ABO血型鉴定与血涂片观察 2014-3

1、邹方东 教授助教：阳敏 课程QQ群： 299535378课件共享：QQ群、课程中心网站实验报告提交时间：5月8日10时16时 地点：第一实验大楼C102期末考试时间：课堂通知、网站、QQ群 （一般是最后一次课之后的一两周）注意事项实验目的1. 掌握光学显微镜的使用方法；2. 了解人体血液以及输血相关常识；3. 掌握ABO组成以及分型原则；4. 初步掌握血涂片制片的方法和练习光学显微镜的常规使用。第一节 显微镜的使用光学显微镜的构造显微镜的正确使用方法显微镜的保养油镜的使用与清洁（了解）目镜目镜物镜物镜载物台载物台焦距粗焦距粗 微调螺旋微调螺旋集光镜集光镜聚光镜聚光镜视度调节圈视度调节圈瞳距调节

2、拉板瞳距调节拉板物镜转换器物镜转换器光源亮度调节手轮光源亮度调节手轮载物台左右推进螺旋载物台左右推进螺旋显 微 镜 的 结 构操作步骤（一）1、将凳子调节到合适的高度，保持桌面整洁；2、手握镜柱将显微镜轻轻挪出，目镜筒与桌边对齐，将镜罩拿下放于抽屉中，插上电源；3、调节物镜转换器胶轮到4x物镜（最短物镜），缓慢旋转粗准焦螺旋，将载物台调到最低；4、打开集光灯电源，将灯光调节到适当亮度，将集光镜调节到最高；5、将目镜调节到合适的瞳距，调节聚光镜轮找到白亮的视野；操作步骤（二）6、将青蛙血涂片正确放置于载物台，将涂有血细胞的一面朝上，用玻片夹固定；7、缓慢调节粗准焦螺旋，将载物台调到最高；8、双眼

3、从目镜观察视野，将两个视野合并为一个。缓缓调节粗准焦螺旋使载物台下降，找到物像，配合细准焦螺旋将物像调节清晰；9、使用物镜转换器胶轮，将10X或40X目镜调节到位，配合粗细准焦螺旋和聚光镜、集光镜亮度将视野调节清晰；注意玻片的正确放置！操作步骤（三）10、将物镜调到4x，载物台调低，取出玻片放于适当位置，用擦镜纸轻轻擦拭用过的目镜与物镜；11、关闭聚光灯，拔出插头，将载物台调高后将线缆轻轻缠绕在显微镜柱上；12、将目镜调节拉板调回，套上镜罩，将显微镜轻轻放回。第二节 ABO血型鉴定与血涂片制作ABO血型鉴定原理与鉴定方法血涂片制作与观察红细胞、白细胞的识别（照相）一次性医用采血针酒精消毒棉球抗

4、A血清(蓝色)，抗B血清(黄色)瑞氏染液载玻片，消毒牙签显微镜(带油镜，香柏油，擦镜纸，洗镜液)红细胞红细胞 抗原抗原（表型）（表型）血型鉴定原理1、抗A血清含有使A型血凝集的抗体（A凝集素）， 抗B血清含有使B型血凝集的抗体（B凝集素）；2、A型血：抗A血清凝集、抗B血清不凝集 B型血：抗A血清不凝集、抗B血清凝集 O型血：抗A血清、抗B血清均不凝集 AB型血：抗A血清、抗B血清均凝集 凝集凝集血浆 水、糖类、脂类、蛋白质和钾盐、钠盐、钙盐的混合物。 红细胞白细胞血小板血浆 55%红细胞 45%白细胞 0.1%血小板 0.17%血细胞的组成小淋巴细胞嗜曙红细胞单核细胞血小板嗜中性粒细胞嗜碱性

5、细胞巨淋巴细胞红细胞实 验 步 骤 注意：有严重晕血史的同学请不要参加实验，可到休息室休息，待放学后离开！准备（1）取三张载玻片，用吸水纸将两面擦干，放于白纸上；（2）取一张玻片，如图在两端分别滴上抗A、抗B血清，在白纸上标明；（3）取未用过的采血针，检查包装是否破损、是否干燥，检查牙签；A B第1张：血型鉴定第2张：血涂片第3张：血涂片推片采血（4）用酒精棉球将左手无名指消毒，以穿刺法，用一次性医用采血针无名指指腹迅速扎一下，取血；注意：采血针、牙签、棉花等请勿混用，以免造成交叉感染，用完即弃入垃圾桶中！酒精棉球消毒扎取无名指采血（5）用右手自无名指指腹下端挤压，流出适量血液；（6）用第一根

6、牙签蘸取少许血液混于抗A血清，搅拌混匀，将牙签放入垃圾桶；再用另一根牙签蘸取血液混于抗B血清（切记换牙签！）；（7）将此玻片静置与空闲处，观察血液是否凝集；血型鉴定请问：上图是什么血型？血型鉴定（8）取末捎血一滴置于玻片的一端，左手持，载片上保留下一薄层血膜载玻片，右手以边缘平滑的推片的一端从血滴前方后移接触血滴，待血滴即沿推片散开。然后使推片与载片夹角保持30-45度平稳地向前移动；血涂片制作血涂片制作推推 片片 动动 作作(9) 血涂片制成后可手持玻片在空气中挥动，使血膜迅速干燥，以免血细胞皱缩；(10) 将干燥后的血膜平放在实验台上，加瑞氏染液2-3滴,使覆盖整个血膜，固定5-10min

7、，注意不要让染液干掉，如若有干燥请覆以少量清水；血涂片制作 (11)用流水小心冲去染液，待自然干燥后或用吸水纸吸干，即可置血涂片于显微镜下进行镜检、照相；(12)镜检完毕请将载玻片放入垃圾桶，将显微镜收好、桌面擦拭干净。血涂片制作请从低倍镜到高倍镜进行镜检，并用手机或相机拍照，将照片贴在实验报告上。血细胞的组成小淋巴细胞嗜曙红细胞单核细胞血小板嗜中性粒细胞嗜碱性细胞巨淋巴细胞红细胞1. 一张良好的血片,要求厚薄适宜,头体尾分明,分布均匀,边缘整齐, 两侧留有空隙；2.血片制好后最好立即固定染色,以免细胞变化影响观察；3.血膜未干透,细胞尚未牢固附在玻片上,在染色过程中容易脱落,因此血膜必需充分干燥；注 意 事 项4. 染液不可过少，以防蒸发干燥，染料沉着于血片上难冲洗干净；5. 冲洗时应用流水将染液冲去，不能先倒掉染液，以免染料沉着于血片上；6. 染色时应注意保护血膜尾部细胞，不能划掉，因为体积较大细胞常在此处出现。注 意 事 项1. 通过凝集反应判断自身血型；2. 从显微镜下找到白细胞，并由老师检查；3. 完成实验报告。 实验报告包括：实验目的、实验原理、实验步骤、实验结果、讨论、思考题、引用文献等 实验报告于最后一次实验完成后，装订成册交道老师办公室。q 血细胞由红细胞