第二章 天然药物化学成分的提取与分离

1、第二章 天然药物化学成分的提取与分离第1页，共108页。药材粗粉提取混合物 分离有效成分第2页，共108页。提取分离方法溶剂提取法溶剂提取法水蒸汽蒸馏法水蒸汽蒸馏法两相溶剂萃取法两相溶剂萃取法沉淀法沉淀法透析法透析法分馏法分馏法盐析法盐析法结晶法与重结晶法结晶法与重结晶法超临界流体萃取法超临界流体萃取法色谱法色谱法第3页，共108页。一、溶剂提取法第一节 天然药物化学成分的提取1、溶剂的极性极性：指一根共价键或一个共价分子中电荷分布的不均匀性。如果电荷分布得不均匀，则称该键或分子为极性；如果均匀，则称为非极性。与介电常数成正相关。 第4页，共108页。H2O (水) 78.5 HCOOH (甲

2、酸) 58.5 HCON(CH3)2 (N,N-二甲基甲酰胺) 36.7 CH3OH (甲醇) 32.7 C2H5OH (乙醇) 24.5 CH3COCH3 (丙酮) 20.7 n-C6H13OH （正己醇） 13.3 CH3COOH (乙酸) 6.15 C6H6 (苯) 2.28 CCl4 (四氯化碳) 2.24 n-C6H14 （正己烷） 1.88 介电常数第5页，共108页。 由弱到强的顺序如下：石油醚石油醚(低沸点低沸点 高沸点高沸点) 二硫化碳二硫化碳 四氯化碳四氯化碳 苯苯 二氯甲烷二氯甲烷 氯仿氯仿乙醚乙醚 醋酸乙酯醋酸乙酯 正丁醇正丁醇 丙酮丙酮 乙醇乙醇甲醇甲醇 水水选择溶剂

3、的要点：能有效的提取成分；相似相溶，沸点适中易回收；低毒安全。第6页，共108页。2、溶剂的类型水水 亲水性有机溶剂（极性溶剂）亲水性有机溶剂（极性溶剂）亲脂性有机溶剂（非极性溶剂）亲脂性有机溶剂（非极性溶剂）第7页，共108页。（1）水优点优点：溶解范围广、穿透能力强、易得、安全 缺点缺点：a.有些苷类成分的酶解 b.有些脂溶性成分溶解不完全 c.水提液易发霉、变质 d.水溶性杂质多，过滤困难 e.沸点高，浓缩困难第8页，共108页。(2)亲水性有机溶剂优点优点：溶解范围广、水溶性杂质溶出少、提取液不易发霉、变质、大部分可回收利用。缺点缺点：但有挥发性、易燃烧。第9页，共108页。（3）亲脂

4、性有机溶剂优点：优点：对化合物溶解选择性较强、水溶性杂质少、易纯化。缺点：挥发性大、易燃烧，有毒、价格昂贵，对提取设备要求高穿透力较弱，提取时间长。第10页，共108页。3、被提取成分的性质u极性（亲水性）u非极性（亲脂性）u中等极性（既有亲水性又有亲脂性）常见取代基的极性大小顺序：酸酚醇胺醛酮酯醚烯烷 第11页，共108页。4、溶剂选择的原则（1）“相似相溶”，对有效成分溶解度大，对杂志溶解度小。（2）溶剂与所溶成分不发生化学反应，即使发生也是可逆的。（3）廉价、易得、使用安全、易于回收和浓缩。第12页，共108页。（三）提取技术1、浸渍法适用于：有效成分遇热易破坏及含淀粉、果胶、粘液质、树

5、胶等多糖物质较多的中药。第13页，共108页。2、煎煮法适用于：能溶于水且遇热稳定成分的提取。第14页，共108页。3、渗漉法适用于：遇热易被破坏的成分。第15页，共108页。4、回流提取法适用于：对热稳定的成分提取。第16页，共108页。5、连续回流提取法索氏提取器第17页，共108页。溶剂提取法分类溶剂提取法分类提取方法提取方法溶剂溶剂操作操作提取效率提取效率使用范围使用范围备注备注浸渍法浸渍法水水有机溶剂有机溶剂不加热，在常不加热，在常温下浸泡提取温下浸泡提取 效率低效率低各类成分，各类成分，尤遇热不稳尤遇热不稳定成分定成分出膏率低，易出膏率低，易发霉，需加防发霉，需加防腐剂腐剂渗漉法渗

