XXX药品中残留溶剂内标法检测方法验证方案(DOC)

1、第1页共 12 页XXXXXX 中甲醇、乙醇、正己烷、甲苯残留检中甲醇、乙醇、正己烷、甲苯残留检测方法验证方案测方法验证方案方案编号方案编号: :姓名姓名职位职位签名签名日期日期起草起草XXX质量研究员审核审核XXX质量副部长审核审核XXXQA批准批准XXX质量部长概述概述 XXX 是生产 XX 的起始物料，生产该物料工艺中使用的溶剂有：甲醇、乙醇、正己烷、甲苯。根据 ICH 要求需要开发方法对这些残留溶剂进行检测，该方法属于杂质定量分析，根据 USP要求需要验证的内容有：系统适用性、专属性、线性、范围、灵敏度、准确度、重复性、中间精密度、耐用性。第2页共 12 页1.1.验证所需试剂验证所需

2、试剂甲苯 AR 级或更高级别甲醇 AR 级或更高级别乙醇 AR 级或更高级别正己烷 AR 级或更咼级别正庚烷 AR 级或更高级别N,N-二甲基甲酰胺（DMF）HPLC 级或更高级别2.2. 试验所需仪器或设备试验所需仪器或设备气相色谱仪带有 FID 检测器气相色谱柱 DB-624,30mX0.53mm,3.0“m 石英毛细管柱高纯氮气量瓶移液管电子分析天平（十万分之一）3 3 验证内容验证内容3.1 系统适用性目的：对由分析设备、实验操作、被分析供试品组成的完整的系统进行评估。接受标准：计算对照溶液图谱中甲醇、 乙醇、 正己烷、 正庚烷、 甲苯峰面积的相对标准偏差 RSD%，均不得过 5%。3

3、.1.1 溶液制备见附件分析方法中对照溶液的制备。3.1.2 分析待色谱系统稳定后，按下面序列表进样分析。名称进样针数空白（溶剂）2 针或更多对照品溶液（S）6 针3.2 专属性目的：确保采用的方法能正确测定出被测物的特性。接受标准：空白溶液图谱中目标峰出峰位置附近无显著干扰峰。分离度测试溶液（RS）图谱中目标峰与相邻峰的分离度应不小于 1.5。3.2.1 溶液制备样品溶液制成浓度约为 20mg/ml 的 DMF 溶液。称取 1.0g 样品置 50ml 量瓶中，第3页共 12 页加溶剂约 30ml 使溶解，加溶剂定容至刻度，摇匀。标记为 Sample。乙醇定位溶液制成乙醇浓度为 0.08% （

4、v/v） 的 DMF 溶液。 量取乙醇 40l 置 50ml量瓶中加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，标记为 Ethanol。甲醇定位溶液制成甲醇浓度为 0.002%（v/v）的 DMF 溶液。量取甲醇 50l 置50ml 量瓶中加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，标记为 MCBY，再量取该溶液 1ml置 50ml 量瓶中加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，标记为 Methanol。正己烷定位溶液制成正己烷浓度为 0.002%（v/v）的 DMF 溶液。量取正己烷 50l 置 50ml 量瓶中加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，标记为 HCBY，再量取该溶液1ml 置 50ml 量瓶中加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，标

5、记为 Hexane。甲苯定位溶液制成甲苯浓度为 0.002%（v/v）的 DMF 溶液。量取甲苯 50l 置50ml 量瓶中加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，标记为 TCBY，再量取该溶液 1ml置 50ml 量瓶中加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，标记为 Toluene。正庚烷定位溶液制成正庚烷浓度为 0.04%（v/v）的 DMF 溶液。量取正庚烷 20l 置 50ml 量瓶中加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，标记为 Heptane。分离度测试溶液制成含供试品 20mg/ml、 其他各溶剂浓度同工作对照品溶液的混合溶液。分别量取乙醇 40l、正庚烷 20l、MCBY 溶液 1ml、HCBY 溶液 1m

