DNA的粗提取和鉴定实用教案

1、11 1）不同浓度）不同浓度NaClNaCl中中DNADNA溶解度不同。溶解度不同。 2 2）DNADNA与其他细胞成分在酒精中溶解度不同，与其他细胞成分在酒精中溶解度不同，DNADNA不溶于酒不溶于酒精，细胞中某些蛋白质则溶于酒精。精，细胞中某些蛋白质则溶于酒精。3 3）DNADNA和蛋白质对酶耐受性不同：酶的专一性和蛋白质对酶耐受性不同：酶的专一性蛋白酶水蛋白酶水解蛋白质。但是对解蛋白质。但是对DNADNA没有影响。没有影响。4 4）DNADNA和蛋白质对高温耐受性不同：蛋白质、和蛋白质对高温耐受性不同：蛋白质、DNADNA热稳定性热稳定性不同。大多数蛋白质不能忍受不同。大多数蛋白质不能忍

2、受60608080的高温，而的高温，而DNADNA在在8080以上才会变性。以上才会变性。5 5）DNADNA和蛋白质对洗涤剂耐受性不同：洗涤剂能够和蛋白质对洗涤剂耐受性不同：洗涤剂能够(nnggu)(nnggu)瓦解细胞膜，但对瓦解细胞膜，但对DNADNA没有影响。没有影响。提取DNA的原理包括(boku)DNA的 两个方面 溶解性和耐受性1.DNA的粗提取实验(shyn)原理第1页/共29页第一页，共30页。2鸡血红细胞、白细胞中都有细胞核，鸡血红细胞、白细胞中都有细胞核，含大量含大量(dling)(dling)的的DNA,DNA,既经济又易既经济又易取取 第2页/共29页第二页，共30页

3、。33 3、方法(fngf)(fngf)与过程 1).1).制鸡血细胞液0.1g/mL柠檬酸钠100mL活鸡鲜血180mL500mL烧杯中，玻棒搅拌，离心(lxn)或静置沉淀。离心(lxn)或静置后去掉上清液血浆血细胞第3页/共29页第三页，共30页。4关于DNA粗提取的实验材料的选择，也经过了多次实验结果的比较，最终选择鸡血做实验材料的原因是什么？请回答下列问题：（1）鸡血中红细胞 ，家鸡属于鸟类，新陈代谢旺盛，因而血液中 细胞数目较多，可以(ky)提供丰富的 （2）实验前由老师制备鸡血细胞液供同学们做实验材料，而不用鸡全血，主要原因是（3）生活在牧区的人们，采集羊、牛和马血比较方便，若他们

4、按实验要求完成实验步骤后，结果是 ，这是因为 ， 但若改用动物肝脏做实验材料，实验可以(ky)顺利进行，这是因为 。（4）若选用动物肝脏做实验材料，在提取之前，最好增加 程序，使组织细胞更易分离。含有完整(wnzhng)的、成形的细胞核红DNA量，所以(suy)一般采用鸡血 鸡的全血包括血浆和血细胞，血浆中无DNA，全血中除掉血浆后就是浓缩的血细胞液，DNA的相对含量提高了。在实验中很难提取到DNA哺乳动物成熟的红细胞中无细胞核，反靠白细胞和淋巴细胞中的少量DNA，在实验中很难提取到肝细胞中含有细胞核，并且肝组织容易被破坏，有利于肝细胞中含有细胞核，并且肝组织容易被破坏，有利于DNADNA的提

5、取的提取若使肝组织易分离，将肝细胞剪碎、研磨是一种简便易行的方法。第4页/共29页第四页，共30页。5提取细胞核物质：溶解核内DNA：在滤液中加2mol/Lmol/L的NaClNaCl溶液并搅拌，使染色质中DNADNA 与蛋白质分离，DNADNA充分溶解，析出DNA：DNA黏稠物再溶解：在烧杯中用2mol/Lmol/L的NaClNaCl溶液溶解DNADNA。提取较纯净的DNA：DNA的鉴定：取两试管各加2mol/L的NaClNaCl溶液，将DNA充分溶解于其 中一试管，然后向两试管加入二苯胺试剂，混匀沸水中加热 5min5min后冷却，可发现DNADNA与试剂反应使溶液呈现蓝色。滤取DNA黏稠