6、漉法有机溶剂有机溶剂不加热不加热渗漉筒渗漉筒 脂溶性成分脂溶性成分消耗溶剂量消耗溶剂量大，费时长大，费时长煎煮法煎煮法水水直火加热直火加热水溶性成分水溶性成分易挥发、热不易挥发、热不稳定不宜用稳定不宜用回流提取回流提取法法有机溶剂有机溶剂在回流装置中在回流装置中水浴加热提取水浴加热提取脂溶性成分脂溶性成分热不稳定不宜热不稳定不宜用，溶剂量大用，溶剂量大连续回流连续回流提取法提取法有机溶剂有机溶剂以索氏提取器以索氏提取器水浴加水浴加热回流提取热回流提取 节省溶剂节省溶剂效率最高效率最高亲脂性较强亲脂性较强成分成分时间长时间长第18页，共108页。（四）影响提取效率的主要因素 溶剂的选择（关键）提

7、取技术浓度差药物的粉碎度温度、时间第19页，共108页。（五）提取液的浓缩1、蒸馏 指将提取液加热浓缩，特点是不仅对回收的溶剂可再利用，降低成本，减少有机溶剂对环境的污染和对操作人员的危害。第20页，共108页。2、蒸发 通过加热使提取液中的溶剂气化并除去，从而提高提取液浓度。第21页，共108页。 原理：原理：被提取成分和水一起加热时，其蒸汽压与水蒸气被提取成分和水一起加热时，其蒸汽压与水蒸气压总和为一个大气压，液体沸腾，水蒸气将挥发性成分一压总和为一个大气压，液体沸腾，水蒸气将挥发性成分一并带出。并带出。 范围：范围：难溶于水或不溶于水的挥发性成分，加热不被破难溶于水或不溶于水的挥发性成分

8、，加热不被破坏。如：挥发油、小分子的香豆素类、小分子的醌类成坏。如：挥发油、小分子的香豆素类、小分子的醌类成分。分。二、水蒸气蒸馏法： 共水蒸馏法（即直接加热法）共水蒸馏法（即直接加热法）通水蒸气蒸馏法通水蒸气蒸馏法第22页，共108页。适用于：具有挥发性、能随水蒸气蒸馏而不被破坏、与水不发生反应且不溶或难溶于水的成分的提取。第23页，共108页。三、超临界流体萃取三、超临界流体萃取物质处于临界温度和临界压力以上状态时，成为单物质处于临界温度和临界压力以上状态时，成为单一相态，称超临界状态。一相态，称超临界状态。 兼具有气液两相性质（兼具有气液两相性质（常用萃取剂常用萃取剂CO2）：）：液体相

9、近的密度，强穿透力；液体相近的密度，强穿透力；气体相近的扩散力，提取速率高。气体相近的扩散力，提取速率高。第24页，共108页。第25页，共108页。第二节 天然药物化学成分的分离一、两相溶剂萃取法（一）基本原理液液萃取是以分配定律为基础液液萃取是以分配定律为基础分配定律：一定分配定律：一定T T、P P下，溶质在两个互不相溶的溶剂中分配，下，溶质在两个互不相溶的溶剂中分配，平衡平衡时，溶质在两相中浓度之比为常数。时，溶质在两相中浓度之比为常数。K-分配系数分配系数萃余相的浓度萃取相的浓度21CCK第26页，共108页。杂质杂质溶质溶质原溶剂原溶剂萃取剂萃取剂第27页，共108页。实验室液液萃