6、l、TCBY 溶液 1ml 置已称有 1.0g 样品并加 30ml 溶剂溶解的量瓶中，再加溶剂定容至刻度，摇匀，标记为 RS。3.2.2 分析待色谱系统稳定后，按下面序列表进样分析。名称进样针数空白（溶剂）2 针或更多Sample1 针对照品溶液（S）6 针Ethanol1 针Methanol1 针Hexane1 针Toluene1 针Heptane1 针分离度测试溶液（RS）1 针3.3 线性目的：测试在给定的范围内，待测物的响应值与供试品中被分析物的浓度成正比例关系的程度。第4页共 12 页接受标准：以甲醇、乙醇、正己烷、甲苯测试所得峰面积与正庚烷峰面积比值为纵坐标,浓度为横坐标分别计算线

7、性相关系数 r，均应不小于 0.950。3.3.1 溶液制备量取乙醇 6ml、甲苯、甲醇、正己烷各 0.5ml，置 50ml 量瓶中，加溶剂稀释至刻度摇匀，作为线性储备溶液 a。量取线性储备溶液 a0.5ml 置 50ml 量瓶中，加溶剂稀释至刻度摇匀，标记为线性储备液 b.取线性储备溶液 a1ml，内标溶液 5ml 置 50ml 量瓶中，加溶剂至刻度，摇匀，标记为 L-01。取线性储备溶液 a1.5ml， 内标溶液 10ml 置 100ml 量瓶中， 加溶剂至刻度,摇匀，标记为 L-02。取线性储备溶液 a0.5ml，内标溶液 5ml 置 50ml 量瓶中，加溶剂至刻度，摇匀，标记为 L-0

8、3。取线性储备溶液 a0.5ml， 内标溶液 10ml 置 100ml 量瓶中， 加溶剂至刻度,摇匀，标记为 L-04。取线性储备溶液 b2ml，内标溶液 1ml 置 10ml 量瓶中，加溶剂至刻度，摇匀，标记为 L-05。取线性储备溶液 b1ml，内标溶液 1ml 置 10ml 量瓶中，加溶剂至刻度，摇匀，标记为 L-06。取线性储备溶液 b1ml，内标溶液 2ml 置 20ml 量瓶中，加溶剂至刻度，摇匀，标记为 L-07。标记乙醇（W/W）正己烷（W/W）甲醇（W/W） 甲苯（W/W）L-019.480.660.790.87L-027.110.4950.59250.6525L-034.7

9、40.330.3950.435L-042.370.1650.19750.2175L-050.9480.0660.0790.087第5页共 12 页L-060.4740.0330.03950.0435L-070.2370.01650.019750.021753.3.2 分析待色谱系统稳定后，按下面序列表进样分析。名称进样针数空白（溶剂）2 针或更多对照品溶液（S）6 针空白（溶剂）1 针或更多L07、 L06、 L05、 L04、 L03、 L02、L-01各 1 针3.4 检出限目的：确定试样中的被测溶剂能够被检出的最低量。接受标准：检出浓度不得高于限度的 15%,信噪比应3.取线性项下的溶液

10、，当某个溶液中的某个溶剂峰信噪比不小于 3 时，对应溶液浓度即可作为该溶剂检出限浓度，即为检出限；如果 L-07 溶液中某个溶剂峰信噪比大于 10,则以 L-07 作为该溶液检出限溶液，不再另外稀释。3.5 定量限目的：确定试样中的被测溶剂能够被定量的最低量。接受标准：检出浓度不得高于限度的 50%，信噪比应10.当线性项下的某个溶液中的某个溶剂峰信噪比不小于 10,该溶液浓度即可作为定量限浓度，即为定量限。如 L-07 溶液中某个对照品峰信噪比大于 10,则以线性中L-06 作为定量限溶液，不再另外稀释。3.6 方法准确度目的：考察残留溶剂分析方法测定结果与真实值或参考值接近的程度。接受标准

11、：单一回收率应在 75%125%之间。各浓度水平内的回收率 RSD 值应不大于 20%。3.6.1 溶液制备3.6.1.1 空白样品溶液取 XXX 样品一批， 按附件方法供试品溶液制备精密称取三份，制备成供试品溶液，分别标记为：U-1、U-2、U-3。3.6.1.2 50%工作浓度准确度测试溶液量取乙醇 20ml、正己烷 0.5ml、甲苯 0.5ml、甲醇 0.5ml 置 100ml 量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，再量取该 0.5ml、内标溶液 25ml 置 250ml 的量瓶中，加入溶剂稀释至刻度摇匀，作为 50%浓度稀释液。称取第6页共 12 页1.0g 样品置 50ml 量瓶中，加 5

