阳启顺的论文答辩

1、设计（论文）题目:光照对拟南芥灰霉菌毒素抗性的影响姓名：阳启顺 班级：10生科2班 指导教师：杨红玉 教授设计（论文）题目:光照对拟南芥灰霉菌毒素抗性的影响姓名：阳启顺 班级：10生科2班 指导教师：杨红玉 教授提纲：一一. . 课题的任务课题的任务二二. . 课题的目的和意义课题的目的和意义三三. . 原始资料和参考文献原始资料和参考文献四四. . 基本内容及主要方法基本内容及主要方法五五. . 实验成果、结论实验成果、结论一. 课题的任务1.1 制定实验方案 1.1.1查阅相关文献资料 1.1.2配制所需溶液 1.1.3准备所需的实验材料和仪器设备1.2 实施实验方案1.3 分析实验结果，

2、得出结论二. 课题的目的和意义 近年来，灰霉菌致病机制的研究越来越广泛。本课题目的在于通过将灰霉菌大分子毒素渗入到拟南芥叶片中，设置光照、黑暗为对照实验，统计观察拟南芥叶片的病情，进一步探索光照对拟南芥灰霉菌毒素抗性的影响，进而为研究灰霉菌的致病机制作出铺垫。三. 原始资料和参考文献杨红玉，李 湘，张一凡，李 然灰霉菌培养及其对拟南芥的侵染05夏绍嫘，杨红玉，吴 嘉灰霉菌与其分泌毒素对拟南芥致病性比较11夏绍嫘灰霉菌致病大分子的提取、分离及其特性鉴定云师大11胡海林拟南芥与灰葡萄孢菌互作中ESB1基因作用初探农大13张美丽拟南芥经灰霉菌胞外大分子毒素处理后SOD的变化09生科 四. 基本内容及

3、主要方法4.1 配制马铃薯蔗糖培养基、马铃薯蔗糖培养液、拟南芥种 子MS培养基。4.2 拟南芥的栽培、管理：种子消毒铺种恒温管理。4.3 灰霉菌的培养：接种振荡恒温（25-28）培养。四. 基本内容及主要方法4.4 灰霉菌大分子毒素的提取：菌体培养液过滤去菌丝 离心去上清液抽滤去除残留菌丝、孢子透析冷冻 干燥经0.45m膜过滤离心抽滤粗提液（样品）。四. 基本内容及主要方法4.5 灰霉菌大分子毒素蛋白浓度的测定4.5.1紫外分光光度法（如下表）四四. . 基本内容及主要方法基本内容及主要方法4.5.1紫外分光光度法（标准曲线）四四. . 基本内容及主要方法基本内容及主要方法4.5.2 Brad

4、ford检测法（见下表）四四. . 基本内容及主要方法基本内容及主要方法4.5.2 Bradford检测法（标准曲线）四四. . 基本内容及主要方法基本内容及主要方法4.6 灰霉菌大分子毒素在光暗下侵染拟南芥的形态学观察4.6.1 调整灰霉菌大分子毒素蛋白浓度 大分子毒素蛋白浓度测定完成后，用灭菌蒸馏水将浓度调整到 400g/ml、200g/ml。四四. . 基本内容及主要方法基本内容及主要方法4.6 灰霉菌大分子毒素在光暗下侵染拟南芥的形态学观察4.6.2 设置对照实验（如下表）四四. . 基本内容及主要方法基本内容及主要方法4.6.3 将灰霉菌大分子毒素渗入拟南芥叶片中拟南芥叶片先经 75

5、%酒精进行表面消毒，用1ml注射器针头在叶片上刺一小孔，用一手按住叶片背面，用1ml去针头的注射器沿针刺小孔将毒素渗入，每片叶片渗入10l。 4.6.4 观察、统计拟南芥发病情况五五. . 实验成果、结论实验成果、结论5.1 灰霉菌大分子毒素蛋白浓度测定结果 用紫外分光光度法测定大分子毒素的蛋白浓度，蛋白质标准曲线如图3.1所示。实验测得待测样品在280nm下三次吸光度均值为0.490，代入标准曲线图关系式：y=0.0006x+0.0069，解得x=809g/ml。因此，样品浓度为809g/ml。五五. . 实验成果、结论实验成果、结论5.1 灰霉菌大分子毒素蛋白浓度测定结果 用Bradfor

6、d检测法测得样品吸光度值2.308，将该值代入标准曲线图3.2中关系式：y=0.0029x+0.0081，解得x=793g/ml，也就是说样品浓度为：793g/ml。由此可见，用两种方法测定灰霉菌大分子毒素蛋白浓度所得的数据并不一致，但是相差不大。实验用浓度可取平均值 800g/ml。五五. . 实验成果、结论实验成果、结论5.2 蛋白质浓度测定方法比较、讨论五五. . 实验成果、结论实验成果、结论5.2 蛋白质浓度测定方法比较、讨论 本实验提取的大分子毒素量（样品）很少，在测定其浓度时，尽量避免浪费。由以上方法可知，紫外分光光度法与考马氏亮蓝G-250需要的样品量较少，适用于本实验，故而选择

7、这两种方法。另外，还需考虑所用方法的灵敏度范围。五五. . 实验成果、结论实验成果、结论5.3 灰霉菌大分子毒素侵染拟南芥的形态学观察结果第一天：可明显看到400g/ml、200g/ml大分子毒素侵染的叶片组织变得透明，而此时无菌蒸馏水、BSA对照组拟南芥叶片只出现接种时留下的伤痕，并无叶片组织变透明的现象。五五. . 实验成果、结论实验成果、结论5.3 灰霉菌大分子毒素侵染拟南芥的形态学观察结果第二天：接种周围叶片组织开始出现萎焉症状，且面积进一步扩大，萎焉组织沿接种部位呈近椭圆形向四周扩散。第三天：可看到沿接种部位病症面积未明显扩大，以接种部位为中心出现一个近黄色“枯斑”，同时在离接种部位

8、较远的叶缘也出现轻微卷曲或面 积大小不等的“枯斑”。 第四天：以接种部位组织为中心呈淡黄色病斑。五五. . 实验成果、结论实验成果、结论5.3 灰霉菌大分子毒素侵染拟南芥的形态学观察结果第五天：将症状较为明显的叶片剪下，拍照如图3.1所示。五五. . 实验成果、结论实验成果、结论五五. . 实验成果、结论实验成果、结论 从图3.1可以明显看出，光照条件下，标号1（用400g/ml大分子毒素渗入的叶片）所示叶片，红色圈内病斑呈现为水渍、透明状，而标号2（用400g/mlBSA渗入的叶片）、标号3（用无菌蒸馏水渗入的叶）所示叶片无此症状。即用400g/ml大分子毒素渗入的叶片出现了病斑，而作为对照的两种叶片没有出现病斑。这说明：光照条件下，400g/ml 大分子毒素侵染了拟南芥叶片，有一定的毒性。五五. . 实验成果、结论实验成果、结论 同样，其他对照实验，无论是光照还是黑暗条件下，只有用 400g/ml、200g/ml大分子毒素渗入的叶片侵染了拟南芥叶片，并出现病斑。而用无菌蒸馏水、BSA渗入的拟南芥叶片无病斑出现。五五. . 实验成果、结论实验成果、结论 根据以上结论，无论是光照条件下还是黑暗下，被浓度200g/ml、400g/ml的大分子毒素渗入的叶片，都受