血液分析仪及其临床应用 (2)ppt课件

1、 血液分析仪及其临床运用血液分析仪及其临床运用 血液分析仪血液分析仪hematology analyzer, HA：临床血液普通检查最常用仪器。：临床血液普通检查最常用仪器。 50年代，美国库尔特年代，美国库尔特W.H.Coulter发发明电子血细胞计数仪并恳求专利。明电子血细胞计数仪并恳求专利。血液分析仪优势：血液分析仪优势：检测工程多检测工程多速度快速度快精度高精度高易操作易操作一、检测原理一、检测原理检测功能：检测功能：细胞计数功能细胞计数功能细胞分类功能细胞分类功能 检测原理分为检测原理分为2类：类：一电阻抗法一电阻抗法1.电阻抗原理电阻抗原理(principle of electri

2、cal i m p e d a n c e ) ， 又 称 库 尔 特 原 理， 又 称 库 尔 特 原 理Coulter principleCouler计数原理计数原理 孔电流 真空 内电极 外电极 - + 血细胞 悬液 标本杯2.计数部件构造组成计数部件构造组成等渗电解质溶液等渗电解质溶液细胞悬液细胞悬液小孔管传感器小孔管传感器transducer宝石孔宝石孔直径直径 100m，厚度约，厚度约75m脉冲数量和大小反映细胞：脉冲数量和大小反映细胞：数量数量体积大小体积大小3.白细胞计数和分类计数原理白细胞计数和分类计数原理仪器将体积为仪器将体积为35450fL的血细胞，分为的血细胞，分为25

3、6个通道个通道channel。每个通道：每个通道：1.64fl根据细胞大小，分别置于不同的通道中，根据细胞大小，分别置于不同的通道中，显 示 血 细 胞 体 积 分 布 直 方 图显 示 血 细 胞 体 积 分 布 直 方 图Histogram。 经溶血素处置脱水后，血细胞体积大小发经溶血素处置脱水后，血细胞体积大小发生了变化！生了变化！第一群第一群3590fl小细胞区：淋巴细胞小细胞区：淋巴细胞体积最小：普通在体积最小：普通在3590fl。第二群第二群90160fl是单个核细胞区，是单个核细胞区，中间细胞：中间细胞：单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、

4、原始、幼稚细胞、异常细胞等原始、幼稚细胞、异常细胞等第三群第三群160fl以上大细胞区：嗜中性粒以上大细胞区：嗜中性粒细胞体积最大：普通在细胞体积最大：普通在-350fl三分群血液分析仪正常白细胞分类方式图直方三分群血液分析仪正常白细胞分类方式图直方图图 35 90 160 300 400 450(fl)%仪器组成：仪器组成：信号发生器信号发生器 放大器放大器阈值调理阈值调理甄别器甄别器整形器整形器 计数系统计数系统 2.电阻抗法红细胞检测原理电阻抗法红细胞检测原理 1红细胞计数和血细胞比容测定红细胞计数和血细胞比容测定与白细胞计数类似。与白细胞计数类似。(%) 100 200 300 400

5、 (fl)(2)(2)血红蛋白测定：血红蛋白与溶血剂中的血红蛋白测定：血红蛋白与溶血剂中的特定试剂结合构成一种血红蛋白衍生物，特定试剂结合构成一种血红蛋白衍生物，在在530530550nm550nm下进展比色。下进展比色。 ICSHICSH引荐用氰化高铁法引荐用氰化高铁法540nm540nm比色。比色。非氰化溶血剂，如非氰化溶血剂，如SDS-HbSDS-Hb。 (3)(3)红细胞其他参数检测红细胞其他参数检测 3.3.电阻抗法血小板检测原理电阻抗法血小板检测原理 血小板计数血小板计数platelet, PLTplatelet, PLT：随红细胞在一个系统中进展检测。随红细胞在一个系统中进展检测

6、。直方图在直方图在2 228fl28fl不同仪器不一。不同仪器不一。血小板平均体积血小板平均体积mean platelet volume, mean platelet volume, MPVMPV。 10 20 30(fl)%二光散射法血液分析仪检测原理二光散射法血液分析仪检测原理 组合运用组合运用电学电学光学光学细胞化学等细胞化学等细胞流电学和光学检测图细胞流电学和光学检测图AcT 5diffAcT 5diff光散射法白细胞检测原理类别光散射法白细胞检测原理类别1 1激光与细胞化学法激光与细胞化学法 1 1过氧化物酶检测通道：过氧化物酶检测通道：嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞过氧化物酶活性比嗜酸

