血液常用检查一

1、血液常用检查一、红细胞计数二、血红蛋白测定三、红细胞形态学检查四、白细胞计数五、白细胞分类计数六、白细胞形态学检查七、血小板计数八、血小板形态学检查红细胞计数红细胞计数一一血红蛋白测定血红蛋白测定二二红细胞形态检查红细胞形态检查三三教学目标 掌握红细胞计数、血红蛋白方法掌握红细胞计数、血红蛋白方法 熟悉红细胞形态特点熟悉红细胞形态特点 了解红细胞计数、血红蛋白测定临床意义了解红细胞计数、血红蛋白测定临床意义 造血干细胞造血干细胞 早幼红细胞早幼红细胞中幼红细胞中幼红细胞晚幼红细胞晚幼红细胞脱核脱核网织红细胞网织红细胞成熟红细胞成熟红细胞EPO红系祖细胞红系祖细胞原始红细胞原始红细胞（有丝分裂）

2、（有丝分裂）48h成熟红细胞成熟红细胞铁铁 铁代谢铁代谢原卟啉原卟啉 胆色素代谢胆色素代谢珠蛋白珠蛋白 蛋白质代谢蛋白质代谢衰老红细胞衰老红细胞120天天6 检测方法检测方法1.手工显微镜法手工显微镜法2.血液分析仪法血液分析仪法71.手工显微镜法手工显微镜法（1）血液分析仪的校正血液分析仪的校正 （2）适用基层医疗单位和分散就诊患者）适用基层医疗单位和分散就诊患者（3）费时、重复性差，准确性取决操作者技术水平）费时、重复性差，准确性取决操作者技术水平 2血液分析仪法血液分析仪法 操作简便、重复性好，适用大批量集中检测操作简便、重复性好，适用大批量集中检测 准确性取决于仪器性能及工作状态，定期

3、校准、质控准确性取决于仪器性能及工作状态，定期校准、质控8定义：用等渗稀释液将血液稀释一定倍数定义：用等渗稀释液将血液稀释一定倍数后，滴入改良后，滴入改良Neubauer计数板，在显微计数板，在显微镜下计数一定范围内的红细胞数，经换镜下计数一定范围内的红细胞数，经换算即可求得每升血液中的红细胞数。算即可求得每升血液中的红细胞数。 9计数板计数板压线细胞的计数原则压线细胞的计数原则：数左不数右数左不数右，数上不数下数上不数下12血细胞计数室各计数区的计数对象、范围和单位换算血细胞计数室各计数区的计数对象、范围和单位换算计数区域计数区域 计数细胞种类计数细胞种类 换算方式（以细胞个数换算方式（以细

4、胞个数/L计）计）四角四角4个大方格个大方格 白细胞白细胞 N/410稀释倍数稀释倍数106四角及中央四角及中央5个中方格个中方格 红细胞、血小板红细胞、血小板 N510稀释倍数稀释倍数106两侧计数室四角及中央两侧计数室四角及中央 嗜酸性粒细胞、体嗜酸性粒细胞、体 N稀释倍数稀释倍数1065个大方格共个大方格共10个大方格个大方格 腔液细胞、精子腔液细胞、精子13红细胞稀释液组成与作用红细胞稀释液组成与作用稀释液稀释液 组成组成 作用作用 备注备注Hayem液液 NaCl、Na2SO4、HgCl2 调节渗透压、增加红细调节渗透压、增加红细 胞悬浮性和防腐作用胞悬浮性和防腐作用高球蛋白血症时，

5、高球蛋白血症时，蛋白质沉淀致红蛋白质沉淀致红细胞凝集细胞凝集枸橼酸钠稀释液枸橼酸钠稀释液 NaCl、枸橼酸钠、甲醛、枸橼酸钠、甲醛 NaCl和枸橼酸钠调和枸橼酸钠调 节渗透压节渗透压 ，枸橼酸钠，枸橼酸钠 具抗凝，甲醛防腐具抗凝，甲醛防腐 生理盐水生理盐水 生理盐水生理盐水 急诊时用急诊时用1%甲醛生理盐水甲醛生理盐水 甲醛、生理盐水甲醛、生理盐水 急诊时用急诊时用141.准备计数板准备计数板2.加稀释液：加稀释液：2ml3.加血：加血：10l混匀混匀4.充池充池5.计数计数6.计算：红细胞数计算：红细胞数=N/5*25*10*200*106/L结果报告方式：结果报告方式：X. X1012/L

