结核病实验室生物安全

1、结核病实验室生物安全结核病实验室生物安全自治区疾控中心结核病实验室自治区疾控中心结核病实验室什么是生物安全什么是生物安全生物安全是指对由现代生物技术的开发和生物安全是指对由现代生物技术的开发和应用应用过程中过程中可能产生的可能产生的负面影响负面影响，所采取，所采取的有效预防和控制措施的有效预防和控制措施. .l保护人保护人（实验人员、同事、实验室辅助实验人员、同事、实验室辅助人员）人员）l物品物品( (标本和器材等标本和器材等) ) l环境环境( (空气、土壤、水空气、土壤、水) )生物安全的目的生物安全的目的n国家发展与改革委员会国家发展与改革委员会n科技部科技部n建设部建设部n国家环保部国

2、家环保部n国家质检总局（中国合格评定国家认可中心）国家质检总局（中国合格评定国家认可中心）n国家卫生计生委国家卫生计生委n农业部农业部n民航局民航局n其它有关部门其它有关部门实验室管理部门实验室管理部门国家对病原微生物实行国家对病原微生物实行分类管理分类管理，对实验室实，对实验室实行行分级管理分级管理。 国家实行国家实行统一统一的实验室生物安全的实验室生物安全标准标准。实验室。实验室应当符合国家标准和要求。应当符合国家标准和要求。基本规定基本规定病原微生物的分类和管理病原微生物的分类和管理 国家根据病原微生物的传染性、感染后对个体或者群体的危害国家根据病原微生物的传染性、感染后对个体或者群体的

3、危害程度，将病原微生物分为程度，将病原微生物分为四类四类：第一类病原微生物第一类病原微生物，是指能够引起人类或者动物，是指能够引起人类或者动物非常严重非常严重疾病的微生物，以及我国尚疾病的微生物，以及我国尚未发现未发现或者或者已经宣布消灭已经宣布消灭的微生物。的微生物。第二类病原微生物第二类病原微生物，是指能够引起人类或者动物，是指能够引起人类或者动物严重疾病严重疾病，比较容易直比较容易直接或者间接在人与人接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传、动物与人、动物与动物间传播的微生物。播的微生物。第一类、第二类病原微生物统称为第一类、第二类病原微生物统称为高致病性病原微生物高致病性病原微生物

4、。第三类病原微生物第三类病原微生物，是指能够引起人类或者动物，是指能够引起人类或者动物疾病疾病，但一般，但一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限，情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物。施的微生物。第四类病原微生物第四类病原微生物，是指在通常情况下不会引起人类或者动物，是指在通常情况下不会引起人类或者动物疾病的微生物。疾病的微生物。结核分枝杆菌危害等级结核分枝杆菌危害等级n 根据卫生部病原微生物危害等级分类，结核分枝杆菌属于第二类，即指能够引起

5、人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物。实验室的设立与管理实验室的设立与管理国家根据实验室对病原微生物的生物安全防护水平，并依照实验室生物安全国家标准的规定，将实验室分为一级、二级、三级、四级。 BSL-1BSL-2BSL-3 原则：定向气流原则：定向气流设施设备设施设备标准操作程序标准操作程序个人防护装备个人防护装备管理管理实验室生物安全控制要素实验室生物安全控制要素4结核菌是通过气溶胶传播结核菌是通过气溶胶传播l涂片l培养液的倾倒和转移；l高速混合含菌液体；l滴加、接种培养物；l取样器和振荡器的使用；l容器内外压力不同时打开容器可能产生气溶胶

6、的操作可能产生气溶胶的操作实验室仪器设备操作及其危险性实验室仪器设备操作及其危险性 在实验室中使用离心机、搅拌机、匀浆机、在实验室中使用离心机、搅拌机、匀浆机、振荡器、超声波粉碎仪和混合仪处理含有感振荡器、超声波粉碎仪和混合仪处理含有感染性结核菌的材料时，以及打开培养容器；染性结核菌的材料时，以及打开培养容器；冻干和过滤也可以产生感染性气溶胶冻干和过滤也可以产生感染性气溶胶 保证实验室通风保证实验室通风 保证实验室的窗户可以通风将含有气溶胶保证实验室的窗户可以通风将含有气溶胶的空气与室外空气进行交换，以排出或稀释的空气与室外空气进行交换，以排出或稀释气溶胶浓度。气溶胶浓度。 如果实验室进行了正