7、性粒细胞、嗜中性粒细胞过氧化物酶活性比单核细胞强单核细胞强淋巴细胞、嗜碱粒细胞无过氧化物酶活性。淋巴细胞、嗜碱粒细胞无过氧化物酶活性。散射图定位：散射图定位：X X轴为吸光率酶反响强度、轴为吸光率酶反响强度、Y Y轴轴为光散射细胞大小显示检测结果。为光散射细胞大小显示检测结果。 2 2嗜碱性粒细胞嗜碱性粒细胞/ /分叶核检测通道。分叶核检测通道。 2 2 容 量 、 电 导 、 光 散 射 容 量 、 电 导 、 光 散 射 v o l u m ev o l u m e ，conductivityconductivity， scatter, VCSscatter, VCS法：法：血细胞未经任何

8、处置，坚持与体内完全一样形状血细胞未经任何处置，坚持与体内完全一样形状下进展。下进展。 VCSVCS法检测原理法检测原理细胞体积技术丈量细胞大小细胞体积技术丈量细胞大小电导性技术丈量细胞内部构造电导性技术丈量细胞内部构造光散射光散射scatter, Sscatter, S技术丈量细胞形状、细技术丈量细胞形状、细胞核和细胞颗粒。胞核和细胞颗粒。 体积体积 电导电导 光散射光散射VCSVCS可显示可显示3 3种细胞散点图种细胞散点图DF1DF1体积值和散射光值体积值和散射光值DF2DF2体积值和电导值体积值和电导值DF3DF3体积值和电导值：只显示体积值和电导值：只显示basophil basop

9、hil 细胞流电学和光学散点图细胞流电学和光学散点图AcT 5diffAcT 5diffVCSVCS血液分析仪正常白细胞散点图实例血液分析仪正常白细胞散点图实例3 3电阻抗与射频法能透入细胞内，丈量核电阻抗与射频法能透入细胞内，丈量核的大小及颗粒的多少：的大小及颗粒的多少：嗜酸性粒细胞检测系统嗜酸性粒细胞检测系统嗜碱性粒细胞检测系统嗜碱性粒细胞检测系统 5 5种白细胞分类检测系统：直流电种白细胞分类检测系统：直流电direct direct currentcurrent，DCDC为横坐标，以射频为横坐标，以射频radio radio frequency frequency ，RFRF为纵坐标。

10、为纵坐标。幼稚细胞检测系统：幼稚细胞检测系统：幼稚细胞膜脂质较成熟细胞少。幼稚细胞膜脂质较成熟细胞少。参与硫化氨基酸，与幼稚细胞的结合量多于较成参与硫化氨基酸，与幼稚细胞的结合量多于较成熟的细胞熟的细胞幼稚细胞对溶血剂有抵抗作用，从而提供幼稚髓幼稚细胞对溶血剂有抵抗作用，从而提供幼稚髓细胞信息细胞信息immature myeloid informationimmature myeloid information，IMIIMI。 4 4多角度偏振光散射多角度偏振光散射multi-angle multi-angle polarized scatter separation of white pol

11、arized scatter separation of white cell, MAPSScell, MAPSS法法0 0：前角光散射：前角光散射1 13 3，可粗略测定，可粗略测定细胞大小。细胞大小。1010：狭角光散射：狭角光散射7 71111，可测定细，可测定细胞内部构造相对特征。胞内部构造相对特征。9090：垂直光散射：垂直光散射7070110110，测定细，测定细胞核分叶情况。胞核分叶情况。9090：消偏振光散射：消偏振光散射7070110110，区分，区分嗜酸性粒细胞与其他细胞。嗜酸性粒细胞与其他细胞。 2.2.光散射法红细胞检测原理光散射法红细胞检测原理 低角度低角度(2(23

12、 3) )：丈量红细胞体积：丈量红细胞体积高角度高角度(5(51515) )：测定红细胞血红蛋白：测定红细胞血红蛋白浓度浓度得到得到MCVMCV、MCHMCH、MCHCMCHC测定值，计算出测定值，计算出RDWRDW、红细胞血红蛋白分布宽度红细胞血红蛋白分布宽度red blood red blood cell hemoglobin distribution widthcell hemoglobin distribution width，HDWHDW3.3.光散射法血小板检测原理光散射法血小板检测原理 MieMie实际实际Mie theory of light scatter Mie theor

