第五章中药制剂中各类化学成分分析

1、pyh 第五章第五章 中药制剂中各类化学成分分析中药制剂中各类化学成分分析江西中医学院药学系pyh第一节第一节 含生物碱类成分的分析含生物碱类成分的分析生物碱（生物碱（alkaloid）的概念的概念： 是一类是一类含含氮的碱性天然有机物氮的碱性天然有机物，大，大多数具有复杂的环状结构，氮原子在环多数具有复杂的环状结构，氮原子在环内，大多数具有光学活性，又特殊而显内，大多数具有光学活性，又特殊而显著的生理活性。著的生理活性。 pyh 二、生物碱的性质二、生物碱的性质： 1、性状：性状： 多为无色晶体（少数为无定型多为无色晶体（少数为无定型粉末，还有为液体味苦辛辣，有旋光，粉末，还有为液体味苦辛辣

2、，有旋光，与生理活性有关与生理活性有关 麻黄碱麻黄碱 挥发性挥发性 咖啡因咖啡因 升华性升华性 2、溶解性溶解性：大多极性较小，游离状态下：大多极性较小，游离状态下几乎不溶于水，溶于氯仿、乙醚、丙酮几乎不溶于水，溶于氯仿、乙醚、丙酮等有机溶剂；成盐后水溶性增加。等有机溶剂；成盐后水溶性增加。pyh 注意注意：a)酚性生物碱可溶于有机溶剂，也可溶于酚性生物碱可溶于有机溶剂，也可溶于碱水；碱水；b)小檗碱盐酸盐难溶于水；小檗碱盐酸盐难溶于水；c)季胺生物碱一般来说水溶性大；季胺生物碱一般来说水溶性大；pyh一、定性鉴别一、定性鉴别 中药制剂成分复杂，注意各成分之间中药制剂成分复杂，注意各成分之间的

3、相互干扰，进行化学鉴别反应时，先制的相互干扰，进行化学鉴别反应时，先制备供试品溶液，再提取分离生物碱成分后备供试品溶液，再提取分离生物碱成分后进行。进行。1、沉淀反应：沉淀反应： 注意假阳性注意假阳性 通常在通常在酸性水溶液酸性水溶液中进行，形成的沉淀的颜色和形态因生物碱种类不同而不同pyh 2、色谱鉴别色谱鉴别：薄层色谱：薄层色谱： 常用吸附剂：硅胶常用吸附剂：硅胶G 氧化铝氧化铝 展开剂：氯仿、苯展开剂：氯仿、苯 固定相为硅胶固定相为硅胶 ，流动相常加氨水或二，流动相常加氨水或二 乙胺乙胺方法：样品方法：样品 碱化碱化 氯仿提取氯仿提取 浓缩浓缩 点样点样 展开展开 显色显色注意：板层上要

4、有注意：板层上要有 对照品对照品、对照药材、阴对照药材、阴性对照性对照pyh 纸色谱法：不常用纸色谱法：不常用高效液相色谱法：高效液相色谱法： 定性鉴别参数：定性鉴别参数：tR 样品需经预处理，使用预柱样品需经预处理，使用预柱气相色谱法：气相色谱法： 适用于具有挥发性且过热不分解的生物碱适用于具有挥发性且过热不分解的生物碱pyh二、含量测定二、含量测定 方法较多，有方法较多，有酸碱滴定法、沉淀酸碱滴定法、沉淀法、酸性染料比色法、雷氏盐比色法、酸性染料比色法、雷氏盐比色法法，还有分光光度法、薄层扫描法、分光光度法、薄层扫描法、高效液相色谱法、气相色谱法高效液相色谱法、气相色谱法等 pyh（一）总

5、生物碱的含量测定（一）总生物碱的含量测定经典化学方法：经典化学方法：1、重量法重量法：直接重量法：具挥发性或或受热易分解或加碱易水解的样品不适用。 方法：样品 （碱化碱化） 有机溶剂提取 干燥 称重pyh 特点特点：取样量大，提取时易乳化、费时：取样量大，提取时易乳化、费时沉淀重量法：沉淀重量法： 方法：样品方法：样品 （碱化）（碱化） 有机溶剂提取有机溶剂提取 蒸干蒸干 加酸溶解加酸溶解 沉淀试剂沉淀试剂 沉淀沉淀 洗涤洗涤 干燥干燥 称重称重 计算计算 含量含量 = 沉淀重量化学因子沉淀重量化学因子 / 样品重量样品重量特点特点：取样量少，操作繁琐费时：取样量少，操作繁琐费时pyh 2、容

6、量法容量法： 常用方法有：水溶液常用方法有：水溶液酸碱滴定法酸碱滴定法、双相、双相滴定法、络合滴定法、沉淀容量法滴定法、络合滴定法、沉淀容量法酸碱滴定法酸碱滴定法 （总生物碱的测定）（总生物碱的测定） 生物碱分子中含有氮原子具有一定碱性生物碱分子中含有氮原子具有一定碱性1) 直接法：直接法： 用酸滴定（游离生物碱溶于水或水用酸滴定（游离生物碱溶于水或水乙醇液）乙醇液） pyh 用强碱滴定（生物碱盐溶于水或乙醇，用强碱滴定（生物碱盐溶于水或乙醇， 弱碱强酸盐显酸性）弱碱强酸盐显酸性）2）间接法：加定量过量的酸溶液间接法：加定量过量的酸溶液 碱碱标准溶液回滴定标准溶液回滴定 终点指示：酸碱指示剂或

