USP法定方法验证

1、QC方法验证2009.12目录目录 法定方法的验证法定方法的验证USPUSP与与ICH Q2ICH Q2（R1R1）之间的关系）之间的关系鉴别测试的方法验证鉴别测试的方法验证杂质测试的方法验证杂质测试的方法验证含量测定的方法验证含量测定的方法验证方法验证汇总方法验证汇总课程目的课程目的 明确验证的目的 区分验证和确认的区别 描述不同分析方法验证需考虑的条件 能够开展鉴定各种所需性质的实验 能够使用Excel分析验证实验的数据 理解新方法验证与替代正式方法的验证这两者之间统计学上的本质差别PART I“验证验证”的定义的定义“分析方法验证是一个通过实验室研究来证明程序的性能参数符合期望的分析应用

2、要求的过程”USP“分析方法验证的目的是显示分析方法适用于它所期望的应用目的” ICH“方法验证是一个阐述分析方法适合于其使用目的的过程” FDA “适合于它的使用目的适合于它的使用目的” 关于验证共同的主题验证：关键的第一步验证：关键的第一步 在验证开始阶段将待验证方法目的目的清晰的表达出来是十分必要的，例如： 无菌测试：“下列程序适用于确定医药产品是否如所宣称的那样是无菌的，并符合各论中设定的无菌测定要求” 下段中表述“这些药典方法不是设计用来保证各批产品无菌或已灭菌。相关产品灭菌或无菌过程的验证才是从根本上实现这一点的”“分析程序的目标应能被很清晰地被理解，因为它将主导哪些验证参数需要被

3、评估。” ICH验证实施条件的阐明验证实施条件的阐明 提供验证实施所需的条件是必要的，如果发现条件与方法所要求条件不一致时，应指出。 例如：生物技术衍生产品测试 全蛋白质测试（Bradford测试）一节中提到硅玻璃因和染料结合而不能使用。同样不同蛋白在相同量的条件下也会表现出不同的响应值。验证参数验证参数 Accuracy 准确性 Precision 精密度 Specificity 专属性 Detection Limit 检测限 Quantitation Limit 定量限 Linearity 线性 Range 范围“确认确认”的定义的定义 :“USP-NF所收载方法的使用者不需要验证这些方法

4、的准确性和可靠性，但需要确认这些方法在实际使用条件下的适应性”。 :“确认包括所涉及方法的性能参数，如那些在中描述的，是产生相关数据而不是重复验证目的” USP “出现在USP中的方法被认为已验证，对于法定方法，厂家必须阐明该方法在实际使用情况下的状态” FDA确认的一般要求确认的一般要求 “尽管在确认法定方法在真实条件下使用时的适应性不要求进行完整的再验证过程，列在表2中的一些分析参数可以在确认过程中使用” “特定方法的确认仅需要对被认为适宜的参数进行评估”小结小结 验证：“必须阐明方法适合于它使用目的的一个过程” 确认：“阐明通过已验证方法进行产品测试的条件确实适合于该已验证方法的过程”

5、待验证方法的目的应被清晰明确的阐述 验证实施的条件应明确提出 确认包括使用者决定哪些条件将被评估，选择适宜数据元素进行检查。PART II概述概述方法提交方法提交方法种类方法种类验证参数验证参数准确性准确性精密度（精密度（1）精密度（精密度（2）重现性）重现性精密度（精密度（3）专属性的定义（专属性的定义（1）专属性的定义（专属性的定义（2）检测限的定义检测限的定义定量限的定义定量限的定义线性的定义线性的定义范围的定义范围的定义其余的差别其余的差别指导原则的差别指导原则的差别各指导原则的差异：各指导原则的差异：1、 鉴别：鉴别：中检所（生物药）指导原则：专属性，耐用性通常需要验证；中检所（生物

