多糖技术路线图

1、Molish反应Fehling反应邻苯二甲酸-苯胺显色反应间苯二胺试验3,5-二硝基水杨酸显色法Somogyi-Nelson显色法比阿耳（Bial）反应本尼迪克（Benedict）试验谢里万诺夫（CenHB）HOB试验J分光光度法离子交换色谱气相色谱法曰J凝胶电泳法高效液相色谱法r苯酚一硫酸反应显色剂法，与慈酮-硫酸反应水提醇沉高温水提取法碱提取法超临界提取法4酶提取法超声波提取法微波提取法超高压提取法工复合提取法溶剂处理法sevag法、三氟三氯乙烷法,蛋白质去除三氯醋酸法吸附剂离子交换柱氧化剂卜色素去除透析法J除无机盐、单糖分化，铅盐沉淀法沉淀法，铜盐沉淀法钙、锅及钢盐沉淀法A1r活性炭柱层

2、析纤维素柱层析柱层析分离法彳离子交换柱层析凝胶柱层析季俊盐沉淀纯化金属络合物法体内外抗氧化性、免疫调节活性抗肿瘤活性酶抑制活性物理常数抗菌活性抗凝血活性甲基化法、高碘酸氧化反应smith降解酸水解紫外、红外、核磁共振波谱,化学分析法测定分子量测定场解吸质谱广电喷雾质谱电子轰击质谱化学电离质谱快原子轰出质谱动态渗透压法光散射法端基法粘度法凝胶电泳法凝胶色谱HPLCI,法、HPLC质谱法电泳仪器分析法酶法、免疫学法：生物分析法核磁共振波谱法、圆二色谱法结构分析色谱鉴别薄层层析色谱鉴别,凝胶层析电泳超离心法提取方法：1水提醇沉2高温水提取法3碱提取法4超声波提取法5酶提取法6复合提取法7微博提取法8

3、超高压提取9超临界提取法水提取法：常用温度7090度，每次回流提取2h酸提取：将植物用品浸泡在稀酸水溶液中，再调节溶液PH至中性，用水提醇沉得到多糖超声波提取：适用超笔技术江植物样品浸泡一段时间，再热水浸提超高压提取：先对物料加压再泄压，细胞内外形成压力差，植物细胞壁在高压下破裂，释放多糖。将植物样品加入水中，搅拌，调节PH,装入聚乙烯袋中在高压容器中进行高压处理，过滤减压浓缩得到多糖提取时间远少于热水提取，操作简单，提取率高微波提取：通过微波热效应及产生的电磁波效应，加快分子的运动，迅速释放多糖复合提取法：纤维素酶辅助超声提取糖类分离方法：1溶剂处理法2沉淀法（铅盐沉淀法、铜盐沉淀法、钙、锯

4、及砌复盐形成法）3大孔树脂处理法4柱层析分离法（活性炭柱层析、纤维素柱层析、离子交换柱层析、淀粉柱层析、凝胶柱层析)5阴离子交换色谱法蛋白质的去除：用分级沉淀法得到的多糖，常混有较多的蛋白质，必须予以去除。一般选择那些使蛋白质沉淀而使多糖不沉淀的试剂来处理，如酚、三氯乙酸、鞍酸等。但必须处理时间短，温度低，避免多糖降解。而要达到除尽游离蛋白质的目的仍需反复多次处理。除去蛋白质的常用方法有：(1) .Sevag法：根据蛋白质在氯仿CHC3等有机溶剂中变性的特点，用氯仿：戊醇或丁醇5:1或4:1混合液与糖提取物混合，剧烈震荡2030min,蛋白质与氯仿-戊醇或丁醇溶液形成凝胶而分离，离心，分去水层

5、和溶剂层交界处的变性蛋白质。这种方法在避免糖降解上有较好的效果，但效率不高，如能配合加入蛋白质水解酶(胰蛋白酶、胃蛋白酶、链霉蛋白酶等)，使蛋白质大分子进行一定程度降解，再用Sevag法处理，效果会更好。(2) .三氟三氯乙烷法F3C-CCI3：按多糖提取液：三氟三氯乙烷1：1混合，在低温下搅拌约10min,离心得上层水溶液，水层反复用上述方法处理几次，即得无蛋白质的多糖溶液。此法效率高，但溶剂沸点低，易挥发，不宜大量使用。(3) .三氯醋酸法F3CCOOH在多糖水溶液中滴加3犷氯醋酸,直至溶液不再继续混浊为止，在510放置过夜，离心除去沉淀，即得纯的多糖溶液。此法会引起某些多糖的降解。色素的