10、取过程实验室液液萃取过程第28页，共108页。（二）萃取剂的选择原则1、互不相溶2、分配系数相差越大越好3、水提取液中的有效成分是亲脂性的物质，一般多用亲脂性有机溶剂，如苯、氯仿或乙醚进行两相萃取；有效成分是偏于亲水性的物质，需用弱亲脂性的溶剂，例如乙酸乙酯、丁醇等。第29页，共108页。溶剂萃取步骤溶剂萃取步骤溶剂体积为样品溶剂体积为样品溶液的溶液的3030-35-35。振荡几次振荡几次打开活塞打开活塞GasGas蒸气逸出（也叫放气）蒸气逸出（也叫放气）第30页，共108页。絮状物絮状物（乳化）（乳化）有机相有机相水相水相水相和絮状物水相和絮状物静置分层静置分层激烈振摇激烈振摇1 - 2mi

11、n1 - 2min第31页，共108页。有机相有机相3 35 5次次少量多次原则第32页，共108页。二、沉淀法（一）酸碱沉淀法 利用天然药物中游离酸性（或碱性）成分可与碱性（或酸性）试剂反应生成盐而溶于水，再加酸（或碱性）试剂，重新生成原来的游离酸性（或碱性）成分而从溶液中沉淀析出的性质，滤过（或加有机溶剂萃取）而与其他成分或杂质分离的一种方法。（二）乙醇沉淀法 在浓缩后的水提液中，加入一定量的乙醇（使含醇量达80%以上），则难溶于高浓度乙醇的成分如蛋白质、淀粉、树胶等从溶液中析出，经过滤即可除去。第33页，共108页。三、结晶法与重结晶法（一）基本概念（一）基本概念第34页，共108页。结

12、晶：由非晶形经过结晶操作形成有晶形的过程。原理：根据混合物中各成分在某种溶剂中溶解度的差异。 先加热溶液，蒸发溶剂成饱和溶液，此时降低热饱和溶液的温度，溶解度随温度变化较大的溶质就会呈晶体析出。 关键-溶剂: u被溶解成分的溶解度随温度不同有显著差别； u与成分不产生化学反应； u沸点适中；常用溶剂：甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯第35页，共108页。（二）操作过程1、选择适宜的溶剂 根据欲结晶成分的性质及在溶剂中溶解度大小来选择。2、制备饱和的结晶溶液（1）过饱和溶液的形成（2）晶核生成（3）晶体的生长(1) 冷却(2) 溶剂蒸发第36页，共108页。3、趁热过滤第37页，共108页。第38页，

13、共108页。（三）结晶溶剂的选择（1）与被提纯的有机化合物不起化学反应。（2）对被提纯的有机物应具有热溶，冷不溶（3）杂质化合物的溶解性对温度变化不敏感（4）对要提纯的有机物能在溶剂中形成较整齐的晶体。（5）溶剂的沸点，不宜太低（易损），也不宜太高（难除）。（6）价廉易得无毒。第39页，共108页。第40页，共108页。四、盐析法 盐析法是在中草药的水提液中、加入无机盐至一定浓度，或达到饱和状态，可使某些成分在水中的溶解度降低沉淀析出，而与水溶性大的杂质分离。 盐析用的无机盐有氯化钠、硫酸钠、硫酸镁、硫酸铵等。三七的水提取液中加硫酸镁至饱和状态，三七皂甙乙即可沉淀析出，自黄藤中提取掌叶防己碱，

14、自三颗针中提取小檗碱在生产上都是用氯化钠或硫酸铵盐析制备。有些成分如原白头翁素、麻黄碱、苦参碱等水溶性较大，在提取时，亦往往先在水提取液中加入一定量的食盐，再用有机溶剂萃取。第41页，共108页。五、透析法 透析法是利用小分子物质在溶液中可通过半透膜，而大分子物质不能通过半透膜的性质，达到分离的方法。例如分离和纯化皂甙、蛋白质、多肽、多糖等物质时，可用透析法以除去无机盐、单糖、双糖等杂质。反之也可将大分子的杂质留在半透膜内，而将小分子的物质通过半透膜进入膜外溶液中，而加以分离精制。透析是否成功与透析膜的规格关系极大。 第42页，共108页。第43页，共108页。六、升华法 固体物质受热直接气化

