第十四部分免疫细胞的分离及其表面标志检测技术教学ppt课件

1、第十四章第十四章 免疫细胞的分别及免疫细胞的分别及其外表标志检测技术其外表标志检测技术第一节第一节 免疫细胞的分别免疫细胞的分别 一、一、 外周血单个核细胞分别外周血单个核细胞分别 二、二、 淋巴细胞的分别淋巴细胞的分别 三、三、 T T细胞和细胞和B B细胞的分别细胞的分别 四、四、 T T细胞亚群的分别细胞亚群的分别第二节第二节 淋巴细胞标志及亚群分类淋巴细胞标志及亚群分类 一、一、 细胞外表标志及亚群细胞外表标志及亚群 二、二、 B B细胞外表标志细胞外表标志 三、三、 NK NK细胞外表标志细胞外表标志第三节第三节 其他的免疫细胞其他的免疫细胞第四节第四节 免疫细胞外表标志的检测及运用

2、免疫细胞外表标志的检测及运用 一、一、 免疫细胞外表标志的检测方法免疫细胞外表标志的检测方法 二、二、 淋巴细胞外表标志检测的临床意义淋巴细胞外表标志检测的临床意义思索题思索题小结小结 第一节第一节 免疫细胞的分别免疫细胞的分别 外周血单个核细胞分别外周血单个核细胞分别 淋巴细胞的分别淋巴细胞的分别 T T细胞和细胞和B B细胞的分别细胞的分别 T T细胞亚群的分别细胞亚群的分别一、外周血单个核细胞分别一、外周血单个核细胞分别 外周血单个核细胞外周血单个核细胞peripheral mononuclear peripheral mononuclear cells, PMNCcells, PMNC

3、包括淋巴细胞和单核细胞包括淋巴细胞和单核细胞monocytemonocyte。 FicollFicoll分别液法主要用于分别外周血中的单个分别液法主要用于分别外周血中的单个核细胞，是一种单次差速密度梯度离心的分别核细胞，是一种单次差速密度梯度离心的分别法。法。 细胞分别根本原理细胞分别根本原理不同细胞密度不同不同细胞密度不同不同细胞外表生物学特性不同不同细胞外表生物学特性不同不同细胞外表分化抗原不同不同细胞外表分化抗原不同不同细胞密度不同不同细胞密度不同人的红细胞密度为人的红细胞密度为1.093 1.093 粒细胞密度为粒细胞密度为1.092 1.092 单个核细胞淋巴细胞和单核细胞的密度为单

4、个核细胞淋巴细胞和单核细胞的密度为1.075-1.090 1.075-1.090 不同细胞密度不同不同细胞密度不同用用1.0771.0770.0010.001的分层液可将细胞分别的分层液可将细胞分别 密度梯度离心密度梯度离心(Ficoll)(Ficoll)离心离心二二 、淋巴细胞分别、淋巴细胞分别贴壁粘附法贴壁粘附法 吸附柱过滤法吸附柱过滤法 磁铁吸引法磁铁吸引法 Percoll Percoll 分别液法分别液法 延续密度梯度离心延续密度梯度离心去单核细胞去单核细胞E E花环沉降法花环沉降法 尼龙毛柱分别法尼龙毛柱分别法 三、三、T T细胞和细胞和B B细胞的分别细胞的分别四、四、T T细胞亚

5、群的分别细胞亚群的分别 亲和板结合分别法亲和板结合分别法 磁性微球分别法磁性微球分别法 荧光激活细胞分别仪分别法荧光激活细胞分别仪分别法 荧光激活细胞分别仪分别法荧光激活细胞分别仪分别法 磁珠大小可以选择磁珠大小可以选择大小免疫磁珠分别细胞的特点比较大小免疫磁珠分别细胞的特点比较 比较工程比较工程大磁珠大磁珠小磁珠小磁珠对细胞的影响对细胞的影响对细胞呵斥机械压力，影响对细胞呵斥机械压力，影响其生物学活性，不利于分别其生物学活性，不利于分别后培育。后培育。对细胞温暖，不影响分别细对细胞温暖，不影响分别细胞的后续培育。胞的后续培育。对流式细胞仪的影响对流式细胞仪的影响阻塞流式细胞仪的喷嘴，影阻塞流

6、式细胞仪的喷嘴，影响散射光。响散射光。可直接上流式细胞仪检测，可直接上流式细胞仪检测，不影响散射光。不影响散射光。分别条件要求分别条件要求技术简单，分别可在试管中技术简单，分别可在试管中完成。完成。需求很强的磁场来分别细胞。需求很强的磁场来分别细胞。 收率收率得率高。得率高。得率不高。得率不高。纯度纯度纯度低。纯度低。纯度高。纯度高。分别时间分别时间分别速度快。分别速度快。分别速度慢。分别速度慢。分别本钱分别本钱本钱低。本钱低。需求很强的磁场来分别细胞，需求很强的磁场来分别细胞，需求一次性的分别柱，不能需求一次性的分别柱，不能在普通试管进展。在普通试管进展。免疫磁珠法细胞分选过程免疫磁珠法细胞