6、物：过滤含DNA的NaClNaCl溶液：用两层纱布过滤。2)实验方法(fngf)步骤： 在上述溶液中缓缓(hun hun)加入蒸馏水，并沿一个方向轻轻搅拌，出现丝状物；当丝状物不在增加时，停止加水（此时NaCl溶液的浓度相当于0.14mol/L）。 用多层纱布(shb)过滤，含DNA的粘稠物留在纱布(shb)上。 滤液中含有DNA。所得的滤液体积分数为95%的冷却酒精50mL，用玻棒沿一个方向轻缓搅拌，溶液中（析出）出现乳白色丝状物，用玻棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。利用细胞吸水破裂，细胞核内物质释放出来，后用纱布过滤取其滤液。血细胞在蒸馏水中易吸水而导致细胞膜和核膜的破裂，据此可得

7、出含核DNADNA的溶液。第5页/共29页第五页，共30页。6鉴定(jindng)时蓝色的深浅与溶液中DNA的含量多少有关。自变量你能采用其他方法对你能采用其他方法对DNADNA进行鉴定吗？进行鉴定吗？洋葱的鳞片叶表皮细胞洋葱的鳞片叶表皮细胞鉴定所用的试剂是鉴定所用的试剂是二苯胺二苯胺或或甲基绿甲基绿。用用二苯胺二苯胺须加热。用须加热。用甲基绿不用水浴甲基绿不用水浴加热。加热。第6页/共29页第六页，共30页。7第7页/共29页第七页，共30页。8第8页/共29页第八页，共30页。9第9页/共29页第九页，共30页。10下图为下图为“DNA“DNA粗提取和鉴定粗提取和鉴定”实验的相关操作实验的

8、相关操作(cozu)(cozu)。这些操作。这些操作(cozu)(cozu)目的正确的是目的正确的是（）A.A.是洗涤血细胞，去除血细胞表面的杂质是洗涤血细胞，去除血细胞表面的杂质(zzh)(zzh)B.B.是溶解是溶解DNADNA，去除不溶于酒精的杂质，去除不溶于酒精的杂质(zzh)(zzh)C.C.是溶解是溶解DNADNA，去除不溶于，去除不溶于2 mol/L NaCl2 mol/L NaCl溶液的杂质溶液的杂质(zzh)(zzh)D.D.是稀释是稀释NaClNaCl溶液，去除不溶于低浓度溶液，去除不溶于低浓度NaClNaCl溶液的杂质溶液的杂质(zzh)(zzh)是释放是释放(shfng

9、)(shfng)核物质核物质是提纯是提纯DNADNA，去除溶于酒精，去除溶于酒精的杂质，的杂质，稀释稀释NaClNaCl溶液，析出溶液，析出DNADNA。C第10页/共29页第十页，共30页。11甲、乙两图为甲、乙两图为“DNA“DNA的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定”实验中涉及实验中涉及(shj)(shj)的两个的两个操作装置图。相关叙述正确的是操作装置图。相关叙述正确的是 甲甲 乙乙A A图甲的烧杯和图乙的试管中所用溶剂都为图甲的烧杯和图乙的试管中所用溶剂都为NaClNaCl溶液，但两者浓溶液，但两者浓度不同度不同B B图乙试管经少许加热后即可观察到一支试管中的溶液明显变蓝，图乙试管经少许加热