12、0%浓度稀释液使溶解，再加溶剂定容至刻度，摇匀。平行制备三份，标记为 CR-01、CR-02、CR-03。3.6.1.3 100%工作浓度准确度测试溶液量取乙醇 20ml、正己烷 0.5ml、甲苯 0.5ml、甲醇 0.5ml 置 100ml 量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，再量取该 1ml、内标溶液25ml 置 250ml 的量瓶中，加入溶剂稀释至刻度摇匀，作为 100%浓度稀释液。称取1.0g 样品置 50ml 量瓶中，加 100%浓度稀释液使溶解，再加溶剂定容至刻度，摇匀。平行制备三份，标记为 CR-04、CR-05、CR-06。3.6.1.4 150%工作浓度准确度测试溶液量取乙醇 2

13、0ml、正己烷 0.5ml、甲苯 0.5ml、甲醇 0.5ml 置 100ml 量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，再量取该 1.5ml、内标溶液 25ml 置 250ml 的量瓶中，加入溶剂稀释至刻度摇匀，作为 150%浓度稀释液。称取 1.0g 样品置 50ml 量瓶中，加 150%浓度稀释液使溶解，再加溶剂定容至刻度，摇匀。平行制备三份，标记为 CR-07、CR-08、CR-09。名称150%Level100%Level50%Level乙醇4.74%(w/w)3.16%(w/w)1.58%(w/w)正己烷0.099%(w/w)0.066%(w/w)0.033%(w/w)甲醇0.1185%(w

14、/w)0.079%(w/w)0.0395%(w/w)甲苯0.1305%(w/w)0.087%(w/w)0.0435%(w/w)XXX20mg/mL20mg/mL20mg/mL正庚烷0.04%(v/v)0.04%(v/v)0.04%(v/v)3.6.2 分析待色谱系统稳定后， 按下面序列表进样分析。 按内标法测定准确度测试溶液中甲醇、乙醇、正己烷、甲苯的量，扣除空白残留，而后除以溶液配制时甲醇、乙醇、正己烷、甲苯的加入量，即得回收率。名称进样针数空白（溶剂）2 针或更多对照品溶液（S）6 针空白（溶剂）1 针或更多空白样品溶液（U-1、U-2、U-3）各 1 针准确度测试溶液（CR-01、CR-

15、02、CR-03、CR-04、 CR-05、 CR-06、 CR-07、 CR-08、 CR-09）各 1 针准确度测试溶液测得量-空白样品含量计算公式：回收率%二-X100%对照加入量第7页共 12 页3.7 精密度由于实际供试品中目标残留溶剂有些能够检出，有些未检出，此时比较供试品含量测定结果无法反映精密度。 故以准确度项下 100%工作浓度测试溶液代替供试品考察精密度。3.7.1 重复性目的：在相同的操作条件下，测试在较短时间间隔精密度。接受标准：六份测试溶液所得图谱中甲醇、乙醇、正己烷、甲苯测得量的 RSD 值不得过 20%。3.7.1.1 溶液制备按附件中供试品溶液制备方法 6.2.

16、3 项制备 6 份，标记为 U-1、U-2、U-3、U-4、U-5、U-6。3.7.1.2 分析待色谱系统稳定后，按下面序列表进样分析。名称进样针数空白（溶剂）2 针或更多对照品溶液（S）6 针空白（溶剂）1 针或更多重复性测试溶液 （U-1、 U-2、 U-3、 U-4、 U-5、 U-6）各 1 针3.8.2 中间精密度目的：按照重复性实验的测定程序，评价在改变实验员、日期条件下不同仪器上所得结果之间的精密度。接受标准：两个分析人员测得每批残留溶剂结果应一致：甲醇、正己烷、甲苯残留量绝对差值应不得过 0.1%;乙醇残留量绝对差值应不得过 0.7%.3.8.2.1 溶液制备取三批产品，由两个