6、药）指导原则：专属性，耐用性通常需要验证；FDAFDA指导原则：耐用性通常不需要验证，只需要验证专属性；指导原则：耐用性通常不需要验证，只需要验证专属性；中检所（化药）指导原则，中检所（化药）指导原则，ICH指导原则：专属性需要验证，耐用性的验证无明指导原则：专属性需要验证，耐用性的验证无明确指示。确指示。2、 杂质检查（定量实验）：杂质检查（定量实验）：FDA和和ICH指导原则：检测限度在有些情况下是需要验证的；指导原则：检测限度在有些情况下是需要验证的；中检所（生物药）指导原则：检测限度通常是不需要验证的；中检所（生物药）指导原则：检测限度通常是不需要验证的；中检所（化药）指导原则：无明确

7、指示。中检所（化药）指导原则：无明确指示。3 3、杂质检查（限度实验）：、杂质检查（限度实验）：FDA指导原则：耐用性在有些情况下是需要验证的；指导原则：耐用性在有些情况下是需要验证的；中检所（生物药）指导原则：耐用性通常是需要验证的；中检所（生物药）指导原则：耐用性通常是需要验证的；中检所（化药）指导原则，中检所（化药）指导原则，ICH指导原则指出对于耐用性的验证并没有明确指示。指导原则指出对于耐用性的验证并没有明确指示。4 4、含量测定：、含量测定：各指导原则基本统一，除了检测限度和定量限度外，其他各验证项目均需要验证。各指导原则基本统一，除了检测限度和定量限度外，其他各验证项目均需要验证

8、。PART III鉴别实验评估的要求鉴别实验评估的要求Specificity 专属性ICHSpecificity 专属性USP专属性专属性 1 “适当的鉴别测试应该能够区分可能共存的结构相似的化合物。需确证被分析的供试品呈正反应（可与已知的对照品比较），而不含被测成分的样品呈负反应。此外，结构相似或组分中的有关化合物也应呈负反应。选择这些潜在的干扰物质应该基于合理的科学判断，考虑有哪些干扰可能出现。”Q2(R1)专属性专属性 2 有些分析方法不具备足够的专属性 - 滴定法含量测定 - 对映体含量的非手性方法测试 - 通过紫外吸收进行的鉴别测试 推荐结合使用两种或更多的分析方法以达到充分的专属性

9、专属性专属性 3 对于阐述稳定性指示的方法来说，专属性有其重要。稳定性指示分析稳定性指示分析 “是能检测出原料药或制剂的性质随着时间的延长而出现变化的验证过的定量分析方法。它可以精确检出有效成分，而不受降解产物、工艺杂质、辅料或其他可能杂质的干扰。” FDA工业指导原则-分析步骤和方法验证，2000鉴别实验鉴别实验 1 正反应结果-比较已知的对照品与包含被分析成分的样品 - 已建立的测试方法 - 特征明显的标准品 负反应结果-不含被测组分的样品鉴别实验鉴别实验 2 对于结构相似或组分中的有关化合物呈负反应。 选择这些潜在的干扰物质应该基于合理的科学判断，考虑有哪些干扰可能出现。鉴别实验鉴别实验

10、 3USP各论中常采用多个方法进行鉴别测试各论中常采用多个方法进行鉴别测试 例如：双氯芬酸钠例如：双氯芬酸钠 A: 红外吸收 B: 色谱纯度测试中，双氯芬酸峰在测试溶液图谱中的保留时间与分离度溶液图谱中的一致 C: 灼烧残渣的焰色反应与钠一致红外吸收光谱（摘自红外吸收光谱（摘自） “待测样品红外谱图的最大吸收峰与经相似处理过的USP标准品的最大吸收峰波数一致。待测样品干燥条件需与相应的标准品规定的干燥条件一致，除非标准品另有规定或不需干燥。”保留时间保留时间需要注意以下重要的两点（摘自） “色谱保留时间是化合物表现的性质但不是特有的。待测品和标准品的保留时间一致可用作结构鉴定的一个特征，但仅靠