10、后即可观察到一支试管中的溶液明显变蓝，另一支试管中的溶液不变蓝另一支试管中的溶液不变蓝C C图甲操作需用玻棒迅速搅拌以使图甲操作需用玻棒迅速搅拌以使DNADNA成为絮状沉淀并缠绕在玻成为絮状沉淀并缠绕在玻棒上棒上D D图乙操作中所用的二苯胺需现配现用以达到较好的鉴定效果图乙操作中所用的二苯胺需现配现用以达到较好的鉴定效果D第11页/共29页第十一页，共30页。12试剂名称试剂名称鉴定物质鉴定物质颜色反应颜色反应温度条件温度条件还原性糖还原性糖如葡萄糖如葡萄糖脂脂 肪肪蛋白质蛋白质DNADNA淀淀 粉粉 砖红色砖红色(hngs)沉沉淀淀蓝色橘黄色橘黄色红色红色(hngs)紫色紫色蓝紫色蓝紫色加热

11、加热加热加热斐林试剂斐林试剂班氏试剂班氏试剂苏丹苏丹IIIIII苏丹苏丹IVIV双缩脲试剂双缩脲试剂二苯胺试剂二苯胺试剂碘液碘液第12页/共29页第十二页，共30页。13植物细胞需要植物细胞需要(xyo)(xyo)先用洗涤剂（洗发香波、沐浴液、先用洗涤剂（洗发香波、沐浴液、洗洁精等）溶解细胞膜。洗洁精等）溶解细胞膜。 洗涤剂可以瓦解细胞膜的原因是：洗涤剂可以瓦解细胞膜的原因是：洗涤液中含有十二烷基硫酸钠和碱，洗涤液中含有十二烷基硫酸钠和碱，它们可使细胞膜破裂，蛋白质变性，它们可使细胞膜破裂，蛋白质变性，使蛋白质与使蛋白质与DNADNA分离开来。利于分离开来。利于(ly)DNA(ly)DNA的释

12、放。的释放。 动物细胞膜是不用试剂（洗涤剂）破动物细胞膜是不用试剂（洗涤剂）破坏的，因为动物细胞膜外面没有细胞坏的，因为动物细胞膜外面没有细胞壁的保护，放在清水中自然壁的保护，放在清水中自然(zrn)(zrn)的就会吸水而胀破，释放出其中的的就会吸水而胀破，释放出其中的DNADNA等物质。等物质。 第13页/共29页第十三页，共30页。14方法方法(fngf)(fngf)步骤步骤1 1、将、将30g30g香蕉或菜花切碎，放入研钵中。向研钵中加香蕉或菜花切碎，放入研钵中。向研钵中加入入2g2g氯化钠，研磨氯化钠，研磨(ynm)(ynm)直至成半流体状。直至成半流体状。3 3、将混合液用两层纱布过

13、滤，向滤液、将混合液用两层纱布过滤，向滤液(ly)(ly)中中加入预冷的加入预冷的10ml10ml乙醇溶液，静置，可产生絮状的乙醇溶液，静置，可产生絮状的DNADNA。4 4、取两支试管，分别加入、取两支试管，分别加入5ml5ml生理盐生理盐水，将水，将DNADNA挑至其中一支试管中，挑至其中一支试管中，轻轻搅拌使其溶解。轻轻搅拌使其溶解。2 2、向研钵中加入、向研钵中加入10ml10ml蒸馏水或凉开水，搅拌。蒸馏水或凉开水，搅拌。然后加入然后加入10ml10ml洗涤剂洗涤剂，轻轻搅拌。，轻轻搅拌。第14页/共29页第十四页，共30页。1520072007年高考生物试题年高考生物试题: : 在

14、某些深海鱼中发现的抗冻蛋白基因，该对提高农作物的抗寒能力有较好的应用价值，在某些深海鱼中发现的抗冻蛋白基因，该对提高农作物的抗寒能力有较好的应用价值，该基因可以从这些鱼的该基因可以从这些鱼的DNADNA中扩增得到。试述在提取和纯化中扩增得到。试述在提取和纯化DNADNA时影响提纯效果的因素时影响提纯效果的因素及其依据及其依据(yj)(yj)。（列举两点）。（列举两点） 选择NaCl溶液的合适浓度，利用(lyng)DNA和其它杂质在不同NaCl溶液中溶解 度不同的特性，达到分离目的；加人一定量酒精，使部分蛋白质杂质溶解于酒精， 与DNA分离；加人蛋白酶，除去蛋白质杂质的干扰；控制DNA提取的温度

