细胞融合和单克隆抗体

1、动物细胞融合与单克隆抗体动物细胞融合与单克隆抗体教学目标：教学目标： 1、了解并能简述动物细胞培养、了解并能简述动物细胞培养的过程、条件及应用的过程、条件及应用 2、举例说出动物细胞融合与单、举例说出动物细胞融合与单克隆抗体的原理和应用克隆抗体的原理和应用教学重点和难点：教学重点和难点： 1.动物细胞培养的过程及条件动物细胞培养的过程及条件 2.单克隆抗体的制备和应用单克隆抗体的制备和应用 复习回顾：复习回顾： 1、植物体细胞杂交的过程是怎样的？、植物体细胞杂交的过程是怎样的？ 2、动物细胞和植物细胞有何不同、动物细胞和植物细胞有何不同 ？一、动物细胞融合：一、动物细胞融合：1、概念：也、概念

2、：也称称 ，是，是指指 或或 动动物细胞结合形成一个物细胞结合形成一个细胞的过程。形成的细胞的过程。形成的单核细胞称为单核细胞称为 。2、过程：不同、过程：不同 的的两个细胞两个细胞 细胞细胞细胞杂交细胞杂交两个两个多个多个杂交细胞杂交细胞DNA杂交杂交 3、动物细胞融合原理与植物原生质体动物细胞融合原理与植物原生质体融合的基本原理是否相同？融合的基本原理是否相同？ 诱导方法：诱导方法： 、 、 。 思考：为什么灭活病毒能够作为诱导剂？思考：为什么灭活病毒能够作为诱导剂？不灭活的是否可以？不灭活的是否可以？ 4、动物细胞融合的意义：克服了、动物细胞融合的意义：克服了 杂交的不亲和性。杂交的不亲

3、和性。物理法物理法化学法化学法生物法生物法远缘远缘灭活的病毒对细胞没有感染能力。灭活的病毒对细胞没有感染能力。动物细胞融合动物细胞融合杂种细胞杂种细胞愈伤组织愈伤组织杂种植株杂种植株植物细胞植物细胞A植物细胞植物细胞B 原生质体原生质体A原生质体原生质体B植物体细胞杂交植物体细胞杂交去壁去壁融合融合组培组培物理法物理法化学法化学法生物法：生物法：灭活的病毒灭活的病毒动物细胞动物细胞A动物细胞动物细胞B杂种细胞杂种细胞5、动物细胞融合与植物体、动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较：细胞杂交的比较：比较比较项目项目细胞融合细胞融合的原理的原理细胞融合细胞融合的方法的方法诱导手段诱导手段用法用法植物植

4、物体细体细胞杂胞杂交交细胞膜的细胞膜的流动性流动性去壁后诱去壁后诱导原生质导原生质体融合体融合物理法（离物理法（离心、振动、心、振动、电激）化学电激）化学法（聚乙二法（聚乙二醇醇获得获得杂种杂种植株植株动物动物细胞细胞融合融合细胞膜的细胞膜的流动性流动性使细胞分使细胞分散后诱导散后诱导细胞融合细胞融合除以上方法，除以上方法，还有生物法还有生物法制备制备单克单克隆抗隆抗体体二、单克隆抗体：二、单克隆抗体： 1.其由何种细胞产生？其由何种细胞产生？ 2.主要分布在哪里？主要分布在哪里？ 3.如何得到抗体？如何得到抗体？提问提问？动物细胞动物细胞A动物细胞动物细胞B杂种细胞杂种细胞用动物细胞融合的方

5、法制备单克隆抗体用动物细胞融合的方法制备单克隆抗体试一试试一试聚乙二醇或灭活的病毒聚乙二醇或灭活的病毒杂交瘤细胞杂交瘤细胞细胞培养细胞培养提取抗体提取抗体效应细胞效应细胞肿瘤细胞肿瘤细胞2.2.制备过程：制备过程：诱导其融合的方法有哪些？诱导其融合的方法有哪些？融合后培养液中有几种细胞融合后培养液中有几种细胞怎样筛选出杂交瘤细胞，杂交怎样筛选出杂交瘤细胞，杂交瘤细胞有何优点瘤细胞有何优点注射抗原的目的是什么注射抗原的目的是什么为何要进行克隆化培养和专为何要进行克隆化培养和专一抗体检测，多次筛选一抗体检测，多次筛选大量增殖杂交瘤细胞获得单大量增殖杂交瘤细胞获得单抗的方法抗的方法单单克克隆隆抗抗体