11、此一点不足以确认。” 同一个给定化合物的绝对保留时间在不同的谱图里可能是不一样的。钠（摘自钠（摘自） “含钠的化合物在无色的火焰中显示亮黄色”如果一切顺利如果一切顺利 若待测样品中包含适当的相似的化合物，且所有的测试结果一致（根据实际情况呈正反应或者负反应），则该鉴别测试方法的验证完成。注：相似化合物的选择要基于良好合理的科学判断。 不管用何种方法，要确保在验证方法里描述清楚有哪些相似化合物需要参与验证。你不需要验证所有可能的污染物。若生产/合成路线发生本质变化，鉴别测试部分则需要重新验证。假如进展不顺利假如进展不顺利 尝试使用不同的条件，检验这种方法是否有效。如果找不到使之有效的条件，就要尝

12、试其他的方法。 对于微生物方法经常性的事情就是改变所需微生物的生长条件，使其能适合法定方法的应用。结束语结束语 谨记，鉴别测试的最终目的是确保识别出被测组分。无论最终采用了一系列怎样的方法，必须能够在其他组分可能存在的情况下，识别出样品中被测组分。杂质定量检查方法杂质定量检查方法ICH：Specificity 专属性Accuracy 准确度Precision(all three aspects) 精密度（三个方面）Detection limit 检测限Quantitation limit 定量限Linearity 线性Range 范围 Robustness 耐用性验证内容验证内容USP：Spe

13、cificity 专属性Accuracy 准确度Precision(all three aspects) 精密度（三个方面）Detection limit 检测限Quantitation limit 定量限Linearity 线性Range 范围Robustness 耐用性注：注：ICH、FDA，检测限在有些情况下是需要验证的，检测限在有些情况下是需要验证的 ；SFDA指导原则，检测限通常是不需要验证的指导原则，检测限通常是不需要验证的 杂质限度检查方法杂质限度检查方法ICH：Specificity 专属性Detection limit 检测限Robustness 耐用性验证内容验证内容USP

14、：Specificity 专属性Detection limit 检测限Accuracy(may be required) 准确度(可能要求)Range(may be required) 范围(可能要求)Robustness 耐用性FDA指导原则：耐用性在有些情况下是需要验证的；指导原则：耐用性在有些情况下是需要验证的；SFDA指导原则：耐用性通常是需要验证的指导原则：耐用性通常是需要验证的 专属性专属性 1 专属性：专属性： 指有其他成分（杂质、降解物、辅料等）可能存在情况下采用的方法能准确测定出被测物的特性。 能反映该方法在有共存物时对供试物准确而专属的测定能力，是指该法用于复杂样品分析时受

15、到干扰程度的度量。专属性专属性 2 杂质检查专属性含义：杂质检查专属性含义： ICH Q2A “纯度检查：确保采用的分析方法可检出被分析物中杂质的准确含量，如有关物质、重金属、溶剂残留量等” USP “纯度检查：确保实施的所有分析方法能够准确检出被分析物的杂质含量（如有关物质检查、重金属限度、有机挥发性杂质）” SFDA化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则 “作为纯度检查，所采用的分析方法应确保可检出被分析物中杂质的含量，如有关物质、重金属、有机溶剂等”专属性专属性 3 色谱法和其他方法：附代表性图谱说明专属性，并应恰当地标明诸成分在色谱方法中，应在

16、一等程度上考察关键性的分离。关键性的分离-可通过两个洗脱程度最接近的化合物的分离度来证明专属性专属性 4 非专属性的含量测定方法可采用其他分析方法予以支持 例：rh-GH HPLC分子排阻法测定rh-GH含量，HPLC反相法测定相关物质 专属性专属性 5 有两种基本途径用来确定杂质检查方法的专属性有两种基本途径用来确定杂质检查方法的专属性有杂质或降解产物标准品没有杂质或降解产物标准品专属性专属性 6 杂质获得 - 可从历史数据获得降解物和杂质的信息 - 建立杂质和降解产物库并对其定性 - 可以获得足够的量 专属性专属性 7 当杂质可以获得时 - 杂质检查向原料药或制剂中加入适量的杂质证明杂质之