13、y of light scatter for homogeneous spheresfor homogeneous spheres：当球形化：当球形化的血小板一个一个经过激光照射区时：的血小板一个一个经过激光照射区时：高角度高角度5 51515：检测细胞折射指：检测细胞折射指数数reactive indexreactive index，RIRI；低角度低角度2 23 3：丈量细胞大小。：丈量细胞大小。大血小板与各种碎片假设体积类似，但由大血小板与各种碎片假设体积类似，但由于内容物不同，于内容物不同，RIRI相差较大，故能鉴别。相差较大，故能鉴别。 5.5.网织红细胞计数网织红细胞计数retic

14、ulocytereticulocyte，RETRET原理原理 2020世纪世纪9090年代起，有多种检测原理类似网年代起，有多种检测原理类似网织红细胞分析仪。织红细胞分析仪。1 1血液分析仪检测原理：血液分析仪检测原理：用新亚甲蓝染色使红细胞用新亚甲蓝染色使红细胞RNARNA着色或用荧光着色或用荧光染料对染料对RNARNA进展染色。进展染色。检测参数：检测参数：网织红细胞绝对值网织红细胞绝对值RET#RET#网织红细胞百分数网织红细胞百分数RET%RET%网织红细胞平均体积网织红细胞平均体积MCVrMCVr网织红细胞成熟指数网织红细胞成熟指数RMIRMI网织红细胞分布宽度网织红细胞分布宽度re

15、ticulocyte reticulocyte distribution width, RDWrdistribution width, RDWr 新亚甲蓝网织红细胞染色新亚甲蓝网织红细胞染色光散射法网织红细胞检测散点图光散射法网织红细胞检测散点图 二、检测参数二、检测参数一检测参数一检测参数 中高档仪器检测参数：中高档仪器检测参数：2020项左右或超越项左右或超越4040多项多项二检测结果及表达方式二检测结果及表达方式表表 常见血液分析报告用语及英文缩写词常见血液分析报告用语及英文缩写词三、细胞直方图三、细胞直方图横坐标为血细胞体积大小横坐标为血细胞体积大小纵坐标为不同体积细胞的相对频率。纵坐

16、标为不同体积细胞的相对频率。 一白细胞直方图一白细胞直方图正常白细胞直方图正常白细胞直方图出现异常直方图时，常伴警报信号，如出现异常直方图时，常伴警报信号，如“H Hhighhigh，高或，高或“L Llowlow，低。，低。 二红细胞直方图二红细胞直方图正常红细胞分布：正常红细胞分布：5050200fl 200fl 峰左移峰左移峰右移峰右移双峰双峰 三血小板直方图三血小板直方图正常血小板直方图呈左偏态分布：正常血小板直方图呈左偏态分布： 2 230fl30fl分布，主要在分布，主要在2 215fl15fl。 四、方法学评价四、方法学评价 一仪器类型和特点一仪器类型和特点 1.1.单纯电阻抗法

17、三分群血液分析仪特点单纯电阻抗法三分群血液分析仪特点 1 1检测参数：红细胞、白细胞、血小板检测参数：红细胞、白细胞、血小板 2 2白细胞分类白细胞分类 3 3直方图直方图 4 4报警报警(flag)(flag)功能：文字、图标功能：文字、图标 2. 2. 综合光学电学技术血液分析仪特点综合光学电学技术血液分析仪特点 1 1检测参数：检测参数：红细胞红细胞白细胞白细胞血小板血小板网织红细胞网织红细胞幼稚细胞幼稚细胞2 2白细胞分类白细胞分类五分类，准确性较三分群血液分析仪高。五分类，准确性较三分群血液分析仪高。 3 3直方图和散点图：直方图和散点图：红细胞直方图红细胞直方图白细胞直方图白细胞直

18、方图血小板直方图血小板直方图白细胞分类散点图。白细胞分类散点图。4 4报警功能：文字、图标报警功能：文字、图标3.3.自动化程度自动化程度 操作过程：半自动、全自动操作过程：半自动、全自动储存信息：储存信息：质量控制：质量控制软件、显示质控图形质量控制：质量控制软件、显示质控图形 至今，血液分析仪还只能用作安康人血液至今，血液分析仪还只能用作安康人血液筛检之用，尚不能完全替代显微镜功能。筛检之用，尚不能完全替代显微镜功能。( (二二) )仪器性能评价仪器性能评价ICSHICSH 1. 1. 可比性可比性 (comparability) (comparability) 指血液分析仪测定结果，与常