6、去除植物多糖提取物中含有酚类化合物而使其颜色较深，可用吸附剂（纤维素、硅藻土、活性炭等）、离子交换柱（DEAE一纤维素）、氧化剂（H2O2）等脱除。活性炭比表面积大，吸附能力强，在进行当归多糖的提取时只向多糖液中加入了0.1%左右的活性炭，煮沸后滤过即完成了脱色操作。此法成本低廉，适合工业化生产。（3）透析法除无机盐、单糖、多糖（4）季钱盐沉淀纯化（5）金属络合物法三定性反应试验：（1） Molish反应（2） Fehling反应：+a-秦酚-浓硫酸-紫红色环（3）邻苯二甲酸-苯胺显色反（4）间苯二胺试验（1）a祭酚试验（Molisch紫环反应）：取检品的水溶液1ml,加5%禁酚试液数滴振摇后

7、，沿管壁滴入56滴浓硫酸，使成两液层，待2-3分钟后，两层液面出现紫红色环（糖、多糖或就类）。多糖类遇浓硫酸被水解成单糖，单糖被浓硫酸脱水闭环，形成糠醛类化合物，在浓硫酸存在下与a茶酚发生酚醛缩合反应，生成紫红色缩合物。【注】就的分子结构中含有糖基，一般属于单糖类，如葡萄糖，鼠李糖、半乳糖，但也有含二分子糖（双糖）或多分子糖（多糖）。在上述反应条件下，就被水解成单糖，因此就茶酚试验，系分子中糖部分的反应。由于此反应较为灵敏，如有微量滤纸纤维或中草药粉末存在于溶液中，都能产生上述反应。故滤过时应加注意。（2）碱性酒石酸铜试液：取检品的水溶液12ml（如为醇溶液须将醇蒸发除去），加入碱笥酒石酸铜试

8、液1ml,于沸水浴上加热5分钟，产生棕红色或传红色氧化亚铜沉淀，示有还原糖。还原糖能使二价铜盐（蓝色）还原成氧化亚铜，醛糖的醛基氧化成竣基：【注】如检液呈酸性，应先碱化。此反应所产生的沉淀由于条件不同，其颜色也不同，质点上的呈黄色，质点大的呈红色。有保持性胶体存在时，也常产生黄色沉淀。职样品中含有其他醛、酮及还原较强的其他成分，或中划药制剂中附加的抗氧剂、；葡萄糖等均可显阳性反应。（3）邻苯二甲酸-苯胺显色反应：用毛细管将样品提取液点于滤纸上，溶剂挥干后，置于展开缸中，以甲醇为展开剂展开。展开后取出滤纸，挥干溶剂，喷邻苯二甲酸-苯胺试剂。104c烘10分钟，显红色棕色斑点，表明有还原糖存在。(

9、4)见苯二胺试验：取水提样点在滤纸上，喷洒间二苯胺试剂，在105c加热5min,如呈现黄色荧光，表明可能含有糖。定量(1)与慈酮-硫酸反应：糖类与浓硫酸脱水生成糠醛或糠醛衍生物，可与慈酮试剂缩合成有色物质，反应后呈蓝绿色溶液。方法是：取样品热水提取液1mL置于小试管中，加入24mL；1酮试剂，在沸水浴中加热，沸腾10分钟后，若溶液呈蓝绿色，表明有糖存在。慈酮-硫酸显色反应非常灵敏，样品中切勿混入尘埃等杂质，要用高纯度硫酸。不同糖类与慈酮的显色有差异，稳定性也不同，显色后应及时观察。测定总糖含量。【注意】当样品中含有色氨酸含量较高的蛋白质存在时，溶液呈红色而干扰反应。四多糖分子量测定：凝胶柱、质谱分析、化学电离质谱、场解析质谱、快原子轰出质谱、电喷雾质谱、鉴定：纸色谱、薄层色谱、气相色谱、离子交换色谱、液相色谱五纯度的检验方法：1总糖、糖醛酸含量：比色法分析了多糖的总糖、糖醛酸含单。2杂质的含量测定一一紫外光谱UV法：紫外检测显示多糖在260nm和280nm无核酸和蛋白特征吸收峰。色素：多糖外观为白色粉末，不含核酸、蛋白、多肽等杂质3多糖的官能团特征2构的确证一一IRIR:红外检测显示多糖具有多糖类物