17、间以及杂质和样品中其它物质能够得到分离 专属性专属性 8 当杂质不能获得时 破坏性试验破坏性试验 高温、高湿、光照、酸破坏、碱破坏、氧化破坏 注意观察降解产物生成情况，分离度是否符合要求。注意掌握破坏条件，应使主成分产生10-30%降解。10%左右个案研究：破坏试验条件溶液置于0.05M盐酸（8小时）溶液置于0.02M氢氧化钠（8小时）溶液置于0.15%H2O2 （1.5小时）将样品溶液加热至100度（9小时）紫外光照射（14天） 专属性专属性 9 破坏实验 应将破坏前后检出的杂质情况进 行比较，比较前后检出的杂质个数和量；证明杂质之间以及杂质和样品中其它物质能够得到分离 峰纯度检测是很有用的

18、，它显示被测物色谱峰是单个还是多个成分(如二极管阵列、质谱)。 杂质检查的准确性杂质检查的准确性 1 准确性：对于杂质定量检查（非限度检查），有必要确定方法的准确性定义USP “用该方法测定的结果与真实值的接近的程度” ICH “用该方法测定的结果与被认可的常规真实值或参考值之间接近的程度”SFDA (化药) “准确度系指用该方法测定的结果与真实值或认可的参考值之间接近的程度。有时也称真实度。SFDA(生物药) 分析方法的准确性是指测定值与真实值或认可的参考值的一致性或接近程度。杂质检查的准确性杂质检查的准确性 2 准确性 - 当杂质可获得时在试样中加入杂质 - 当杂质不能获得时与参考方法比较

19、采用药品的回收率 杂质检查的准确性杂质检查的准确性 3 参见A.“准确性可通过加入已知量的被测物的回收率（%）计算得到B. 准确性可通过计算平均值和被认可的真实值的偏差得到，结果应含置信区间。” 杂质检查的准确性杂质检查的准确性 4%100APMR%100AMR空白回收试验：测定值（回收试验：测定值（M M）、空白、已知量）、空白、已知量A A的对照品测定的对照品测定回收率：回收率： 加样回收试验：测定值（加样回收试验：测定值（M M）、背景值（）、背景值（P P） 、 已已知量的加入的对照品（或标准品）的值（知量的加入的对照品（或标准品）的值（A A） 59回收率：回收率： 杂质检查的准确性

20、杂质检查的准确性 5回收实验回收实验杂质检查的准确性杂质检查的准确性 6加样回收实验加样回收实验杂质检查的准确性杂质检查的准确性 7 “ICH推荐，准确度的评价应涵盖所规定的范围，至少用3个不同浓度，并至少测定9次（例如，3个不同浓度样品，各测定3次）”杂质检查准确性参考接受标准：各浓度下的平均回收率均应在80.0%-120.0%之间，RSD应不大于10%。 精密度精密度1精密度 杂质定量测定要做精密度考察精密度是指在规定条件下，同一个均匀样品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。用偏差（d）、标准偏差(SD)、相对标准偏差(RSD)（变异系数CV）表示xxdi偏差偏差(d):(d): 标准

21、偏差标准偏差SD: 1)(2nxxSDi相对标准偏差相对标准偏差RSD: %100 xSDRSD64 精密度精密度2精密度精密度3 精密度应在方法规定的定量范围内求得 精密度可以从三个层次考察：重复性、中间精密度、重现性。 方法的精密度应包括从样品准备到最终测试结果中所有的变异来源重复性重复性重复性 重复性系指在同样的操作条件下，在较短时间间隔内，由同一分析人员测定所得结果的精密度。 重复性测定可在规定范围内， 用9次测定结果进行评价，制备3个不同浓度的试样，各测定3次，即33水平 或100的浓度水平，用至少测定6次的结果进行评价 杂质检查重复性接受标准：RSD15 中间精密度中间精密度中间精