17、不同的分析员在不同日按供试品溶液制备方法每批各制备两份溶液并采用不同仪器进行检测，按内标法计算甲醇、乙醇、正己烷、甲苯的残留量。3.8.2.2 分析待色谱系统稳定后，两个分析人员各按下面序列表进样分析。名称进样针数空白（溶剂）2 针或更多第8页共 12 页对照品溶液（S）6 针空白（溶剂）1 针或更多中间精密度测试溶液 loti（U-1、U-2）各 1 针中间精密度测试溶液 lot2（U-1、U-2）各 1 针中间精密度测试溶液 lot3（U-1、U-2）各 1 针3.9 耐用性目的：确认在测定条件有微小变动时，测定结果不受影响的承受程度。接受标准：改变不同色谱条件后， 系统适用性应符合要求。

18、即对照溶液图谱中甲醇、 乙醇、正己烷、正庚烷、甲苯峰面积的相对标准偏差 RSD%值，均不得过 5%。3.9.1 溶液制备按附件中 6.2.2.4 项对照溶液制备方法制备。3.9.2 分析3.9.2.1 不同载气流速将载气流速分别设置为 4.8ml/min、5.2ml/min，其余色谱条件按附件中色谱条件设置 。 待 色 谱 系 统 稳 定 后 ， 按 下 面 序 列 表 进 样 分 析 。名称进样针数空白（溶剂）2 针或更多对照品溶液（S）6 针3.9.2.2 不同进样口温度将进样口温度设置为 235C、245C，其余色谱条件按附件中色谱条件设置。待色谱系统稳定后，按下面序列表进样分析。名称进

19、样针数空白（溶剂）2 针或更多对照品溶液（S）6 针3.9.2.3 不同检测器温度将检测器温度设置为 235C、245C，其余色谱条件按附件中色谱条件设置。待色谱系统稳定后，按下面序列表进样分析。名称进样针数空白（溶剂）2 针或更多对照品溶液（S）6 针3.9.2.4 不同色谱柱采用两个批号的 30mX0.53mmX3.0“m 石英毛细管柱，DB-624，其余色谱条件按附件中色谱条件设置。待色谱系统稳定后，按下面序列表进样分析。第9页共 12 页名称进样针数空白（溶剂）2 针或更多对照品溶液（S）6 针4.4.再验证周期再验证周期若分析方法的改变超出方法验证范围， 或产品生产工艺发生改变， 需

20、对分析方法进行再验证。5.5.偏差及纠正措施偏差及纠正措施该方法验证过程中，是否产生了偏差，若有，应将所出现的所有偏差和所采取的纠正措施应记录在“偏差清单”中。 对因发生偏差而导致的任何变更控制， 应有记录并在报告中加以说明。序号项目偏差内容产生的原因及采取的措施负责人完成日期第10页共 12 页6.6.附件附件 1 1 分析方法分析方法6.1 色谱条件仪器Agilent6890GC 带 FID 检测器，或等效仪器色谱柱DB-624，30mX0.53mm，3.0m 石英毛细管柱载气氮气流速5.0ml/min柱温起始温度 40C,以 3C/min 的升温速率升温至80C,保持 2min，再以 3

21、0C/min 的升温速率升温至200C，保持 10min。进样口温度240C检测器温度240C进样量1l分流比5:16.2 溶液制备6.2.1 溶剂 N,N-二甲基甲酰胺(DMF)6.2.2 对照溶液6.2.2.1 内标溶液制备 0.4%(V/V)的正庚烷的 DMF 溶液。 精密量取 0.4ml 正庚烷置100ml 量瓶，加溶剂稀释至刻度，摇匀。6.2.2.2 对照储备液 1 量取乙醇 20ml、正己烷 0.5ml、甲苯 0.5ml、甲醇 0.5ml 置50ml 量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀。6.2.2.3 对照储备液 2 量取 1ml 对照储备液 1 置 100ml 量瓶中加溶剂稀释至刻度，摇匀。6.2.2.4 工作对照溶液量取 2ml 对照储备液 2、1ml 内标溶液置 10ml 量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，标记为 S。Solvent%V/V%W/Winsample密度(g/ml)Ethanol0.083.160.789nHexane0.0020.0660.660Methanol0.0020.