7、确的试验操作，如果实验室进行了正确的试验操作，那么与患者的一次不加防护的咳嗽相那么与患者的一次不加防护的咳嗽相比，在操作中产生的气溶胶是很少的。比，在操作中产生的气溶胶是很少的。实验室危险实验室危险 给予口罩或面巾给予口罩或面巾 教会如何较卫生的方式咳嗽教会如何较卫生的方式咳嗽 分开的区域侯诊分开的区域侯诊 尽快接受相关检查尽快接受相关检查(在排队前在排队前) 转诊到专门的结核病诊断和治疗场所转诊到专门的结核病诊断和治疗场所(机构机构)对结核病可疑症状者或结核病患者对结核病可疑症状者或结核病患者应该采取：应该采取： 根据我国发布的根据我国发布的人间传染的病原微生物人间传染的病原微生物名录名录的

8、要求，对于结核分枝杆菌大量活菌操的要求，对于结核分枝杆菌大量活菌操作须在符合生物安全三级（作须在符合生物安全三级（BSL-3）的环境中）的环境中进行；进行； 样本检测，包括样本的病原菌分离纯化、样本检测，包括样本的病原菌分离纯化、药物敏感性实验、生化鉴定、免疫学实验、药物敏感性实验、生化鉴定、免疫学实验、PCR核酸提取、涂片、显微观察等初步检测活核酸提取、涂片、显微观察等初步检测活动，可以在符合生物安全二级（动，可以在符合生物安全二级（BSL-2）的环）的环境中进行。境中进行。结核分枝杆菌实验操作要求结核分枝杆菌实验操作要求用于保护操作人员、处理样品安全与环境安用于保护操作人员、处理样品安全与

9、环境安全的通风安全柜，柜内保持负压状态，适用全的通风安全柜，柜内保持负压状态，适用于生物危险度等级为于生物危险度等级为1 1、2 2、3 3的媒质的操作。的媒质的操作。级生物安全柜为临床生物防护中应用最普级生物安全柜为临床生物防护中应用最普遍的一类生物安全柜。遍的一类生物安全柜。级生物安全柜级生物安全柜安全柜的最佳放置位置安全柜的最佳放置位置安全柜应该放在什么地方？安全柜应该放在什么地方？尽量隔离安全柜尽量隔离安全柜-降低人流降低人流-尽量离开风管出口尽量离开风管出口-尽量离开门和窗口尽量离开门和窗口注注 意意ABCDA ， B : 不可不可 D ，C : 建议建议Installation生物

10、安全柜的使用生物安全柜的使用准备：准备：l在开始工作前应考虑实验中的操作步骤和所在开始工作前应考虑实验中的操作步骤和所需设备，充分做好准备工作。需设备，充分做好准备工作。l准备好消毒剂和处理遗撒事件的物品。准备好消毒剂和处理遗撒事件的物品。l尽量减少房间内的走动，保证正常气流。尽量减少房间内的走动，保证正常气流。l前窗开至适当高度，打开安全柜的灯和风前窗开至适当高度，打开安全柜的灯和风机。机。l让生物安全柜工作区排气几分钟之后再开始让生物安全柜工作区排气几分钟之后再开始工作工作生物安全柜的使用生物安全柜的使用操作：操作：l消毒桌面（消毒桌面（75%75%酒精，使用紫外线作为表面消毒酒精，使用紫

11、外线作为表面消毒的效果不一定能完全无菌）的效果不一定能完全无菌）l安全柜内只放本次实验所需的物品。所有物品安全柜内只放本次实验所需的物品。所有物品离前窗至少离前窗至少15cm15cm，即在隔栅之后，所有污染性即在隔栅之后，所有污染性的操作尽量远离工作区域的后部。的操作尽量远离工作区域的后部。l大物体之间要保持一定距离。大物体之间要保持一定距离。生物安全柜的使用生物安全柜的使用操作：操作：l干净和被污染的物品分开放置；被污染的物品干净和被污染的物品分开放置；被污染的物品尽量不要进入干净区域，应放置在工作区域的尽量不要进入干净区域，应放置在工作区域的后部。后部。l操作时物品和手臂不要操作时物品和手