7、电位计终点指示：酸碱指示剂或电位计 碱性较弱的生物碱可用非水滴定法。碱性较弱的生物碱可用非水滴定法。pyh 光谱法光谱法 利用物质对光所具的吸收性能而测利用物质对光所具的吸收性能而测定其含量的一种方法。定其含量的一种方法。1、可见分光光度法（比色法）可见分光光度法（比色法）： 生物碱自身有颜色生物碱自身有颜色 与氧化剂产生颜色与氧化剂产生颜色 与其他试剂反应产生颜色与其他试剂反应产生颜色 直接比色测定常用于药味少、干扰小的直接比色测定常用于药味少、干扰小的中药制剂中总生物碱的测定中药制剂中总生物碱的测定pyh 酸性染料比色法酸性染料比色法： 在一定在一定PH条件下条件下BHIn 定量被有机溶剂

8、提取，在一定波长定量被有机溶剂提取，在一定波长处进行测定处进行测定 注意注意：水相：水相PH 有机染料的选择有机染料的选择 有机溶剂的选择有机溶剂的选择 有机相中防止混入有机相中防止混入水分水分BH + In BHIn+-pyh 雷氏盐比色法雷氏盐比色法 方法：生物碱方法：生物碱+雷氏盐雷氏盐 沉淀沉淀 溶于丙溶于丙酮酮 520526nm处测吸收值处测吸收值pyh（二）单体生物碱的含量测定法（二）单体生物碱的含量测定法HPLC ：可采用正相、反相、离子对色谱可采用正相、反相、离子对色谱 常用反相高效液相色谱法（常用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）固定相：固定相：C18、 C8 ( C8柱较

9、好，硅醇基少）柱较好，硅醇基少）流动相：加扫尾剂流动相：加扫尾剂 三乙胺三乙胺、离子对试剂、离子对试剂、 季铵盐季铵盐（溴化四甲基胺）（溴化四甲基胺） 电解质缓冲溶液电解质缓冲溶液pyh目的目的：掩蔽生物碱的碱性基团与固定：掩蔽生物碱的碱性基团与固定相表面的硅醇基作用，使生物碱易于相表面的硅醇基作用，使生物碱易于出峰，且峰形好。出峰，且峰形好。 固定相也可用原型硅胶（吸附色固定相也可用原型硅胶（吸附色谱法）、阳离子交换树脂谱法）、阳离子交换树脂pyh TLC （TLC-S、TLC-UV） 分析前需用化学方法提取和纯化分析前需用化学方法提取和纯化 固定相固定相用碱液（用碱液（0.1-0.5mol

10、/LNaOH或或碱性缓冲溶液）代替水制作硅胶板层碱性缓冲溶液）代替水制作硅胶板层 流动相流动相氯仿为基本溶剂，加适量二乙氯仿为基本溶剂，加适量二乙 胺胺 展开缸展开缸内放含氨水的小容器内放含氨水的小容器GC 适用于有挥发性，遇热不分解的生适用于有挥发性，遇热不分解的生物碱，如：麻黄碱、苦参碱、颠茄类生物碱，如：麻黄碱、苦参碱、颠茄类生物碱物碱pyh第二节第二节 黄酮类制剂的分析黄酮类制剂的分析黄酮类化合物黄酮类化合物：具有两个芳环（：具有两个芳环（A与与B）通过三碳链相互联结而成的一系列化合通过三碳链相互联结而成的一系列化合物物,都称为黄酮类化合物（都称为黄酮类化合物（flavonoids ）

11、pyhpyh 7 7pyh910 黄酮类化合物黄酮类化合物是中药中的一类有效成分，是中药中的一类有效成分，具有抗菌消炎、扩张冠状动脉、降低血压具有抗菌消炎、扩张冠状动脉、降低血压止咳祛痰，降低胆固醇、抗肿瘤等作用止咳祛痰，降低胆固醇、抗肿瘤等作用所以，在中药制剂中常作为所以，在中药制剂中常作为药效学指标性药效学指标性成分成分进行分析研究进行分析研究pyh理化性质物理性状物理性状：多为结晶性固体，少数为无：多为结晶性固体，少数为无定形粉末定形粉末 旋光旋光：苷元：苷元 二氢黄酮、二氢黄酮醇、黄二氢黄酮、二氢黄酮醇、黄 烷、黄烷醇有旋光性；烷、黄烷醇有旋光性； 苷有糖的苷有糖的 结构，均有旋光性，

12、左旋结构，均有旋光性，左旋 黄酮颜色黄酮颜色：与含交叉共轭系统、助色基：与含交叉共轭系统、助色基 团的种类、数量、位置有关团的种类、数量、位置有关pyh 溶解性：溶解性： 游离的苷元难熔或不溶于水，一般溶游离的苷元难熔或不溶于水，一般溶于甲醇、乙醇、醋酸乙酯、乙醚等有机于甲醇、乙醇、醋酸乙酯、乙醚等有机 溶剂及稀碱液中。溶剂及稀碱液中。pyh一、定性鉴别一、定性鉴别在中药制剂中要鉴别黄酮类成分，一般需在中药制剂中要鉴别黄酮类成分，一般需经适当的提取分。经适当的提取分。（一）（一）化学显色反应：化学显色反应： 1、还原反应还原反应：盐酸镁粉反应是鉴别盐酸镁粉反应是鉴别中药制剂中黄酮类成分最常用的