6、红细胞计数操作红细胞计数操作15成年：男性（成年：男性（45.5）1012/L 女性（女性（3.55.0）1012/L新生儿：新生儿： （6.07.0）1012/L16 1.分析前质量控制分析前质量控制 患者准备、标本采集、存储温度和时间患者准备、标本采集、存储温度和时间 2.分析中质量控制分析中质量控制 计数误差（技术误差和固有误差）、白细胞影响计数误差（技术误差和固有误差）、白细胞影响 3.分析后质量控制分析后质量控制 结合临床资料结合临床资料血红蛋白血红蛋白 ( (血色素，血色素， Hb Hb 或或 HGB) HGB) 组成组成珠蛋白：珠蛋白：4条，种属特异性条，种属特异性亚铁血红素：亚

7、铁血红素：4个，无种属特异性个，无种属特异性 珠珠Pr N N Fe N N 亚铁血红素结构示意图亚铁血红素结构示意图O2HbAHbA： 2 22 2 成人占成人占95%95%以上以上HbAHbA2 2： 2 22 2 成人约占成人约占2 23%3%HbF(HbF(胎儿胎儿Hb)Hb)：2 22 2 成人成人1%1%以下以下 每个每个 Hb Hb 分子由分子由 2 2 条条类肽链和类肽链和 2 2 条条非非 类肽链组成，每条珠蛋白肽链含类肽链组成，每条珠蛋白肽链含有有 1 1 个亚铁血红素个亚铁血红素HbOHbO2 2( (氧合血红蛋白氧合血红蛋白) )HbredHbred( (还原血红蛋白还

8、原血红蛋白) )HbCOHbCO( (碳氧血红蛋白碳氧血红蛋白) )Hi Hi ( (高铁血红蛋白高铁血红蛋白) )SHbSHb( (硫化血红蛋白硫化血红蛋白) )主要成分主要成分少量少量与氧结合与氧结合未结合未结合与与COCO结合结合FeFe2 2FeFe3 3与与S S结合结合21 氰化高铁血红蛋白氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法测定法 十二烷基硫酸钠血红蛋白（十二烷基硫酸钠血红蛋白（SDS-Hb）法）法 叠氮高铁血红蛋白叠氮高铁血红蛋白(HiN3)法法 碱羟血红蛋白法碱羟血红蛋白法 叠叠氮高铁氮高铁血红蛋白血红蛋白测定法测定法 溴代十六烷基三甲胺血红蛋白测定法（溴代十六烷基三甲胺血红蛋

9、白测定法（CTAB）一一. 原理原理HbHbCNCN氧化氧化HiCNHiCN为棕红色，最大吸收峰为棕红色，最大吸收峰540nm540nm。根据标本的吸光度可知根据标本的吸光度可知HbHb浓度。浓度。HiCNHiCNHiHi(HiCN(HiCN法法) )注：注：硫化血红蛋白硫化血红蛋白(SHb)(SHb)不能被转化不能被转化氰化钾氰化钾 0.05g0.05g高铁氰化钾高铁氰化钾 0.2g0.2g磷酸二氢钾磷酸二氢钾 0.14g0.14g非离子表面活性剂非离子表面活性剂 1.01.0 mlml蒸馏水蒸馏水 加至加至10001000 mlml二二. 试剂试剂HiCNHiCN转化液转化液( (文齐液文

10、齐液) ) 调调pH7.0pH7.07.47.4，置置棕色玻璃瓶棕色玻璃瓶中密封保存。中密封保存。氧化氧化调节调节pHpH促溶促溶, ,防混浊防混浊提供提供CNCN- -(HiCN(HiCN法法) )三三. 方法方法4.4.实际工作中，可用实际工作中，可用HiCNHiCN参考液，按生化方参考液，按生化方 法绘制标准曲线，或求出法绘制标准曲线，或求出K K值后计算。值后计算。 K KHbHb（g g）/A/A 1.1. 5.05.0 mlml HbHb转化液血转化液血20ul,20ul,混匀混匀, ,静置静置5min5min。2.2.分光光度计比色，波长分光光度计比色，波长540nm540nm，

11、以空白转化以空白转化 液调零，测定吸光度液调零，测定吸光度“A”A”。3.3.如用符合如用符合WHOWHO标准的光度计，则可据标准的光度计，则可据“A”A”直直 接计算接计算HbHb浓度。浓度。25 血红蛋白浓度计算公式：血红蛋白浓度计算公式： Hb(g/L)=AHb(g/L)=A?540540HiCNHiCN/44/4464458/64458/1 1000000251251 =A =A367.7367.7u A A?540540HiCNHiCN：测定管吸光度：测定管吸光度u 4444：毫摩尔消光系数：毫摩尔消光系数u 64458/64458/1 1000000：1mmol/L Hb1mmol

