的分子数发射光子的分子数率和激发态分子的发光效激发态分子的化学效率率，它取决于生成又称化学发光总量子产化学发光效率：dtdctIdc/dtCLCL)( ：有如下关系，与间内发射的光子数表示化学发光强度以单位时率。光光谱和发光效应都有其特征的化学发定，故任一化学发光反由化学反应所决量的大小及光谱范围均化学发光效率、辐射能5.3.1 基本原理cdtdtdcdttIc

6、tItkcdtdcCLCLCLCL)( )( /化学发光强度积分。行定量，即对。常用发光总强度来进据此对待测物进行定量线性关系，值强度与待测物浓度呈成正比，即化学发光峰度与该时刻待测物浓时刻的即速率可表示为级反应，反应为常数，可视其为拟一故可认为发光试剂浓度质的实际浓度，测的浓度远低于发光物在化学发光反应中，被，5.3.1 基本原理5.3.2 化学发光反应的类型1液相化学发光2气相化学发光3异相化学发光4生物化学发光NHNHONH2OOOONH2O催化， OHOOONH2O+hvh22223NONOONOONO584nm)BBBBAOAOCL23（罗丹明罗丹明罗丹明罗丹明没食子酸1.2.3.5.3.2 化学发光反应的类型NSSNOOH+ATP+Mg2+ENSSNOOAMP+MgP2O7HOHONSSNOOCO2NSSNO*HOHO)562nm(CL1液相化学发光2气相化学发光3异相化学发光4生物化学发光5.3.2 化学发光反应的类型1液相化学发光2气相化学发光3异相化学发光4生物化学发光5.3.2 化学发光反应的类型1液相化学发光2气相化学发光3异相化学发光4生物化学发光nm)495(OHRCOOHFMN ORCHOFMNHCL2E