15、，使大多数蛋白质杂质变性。第15页/共29页第十五页，共30页。161.如果用棉花植株作为实验材料做DNA的粗提取与鉴定实验，请你说出可能用到的二种化学试剂名称(mngchng)，并说出这种试剂在该实验中的用途。（4分） 氯化钠溶液：不同浓度的NaCl溶液，能使DNA溶解或析 出，从而起到提取DNA的作用(zuyng)； 95%乙醇：DNA不溶于酒精，可以用于提取出含杂质较少的DNA；二苯胺：作为鉴定DNA的试剂；洗涤剂：能溶解细胞膜，有利于细胞内DNA的释放（答出每种试剂的名称和用途得2分）。第16页/共29页第十六页，共30页。172 2：下列：下列(xili)(xili)图示中能反映图示

16、中能反映DNADNA溶解度与溶解度与NaClNaCl溶液浓度溶液浓度(mol/L)(mol/L)之间的关系的是（之间的关系的是（ ）C C0.140.14DNADNA溶解度溶解度0.140.140.140.140.140.14DNADNA溶解度溶解度DNADNA溶解度溶解度DNADNA溶解度溶解度A AB BC CD DNaClNaCl浓度浓度NaClNaCl浓度浓度NaClNaCl浓度浓度NaClNaCl浓度浓度第17页/共29页第十七页，共30页。18C0.14DNA析出量析出量0.140.140.14DNA析出量析出量DNA析出量析出量DNA析出量析出量ABDNaCl浓度浓度NaCl浓度

17、浓度NaCl浓度浓度NaCl浓度浓度3：下列图示中能反映：下列图示中能反映DNA析出量与析出量与NaCl溶液浓度溶液浓度(mol/L)之间的关系的是之间的关系的是 （ ）B溶解度与析出量的关系(gun x)是相反第18页/共29页第十八页，共30页。194.4.江苏有一道凉菜江苏有一道凉菜白斩鸡，鸡肉嫩而不韧、味美鲜香。其加白斩鸡，鸡肉嫩而不韧、味美鲜香。其加工过程中添加了从木瓜中提取的酶制成的工过程中添加了从木瓜中提取的酶制成的“嫩肉粉。嫩肉粉。”下列有关下列有关嫩肉粉的叙述中，正确的是嫩肉粉的叙述中，正确的是( () )A A“嫩肉粉嫩肉粉”可能是通过催化细胞间的纤维素水解而实现可能是通过

18、催化细胞间的纤维素水解而实现“嫩肉嫩肉”的的B B与高温与高温(gown)(gown)蒸煮相比，蒸煮相比，“嫩肉粉嫩肉粉”是通过降低反应活化能是通过降低反应活化能而实现而实现“嫩肉嫩肉”的的C C“嫩肉粉嫩肉粉”应在蒸煮鸡肉时加入，才能实现应在蒸煮鸡肉时加入，才能实现“嫩肉嫩肉”D D“嫩肉粉嫩肉粉”是一种化工产品，不利于人体健康，实际应用中能是一种化工产品，不利于人体健康，实际应用中能少则少、能无则无少则少、能无则无B第19页/共29页第十九页，共30页。205.5.（0909江苏四市）下列操作可以江苏四市）下列操作可以(ky)(ky)达到目的的选项是达到目的的选项是选项选项 操作操作 目的