22、密度：同一实验室，不同时间由不同分析人员用中间精密度：同一实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备所得结果的精密度（三人三机）。不同设备所得结果的精密度（三人三机）。接受标准：RSD20中间精密度中间精密度 中间精密度试验变动因素 - 分析人员 - 日期 - 设备 - （色谱柱） 中间精密度中间精密度 由变动因素影响的测试结果的重现性 HPLC重现性重现性重现性 指不同实验室之间不同分析人员测定结果的精密度 当分析方法将被法定标准采用时，应进行重现性试验。精密度和准确度精密度和准确度 精密度和准确度精密度和准确度 准确度一般以回收率（%）表示 精密度一般以RSD表示检测限检测限-杂质杂质1 检

23、测限：检测限： 有些杂质检查方法用于限度检查。这些方法的验证需要测定检测限 ：“检测限是指在实验条件下，被分析物能够被检测到的最低量，但不必准确定量。”检测限检测限-杂质杂质2：“对于非仪器分析方法，检测限一般通过对一系列有已知浓度被测物的试样进行分析，确定能被可靠检测出的最低浓度或量” “对于仪器分析法，也可采用非仪器分析方法中所描述的相似方法。但要注意这仅适用于没有背景噪音的仪器”检测限检测限 3在Q2(R1)中描述了两种测定仪器检测限的方法 根据信噪比 根据响应值的标准差和斜率 - 根据空白的标准偏差 - 根据标准曲线 检测限检测限 4信噪比法：一般以信噪比为3：1时相应的浓度或注入仪器

24、的量确定检测限。检测限检测限 5 根据响应值的标准差和斜率 检测限（DL）可表示为: DL=3.3 /S 其中， =标准偏差，S=斜率检测限检测限6 定量限定量限 1定量限：定量限：某些杂质检查方法用于定量。这些方法的验证需要进行定量限的测定“定量限是指在规定的实验条件下，试样中被测物能被定量测定的最低量，并且结果应具有可接受的精密度和准确度。”定量限定量限 2在Q2(R1)中描述了两种测定仪器定量限的方法 根据信噪比 根据响应值的标准差和斜率定量限定量限 3信噪比法：一般以信噪比为10：1时相应的浓度或注入仪器的量确定定量限。可接受标准：保留时间的相对标准差应不大于可接受标准：保留时间的相对

25、标准差应不大于2.0%2.0%，峰面积的相对标准差应不大于峰面积的相对标准差应不大于5.0%5.0%。定量限定量限 4 根据响应值的标准差和斜率 定量限（QL）可表示为 QL=10 /S 其中， =标准偏差，S=斜率定量限定量限5杂质杂质-线性线性线性：线性： “分析方法的线性是指在给定的范围内，直接得到的或经明确的数学转化得到的测试结果与被分析物的浓度成比例关系的能力。”杂质杂质-线性线性线性是定量测定的基础，杂质定量试验需要验证线性。线性应在分析需要的范围内进行评价。通过适宜的统计学方法 线性回归（y = mx + b） 相关系数，y轴截距（b），斜率（m）杂质杂质-线性线性 验收准则应权

26、衡科学的严谨性和实际的需要 线性- - r2最小值- 0.99到0.9999 - Y轴截距- 在标准溶液响应值的n%内，在统计学上 不显著 杂质杂质-线性线性 相关性- r2 0.990 Y轴截距- 小于标准响应值的20%，在统计学上不显著范围范围1 范围是指达到一定精密度、准确度和线性的条件下，测试方法适用的高、低限浓度或量的区间。 范围是规定值，在试验研究开始前应确定验证的范围。 范围范围2杂质测定范围： SFDA:应为被测杂质规定限度的20% ICH: 应为杂质报告水平至标准规定的120% - 对已知有异常功效、能产生毒性或不可预见的药理作用的杂质，检测/定量限应与杂质需控制的水平相当如