13、方法。中药制剂中黄酮类成分最常用的方法。 黄酮类成分 花色苷元及其二聚物方法：样品 提取 取510ml 橙色或红色还原还原甲醇或乙醇甲醇或乙醇或乙酸乙酯或乙酸乙酯盐酸盐酸镁粉镁粉pyh 2、与金属盐类试剂的络合反应：、与金属盐类试剂的络合反应：常用试剂：三氯化铝、硝酸铝、二氯氧锆常用试剂：三氯化铝、硝酸铝、二氯氧锆的醇溶液的醇溶液（产生黄绿色荧光产生黄绿色荧光）pyh（二）薄层色谱法：（二）薄层色谱法： 是中药制剂中黄酮成分最常用的定性分是中药制剂中黄酮成分最常用的定性分析方法析方法硅胶薄层色谱法硅胶薄层色谱法：分离弱极性化合物较好：分离弱极性化合物较好 遵循正相色谱层析的规律遵循正相色谱层析

14、的规律 RCH3 RH ROCH3 R-O-糖糖 ROH常用溶剂有甲苯甲酸甲酯甲酸（5:4:1）; 甲苯氯仿丙酮(40:25:35); 苯甲醇（95:5）等pyh 聚酰胺薄层色谱聚酰胺薄层色谱：用于分离含游离酚：用于分离含游离酚羟基的黄酮苷与苷元较好羟基的黄酮苷与苷元较好 原理原理：黄酮类成分中含黄酮类成分中含酚羟基酚羟基，与聚酰，与聚酰胺分子中胺分子中酰胺基酰胺基形成形成氢键氢键，由于各种黄酮，由于各种黄酮类成分取代基的性质、多少和位置的不同，类成分取代基的性质、多少和位置的不同，与聚酰胺与聚酰胺形成氢键的能力有所差别形成氢键的能力有所差别而得到而得到分离。分离。 展开剂：极性较强如含醇、酸

15、、水展开剂：极性较强如含醇、酸、水 点样量：较小（载样量小）点样量：较小（载样量小）HPLC法法pyh 二、黄酮类成分的定量分析：二、黄酮类成分的定量分析： 方法主要有比色法、方法主要有比色法、UV、TLC、HPLC等等（一）（一）总黄酮含量测定总黄酮含量测定 1.紫外紫外 2.比色法比色法原药材原药材中黄酮类化合物分析中黄酮类化合物分析自身颜色自身颜色中药制剂中药制剂中黄酮类化合物分析中黄酮类化合物分析与铝盐反与铝盐反应（应（以芦丁作为对照品以芦丁作为对照品）3.HPLC: 银杏叶总黄酮醇苷银杏叶总黄酮醇苷pyh 薄层色谱薄层色谱 是中药制剂中单体黄酮类成分的有效办法。是中药制剂中单体黄酮类

16、成分的有效办法。样品样品 有机溶剂提取有机溶剂提取 层析层析 TLCS或刮下色斑或刮下色斑 溶剂洗脱溶剂洗脱 比色或分光光度法比色或分光光度法测定测定 HPLC 多用反相多用反相HPLC , C18柱，流动相常用甲醇柱，流动相常用甲醇水乙酸、乙腈水水乙酸、乙腈水极谱法、极谱法、计算分光光度法计算分光光度法（苯基色原酮）苯基色原酮） (二二)单体黄酮成分含量测定单体黄酮成分含量测定pyh第三节 皂甙类制剂的分析特点特点：其水溶液易引起肥皂样泡沫。具有其水溶液易引起肥皂样泡沫。具有 溶血、遇胆固醇形成复合物等特征。溶血、遇胆固醇形成复合物等特征。 无明显紫外吸收无明显紫外吸收按皂甙元分类按皂甙元分

17、类：甾体皂甙、三萜皂甙甾体皂甙、三萜皂甙pyh一、皂甙类成分的定性分析一、皂甙类成分的定性分析薄层色谱薄层色谱 是皂甙各组分定性鉴别中最常用的方法是皂甙各组分定性鉴别中最常用的方法pyh 吸附剂：硅胶或氧化铝吸附剂：硅胶或氧化铝皂甙皂甙：极性较大，要求硅胶吸附性较：极性较大，要求硅胶吸附性较弱，展开剂极性较大，常用的溶剂弱，展开剂极性较大，常用的溶剂系统氯仿甲醇水（系统氯仿甲醇水（13：7：2，下层）下层）皂甙元皂甙元：极性较小，以硅胶为吸附剂，：极性较小，以硅胶为吸附剂，展开剂亲脂性强，常用的溶剂系统展开剂亲脂性强，常用的溶剂系统以苯、氯仿、己烷、异丙醚为主要以苯、氯仿、己烷、异丙醚为主要组

18、成组成显色剂显色剂：三氯醋酸、浓硫酸、氯磺酸醋三氯醋酸、浓硫酸、氯磺酸醋酸酸pyh二、定量分析二、定量分析可分为可分为：总皂甙测定总皂甙测定、皂甙元测定皂甙元测定和单体单体皂甙测定皂甙测定 甲醇等溶剂提取甲醇等溶剂提取 水饱和正丁醇提取水饱和正丁醇提取 或大孔树脂处理或大孔树脂处理 测定（比色法、重量法）测定（比色法、重量法）总皂甙溶于极性溶剂总皂甙溶于极性溶剂样品样品pyh 皂甙元皂甙元： 提取提取 HCl/H2SO4样品样品总皂甙总皂甙皂甙元皂甙元溶剂提取溶剂提取TLC 、HPLC 比色法测定比色法测定单体皂甙的测定单体皂甙的测定： TLC 、HPLCpyh （一）比色法（一）比色法（总皂