15、，遇冷后又凝固为固体化合物，称为升华。中草药中有一些成分具有升华的性质，故可利用升华法直接自中草药中提取出来。例如樟木中升华的樟脑（camphor），在本草纲目中已有详细的记载，为世界上最早应用升华法制取药材有效成分的记述。又如茶叶中的咖啡因具有升华性，可将茶叶放在大小适宜的烧杯中，上面用圆底烧瓶盛水冷却，然后加热，到一定温度（178），咖啡因可凝结于烧瓶底部，成白色针状结晶。 第44页，共108页。第45页，共108页。七、分馏法 对沸点相近的混合物，在分馏柱内反复进行气化、冷凝、回流等程序而分离的一种方法。第46页，共108页。第三节 色谱分离法第47页，共108页。第48页，共108页。

16、植物色素分离图示植物色素分离图示第49页，共108页。 色谱色谱第50页，共108页。按流动相分按流动相分气相色谱液相色谱超临界流体色谱按机理分按机理分吸附色谱分配色谱离子交换色谱凝胶色谱第51页，共108页。第52页，共108页。一、吸附色谱法一、吸附色谱法当溶液中某组分的分子在运动中碰到一个固体表面时，分子会贴在固当溶液中某组分的分子在运动中碰到一个固体表面时，分子会贴在固定表面上，这就发生了吸附作用。定表面上，这就发生了吸附作用。第53页，共108页。 1.分离原理分离原理 各组分与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心各组分与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心, ,利用吸附剂对不同组分的吸附能

17、力差异而实现分离利用吸附剂对不同组分的吸附能力差异而实现分离. .经过吸附、经过吸附、解吸、再吸附、再解吸解吸、再吸附、再解吸最后混合物得到分离最后混合物得到分离. . 第54页，共108页。2.固定相及其选择固定相及其选择 固定相是表面具有许多吸附中心的吸附剂，常用吸附剂硅胶表面的硅醇基为吸附中心。经典液相柱色谱和薄层色谱使用一般硅胶。（1 1）对吸附剂的要求）对吸附剂的要求 有大的表面积和足够的吸附能力； 对不同的化学成分有不同的吸附力，能较好地把混合物分开； 与流动相、溶剂及样品中各成分不起化学反应； 在所用的溶剂及流动相中不溶解； 颗粒均匀，操作过程中不会碎裂。第55页，共108页。（

18、2 2）吸附剂的类别）吸附剂的类别有机类有机类 淀粉、葡萄糖、聚酰胺、纤维素等淀粉、葡萄糖、聚酰胺、纤维素等无机类无机类 氧化铝、硅胶、活性炭、碳酸钙、氧化铝、硅胶、活性炭、碳酸钙、 硅藻土硅藻土等等（3 3）吸附剂的活度）吸附剂的活度 因含水使吸附剂活度因含水使吸附剂活度 ，含水量，含水量 ，活性，活性( (活度活度) )级别级别 ，活性活性 第56页，共108页。（4 4）吸附剂的选择）吸附剂的选择a 硅胶硅胶：为首选吸附剂。本身具微酸性，适用于分离酸性及中性物质，如有机酸、氨基酸、甾体等。b b 氧化铝氧化铝：氧化铝具有分离能力强、活性可以控制等优点。 碱性氧化铝碱性氧化铝 pH 9pH

19、 910 10 适于分析碱性、中性物质适于分析碱性、中性物质 中性氧化铝中性氧化铝 pH 7.5 pH 7.5 适于分析酸性碱性和中性物质适于分析酸性碱性和中性物质 酸性氧化铝酸性氧化铝 pH 4pH 45 5 适于分析酸性、中性物质适于分析酸性、中性物质C C 聚酰胺聚酰胺: :氢键作用,氢键能力强，组分越后出柱 分离分离极性小极性小的物质，一般选用的物质，一般选用活性大活性大些的些的吸附剂吸附剂；反；反之，分离之，分离极性大极性大的物质，选用的物质，选用活性小活性小的吸附剂。的吸附剂。第57页，共108页。3.3.流动相及其选择流动相及其选择（1 1）要求）要求 应使用较纯试剂，含杂质会影

