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1、亲和层析原理亲和层析原理 1 2 3 M 1 2 3 M 样品加样品加30 uL30 uLMarkerMarker加加10 uL10 uL实验原理实验原理1. 凝胶孔径的不延续性凝胶孔径的不延续性2种孔径种孔径2. 缓冲液离子成分及缓冲液离子成分及pH值的不延续性值的不延续性2种种缓冲体系，缓冲体系，3种种pH：浓缩胶，：浓缩胶，pH6.8，蛋白，蛋白质分子的迁移率比质分子的迁移率比Cl- 低，比低，比Gly高。高。浓缩效应浓缩效应3. 电位梯度不延续性：快离子电位梯度不延续性：快离子 Cl- 后面后面构成高电位梯度区，慢离子构成高电位梯度区，慢离子Gly前面构成前面构成低电位梯度区，高电位梯

2、度和低电位梯度之低电位梯度区，高电位梯度和低电位梯度之间的地方，构成一个稳定而不断向阳极挪动间的地方，构成一个稳定而不断向阳极挪动的界面，蛋白质分子在界面处浓缩成一个狭的界面，蛋白质分子在界面处浓缩成一个狭小的中间层。小的中间层。浓缩效应浓缩效应试剂名称试剂名称加液量加液量ddH2O2.5 mL30% Acr-Bis（29:1）3.0 mL1.5 mol/L Tris-HCl（pH8.8）2.0 mL10% SDS75 uLTEMED（加速剂）（加速剂）10 uL10% AP（催化剂，最后加）（催化剂，最后加）75 uL总体积总体积7.5 mL试剂名称试剂名称加液量加液量ddH2O3.4 mL30% Acr-Bis（29:1）0.86mL1.5 mol/L Tris-HCl（pH6.8）0.62mL10%SDS50 uLTEMED20 uL10%AP（最后加）（最后加）50 uL总体积总

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