19、甙、总皂甙元总皂甙、总皂甙元）皂甙能与皂甙能与某些试剂某些试剂反应产生颜色反应产生颜色 比色比色浓硫酸、高氯酸、硫酸浓硫酸、高氯酸、硫酸-醋酐、香草醛醋酐、香草醛-硫酸硫酸（二）薄层色谱法（二）薄层色谱法（皂甙元、单体皂甙皂甙元、单体皂甙） 斑点面积法、薄层洗脱斑点面积法、薄层洗脱-比色法或比色法或薄层扫描薄层扫描（三）（三）HPLC 多用多用RP-HPLCpyh第四节 醌类成分的分析 中药中醌类成分有中药中醌类成分有蒽醌蒽醌、萘醌、菲醌、萘醌、菲醌、苯醌等类型苯醌等类型理化性质：理化性质：性状：性状： 醌类化合物在药用方面有多种活性，带助色醌类化合物在药用方面有多种活性，带助色团，往往还呈现

20、黄色、红色或紫色团，往往还呈现黄色、红色或紫色 游离醌具有升华性，苯醌、萘醌游离醌具有升华性，苯醌、萘醌 蒽醌结合成苷，难得好晶型蒽醌结合成苷，难得好晶型最常见最常见pyh 溶解性溶解性：游离醌类能溶于有机溶剂游离醌类能溶于有机溶剂，如：，如：乙醇、乙醚、苯等。微溶或难溶于水。乙醇、乙醚、苯等。微溶或难溶于水。 成苷后极性增大，可溶于热水，易溶于成苷后极性增大，可溶于热水，易溶于醇醇，在冷水中溶解度较小，难溶于苯、，在冷水中溶解度较小，难溶于苯、氯仿等有机溶剂。氯仿等有机溶剂。酸碱性酸碱性：含酚羟基，显酸性，溶于碱，加含酚羟基，显酸性，溶于碱，加酸又游离出来酸又游离出来 碱提取碱提取 、酸沉淀

21、、酸沉淀pyh一、定性分析（一）化学显色法（一）化学显色法 蒽醌类化合物的分子中多具有蒽醌类化合物的分子中多具有 酚羟基酚羟基， 具有一定的酸性，能溶于碱性水溶液，并具有一定的酸性，能溶于碱性水溶液，并 产生颜色变化。产生颜色变化。(Borntrager反应反应) pyh （二）升华法（二）升华法 游离醌类多具有升华性游离醌类多具有升华性 中药制剂中这类成分量较大，可采中药制剂中这类成分量较大，可采用升华法得到升华物，可见光下观察用升华法得到升华物，可见光下观察或加碱试液显色定性或加碱试液显色定性 如：牛黄解毒丸中大黄的鉴别如：牛黄解毒丸中大黄的鉴别pyh （三）薄层层析（三）薄层层析 是鉴别

22、含蒽醌类成分的中药制剂的最是鉴别含蒽醌类成分的中药制剂的最主要的定性方法。主要的定性方法。 吸附剂吸附剂：硅胶：硅胶 展开剂展开剂：大多含水或甲醇，增大展开剂极：大多含水或甲醇，增大展开剂极性以及蒽醌类成分的溶解度性以及蒽醌类成分的溶解度 显色方法显色方法：碱性试剂或醋酸镁甲醇液，氨：碱性试剂或醋酸镁甲醇液，氨气熏及在紫外灯下（气熏及在紫外灯下（365nm）观察荧光。观察荧光。 亦可在可见光下直接观察色斑。亦可在可见光下直接观察色斑。pyh二、含量测定 蒽醌类成分的定量分析比色法：比色法：样品样品分液漏斗中碱提分液漏斗中碱提比色比色极性小极性小（1,8二羟基蒽醌二羟基蒽醌为对照、为对照、醋酸镁

23、甲醇溶液）醋酸镁甲醇溶液）游离蒽醌的测定游离蒽醌的测定： 非极性溶剂非极性溶剂 索氏提取器索氏提取器pyh 结合蒽醌的测定：结合蒽醌的测定： 样品样品 HCl/H2SO4 水解水解 氯仿提取氯仿提取碱提碱提比色比色总蒽醌总蒽醌总蒽醌总蒽醌 游离蒽醌结合蒽醌游离蒽醌结合蒽醌注意：分析含蒽醌类成分的天然药物时，注意：分析含蒽醌类成分的天然药物时，往往规定要测定往往规定要测定总蒽醌类成分总蒽醌类成分、蒽醌甙元蒽醌甙元（游离蒽醌）和（游离蒽醌）和葡萄糖甙葡萄糖甙（结合蒽醌）（结合蒽醌）pyh蒽醌类单体成分的测定蒽醌类单体成分的测定薄层色谱法薄层色谱法主要用于分离测定单体蒽醌类化合物主要用于分离测定单体