19、规方法所测指血液分析仪测定结果，与常规方法所测结果相比较。显微镜法是血细胞检验根结果相比较。显微镜法是血细胞检验根底。底。P P0.050.05有可比性。有可比性。P P0.050.05无可比性无可比性结论：计数细胞越多、选用吸管、计数盘结论：计数细胞越多、选用吸管、计数盘越多，计数结果接近真值。越多，计数结果接近真值。实践任务中，镜检法很难到达此要求。实践任务中，镜检法很难到达此要求。 经严厉校正的血液分析仪：经严厉校正的血液分析仪：计数细胞多计数细胞多操作步骤规范化操作步骤规范化准确性高准确性高 CVCV可可2%2%准确性较高准确性较高2. 2. 准确性准确性 (accuracy) (ac

20、curacy) 准确性是指测定准确性是指测定结果与真值一致性的程度。结果与真值一致性的程度。 3. 3. 总反复性总反复性( overall precision ) ( overall precision ) 指指同一份标本多次丈量的结果接近的程度。同一份标本多次丈量的结果接近的程度。反复测定反复测定1 1份抗凝静脉血份抗凝静脉血1010次，计算次，计算CVCV值。值。4.4.精细度精细度 (precision) (precision) 批内批内within- batchwithin- batch精细度：同一批样精细度：同一批样本反复测定结果的评价。本反复测定结果的评价。批间批间(betwee

21、n-batch)(between-batch)精细度：对两批或两精细度：对两批或两批以上样本反复测定结果的评价。批以上样本反复测定结果的评价。 携带污染率携带污染率(carry over)(carry over)：延续测定延续测定1 1份高值样本份高值样本3 3次次i1i1、i2i2、i3i3再测定再测定1 1份低值样本份低值样本3 3次次j1j1、j2j2、j3j3 携带污染率携带污染率% %j1-j3j1-j3/ /i3-J3i3-J3 准确度和准确度准确度和准确度5. 5. 线性范围线性范围 指测定值与稀释倍数能否呈比例关系。指测定值与稀释倍数能否呈比例关系。线性关系范围越宽越理想。线性

22、关系范围越宽越理想。P P 0.01, 0.01, 非线性相关。非线性相关。 P P 0.050.05，未偏离线性。，未偏离线性。 稀释效果稀释效果 MCH MCV MCHC RBC三影响直方图变化的要素三影响直方图变化的要素 1.1.仪器要素仪器要素血细胞体积大小血细胞体积大小仪器阈值仪器阈值孔电压孔电压 2.2.试剂要素试剂要素稀释液：导电率、浸透压、离子强度稀释液：导电率、浸透压、离子强度溶血剂：种类、浓度、用量和溶血时间溶血剂：种类、浓度、用量和溶血时间 3. 3.操作人员技艺：操作人员技艺：高素质高素质技术培训技术培训上岗前要仔细阅读随机手册上岗前要仔细阅读随机手册掌握掌握ICSHI

23、CSH引荐的仪器性能评价方法引荐的仪器性能评价方法全程质量控制全程质量控制 4.4.循证医学对血液分析仪运用指点循证医学对血液分析仪运用指点 1 1循证医学循证医学evidence-based evidence-based medicine, EBMmedicine, EBM：谨慎、准确、合理而：谨慎、准确、合理而明智地对每个患者作出临床决策。明智地对每个患者作出临床决策。 循证检验医学循证检验医学evidence - based evidence - based laboratory medicine, EBLMlaboratory medicine, EBLM。2 2为临床提供真实可靠实验

24、诊断证据。为临床提供真实可靠实验诊断证据。3 3用循征检验医学思想客观评价检验。用循征检验医学思想客观评价检验。 五、临床运用五、临床运用一检测参数临床意义一检测参数临床意义 1.1.红细胞参数红细胞参数 1 1MCVMCV和和RDWRDW：可用于缺铁性贫血的早期：可用于缺铁性贫血的早期诊断和鉴别诊断。诊断和鉴别诊断。2 2红细胞血红蛋白分布宽度红细胞血红蛋白分布宽度2.2.血小板参数血小板参数 1 1血小板计数血小板计数 2 2血小板平均体积血小板平均体积mean platelet mean platelet volume, MPVvolume, MPV: : 鉴别血小板减低的病因：鉴别血小