12、/L Hb溶液中所含溶液中所含HbHb克数克数u 251251为稀释倍数为稀释倍数三三. 方法方法4.4.实际工作中，可用实际工作中，可用HiCNHiCN参考液，按生化方参考液，按生化方 法绘制标准曲线，或求出法绘制标准曲线，或求出K K值后计算。值后计算。 K KHbHb（g g）/A/A 1.1. 5.05.0 mlml HbHb转化液血转化液血20ul,20ul,混匀混匀, ,静置静置5min5min。2.2.分光光度计比色，波长分光光度计比色，波长540nm540nm，以空白转化以空白转化 液调零，测定吸光度液调零，测定吸光度“A”A”。3.3.如用符合如用符合WHOWHO标准的光度计

13、，则可据标准的光度计，则可据“A”A”直直 接计算接计算HbHb浓度。浓度。氰化高铁血红蛋白标准曲线00.10.20.30.40.50.60.050.0100.0150.0200.0250.0Hb(g/L)A540Hb(g/L) A 50 0.128 100 0.265 150 0.385 200 0.523K=Hb/A = 500/1.301 = 384.32Hb=K A1.1.KCNKCN为剧毒药品为剧毒药品，防污染。，防污染。2.HiCN2.HiCN转化液不能存于塑料瓶中。转化液不能存于塑料瓶中。 否则否则CNCN- -下降，结果偏低。下降，结果偏低。3.3.分光光度计应定期校正并使用分

14、光光度计应定期校正并使用 配套的比色杯。配套的比色杯。4.4.标准曲线或标准曲线或K K值应值应定期校正定期校正。四四. 注意事项注意事项血红蛋白血红蛋白SDS-HbSDS-HbSDSSDS540nm血红蛋血红蛋白浓度白浓度吸光度吸光度 十二烷基硫酸钠血红蛋白（SDS-Hb）法HiCNHiCN法法SDS-SDS-HbHb法法优点：操作简便；显色快，结果稳定。优点：操作简便；显色快，结果稳定。缺点：氰化钾有剧毒；缺点：氰化钾有剧毒； 高白细胞或高球蛋白血症等可致浑浊；高白细胞或高球蛋白血症等可致浑浊； HbCOHbCO转化慢。转化慢。 参考方法参考方法优点：操作简单；结果稳定；无公害。优点：操作

15、简单；结果稳定；无公害。缺点：摩尔消光系数未确定；缺点：摩尔消光系数未确定； 破坏白细胞；破坏白细胞； 质量差异大质量差异大 。次选方法次选方法如何采用如何采用SDS-SDS-HbHb法进行血红法进行血红蛋白测定？蛋白测定？1.HiCN1.HiCN法绘制标准曲线法绘制标准曲线2.SDS-Hb2.SDS-Hb法标准工作曲线绘制法标准工作曲线绘制1)1)取取4 4份不同浓度抗凝血或溶血液用份不同浓度抗凝血或溶血液用HiCNHiCN法法 测定吸光度，并求出其测定吸光度，并求出其HbHb浓度。浓度。2)2)再用再用SDS-SDS-HbHb法测定法测定4 4份标本的吸光度。份标本的吸光度。3)3)以以4

16、 4份标本份标本HbHb浓度为横坐标浓度为横坐标，SDS-SDS-HbHb法测得法测得 的吸光度为纵坐标，绘制标准工作曲线。的吸光度为纵坐标，绘制标准工作曲线。32l 分析前质量控制：同红细胞计数分析前质量控制：同红细胞计数l分析中质量控制分析中质量控制技术误差：稀释倍数、分光光度计波长、光缝、比色杯技术误差：稀释倍数、分光光度计波长、光缝、比色杯光径需校正光径需校正HiCN转化液：棕色玻璃瓶转化液：棕色玻璃瓶HiCN参考液：关键参考液：关键质控物：室内质控质控物：室内质控l分析后质量控制：同红细胞计数分析后质量控制：同红细胞计数33 成年：男性：成年：男性：120120160g160gL L

17、； 女性：女性：llOllO150g150gL L。 新生儿：新生儿：170170200g200gL L。 老年老年(70(70岁以上岁以上) )： 男性：男性：9494122g122gL L；女性；女性8787112g112gL L。 34u 轻度贫血，成年男性轻度贫血，成年男性HbHb1 12 20g/L0g/L， 成年女性成年女性1 11 10g/L0g/L；u中度贫血中度贫血90g/L90g/L；u重度贫血重度贫血60g/L60g/L；u极度贫血极度贫血30g/L30g/L。35红细胞大小、形态、染色和内涵物的是否异常红细胞大小、形态、染色和内涵物的是否异常 1显微镜分析法显微镜分析法