20、响洗脱能力应使用较纯试剂，含杂质会影响洗脱能力 与样品或吸附剂不发生化学反应与样品或吸附剂不发生化学反应 能溶解样品中各成分，且各被分离组分有不同的能溶解样品中各成分，且各被分离组分有不同的K K值值 粘度小，易流动粘度小，易流动 （2 2）流动相）流动相 流动相的洗脱能力主要由其极性决定，流动相的洗脱能力主要由其极性决定，极性强极性强的流的流动相分子占据极性中心的能力强，动相分子占据极性中心的能力强，洗脱能力就强洗脱能力就强。流动。流动相的选择要依据样品的极性、吸附剂的活性而定。相的选择要依据样品的极性、吸附剂的活性而定。 第58页，共108页。（3 3）常用溶剂的极性）常用溶剂的极性 石油

21、醚石油醚 环己烷环己烷 二硫化碳二硫化碳 四氯化碳四氯化碳 三氯乙烷三氯乙烷 苯苯 甲甲苯苯 二氯甲烷二氯甲烷 乙醚乙醚 氯仿氯仿 乙酸乙酯乙酸乙酯 正丁醇正丁醇 丙酮丙酮 乙乙醇醇 甲醇甲醇 吡啶吡啶 酸酸 水水（4）流动相的选择）流动相的选择 用硅胶或氧化铝作色谱分离时，如用硅胶或氧化铝作色谱分离时，如被测成分极性较大被测成分极性较大，用用活性较低的吸附剂活性较低的吸附剂，极性较大的冲洗剂极性较大的冲洗剂；被测成分极被测成分极性较小性较小，选用，选用活性较强的吸附剂活性较强的吸附剂，极性较小的冲洗剂极性较小的冲洗剂第59页，共108页。4.洗脱顺序洗脱顺序 吸附弱的组分先被洗脱，吸附强的组

22、分后被洗脱。吸附弱的组分先被洗脱，吸附强的组分后被洗脱。吸附的强弱与组分的性质吸附的强弱与组分的性质( (极性、取代基的类型和数目、极性、取代基的类型和数目、构型）有关。一般规律是：构型）有关。一般规律是：非极性化合物，吸附弱非极性化合物，吸附弱。基本母核相同，分子中取代基的基本母核相同，分子中取代基的极性越强极性越强，或，或极性基团极性基团越多越多，分子极性越强分子极性越强( (但要考虑其他因素的影响但要考虑其他因素的影响) )，吸附吸附能力越强能力越强。分子中双键数越多，则吸附力越强分子中双键数越多，则吸附力越强。能形成能形成分子内氢键分子内氢键的化合物，其的化合物，其吸附能力降低。吸附能

23、力降低。 第60页，共108页。常见化合物的吸附能力的顺序如下：常见化合物的吸附能力的顺序如下： 烷烃烷烃(-CH(-CH3 3、-CH-CH2 2-)-)烯烃烯烃(-CH=CH-)(-CH=CH-)醚类醚类(-(-OCHOCH3 3)硝基化合物硝基化合物(-NO(-NO2 2)二甲胺二甲胺(-N(CH(-N(CH3 3) )2 2)酯类酯类(-COOR)(-COOR)C=O)C=O)醛类醛类(-CHO)(-CHO)硫醇硫醇(-SH)(-SH)胺类胺类(-NH(-NH2 2)酰胺酰胺(-NHCOCH(-NHCOCH3 3)醇类醇类(-(-OH)OH)酚类酚类(Ar-OH)(Ar-OH)羧酸类羧

24、酸类(-COOH)(-COOH)第61页，共108页。薄层色谱法 薄层色谱是在平面上进行分离的一种方法，又叫平面色谱法。通常将固定相(吸附剂)均匀地涂铺在表面洁净的玻璃、塑料或金属板形成薄层，制成薄板，进行样品分离。第62页，共108页。( (一一) )吸附色谱分离原理吸附色谱分离原理利用利用吸附剂吸附剂对不同成分对不同成分吸附力的大小吸附力的大小及及展开剂解吸展开剂解吸附附作用作用的差异的差异进行分离。进行分离。吸附牢的组分随展开剂移动慢，吸附弱的组分随展开剂移动吸附牢的组分随展开剂移动慢，吸附弱的组分随展开剂移动快，一段时后，组分被分离。快，一段时后，组分被分离。固定相固定相: :固体固体