24、蒽醌类化合物 吸附剂吸附剂：硅胶：硅胶 展开剂展开剂：大多含水或甲醇，增大展开剂：大多含水或甲醇，增大展开剂极性以及蒽醌类成分的溶解度极性以及蒽醌类成分的溶解度 显色方法显色方法：碱性试剂或醋酸镁甲醇液：碱性试剂或醋酸镁甲醇液测定测定：比色或分光光度法、：比色或分光光度法、TLCSpyh(三)高效液相色谱法主要用于分离单体蒽醌类化合物主要用于分离单体蒽醌类化合物分离效果，可避免拖尾现象。分离效果，可避免拖尾现象。pyh第五节第五节 含挥发性成分制剂的分析含挥发性成分制剂的分析 挥发性成分是指中药中一类具有芳香挥发性成分是指中药中一类具有芳香气并易挥发的成分。气并易挥发的成分。 挥发油（精油）是

25、存在于植物体中一挥发油（精油）是存在于植物体中一类可随水蒸气蒸馏得到的于水不混溶的油类可随水蒸气蒸馏得到的于水不混溶的油状液体。具有较强的生物活性。状液体。具有较强的生物活性。 按化合物结构分：脂肪族化合物、芳按化合物结构分：脂肪族化合物、芳香族化合物和萜类化合物香族化合物和萜类化合物pyh 一、定性分析化学反应：化学反应： 萜类多有双键萜类多有双键 氢卤酸氢卤酸 加成反应加成反应 内酯类挥发油内酯类挥发油 羟胺羟胺 羟肟酸羟肟酸 FeCl3 显色显色 挥发油含不饱和物挥发油含不饱和物 高锰酸钾高锰酸钾 褪色褪色薄层色谱法：薄层色谱法：固定相：硅胶、氧化铝固定相：硅胶、氧化铝展开剂：正己烷和石

26、油醚展开剂：正己烷和石油醚根据极性大小分离：根据极性大小分离：烃（萜）烃（萜） 醚醚 酯酯 醛、酮醛、酮 醇、酚醇、酚 酸酸pyh 气相色谱法：（联用）气相色谱法：（联用） 是目前挥发油成分微量分离和鉴定的较理想是目前挥发油成分微量分离和鉴定的较理想的方法的方法 需在两种以上不同极性色谱柱上进行比较，需在两种以上不同极性色谱柱上进行比较，Rt一致。一致。二、挥发油类成分的定量分析二、挥发油类成分的定量分析（一）气相色谱法（单体，可用（一）气相色谱法（单体，可用HPLC） 填充柱、毛细管柱填充柱、毛细管柱 硅烷化白色担体硅烷化白色担体 固定相：非极性饱和烃，角鲨烷、硅固定相：非极性饱和烃，角鲨烷

27、、硅烷酮、甲基硅油等；极性固定相，聚酯类、聚乙二醇类烷酮、甲基硅油等；极性固定相，聚酯类、聚乙二醇类 检测器：检测器：FID 测定方法：归一化法测定方法：归一化法pyh总量总量 烧瓶烧瓶挥发油挥发油测定器测定器回流回流冷凝管冷凝管pyh 测定法测定法 甲法：甲法：本法适用于测定相对密度本法适用于测定相对密度在在1.01.0以下的挥发油以下的挥发油。取供试品适量。取供试品适量( (约相约相 当于含挥发油当于含挥发油0.50.51.01.0ml)ml)，称定重量称定重量( (准准确至确至0.010.01g), g), 置烧瓶中，加水置烧瓶中，加水300300500500mlml（或或 适量）与玻璃

28、珠数粒，振摇适量）与玻璃珠数粒，振摇混合后，连接挥发油测定器与回流冷凝混合后，连接挥发油测定器与回流冷凝管。自冷凝管上端加管。自冷凝管上端加 水使充满挥发油测水使充满挥发油测定器的刻度部分，并溢流入烧瓶时为止。定器的刻度部分，并溢流入烧瓶时为止。pyh 置电热套中或用其他适宜方置电热套中或用其他适宜方 法缓缓加热法缓缓加热至沸，并保持微沸约至沸，并保持微沸约5 5小时小时, ,至测定器中油至测定器中油量不再增加，停止加热量不再增加，停止加热, ,放置片刻放置片刻, , 开启测开启测定器下端的活塞，将水缓缓放出，至油定器下端的活塞，将水缓缓放出，至油层上端到达刻度层上端到达刻度0 0线上面线上面

29、5 5mmmm处为止。放处为止。放置置 1 1小时以上，再开启活塞使油层下降至小时以上，再开启活塞使油层下降至其上端恰与刻度其上端恰与刻度0 0线平齐，读取挥发油量，线平齐，读取挥发油量，并计算并计算 供试品中挥发油的含量（供试品中挥发油的含量（%）。）。pyh 乙法：乙法：本法适用于测定相对密度在本法适用于测定相对密度在1.01.0以以上的挥发油上的挥发油。取水约。取水约300300mlml与玻璃珠数粒，与玻璃珠数粒， 置烧瓶中，连接挥发油测定器。自测定置烧瓶中，连接挥发油测定器。自测定器上端加水使充满刻度部分，并溢流入器上端加水使充满刻度部分，并溢流入烧瓶时为烧瓶时为 止，再用移液管加入二

30、甲苯止，再用移液管加入二甲苯1 1mlml，然后连接回流冷凝管。将烧瓶内容物加然后连接回流冷凝管。将烧瓶内容物加热至沸腾热至沸腾, ,并继并继 续蒸馏，其速度以保持续蒸馏，其速度以保持pyh 冷凝管的中部呈冷却状态为度。冷凝管的中部呈冷却状态为度。3030分钟后，分钟后，停止加热，放置停止加热，放置1515分分 钟以上，读取二甲钟以上，读取二甲苯的容积。然后照甲法自苯的容积。然后照甲法自“取供试品适取供试品适量量”起，依法测定，自油层量起，依法测定，自油层量 中减去二中减去二甲苯量，即为挥发油量，再计算供试品甲苯量，即为挥发油量，再计算供试品中含挥发油的含量（中含挥发油的含量（%）。）。 py