18、 采用人工显微镜法血涂片染色观察，采用人工显微镜法血涂片染色观察， 是仪器法校准的参考方法和检测的复核方法。是仪器法校准的参考方法和检测的复核方法。 2 2计算机图像分析计算机图像分析 建立统计模型，以正常红细胞形态建立统计模型，以正常红细胞形态 为参比、作出分析，为参比、作出分析， 可用于与红细胞形态变化疾病的辅助诊断。可用于与红细胞形态变化疾病的辅助诊断。3. 3. 血液分析仪法血液分析仪法 提供红细胞数量及其他相关参数，对异提供红细胞数量及其他相关参数，对异 常结果报警，常结果报警， 但不能提供确切信息，需用镜检血涂片核实。但不能提供确切信息，需用镜检血涂片核实。1.有合格的血液细胞形态

19、检验人员有合格的血液细胞形态检验人员 2.2.选择细胞分布均匀区域进行镜检选择细胞分布均匀区域进行镜检 3.3.注意完整规范的检查顺序注意完整规范的检查顺序 低倍镜低倍镜 细胞分布和染色细胞分布和染色 油镜油镜 细胞形态细胞形态, ,是否存在其他异常细胞是否存在其他异常细胞 4 4减少人为影响因素减少人为影响因素 全片浏览全片浏览质量质量保证保证3839双凹圆盘形双凹圆盘形大小均一，大小均一，平均平均7.2m 7.2m (6.7-7.7m)(6.7-7.7m)；淡粉红色，淡粉红色，HbHb充盈良好，充盈良好，中央部位为生理性淡染区，中央部位为生理性淡染区，大小约为直径的大小约为直径的1 13

20、3；胞质内无异常结。胞质内无异常结。40外周血红细胞形态变化外周血红细胞形态变化 红细胞大小异常红细胞大小异常 小、大、巨、大小不均小、大、巨、大小不均 红细胞性状异常红细胞性状异常 球、椭圆、靶、口、镰、棘、球、椭圆、靶、口、镰、棘、钝锯齿、泪滴、裂片、形态不整钝锯齿、泪滴、裂片、形态不整 血红蛋白充盈度与着色异常血红蛋白充盈度与着色异常 低色素、高色素、低色素、高色素、嗜多色、着色不一嗜多色、着色不一 红细胞内异常结构红细胞内异常结构 嗜碱性点彩、豪焦小体、卡嗜碱性点彩、豪焦小体、卡波环、寄生虫波环、寄生虫 、疟色素、疟色素 红细胞排列异常红细胞排列异常 缗钱状形成、自凝现象缗钱状形成、自

21、凝现象 有核红细胞有核红细胞 1.红细胞大小异常红细胞大小异常 (1)小红细胞：小红细胞： 指指直径小于直径小于6m的红细胞。提示的红细胞。提示血红蛋白合成障碍，见于缺铁性贫血、珠蛋白生血红蛋白合成障碍，见于缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血。成障碍性贫血。 (2)大红细胞：指大红细胞：指直径大于直径大于l0m的红细胞，常见的红细胞，常见于巨幼细胞性贫血，也可见于溶血性贫血、恶性于巨幼细胞性贫血，也可见于溶血性贫血、恶性贫血等。贫血等。 (3)巨红细胞：指直径大于巨红细胞：指直径大于15m的红细胞。最常见的红细胞。最常见于巨幼细胞性贫血于巨幼细胞性贫血 。 (4)红细胞大小不均：指同一患者的红细

22、胞之间直径红细胞大小不均：指同一患者的红细胞之间直径相差一倍以上。大者红细胞直径可达相差一倍以上。大者红细胞直径可达12m，小者，小者直径仅直径仅2.5m。常见于严重的增生性贫血，巨幼细。常见于严重的增生性贫血，巨幼细胞性贫血时尤为明显胞性贫血时尤为明显 2红细胞形态异常红细胞形态异常 (1)球形细胞：该红细胞在血液中为球形，而在涂片球形细胞：该红细胞在血液中为球形，而在涂片上则显示细胞中心着色深浓，体积较小，有球形之上则显示细胞中心着色深浓，体积较小，有球形之立体感。立体感。 (2)椭圆形细胞：红细胞呈椭圆形、杆形，两端钝圆，椭圆形细胞：红细胞呈椭圆形、杆形，两端钝圆，长轴增大，短轴缩短。见