25、吸附剂吸附剂流动相流动相: :液体展开剂液体展开剂一、基本原理一、基本原理第63页，共108页。溶剂溶剂前沿前沿起始线起始线ABabc（1 1）比移值）比移值R Rf f：原原点点到到溶溶剂剂前前沿沿的的距距离离原原点点到到斑斑点点中中心心的的距距离离 fRcbRcaR)b(f)a(f R Rf f是薄层色谱法基本是薄层色谱法基本定性定性参数，一定条件时参数，一定条件时R Rf f为定值，为定值，在在0 01 1之间，可用范围之间，可用范围R Rf f值在值在0.20.20.80.8之间。组分之间。组分极性越大，极性越大，R Rf f越小越小, ,反之越大反之越大。（二）比移值与相对比移值（二

26、）比移值与相对比移值第64页，共108页。硅胶、氧化铝薄层：被分离物质硅胶、氧化铝薄层：被分离物质极性越大，越易被吸附。极性越大，越易被吸附。一般规律：一般规律：（1）官能团极性越大官能团极性越大，整个分子极性越大，越易被吸附；整个分子极性越大，越易被吸附；（2）形成分子内）形成分子内H键时，被吸附力减弱；键时，被吸附力减弱；（3）同系物中，）同系物中，分子量越大，极性越小分子量越大，极性越小，被吸附力越弱。被吸附力越弱。被分离物质极性与吸附能力的关系被分离物质极性与吸附能力的关系第65页，共108页。硅胶薄层色谱规律总结硅胶薄层色谱规律总结被分离组分被分离组分展开剂展开剂R Rf f被分离物

27、洗被分离物洗脱顺序脱顺序极性大极性极性大小后洗脱极性小极性小大先洗脱第66页，共108页。（1 1）软板的制备）软板的制备软板：直接将吸附剂铺在玻璃板上制成，不加粘合剂软板：直接将吸附剂铺在玻璃板上制成，不加粘合剂要求：厚度要求：厚度随分离要求而定，一般随分离要求而定，一般0.250.250.5mm0.5mm 玻璃棒推动速度不宜过快、也不应停顿玻璃棒推动速度不宜过快、也不应停顿影响厚度均一性影响厚度均一性操作步骤操作步骤第67页，共108页。2、点样、点样（1 1）样品溶液的制备：）样品溶液的制备： 第68页，共108页。2、点样、点样（2 2）点样量：）点样量： 与薄层板的关系与薄层板的关系

28、 太多太少的影响太多太少的影响点样基线：距底边点样基线：距底边2.0cm2.0cm样点直径：样点直径：2-4mm2-4mm点间距离：点间距离：1.5-2.0cm1.5-2.0cm第69页，共108页。2、点样、点样（3 3）点样方法：）点样方法： 划线、样品记号点、点样划线、样品记号点、点样 注：动作要轻，注：动作要轻， 毛细管或点样器不能混用，毛细管或点样器不能混用， 斑点大小适当，可多次点样。斑点大小适当，可多次点样。平头平头50ul50ul微量点样器微量点样器全自动点样仪全自动点样仪第70页，共108页。3、展开、展开展开缸（色谱缸）展开缸（色谱缸）第71页，共108页。3、展开、展开（

29、1 1）展开方式：）展开方式：a a、近水平展开、近水平展开特点：速度快、适用于软板的展开。特点：速度快、适用于软板的展开。第72页，共108页。3、展开、展开（1 1）展开方式：）展开方式：b b、上行展开、上行展开 过程：预饱和（滤纸贴于展开槽内侧）、展开、标记溶剂过程：预饱和（滤纸贴于展开槽内侧）、展开、标记溶剂前沿前沿第73页，共108页。4、显色和定位、显色和定位一般规律：一般规律：日光下观察、紫外灯下观察、加显色剂日光下观察、紫外灯下观察、加显色剂加显色剂：多喷雾，软板使用浸渍显色法加显色剂：多喷雾，软板使用浸渍显色法紫外灯观察紫外灯观察喷显色剂观察喷显色剂观察第74页，共108页