31、h第一节第一节 含动物药中药制剂的分析含动物药中药制剂的分析常用的几种动物药常用的几种动物药牛牛黄黄麝麝香香蛇蛇胆胆蟾蟾酥酥熊熊胆胆pyh一、牛黄及其制剂的分析一、牛黄及其制剂的分析牛黄的主要成分牛黄的主要成分 胆酸胆酸 胆红素胆红素 去氧胆酸去氧胆酸 胆固醇胆固醇 牛黄酸牛黄酸 氨基酸氨基酸 无机盐等无机盐等人工牛黄的主要成分人工牛黄的主要成分 胆酸胆酸 胆红素胆红素 猪去氧胆酸猪去氧胆酸 胆固醇胆固醇 无机盐等无机盐等 pyh（一）胆汁酸的化学反应（一）胆汁酸的化学反应1、pettenkofer 反应反应 蔗糖蔗糖+浓硫酸浓硫酸 羟甲基糠醛羟甲基糠醛 1糠醛糠醛 胆汁酸胆汁酸 红色红色2胆

32、汁酸胆汁酸紫色紫色胆汁胆汁1ml蓝色蓝色胆酸定量反应胆酸定量反应pyh 3、Hammarsten 反应反应 胆酸胆酸+20铬酸溶液铬酸溶液 呈现不同的颜色呈现不同的颜色 （可用于（可用于区别胆酸同系物区别胆酸同系物）（二）胆红素的化学反应（二）胆红素的化学反应 1、Gmeli 反应反应 胆红素胆红素 浓硝酸浓硝酸 显色显色 2、胆红素、胆红素+对氨基苯磺酸重氮盐对氨基苯磺酸重氮盐 显色显色 （可用（可用比色法测定含量比色法测定含量 4532nm）pyh人工牛黄的定性鉴别（1）化学反应：）化学反应： 硫酸硫酸 /过氧化氢过氧化氢 污绿色污绿色(胆红素胆红素) 硫酸硫酸/新制糠醛新制糠醛 蓝紫色（

33、胆酸）蓝紫色（胆酸） （2）可见分光光度法）可见分光光度法 max4532nm (胆红素胆红素) (3) IR (4) TLC 胆酸胆酸 硅胶硅胶G 10硫酸乙醇液显色硫酸乙醇液显色 胆红素胆红素 硅胶硅胶G 自然光下黄色斑点自然光下黄色斑点 去氧胆酸去氧胆酸 硅胶硅胶G（紫外灯下看荧光）（紫外灯下看荧光）pyh人工牛黄的含量测定人工牛黄的含量测定胆酸的含量测定胆酸的含量测定 无共轭结构无共轭结构 HPLC 蒸发光散射检测器蒸发光散射检测器pyh二、麝香二、麝香 化学成分复杂，主要成分化学成分复杂，主要成分麝香酮，一般麝香酮，一般含量为含量为24，其他成分有：，其他成分有：雄甾烷雄甾烷， 胆固

34、醇脂、胆固醇脂、肽类肽类、 蛋白质蛋白质 氨基酸及麝香吡啶氨基酸及麝香吡啶pyh 定性鉴别：定性鉴别： 1、TLC 2、GC法法含量测定含量测定：GC法法 麝香酮麝香酮 含量不得少于含量不得少于2pyh三、熊胆及其制剂的分析三、熊胆及其制剂的分析成分成分：熊胆中胆汁酸的成分为熊胆中胆汁酸的成分为 牛磺熊去氧胆酸牛磺熊去氧胆酸熊去氧胆酸熊去氧胆酸碱水解碱水解pyh 定性鉴别：定性鉴别：光谱鉴别：光谱鉴别：2732nm 有吸收有吸收 TLC胆酸胆酸猪去氧胆酸猪去氧胆酸鹅去氧胆酸鹅去氧胆酸去氧去氧熊去氧胆酸熊去氧胆酸对照溶液对照溶液供试溶液供试溶液示意图示意图石胆酸石胆酸pyh 结合胆汁酸的含量测定

35、结合胆汁酸的含量测定 HPLC 蒸发光散射检测器蒸发光散射检测器pyh四、蛇胆及其制剂的分析四、蛇胆及其制剂的分析主要成分：主要成分： 胆酸含量胆酸含量蛇胆汁的质量标准蛇胆汁的质量标准 胆汁比重胆汁比重 总固体含量总固体含量pyh 定性鉴别：定性鉴别：TLC含量测定：含量测定： HPLCpyh五、蟾酥五、蟾酥主要成分主要成分： 蟾蜍甾二烯蟾蜍甾二烯 强心甾烯强心甾烯蟾毒类蟾毒类 吲哚碱类吲哚碱类生理活性强，毒性大，质量要严格控制生理活性强，毒性大，质量要严格控制pyh 定性鉴别：定性鉴别：薄层色谱（邻苯二醛显色剂）薄层色谱（邻苯二醛显色剂）定量分析定量分析HPLC 蟾毒内酯蟾毒内酯斑蝥斑蝥 G