23、于遗传性椭圆形细胞增多长轴增大，短轴缩短。见于遗传性椭圆形细胞增多症、大细胞性贫血；偶见于缺铁性贫血、骨髓纤维症、大细胞性贫血；偶见于缺铁性贫血、骨髓纤维化、巨幼细胞贫血、镰形细胞性贫血。正常人血液化、巨幼细胞贫血、镰形细胞性贫血。正常人血液中约占中约占l，但不超过，但不超过15。 (3)靶形细胞：红细胞中心部位和细胞周缘染色较深，靶形细胞：红细胞中心部位和细胞周缘染色较深，其间为不染色的苍白区环，形如射击之靶其间为不染色的苍白区环，形如射击之靶 。常见于。常见于各种低色素性贫血，尤见于珠蛋白生成障碍性贫血、各种低色素性贫血，尤见于珠蛋白生成障碍性贫血、HbC病，也见于阻塞性黄疽、脾切除后状态

24、。病，也见于阻塞性黄疽、脾切除后状态。 (4)口形细胞：红细胞中央有裂缝，中心苍白区呈口形细胞：红细胞中央有裂缝，中心苍白区呈扁平状，颇似张开的口形或鱼口。常见于口形红细扁平状，颇似张开的口形或鱼口。常见于口形红细胞增多症，小儿消化系统疾患引起的贫血，也可见胞增多症，小儿消化系统疾患引起的贫血，也可见于乙醇中毒、某些溶血性贫血及肝病患者等。正常于乙醇中毒、某些溶血性贫血及肝病患者等。正常人偶见人偶见(4)。 (5)镰形细胞：红细胞外形呈镰刀状、线条状。镰状镰形细胞：红细胞外形呈镰刀状、线条状。镰状细胞贫血细胞贫血(HbS-S，HbS-C)和镰状细胞特性和镰状细胞特性(HbA-S)的血标本，在缺

25、氧的条件下，有大量镰细胞。的血标本，在缺氧的条件下，有大量镰细胞。 (6)棘形细胞：红细胞表面有针尖状突起，其间距不棘形细胞：红细胞表面有针尖状突起，其间距不规则，突起的长度和宽度可不一。多见于遗传性或规则，突起的长度和宽度可不一。多见于遗传性或获得性获得性-脂白缺乏症，可高达脂白缺乏症，可高达7080%；也可见；也可见于脾切除后、酒精中毒性肝脏疾病、尿毒症。于脾切除后、酒精中毒性肝脏疾病、尿毒症。 (7)新月形红细胞：红细胞残缺不全，体积大，状如新月形红细胞：红细胞残缺不全，体积大，状如新月形，直径约新月形，直径约20m 。见于阵发性睡眠性血红蛋。见于阵发性睡眠性血红蛋白尿。白尿。 (8)泪

26、滴形细胞：成熟红细胞形如泪滴或梨状。多见泪滴形细胞：成熟红细胞形如泪滴或梨状。多见于贫血、骨髓纤维化症时，偶见于正常人。于贫血、骨髓纤维化症时，偶见于正常人。 (9)缗钱状形成：红细胞表面电荷发生改变，而使缗钱状形成：红细胞表面电荷发生改变，而使其互相连接如缗钱状。其互相连接如缗钱状。 (10)裂红细胞：为红细胞碎片或不完整的红细胞。裂红细胞：为红细胞碎片或不完整的红细胞。见于弥散性血管内凝血、微血管病性溶血性贫血、见于弥散性血管内凝血、微血管病性溶血性贫血、重型珠蛋白生成障碍性贫血、巨幼细胞性贫血、严重型珠蛋白生成障碍性贫血、巨幼细胞性贫血、严重烧伤。正常人血涂片中裂片细胞小于重烧伤。正常人

27、血涂片中裂片细胞小于2%。 (11)红细胞形态不整红细胞形态不整 指红细胞形态发生各种明显改指红细胞形态发生各种明显改变，出现不规则的奇异形状，如豆状、梨形、蝌蚪变，出现不规则的奇异形状，如豆状、梨形、蝌蚪状、麦粒状和棍棒形等。此种细胞在某些感染或严状、麦粒状和棍棒形等。此种细胞在某些感染或严重贫血时多见，最常见于巨幼细胞性贫血。重贫血时多见，最常见于巨幼细胞性贫血。 3染色异常染色异常 (1)正常色素性：见于正常人外，还见于急性失血、正常色素性：见于正常人外，还见于急性失血、再生障碍性贫血和白血病等。再生障碍性贫血和白血病等。 (2)低色素性：红细胞的生理性中心浅染区扩大，提低色素性：红细胞的生理性中心浅染区扩大，提示其血红蛋白含量明显减少。常见于缺铁性贫血、示其血红蛋白含量明显减少。常见于缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血、铁粒幼细胞