27、果用一个试验同时进行含量和纯度检查，且仅用100%的标准品，线性范围应覆盖报告水品至标准规定的120%范围范围390耐用性耐用性 耐用性系指测定条件发生小的变动时，测定结果不受影响的承受程度。 耐用性主要考察方法本身对于可变试验因素的抗干扰能力。开始研究分析方法时，就应考虑其耐用性。如果测试条件要求苛刻，则建议在方法中予以写明。 耐用性耐用性液相色谱的典型变动： 流动相pH（0.5) 流动相组成(有机相5%） 色谱柱（同一厂家的三个批号，或两个不同厂家（同固 定相和填充物，尺寸） 温度和流速(10%） 检测波长(5nm)气相色谱的典型变动： 色谱柱（同一厂家的三个批号，或两个不同厂家（同固定相

28、 和填充物，尺寸） 温度 流速耐用性耐用性 如果测试条件要求苛刻 ，则建议在方法中予以写明。PART VUSP Professional Education 含量含量 概要： 含量测定的定义 含量测定方法验证所涉及的性能参数 参数定义 参数实验设计 接受标准 实例分析USP Professional Education 含量定义含量定义 USP众多方法中，含量属于第一类。更详细的信息见： “含量是针对原料药主成分或者成品制剂中活性成分（包括防腐剂）的定量分析。” 含量测定目的:是得到供试品中被分析物的含量或效价的准确结果。USP Professional Education 含量测试方法含量测

29、试方法ICH： 准确度 精密度（重复性、 中间精密度、重现性） 专属性 线性 范围 验证内容验证内容性能参数性能参数USP： 准确度 精密度（重复性、 中间精密度、重现性） 专属性 线性 范围 USP Professional Education 专属性专属性摘自ICH Q2(R1)专属性是一种在其他成分（如杂质，降解物，辅料等）可能存在下，采用的分析方法能够正确鉴定，检出被分析物的特性。验证目的能准确地反映样品中待测物的含量或效力的精确结果。USP Professional Education 专属性专属性 在杂质可获得的情况下 对于主成分含量测定可在供试品中加入杂质或辅料，并与未加杂质和辅

30、料的供试品比较测定结果，考察测定结果是否受干扰。 在杂质或降解产物不能获得的情况下 可采用另一个经验证了的或药典方法进行比较，对比两种方法测定的结果。 也可采用破坏性试验（强光照射，高温，高湿，酸、碱水解及氧化），得到含有杂质或降解产物的试样，用两种方法进行含量测定，比较测定结果。 必要时进行色谱峰纯度检查，证明含量测定成分的色谱峰中不包含其他成分。 USP Professional Education Case Study 1 以HPLC含量测定法为例对以下色谱图的比较：稀释液药品X标准溶液强制降解条件下的样品溶液主峰峰纯度测试和光谱分析USP Professional Education

31、Case Study 2稀释液色谱图稀释液色谱图接受标准：在主要物质和杂质的保留时间处，稀释液不得有可检测出的峰USP Professional Education Case Study 3标准溶液色谱图标准溶液色谱图接受标准：已知杂质须能相互并与主峰分离（分离度不低于1.5）USP Professional Education Case Study 4 强制破坏实验溶于0.05M盐酸中（8小时）溶于0.02M氢氧化钠中（8小时）溶于0.15%双氧水中（1.5小时）加热样品溶液至100C（9小时）加热固体样品至120C（17小时）紫外光下（14天）USP Professional Educat

32、ion Case Study 5接受标准：降解产物须与主峰分离（分离度不低于1.5）强制降解条件下的样品溶液强制降解条件下的样品溶液USP Professional Education 专属性专属性 主峰峰纯度测试目的： 主峰上有明显的降解产物峰，测定方法不可行。 如未对峰纯度进行有效分析，则无法判定主峰中是否包含着降解产物峰。 对于制剂，如未对峰纯度进行有效分析，则无法判定辅料降解是否对测定结果有干扰。USP Professional Education 专属性专属性 主峰峰纯度检测方法（杂质结构确认）: 红外光谱 核磁共振谱 质谱 色谱USP Professional Education