30、。判断依据：判断依据：R Rf f值值 四、结果计算和判断四、结果计算和判断原点到溶剂前沿的距离原点到溶剂前沿的距离原点到斑点中心的距离原点到斑点中心的距离 fR第75页，共108页。二、分配色谱法二、分配色谱法 1. 1.分离原理：分离原理：将液体均匀地涂渍在惰性物质(载体)表面上作为固定相，利用被分离组分在固定相与流动相中的溶解度差别所造成的分配系数差别而被分离。第76页，共108页。2.固定相和流动相固定相和流动相要求要求：固定相固定相机械吸附在机械吸附在惰性载体惰性载体上的上的液体液体, ,常用的固定液有常用的固定液有水、水、稀硫酸、甲醇、甲酰胺等强极性溶剂稀硫酸、甲醇、甲酰胺等强极性

31、溶剂 载载 体体惰性物质，无吸附性惰性物质，无吸附性性质稳定，性质稳定，不与固定相和流不与固定相和流动相发生化学反应动相发生化学反应常用的有吸水硅胶、纤维素、多孔硅常用的有吸水硅胶、纤维素、多孔硅藻土等。藻土等。流动相流动相必须与固定相必须与固定相不为互溶不为互溶石油醚、醇类、酮类、石油醚、醇类、酮类、酯类、卤代烷及苯等。酯类、卤代烷及苯等。第77页，共108页。3.洗脱顺序洗脱顺序 正相色谱正相色谱 固定相极性固定相极性大于大于流动相极性流动相极性, ,主要分离极性样主要分离极性样品品. .极性极性弱弱的组分的组分先先被洗脱，极性被洗脱，极性强强的组分的组分后后被洗脱。被洗脱。 反相色谱反相

32、色谱 固定相极性固定相极性小于小于流动相极性流动相极性, ,主要分离非主要分离非极性样品和中等极性样品极性样品和中等极性样品. .极性极性强强的组分的组分先先出柱，极出柱，极性性弱弱的组分的组分后后出柱。出柱。第78页，共108页。 定义：定义： 纸色谱分离法又称纸层析法，是根据不纸色谱分离法又称纸层析法，是根据不同物质在两相中的同物质在两相中的分配比分配比不同而进行分离不同而进行分离的一种微量分离方法。的一种微量分离方法。纸色谱法纸色谱法载体载体层析纸（滤纸）；层析纸（滤纸）；固定相固定相滤纸上的吸湿水分；滤纸上的吸湿水分；流动相流动相有机溶剂（展开剂）。有机溶剂（展开剂）。第79页，共10

33、8页。实验步骤实验步骤点样点样展开分离展开分离显色显色计算比移值计算比移值第80页，共108页。实验原理实验原理分离示意图分离示意图AB上行法上行法第81页，共108页。实验原理实验原理原点原点展开后展开后斑点斑点溶剂溶剂前沿前沿a1a2bAB第82页，共108页。实验原理实验原理 RF: 通常用比移值通常用比移值RF衡量各组分的分离程度衡量各组分的分离程度： baRF沿的距离组分原点中心到溶剂前的斑点中心的距离组分原点中心到展开后 RF:01。 RF值相差越大，分离效果越好。值相差越大，分离效果越好。第83页，共108页。RF：物质物质定性分析定性分析的依据。的依据。在进行分析工作时，可使用

34、各组分相在进行分析工作时，可使用各组分相应的应的标准样品标准样品同时作同时作对照实验对照实验。影响因素影响因素：主要是展开剂、滤纸质量、：主要是展开剂、滤纸质量、温度等实验条件。温度等实验条件。实验原理实验原理第84页，共108页。本实验分离和鉴定的氨基酸混合液本实验分离和鉴定的氨基酸混合液：异亮氨酸、异亮氨酸、赖氨酸和谷氨酸赖氨酸和谷氨酸。氨基酸是无色的，在层析后需在纸上喷洒显色剂氨基酸是无色的，在层析后需在纸上喷洒显色剂茚三酮，斑点呈现茚三酮，斑点呈现蓝紫色蓝紫色。第85页，共108页。 主要仪器：主要仪器：（1 1）玻璃层析筒）玻璃层析筒 150mm300mm(h)。（2）层析纸条）层析