25、板减低的病因：MPVMPV增高：外周血血小板破坏过多致血小板增高：外周血血小板破坏过多致血小板减低减低 MPVMPV减低：减低：骨髓病变引起血小板减低。骨髓病变引起血小板减低。评价骨髓造血功能恢复的情况：评价骨髓造血功能恢复的情况： 部分炎症：骨髓造血未受抑制，部分炎症：骨髓造血未受抑制，MPVMPV正常。正常。 败血症：骨髓造血功能抑制，败血症：骨髓造血功能抑制，MPVMPV减低。减低。 白血病缓解：白血病缓解：MPVMPV增高。增高。 骨髓造血衰竭：骨髓造血衰竭：MPVMPV、PLTPLT继续减低。继续减低。 MPV MPV越小，骨髓受抑制越严重。越小，骨髓受抑制越严重。 骨髓功能恢复时，

26、首先骨髓功能恢复时，首先MPVMPV上升，然后上升，然后PLTPLT逐渐上逐渐上升。升。MPVMPV与血小板功能明显相关：有出血倾向者与血小板功能明显相关：有出血倾向者MPVMPV显显著低于无出血倾向者。著低于无出血倾向者。二红细胞直方图在贫血中的运用二红细胞直方图在贫血中的运用 1.1.小细胞性贫血小细胞性贫血1 1RDWRDW正常：轻型地中海贫血正常：轻型地中海贫血 2 2RDWRDW轻度增高：缺铁性贫血轻度增高：缺铁性贫血 3 3RDWRDW明显增高，两个细胞峰，小细明显增高，两个细胞峰，小细胞峰明显左移：铁粒幼细胞性贫血、缺胞峰明显左移：铁粒幼细胞性贫血、缺铁性贫血经治疗有效铁性贫血经

27、治疗有效2.2.大细胞性贫血大细胞性贫血(1) RDW(1) RDW正常，细胞主峰明显右移：正常，细胞主峰明显右移：溶血性贫血溶血性贫血白血病前期白血病前期再生妨碍性贫血再生妨碍性贫血巨幼细胞性贫血巨幼细胞性贫血(2) RDW(2) RDW轻度增高，红细胞峰明显右移，基底增轻度增高，红细胞峰明显右移，基底增宽：宽：叶酸、维生素叶酸、维生素B12B12缺乏性巨幼细胞性贫血。缺乏性巨幼细胞性贫血。(3)RDW(3)RDW明显增高，红细胞峰明显右移，出现两个明显增高，红细胞峰明显右移，出现两个峰：峰： 巨幼细胞贫血，叶酸、维生素巨幼细胞贫血，叶酸、维生素B12B12治疗初。治疗初。 3.3.正细胞性

28、贫血正细胞性贫血 1 1RDWRDW正常：正常：慢性病慢性病急性失血急性失血骨髓纤维化骨髓纤维化骨髓发育不良骨髓发育不良 (2) RDW(2) RDW轻度增高：轻度增高：血红蛋白异常血红蛋白异常骨髓纤维化骨髓纤维化 3 3 RDWRDW明显增高：明显增高： 早期或混合性营养不良早期或混合性营养不良 三血小板直方图临床运用三血小板直方图临床运用 1. 1. 红细胞碎片红细胞碎片 可干扰血小板直方图可干扰血小板直方图2. 2. 血小板聚集血小板聚集 直方图峰左侧起点较高直方图峰左侧起点较高MCVMCV和和RDWRDW正常，可排除小红细胞干扰正常，可排除小红细胞干扰 3. 3. 小红细胞干扰小红细胞干扰 峰右侧离横坐标较高，峰右侧离横坐标较高，呈脱尾状。呈脱尾状。 4. 4. 小血小板小血小板 峰左移，峰左移，MPVMPV偏小。偏小。血涂片可见较多小血小板。血涂片可见较多小血小板。 5. MPV 5. MPV 与与PLTPLT呈非线性负相关。呈非线性负相关。 四白细胞直方图临床运用四白细胞直方图临床运用直方图只能提示白细胞比例变化或能够出直方图只能提示白细胞比例变化或能够出现异常细胞，故要求用显微镜复查血涂现异常细胞，故要求用显微镜复查血涂片。片。 1.1.中性粒细胞增高中性