6、体制制备备过过程程示示意意图图 注意：注意： 对小鼠做何处理？对小鼠做何处理？ 细胞融合后，培养液中共有几种细胞？有几种细胞融合后，培养液中共有几种细胞？有几种融合细胞？融合细胞？ 杂交瘤细胞的特点：既能大量杂交瘤细胞的特点：既能大量 ，又能，又能产生产生 。 思考思考：产生抗体的杂交瘤细胞如何筛选出来的？产生抗体的杂交瘤细胞如何筛选出来的？注射特定的抗原蛋白注射特定的抗原蛋白五种（五种（B淋巴细胞、骨髓瘤细胞、淋巴细胞、骨髓瘤细胞、B-B、骨骨、杂交瘤细胞）、骨骨、杂交瘤细胞） 其中三种融合细胞。其中三种融合细胞。繁殖繁殖专一的抗体专一的抗体提示：抑制骨髓瘤细胞的提示：抑制骨髓瘤细胞的DNA

7、复制。复制。单克隆抗体的优点和应用单克隆抗体的优点和应用单克隆抗体的优点单克隆抗体的优点 强，强， 高，高， 大。大。单克隆抗体的应用：单克隆抗体的应用： 作为诊断试剂：准确识别各种作为诊断试剂：准确识别各种 物质的物质的细微差别，并跟细微差别，并跟 的结合，具的结合，具有有 、 、 、 的优点。的优点。 用于治疗疾病和运载药物：主要用于治用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗疗 ，可制成，可制成“ ”，也有少量用，也有少量用于治疗其他疾病。于治疗其他疾病。特异性特异性灵敏度灵敏度产量产量抗原抗原一定抗原发生特异性一定抗原发生特异性准确准确 高效高效 简易简易 快速快速癌症癌症生物导弹生物导弹v

8、1、从母羊甲的体细胞中取出细胞核，注入到母羊、从母羊甲的体细胞中取出细胞核，注入到母羊乙去掉核的卵细胞中，融合后的细胞经卵裂形成早乙去掉核的卵细胞中，融合后的细胞经卵裂形成早期胚胎，再植入到另一只母羊丙的子宫内，出生小期胚胎，再植入到另一只母羊丙的子宫内，出生小羊的大多数性状羊的大多数性状 ( ) A.难以预测难以预测 B.像甲像甲 C.像乙像乙 D.像丙像丙v2（2004年，全国）用动物细胞工程技术获取单年，全国）用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中错误的是（克隆抗体，下列实验步骤中错误的是（ ）vA将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B淋淋巴

9、细胞巴细胞vB用纤维素酶处理用纤维素酶处理B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞vC用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的B淋淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合vD筛选杂交资金积累细胞，并从中选出能产生所筛选杂交资金积累细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体BBv3.动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是确的是 （ ）v诱导融合的方法完全相同诱导融合的方法完全相同 所用的技术手段所用的技术手段不相同不相同 所采用的原理完全相

10、同所采用的原理完全相同 都能形成杂都能形成杂种细胞种细胞vA. B. C. D.v4. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（ ）v 淋巴细胞淋巴细胞小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞淋巴细胞自身融合细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞vA BvC D CA创新应用训练创新应用训练5右图为某同学根据杂交右图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验产破伤风杆菌抗体的实验方案。据图回答：方案。据图回答：（1）该方案能达到预）该方案能达到预期效果吗？期效果吗？。原因是。原因是 。（2）图中）图中为为过程，过程，常用常用作为诱导剂。作为诱导剂。该细胞继承了该细胞继承了 ，因此不仅能分泌，因此不仅能分泌 ，还有，还有 本领。本领。（3）该方案的目的是）该方案的目的是。不能不能 没有将抗原注入小鼠体内，无法没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生单一抗体的获得产生单一抗