36、C 斑蝥素斑蝥素鹿茸鹿茸 HPLC 嘌呤、尿苷嘌呤、尿苷羚羊角羚羊角 凯氏定氮凯氏定氮 pyh含矿物药中药制剂的分析一、概述: 矿物药主要包括： 天然矿物、生物化石、人类加工品及 纯粹化学制品，主要是无机化合物。含矿物药中药制剂的分析含矿物药中药制剂的分析2010版版中国药典中国药典中有中有24个中药制剂测个中药制剂测定了矿物药的含量其中定了矿物药的含量其中滴定分析法滴定分析法 20种种，其他方法还有其他方法还有重量分析法、紫外光谱法和重量分析法、紫外光谱法和原子吸收光谱法等。原子吸收光谱法等。 pyh(一) 矿物药的分类：1. 含砷的矿物药：如雄黄、雌黄、信石、砒霜等。2. 含汞的矿物药：如

37、朱砂、灵砂、轻粉、红粉等。3. 含铅的矿物药：如红丹、铅粉、密陀僧、铅霜等。4. 含铜的矿物药：如胆矾、铜绿、绿盐、扁青、空青等。5. 含铁的矿物药：如赭石、磁石、禹余粮、皂矾、黄矾等。6. 含钙的矿物药：如石膏、钟乳石、花蕊石、紫石英等。7. 含硅的矿物药：如滑石、白石英、阳起石、云母石等。8. 含硫的矿物药：如芒硝、朴硝、玄明粉、硫黄等。9. 含氯的矿物药：如大青盐、秋石、紫脑砂、白脑砂等。10. 其他矿物药：白矾、炉甘石、硼砂、硝石、琥珀等。 含矿物药中药制剂的分析含矿物药中药制剂的分析pyh(二) 矿物药的分析方法：1. 试样的分解方法 溶解法（湿法）、熔融法（干法）含矿物药中药制剂的

38、分析含矿物药中药制剂的分析矿物药分析的基本程序矿物药分析的基本程序 取样取样试样的分解试样的分解定性定性定量定量分析结果。分析结果。2定性鉴别定性鉴别a离子反应离子反应 b火焰反应火焰反应 c沉淀反应沉淀反应 d气体鉴别气体鉴别 e显微鉴别显微鉴别 f热分析法热分析法 pyha. 化学分析法常用配位滴定、酸碱滴定、氧化还原滴定 和重量分析法b. 可见分光光度法如高价汞与双硫腙作用生成橙色化合物；镉与双硫腙生成玫瑰红配合物等 。 c. 原子吸收分光光度法可测定几乎全部金属元素 d.电感耦合等离子光谱法（ICP )可应用于矿物药及其制剂中各种微量元素的分析 2.含量测定方法：含量测定方法：含矿物药

39、中药制剂的分析含矿物药中药制剂的分析pyh二、含砷矿物药及其制剂分析： 雄黄（As2S2）、雌黄（As2S3）、砒石（As2O3）、 砒霜等。 含矿物药中药制剂的分析含矿物药中药制剂的分析pyh雄黄(As2S2)的测定 （一）定性鉴别（一）定性鉴别（1）检验硫 224233322NOClSOH2KAsO2HNO3KClO2SAsHCl2BaSOBaClSOH4242232222SO4OAs2O7SAs2OHSAsSH3AsOH232H233含矿物药中药制剂的分析含矿物药中药制剂的分析 （2）检验砷 pyh硫酸分解硫酸分解-直接碘量法直接碘量法 取样品粉末，加过氧化钠取样品粉末，加过氧化钠-碳酸

40、钠混合溶剂（碳酸钠混合溶剂（2:1），搅），搅匀，匀，600 C650 C熔融熔融5分钟，冷后用水浸出，加少量分钟，冷后用水浸出，加少量过氧化钠，煮沸除尽过氧化氢，冷后加酚酞指示剂，用过氧化钠，煮沸除尽过氧化氢，冷后加酚酞指示剂，用硫酸中和至溶液无色，稍过量，加碘化钾，加热煮沸，硫酸中和至溶液无色，稍过量，加碘化钾，加热煮沸，至溶液呈浅黄色，冷却，加入至溶液呈浅黄色，冷却，加入20%酒石酸钾溶液，加淀酒石酸钾溶液，加淀粉指示剂，滴加粉指示剂，滴加0.1mol/L硫代硫酸钠溶液至蓝色消失，硫代硫酸钠溶液至蓝色消失，用氨水调至酚酞变红色，滴加用氨水调至酚酞变红色，滴加1:1硫酸至红色消失。冷却，硫

41、酸至红色消失。冷却，加入碳酸氢钠饱和溶液，用加入碳酸氢钠饱和溶液，用0.1mol/L碘液调至蓝色。碘液调至蓝色。含矿物药中药制剂的分析含矿物药中药制剂的分析（二）含量测定（二）含量测定 1.碘量法碘量法（1）直接碘量法）直接碘量法pyh碱熔分解碱熔分解-直接碘量法直接碘量法 硫酸与过氧化氢分解硫酸与过氧化氢分解-间接碘量法：取样品粉末，间接碘量法：取样品粉末，加硫酸，加热，在振摇下缓缓滴加加硫酸，加热，在振摇下缓缓滴加30%过氧化氢过氧化氢溶液至澄明，继续加热溶液至澄明，继续加热3 5分钟以除尽剩余的过分钟以除尽剩余的过氧化氢，放冷，加水，分三次加入适量氧化氢，放冷，加水，分三次加入适量Na2

