专题五DNA的粗提取与鉴定PPT课件

1、 1.1.经过尝试对植物或动物组织中的经过尝试对植物或动物组织中的DNADNA进展粗提取，了解进展粗提取，了解DNADNA的物理化的物理化学性质。学性质。 2.2.了解了解DNADNA粗提取与鉴定的原理。粗提取与鉴定的原理。 1.提取DNA的方法： 1DNA的溶解性： 【思索1】DNA在氯化钠溶液中的溶解度有什么特点？对此有什么运用？ 【思索2】利用什么原理可以来将DNA与蛋白质进一步别分开？ 2DNA对酶、高温暖洗涤剂的耐受性：对酶、高温暖洗涤剂的耐受性：蛋白酶能水解蛋白酶能水解 ，但对，但对 没有影响；没有影响；大多数蛋白质不能忍受大多数蛋白质不能忍受 的高温，而的高温，而DNA在在 以上

2、才会变性。以上才会变性。 可以瓦解细胞膜，但对可以瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。没有影响。3DNA的鉴定：的鉴定：如何鉴定如何鉴定DNA？DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图在在NaClNaCl溶液浓度低于溶液浓度低于0.14 mol/L0.14 mol/L时，时，DNADNA的溶的溶解度随解度随NaClNaCl溶液浓度的溶液浓度的添 加 而 逐 渐 降 低 ； 在添 加 而 逐 渐 降 低 ； 在0.14 mol/L0.14 mol/L时，时，DNADNA溶解溶解度最小；当度最小；当NaClNaCl溶液浓溶液浓度继续添加时，度继续添加时，DNADNA的溶的溶解度又逐渐增大。解度又逐渐增大。

3、当氯化钠的物质的量浓度为 2 molL时，DNA的溶解度比较大，浓度为 014 molL时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出。 1.必修一学习的质壁分别，他还记得方法和原理吗? 2.鸡血细胞溶液： 1溶解细胞核内的DNA在浓度较高的NaCl溶液中核蛋白容易解聚，游离出的DNA溶解在溶液中。方法：在溶液中参与两倍体积的浓度为2 mol/L的NaCl溶液，搅拌1 min。留意应沿一个方向搅拌，使DNA充分溶解。2 DNA的析出 加蒸馏水降低NaCl溶液浓度，使DNA析出。方法：实验中应该缓慢贴壁参与蒸馏水，并悄然地沿一个方向不停地均匀搅拌，以利于DNA分子的附着和

4、缠绕。同时应留意控制加水量，使NaCl溶液的终浓度为0.10.2 mol/L。加水过程普通分三次进展，当总加水量为300 mL左右时，DNA已根本析出。加水太多、溶液过稀，会使DNA分子又重新溶解。用34层纱布对DNA稀释液进展过滤，滤去蛋白质，搜集DNA的黏稠物。假设采用离心法，效果更好。用4 000 r/min转速的离心机，离心15 min，除去上清液(含有蛋白质)，留下的沉淀物中含有DNA。此时留意察看DNA黏稠物的颜色。3将将DNA黏稠物再溶解，黏稠物再溶解， 思索：方案二与方案三的原理有什么不同？ 方案二利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取方案二利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的的D

5、NA与蛋白质分开与蛋白质分开 方案三利用的是方案三利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白量变性，与不同，从而使蛋白量变性，与DNA分别分别 思索：为什么参与预冷的酒精？预冷的乙醇溶液具有以下优点。预冷的乙醇溶液具有以下优点。1.1.抑制核酸水解酶活性，防止抑制核酸水解酶活性，防止DNADNA降解降解2.2.降低分子运动，易于构成沉淀析出降低分子运动，易于构成沉淀析出3.3.低温有利于添加低温有利于添加DNADNA分子柔韧性，减少断裂分子柔韧性，减少断裂 二苯胺法二苯胺法 在沸水浴的条件下，在沸水浴的条件下，DNADNA遇二苯胺变蓝。遇二苯胺变蓝。DNADNA

6、的鉴定的鉴定方法步骤方法步骤 参与物质参与物质 目的目的 1.制备鸡血细胞液制备鸡血细胞液 柠檬酸钠溶液柠檬酸钠溶液 2.提取鸡血细胞细胞核物质提取鸡血细胞细胞核物质 20 m120 m1蒸馏水蒸馏水 3.溶解细胞核内的溶解细胞核内的DNADNA 2 mo12 mo1 L 的 NaCl 溶液 40 mL 4.析出含DNA的黏稠物 蒸馏水 5.滤取含DNA的黏稠物 6.将DNA的黏稠物再溶解 2 molL 的NaCl溶液20 mL 7.过滤含DNA的NaCl 溶液 8.提取含有杂质较少的 DNA 冷却的95的酒精50 mL A:(1)向试管中参与2molL 的NaCl溶液5mL (2)参与DNA