33、Case Study 6接受标准：在强降解实验中，主峰峰纯度测试（相似度不低于980）主峰峰纯度测试结果主峰峰纯度测试结果USP Professional Education 线性线性 线性是指响应（测试结果）与试样中被测物质浓度直接呈正比关系的程度。 线性是定量测定的基础，涉及定量测定的项目，如杂质定量试验和含量测定均需要验证线性。 应在设计的测定范围内测定线性关系。USP Professional Education 线性线性 可用一贮备液经精密稀释，或分别精密称样，制备一系列被测物质浓度进行测定，至少制备5个浓度。以测得的响应信号作为被测物浓度的函数作图，观察是否呈线性，进行线性回归。

34、R2应0.99到0.9999 Y轴截距:在标准溶液相应值的n%内，在统计学上不显著 必要时，响应信号可经数学转换，再进行线性回归计算，并说明依据。 USP Professional Education 线性线性 以HPLC方法为例：在测量浓度范围内配制6份浓度不同的供试液，各浓度分别测定3次，每次做3个平行，分别测定其主峰的面积，计算相应的含量。以含量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归分析。 可接受的标准为：回归线的相关系数（R2）不得小于0.99，Y轴截距应在100标准浓度响应值的2以内。USP Professional Education 范围范围 范围系指能达到一定的精密

35、度，准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。 范围是规定值，具体的范围一般根据检测的目的而设定，并通常从线性研究中得到。定量测定的检测项目均需要对范围进行验证 范围通常用与分析方法的测试结果相同的单位（如百分浓度）表达。USP Professional Education 范围范围 验证时所设定的范围应至少包括了检定标准中规定的范围，如标准中规定成品浓度应为标示量的80120，则验证的范围可设定为标示量的70130。 确定范围的方法为：供试品浓度（含量）在范围末端（最高和最低限）和范围内时，均能获得满意的线性、精密度和准确性。USP Professional Education 准确

36、度准确度 USP- 该法测定所得的结果与真实值的接近程度。” ICH- “该法测定所得的结果与认可的常规真实值或标准值的接近程度。”USP Professional Education 准确度准确度 一定的准确度为定量测定的必要条件，因此涉及到定量测定的检测项目均需要验证准确度，如含量测定、杂质定量试验等。 方法：准确度应在规定的范围内建立，对于制剂一般以回收率试验来进行验证。也可在精密度，线性和专属性被确认后，推断得出。与已知准确性的方法进行比较（标准方法）。USP Professional Education 准确度准确度 试验设计需考虑在规定范围内，制备3个不同浓度的试样，各测定3次，即

37、测定9次，报告已知加入量的回收率（）。 具体的验证方法案例为：验证时一般要求分别配制浓度为80、100和120的供试品溶液各三份，分别测定其含量，将实测值与理论值比较，计算回收率。 可接受的标准为：各浓度下的平均回收率均应在98.0%-102.0%之间，9个回收率数据的相对标准差（RSD）应不大于2.0%。USP Professional Education 精密度精密度USP：“重复性指在同一个实验室，由同一个分析人员在较短时间间隔内使用同一个分析方法。”“中间精密度指实验室内部的偏差，在不同的时间，不同的分析人员，使用同一实验室的不同的仪器。”“在这里，重现性指在不同实验室使用同一个分析方法，如合作研究。”USP Professional Education 精密度精密度 同一均质供试品，经多次取样进行含量测定的结果之间的接近程度。 精密度应在方法规定的定量范围内求得。 精密度以相对标准方差（RSD）表示。USP Professional Education 精密度（重复性）精密度（重复性）ICH： 目的：确定在同一个试验