12、臂不要频繁穿过前窗。频繁穿过前窗。l操作完毕后，将物品表面用适当的消毒液擦拭操作完毕后，将物品表面用适当的消毒液擦拭后移出，用消毒液擦拭安全柜内面。后移出，用消毒液擦拭安全柜内面。污染区工作区清洁区不要覆盖前、后、侧边的隔栅不要覆盖前、后、侧边的隔栅操作完毕后用消毒操作完毕后用消毒液擦拭安全柜内面液擦拭安全柜内面生物安全柜内发生意外应急处理生物安全柜内发生意外应急处理用蘸取消毒液的纱布或纸巾覆盖溅出物，静置使消毒用蘸取消毒液的纱布或纸巾覆盖溅出物，静置使消毒液和溅出物接触至少液和溅出物接触至少1515分钟分钟用适当的消毒液擦拭溅出物周围表面或其他容器表面用适当的消毒液擦拭溅出物周围表面或其他容

13、器表面换新手套，净化安全柜几分钟换新手套，净化安全柜几分钟将污染物高压灭菌将污染物高压灭菌生物安全柜外发生意外应急处理生物安全柜外发生意外应急处理发生重大溅洒事故时，所有人应立即离开发生重大溅洒事故时，所有人应立即离开实验室，待气溶胶沉降完全后再处理。实验室，待气溶胶沉降完全后再处理。可以在可以在 BSCBSC内用火焰内用火焰 ? ?在生物安全柜内所形成的几乎没有微生物的在生物安全柜内所形成的几乎没有微生物的环境中，应避免使用明火。使用明火会对气环境中，应避免使用明火。使用明火会对气流产生影响。流产生影响。在对接种环进行灭菌时，可以使用微型燃烧在对接种环进行灭菌时，可以使用微型燃烧器或电炉，而

14、不应使用明火。器或电炉，而不应使用明火。高压灭菌器使用高压灭菌器使用u负责高压灭菌的人员应接受过良好的培训负责高压灭菌的人员应接受过良好的培训并持证上岗。并持证上岗。u灭菌前：灭菌前：l检查灭检查灭菌容器的菌容器的盖盖子，子，将盖将盖子旋子旋松后松后再放再放入入消毒物品。消毒物品。l容器內容器內各种液体约装各种液体约装八分八分满满，切勿，切勿装满。装满。l具有具有挥发性的物质挥发性的物质，不可，不可高压灭菌。高压灭菌。l灭菌灭菌前前务必确定务必确定水位在水位在正常要求水位正常要求水位以上。以上。高压灭菌器使用高压灭菌器使用灭菌过程中：灭菌过程中：l随时随时查看所查看所设设定定温度（温度（121

15、121度）、压力度）、压力是否是否正确正确。（。（121121度，度，3030分钟）分钟）灭菌后：灭菌后：l开门前务必确定开门前务必确定內內锅压力表已经归零锅压力表已经归零。l灭菌灭菌器中各器中各项项物品及物品及灭灭菌器本身均高菌器本身均高温温，取出物品取出物品时应戴时应戴手套手套。l随时随时保持保持锅锅內內清洁清洁，以延，以延长长使用年限使用年限。个人防护装备个人防护装备 (PPE)(PPE) 在生物安全实验室中，这些器材和用品主要是在生物安全实验室中，这些器材和用品主要是保护实验人员免于暴露于生物危害物质（气溶胶、保护实验人员免于暴露于生物危害物质（气溶胶、喷濺物以及意外接种等）危险的一种

16、物理屏障。喷濺物以及意外接种等）危险的一种物理屏障。防护部位防护部位 防护装备防护装备眼睛眼睛眼镜（安全镜、护目镜）眼镜（安全镜、护目镜）头面部、呼吸道头面部、呼吸道口罩（口罩（N95N95）、面罩、帽）、面罩、帽子子 躯体躯体防护服防护服( (实验服、隔离衣实验服、隔离衣) )手、足手、足手套、鞋套手套、鞋套N95N95是感染防是感染防护的最低标准，护的最低标准，N95N95口罩非常口罩非常重要，重要，“NIOSHNIOSH”认证。认证。不合格不合格个人防护装置选择原则个人防护装置选择原则要求工作人员应掌握的要点要求工作人员应掌握的要点l必须十分了解和掌握自己工作性质和特点必须十分了解和掌握自己工作性质和特点l所涉及的实验工作需要使用个人防护装备所涉及的实验工作需要使用个人防护装备的类型的类型l正确的使用方法正确的使用方法l使用前应仔细检查，不使用标志不清、破使用前应仔细检查，不使用标志不清、破损或泄漏的防护用品损或泄漏的防护用品个人防护个人防护出实验室前，一定要洗手！出实验室前，一定要洗手！废弃物处理废弃物处理l传染性废弃