7、 (3)4 mL二苯胺试剂 9.DNA的鉴定 B:(1)向试管中参与 2mol L 的NaCl溶液5mL (2)4 mL 二苯胺试剂 参与柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固参与柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固加速血细胞破裂加速血细胞破裂 溶解溶解DNADNA 使使2mol/L2mol/L的的NaClNaCl溶液稀释至溶液稀释至0.14mol/L0.14mol/L使得使得DNADNA最最大限制地释出大限制地释出 使含使含DNA的黏稠物被留在纱布上的黏稠物被留在纱布上使含使含DNADNA的黏稠物尽能够多的溶解于溶液中的黏稠物尽能够多的溶解于溶液中除去含除去含DNADNA的滤液中的杂质的滤液中的杂质提取提

8、取DNADNA A A出现蓝色出现蓝色 B B无变化无变化真题练习2019.18以下关于“DNA粗提取与鉴定实验的表达，正确的选项是A洗涤剂能瓦解细胞膜并添加DNA在NaCl溶液中的溶解度B将DNA丝状物放入二苯胺试剂中沸水浴后冷却变蓝C常温下菜花匀浆中有些酶类会影响DNA的提取D用玻棒缓慢搅拌滤液会导致DNA获得量减少2019.19在利用鸡血进展“DNA的粗提取与鉴定的实验中，相关表达正确的选项是A用蒸馏水将NaCl溶液浓度调至0.14 mol/L，滤去析出物B调理NaCl溶液浓度或参与木瓜蛋白酶，都可以去除部分杂质C将丝状物溶解在2 mol/L NaCl溶液中，参与二苯胺试剂即呈蓝色D用菜

9、花替代鸡血作为实验资料，其实验操作步骤一样2019.322019.32(7(7分分) )某生物兴趣小组开展某生物兴趣小组开展DNADNA粗提取粗提取的相关探求活动。详细步骤如下：的相关探求活动。详细步骤如下：资料处置：称取新颖的花菜、辣椒和蒜黄各资料处置：称取新颖的花菜、辣椒和蒜黄各2 2份每份每份份l0 gl0 g。剪碎后分成两组，一组置于。剪碎后分成两组，一组置于2020、另一、另一组置于一组置于一2020条件下保管条件下保管24 h24 h。DNADNA粗提取：粗提取：第一步：将上述资料分别放人研钵中，各参与第一步：将上述资料分别放人研钵中，各参与l5 mLl5 mL研磨液，充分研磨。用

10、两层纱布过滤取滤液备研磨液，充分研磨。用两层纱布过滤取滤液备用。用。第二步：先向第二步：先向6 6只小烧杯中分别注人只小烧杯中分别注人10mL10mL滤液，再加滤液，再加人人20 mL20 mL体积分数为体积分数为9595的冷酒精溶液，然后用玻的冷酒精溶液，然后用玻璃棒渐渐地向一个方向搅拌，使絮状物缠绕在玻璃棒渐渐地向一个方向搅拌，使絮状物缠绕在玻璃棒上。璃棒上。第三步：取第三步：取6 6支试管，分别参与等量的支试管，分别参与等量的2mol2molL NaClL NaCl溶溶液溶解上述絮状物。液溶解上述絮状物。DNADNA检测：在上述试管中各参与检测：在上述试管中各参与4 mL4 mL二苯胺试

11、剂。混合二苯胺试剂。混合均匀后，置于沸水中加热均匀后，置于沸水中加热5 min5 min，待试管冷却后比较，待试管冷却后比较溶液的颜色深浅溶液的颜色深浅, ,结果如下表。结果如下表。分析上述实验过程，回答以下问题：分析上述实验过程，回答以下问题：(1)(1)该探求性实验课题称号是该探求性实验课题称号是 。(2)(2)第二步中渐渐地搅拌，这是为了减少第二步中渐渐地搅拌，这是为了减少 。(3)(3)根据实验结果，得出结论并分析。根据实验结果，得出结论并分析。结论结论1 1：与：与2020相比，一样实验资料在相比，一样实验资料在-20-20条件下条件下保管，保管，DNADNA的提取量较多。的提取量较多。结论结论2 2： 。针对结论针对结论I I请提出合理的解释：请提出合理的解释： 。(4)(4)氯仿密度大于水，能使蛋白量变性沉淀，与水和氯仿密度大于水，能使蛋白量变