19、目的A A溶解海藻酸钠时用大火加热溶解海藻酸钠时用大火加热 海藻酸钠可以快速溶解海藻酸钠可以快速溶解 B B将装有蛋白质粗制品的透析袋将装有蛋白质粗制品的透析袋（玻璃纸制成）放入透析液中（玻璃纸制成）放入透析液中 蛋白质与其他小分子化蛋白质与其他小分子化合物分离合物分离 C C在在DNADNA粗提取实验中，鸡血中加粗提取实验中，鸡血中加入蒸馏水入蒸馏水 稀释血液，防止凝固稀释血液，防止凝固 D D洋葱根尖解离后漂洗洋葱根尖解离后漂洗 使细胞分散，利于观察使细胞分散，利于观察 B微火加热并不断微火加热并不断(bdun)搅拌，其目的是防止海藻酸钠焦煳搅拌，其目的是防止海藻酸钠焦煳促使促使(csh)

20、血细胞破裂血细胞破裂防止根尖过分解离，对染色造成影响。防止根尖过分解离，对染色造成影响。因玻璃纸是半透膜，所以将装有蛋白质粗制品的透析袋（玻璃纸制成）放入透析液因玻璃纸是半透膜，所以将装有蛋白质粗制品的透析袋（玻璃纸制成）放入透析液中，可以将蛋白质与其他小分子化合物分离。中，可以将蛋白质与其他小分子化合物分离。第20页/共29页第二十页，共30页。216.6.在在“DNA“DNA粗提取与鉴定粗提取与鉴定”实验中，将含有一定杂质的实验中，将含有一定杂质的DNADNA丝丝状物分别放入体积状物分别放入体积(tj)(tj)为为2mL2mL的四种溶液中，经搅拌后过的四种溶液中，经搅拌后过滤，获得滤，获得

21、4 4种滤液，含种滤液，含DNADNA较少的是较少的是A A滤液滤液E BE B滤液滤液F F C C滤液滤液G DG D滤液滤液H H 1 蒸馏水中蒸馏水中搅拌后过滤搅拌后过滤滤液滤液E 2 2molL的的NaCl溶液溶液搅拌后过滤搅拌后过滤滤液滤液F 3 O.14molL的的NaCl溶液中溶液中搅拌后过滤搅拌后过滤滤液滤液G 4 冷却的冷却的95的酒精溶液中的酒精溶液中搅拌后过滤搅拌后过滤滤液滤液HCD7 7、欲使溶有、欲使溶有DNADNA的的2mol/L2mol/L的的NaClNaCl溶液溶液(rngy)(rngy)中的中的DNADNA析出，析出，最有效的办法是最有效的办法是A A 加蒸

22、馏水加蒸馏水 B B 加矿泉水加矿泉水 C C 加清水加清水 D D 加生理盐水加生理盐水第21页/共29页第二十一页，共30页。228、与析出DNA粘稠物有关的叙述(xsh)，不正确的是（多选）A 操作时缓慢滴加蒸馏水，降低DNA的溶解度B 操作时用玻棒轻缓搅拌以保证DNA分子的完整C 加蒸馏水可以同时降低DNA和蛋白质的溶解度D 当丝状粘稠物不再增加时，NaCl溶液的浓度可以认为是0.14mol/LE.改变NaCl溶液的浓度只能使DNA溶解而不能使其析出9、下列与DNA粗提取有关描述正确的是 （ ） A、 DNA能够溶解在一定浓度的NaCl溶液中 B、 DNA能够溶解在质量分数95%冷酒精

23、(jijng)中C、 DNA在0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度最高 D、 DNA只能溶解在2mol/L的NaCl溶液中A第22页/共29页第二十二页，共30页。2310.10.下列操作中，对下列操作中，对DNADNA的提取量影响较小的是的提取量影响较小的是 A.A.使鸡血细胞在蒸馏水中充分破裂，放出使鸡血细胞在蒸馏水中充分破裂，放出DNADNA等核物质等核物质B.B.搅拌时，要用玻璃棒沿一个方向轻缓搅动搅拌时，要用玻璃棒沿一个方向轻缓搅动C.C.在析出在析出DNADNA黏稠物时，要缓缓黏稠物时，要缓缓(hun hun)(hun hun)加蒸馏水，加蒸馏水，直至溶液中黏稠物不再增多直至溶