35、纸条 100mm240mm 。（3）毛细管）毛细管 直径直径1mm左右。左右。（4 4）喷雾器）喷雾器 仪器试剂仪器试剂第86页，共108页。主要试剂：主要试剂：（1）展开剂展开剂 正丁醇正丁醇: :甲酸甲酸: :水水60:12:8。（2）氨基酸标准溶液）氨基酸标准溶液 2 gL-1水溶液。水溶液。（3）茚三酮）茚三酮 1 gL-1乙醇溶液。乙醇溶液。（4）氨基酸混合试液）氨基酸混合试液 将（将（2）配制的三）配制的三种氨基酸等量混合。种氨基酸等量混合。仪器试剂仪器试剂第87页，共108页。实验步骤实验步骤点样点样展开分离展开分离显色显色计算比移值计算比移值第88页，共108页。实验步骤实验步

36、骤点点 样样2.0cm2.0cm1 2 3 4 异亮氨酸异亮氨酸赖氨酸赖氨酸谷氨酸谷氨酸混合液混合液各点各点2mm第89页，共108页。实验步骤实验步骤展开分离展开分离展开剂展开剂滤纸下端浸入展滤纸下端浸入展开剂约开剂约0.5cm，计时。计时。一段时间后，一段时间后，前沿上升前沿上升15cm15cm左右左右记下展开记下展开停止时间停止时间第90页，共108页。实验步骤实验步骤展开分离展开分离取出层析取出层析纸，画出纸，画出溶剂前沿溶剂前沿晾干或烘晾干或烘干展开剂干展开剂第91页，共108页。实验步骤实验步骤显色显色在层析纸在层析纸上均匀喷上均匀喷洒显色剂洒显色剂l00 l00 烘烘箱中，烘箱中

37、，烘3 35min5min第92页，共108页。实验步骤实验步骤计算计算RF用铅笔描用铅笔描出各斑点出各斑点的轮廓的轮廓ba1a2a3第93页，共108页。 （1）计算计算RF。 （2）定性分析。）定性分析。数据处理数据处理第94页，共108页。三、聚酰胺吸附色谱法聚酰胺：聚酰胺：固定相固定相流动相流动相H2CCH2H2CCH2H2CCNCH2H2CCH2H2CCH2CNH2CCH2OOHHCH2H2CCH2H2CCH2NCH2CCH2H2CCH2H2CNCCH2H2CHOOHOHO第95页，共108页。（3）吸附规律：）吸附规律： 1 形成氢键基团数目越多，则吸附能力越强形成氢键基团数目越多

38、，则吸附能力越强 2 形成氢键基团位置不同，被吸附的强度也不同形成氢键基团位置不同，被吸附的强度也不同 3 分子芳香核、共轭双键越多，吸附越牢分子芳香核、共轭双键越多，吸附越牢 4 化合物形成分子内氢键，则被吸附的强度减小化合物形成分子内氢键，则被吸附的强度减小 5与溶剂介质有关与溶剂介质有关.形成氢键能力形成氢键能力: 水中最强水中最强,碱中最弱碱中最弱第96页，共108页。四、离子交换色谱法四、离子交换色谱法要求要求：固定相固定相离子交换树脂离子交换树脂流动相流动相水为溶剂的缓冲溶液水为溶剂的缓冲溶液被分离组分被分离组分离子型的有机物或无机物离子型的有机物或无机物1.分离原理分离原理依据被测组分与离子交换剂交换能力（亲和力）不同而实现依据被测组分与离子交换剂交换能力（亲和力）不同而实现分离分离第97页，共108页。离子交换的基本过程离子交换的基本过程：第98页，共108页。