42、CO3，待气泡冒尽后，立即加入待气泡冒尽后，立即加入KI，混匀，在暗处放置，混匀，在暗处放置10分钟，加水稀释，用分钟，加水稀释，用0.1mol/L硫代硫酸钠溶液硫代硫酸钠溶液滴定至呈浅黄色，加淀粉指示剂滴定至呈浅黄色，加淀粉指示剂2mL，继续滴定，继续滴定至蓝色消失。至蓝色消失。含矿物药中药制剂的分析含矿物药中药制剂的分析pyh2.分光光度法 取样品适量，精密称定，加稀盐酸适量，搅拌取样品适量，精密称定，加稀盐酸适量，搅拌30分分钟，滤过，残渣用稀盐酸洗涤两次，合并滤液，用钟，滤过，残渣用稀盐酸洗涤两次，合并滤液，用稀盐酸定容于容量瓶中，精密量取此液一定体积至稀盐酸定容于容量瓶中，精密量取此

43、液一定体积至砷化氢发生器的三角瓶中，加硫酸，加水稀释，加砷化氢发生器的三角瓶中，加硫酸，加水稀释，加入一定量的碘化钾和氯化亚锡溶液，放置入一定量的碘化钾和氯化亚锡溶液，放置15分钟，分钟，加入锌粒，立即接上导管通入盛有二乙基二硫代氨加入锌粒，立即接上导管通入盛有二乙基二硫代氨基甲酸银基甲酸银-三乙胺三乙胺-氯仿吸收液的吸收管中，反应氯仿吸收液的吸收管中，反应40分分钟后，取下吸收管，用氯仿补足吸收液至一定体积，钟后，取下吸收管，用氯仿补足吸收液至一定体积，在分光光度计上于在分光光度计上于510nm波长处测吸收度，同时绘制波长处测吸收度，同时绘制标准曲线，计算含量。标准曲线，计算含量。 含矿物药

44、中药制剂的分析含矿物药中药制剂的分析pyh例例1 克痢痧胶囊雄黄的含量测定克痢痧胶囊雄黄的含量测定碘量法碘量法处方组成处方组成 ：白芷：白芷 苍术苍术 石菖蒲石菖蒲 细辛细辛 荜茇荜茇 鹅不食鹅不食草草 猪牙皂猪牙皂 雄黄雄黄 丁香丁香 硝石硝石 枯矾枯矾 冰片冰片测定方法：取装量差异项下的本品内容物，研细，取测定方法：取装量差异项下的本品内容物，研细，取约约2.8g，精密称定，置，精密称定，置250ml凯氏烧瓶中，加硫酸钾凯氏烧瓶中，加硫酸钾2g、硫酸铵、硫酸铵3g与硫酸与硫酸12ml，置电热套中加热至溶液呈，置电热套中加热至溶液呈乳白色，放冷，用水乳白色，放冷，用水50ml分分4次转移至次

45、转移至250ml锥形瓶锥形瓶中，加热微沸中，加热微沸5分钟，放冷，加酚酞指示液分钟，放冷，加酚酞指示液2滴，用氢滴，用氢氧化钠溶液（氧化钠溶液（40 :100）中和至溶液显微红色，放冷，）中和至溶液显微红色，放冷，用用0.25mol/L硫酸溶液中和至褪色，加碳酸氢钠硫酸溶液中和至褪色，加碳酸氢钠5g，摇匀后，用碘滴定液（摇匀后，用碘滴定液（0.05mol/L）滴定，至近终点）滴定，至近终点时，加淀粉指示液时，加淀粉指示液2ml，滴定至溶液显紫蓝色。，滴定至溶液显紫蓝色。每每1ml碘滴定液（碘滴定液（0.05mol/L）相当于）相当于5.348mg的二硫的二硫化二砷（化二砷（As2S2） 含矿物

46、药中药制剂的分析含矿物药中药制剂的分析pyh三、含汞矿物药及其制剂分析： 水银（Hg）、朱砂（HgS）、升药（HgO）、 轻粉（Hg2Cl2）等。含矿物药中药制剂的分析含矿物药中药制剂的分析pyh（一）定性鉴别（一）定性鉴别1亚汞盐亚汞盐（1）取供试品溶液，加氨试液或氢氧化钠试液，即变黑色。）取供试品溶液，加氨试液或氢氧化钠试液，即变黑色。（2）取供试品溶液，加碘化钾试液，振摇，即生成黄绿色沉）取供试品溶液，加碘化钾试液，振摇，即生成黄绿色沉淀，瞬即变为灰绿色，并逐渐变为灰黑色。淀，瞬即变为灰绿色，并逐渐变为灰黑色。2汞盐汞盐（1）Hg2+2OH- HgO （黄色沉淀 ） +H2O（2）Hg2+ 2I- HgI2 HgI2+2I- 24HgI3.取不含过量硝酸的供试品溶液，涂于光亮的铜箔表取不含过量硝酸的供试品溶液，涂于光亮的铜箔表面，擦拭后可见一层光亮似银的沉积物。面，擦拭后可见一层光亮似银的沉积物。含矿物药中药制剂的分析含矿物药中药制剂的分析pyh（二）含量测定（二）含量测定1硫氰酸盐法 滴定反应如下：Hg2+ 2SCN- Hg(SCN)2终点时 ：Fe3+ + SCN- FeSCN2+2.分光度法 高价汞与双硫腙作用生成橙色配合，溶于四氯化碳溶液 ，波长，波长492nm），测定吸光度），测定