24、液中黏稠物不再增多D.D.在用酒精沉淀在用酒精沉淀DNADNA时，要使用冷酒精，甚至再将混合时，要使用冷酒精，甚至再将混合液放入冰箱中冷却液放入冰箱中冷却解析：在B所述的操作中，可以保证DNA分子的完整性，但不影响提取量。除了A、C、D 及在DNA的溶解和再溶解时，要充分搅拌影响DNA的提取量外，使用塑料器皿也可以减少DNA在操作中的损失(snsh)。因为塑料制品的性质相对比较温和,所以比金属等其他的制品好一些.对DNA的损伤也就小一些因为DNA容易与玻璃制品粘连 答案(d n)：B 第23页/共29页第二十三页，共30页。2411.11.（多选）下表是关于（多选）下表是关于DNADNA粗提取

25、与鉴定粗提取与鉴定(jindng)(jindng)实验中所使用实验中所使用的材料、操作及其作用的表述。正确的是（的材料、操作及其作用的表述。正确的是（ ）试剂试剂操作操作作用作用A A柠檬酸钠溶液柠檬酸钠溶液与鸡血混合与鸡血混合防止血液凝固防止血液凝固B B蒸馏水蒸馏水与鸡血细胞混合与鸡血细胞混合保持细胞形状保持细胞形状C C蒸馏水蒸馏水加入到溶解有加入到溶解有DNADNA的的NaClNaCl中中析出析出DNADNA丝状物丝状物D D冷却的酒精冷却的酒精加入到过滤后加入到过滤后DNADNA的的NaClNaCl中中产生特定的颜色反应产生特定的颜色反应AC第24页/共29页第二十四页，共30页。2

26、512.12.下列关于下列关于DNADNA粗提取与鉴定的说法正确的是粗提取与鉴定的说法正确的是( ) ( ) A A、氯化钠的浓度越低，对、氯化钠的浓度越低，对DNADNA的溶解度越大的溶解度越大B B、人血也可代替鸡血进行实验、人血也可代替鸡血进行实验C C、柠檬酸钠的主要、柠檬酸钠的主要(zhyo)(zhyo)作用是加速血细胞破裂作用是加速血细胞破裂D D、 DNA DNA不能溶于酒精尤其是冷酒精不能溶于酒精尤其是冷酒精D防止(fngzh)凝血13.蛙的红细胞、鸡的红细胞都有细胞核和各种细胞器，哺乳动物成熟的红细胞没有细胞核和各种细胞器，它们的呼吸方式(fngsh)是什么?蛙的红细胞、鸡的

27、红细胞都是正常的细胞蛙的红细胞、鸡的红细胞都是正常的细胞, ,进行进行的是的是有氧呼吸有氧呼吸. .哺乳动物成熟的红细胞哺乳动物成熟的红细胞是进行无氧呼吸的。是进行无氧呼吸的。第25页/共29页第二十五页，共30页。2616.16.实验实验(shyn)(shyn)中中NaClNaCl的物质的量浓度为的物质的量浓度为2 mol2 molL L和和0.14 mol0.14 molL L对对DNADNA有何影响有何影响? ?15.15.在在DNADNA的粗提取的粗提取(tq)(tq)实验过程中，两次向实验过程中，两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是烧杯中加入蒸馏水的作用是( )( )。A.A.稀释血液、冲洗样品稀释血液、冲洗样品B.B.使血细胞破裂、降低使血细胞破裂、降低NaClNaCl浓度使浓度使DNADNA析出析出C.C.使血细胞破裂、增大使血细胞破裂、增大DNADNA溶解量溶解量 D.D.使血细胞破裂、提取使血细胞破裂、提取(tq)(tq)含杂质较少的含杂质较少的DNADNAB答：前者答：前者(qin zh)(qin zh)是溶解是溶解DNADNA