7、分选过程免免疫疫磁磁珠珠细细胞胞分分选选装装置置全自动细胞分选系统全自动细胞分选系统流式细胞分析仪流式细胞分析仪第二节第二节 淋巴细胞标志及亚群分类淋巴细胞标志及亚群分类 常用于鉴定和检测淋巴细胞外表常用于鉴定和检测淋巴细胞外表标志是簇分化抗原标志是簇分化抗原Cluster of Cluster of differentiationdifferentiation，CDCD。 细胞外表分化抗原细胞外表分化抗原CDCD抗原抗原适用于适用于T T、B B细胞的分别细胞的分别知知CDCD抗原细胞亚群的分别抗原细胞亚群的分别未知未知CDCD抗原细胞亚群的分别抗原细胞亚群的分别阴性分选阴性分选一、一、T

8、T细胞外表标志及其亚群细胞外表标志及其亚群 CD3+CD4+CD8-辅助性辅助性T细胞细胞 help T cell,Th CD3+CD4-CD8+细胞毒性细胞毒性T细胞细胞 cytotoxic T cell,Tc or CTL CD4+CD25+调理性调理性T细胞细胞 regulatory T cell,Tr or Treg二、二、B B细胞外表标志细胞外表标志 SmIgSmIg、FcFc受体、补体受体、受体、补体受体、EBEB病毒受体，部分病毒受体，部分CDCD分子是分子是B B细胞的重要外表标志，其中以细胞的重要外表标志，其中以SmIgSmIg为为B B细胞所特有，是鉴定细胞所特有，是鉴定

9、B B细胞可靠的目的。细胞可靠的目的。 CD19/CD5CD19/CD5分子：可将分子：可将B B细胞区分为细胞区分为B1B1细胞和细胞和B2B2细胞，细胞，B1B1细胞为细胞为CD19CD19和和CD5CD5双阳性，而双阳性，而B2B2细胞细胞仅为仅为CD19CD19阳性，阳性，B2B2细胞为通常所指的细胞为通常所指的B B细胞。细胞。 三、三、NKNK细胞外表标志细胞外表标志 人类人类NKNK细胞外表标志主要以细胞外表标志主要以CD16CD16、CD56CD56来认定，临床上将来认定，临床上将CD3-CD3-CD56+CD16+CD56+CD16+淋巴细胞认定为淋巴细胞认定为NKNK细胞。

10、细胞。 T细胞及细胞及NK细胞细胞第三节第三节 其他的免疫细胞其他的免疫细胞抗原提呈类细胞外表标志抗原提呈类细胞外表标志第四节第四节 免疫细胞外表标志的检测及运用免疫细胞外表标志的检测及运用免疫细胞外表标志的检测方法免疫细胞外表标志的检测方法淋巴细胞外表标志检测的临床意义淋巴细胞外表标志检测的临床意义一、免疫细胞外表标志的检测一、免疫细胞外表标志的检测抗体致敏细胞花环法抗体致敏细胞花环法 免疫细胞化学法免疫细胞化学法 免疫荧光法免疫荧光法 流式细胞分析法流式细胞分析法 二、淋巴细胞外表标志检测的临床意义二、淋巴细胞外表标志检测的临床意义 淋巴细胞外表标志检测是评价免疫功淋巴细胞外表标志检测是评

11、价免疫功能的重要目的。能的重要目的。 对对CD4+CD4+和和CD8+TCD8+T细胞的测定，有助于免细胞的测定，有助于免疫缺陷疾病、本身免疫性疾病和移植疫缺陷疾病、本身免疫性疾病和移植排斥反响的监测。排斥反响的监测。 临床常见疾病中的临床常见疾病中的T 淋巴细胞的变化淋巴细胞的变化 思索题思索题1.1.免疫细胞都包括哪些细胞？为什么要将其分别免疫细胞都包括哪些细胞？为什么要将其分别纯化？纯化？2.2.淋巴细胞有哪几类细胞？能用形状学的方法加淋巴细胞有哪几类细胞？能用形状学的方法加以区别吗？以区别吗？3.3.将细胞分别的原理有哪些？各有什么特点？将细胞分别的原理有哪些？各有什么特点？4.4.形

12、状学一样的一类细胞为什么还要分亚群？形状学一样的一类细胞为什么还要分亚群？5.T5.T细胞和细胞和B B细胞进一步区分亚群的根据是什么？细胞进一步区分亚群的根据是什么？6.6.什么是细胞外表标志？其作用是什么？什么是细胞外表标志？其作用是什么？7.7.细胞外表标志的检测方法有哪些？细胞外表标志的检测方法有哪些？8.8.利用细胞外表标志利用细胞外表标志CDCD抗原分别细胞的方法抗原分别细胞的方法有哪几种？有哪几种？9.T9.T细胞、细胞、B B细胞、细胞、NKNK细胞、单核细胞的主要生物细胞、单核细胞的主要生物标志是什么？标志是什么？10.10.淋巴细胞外表标志检测的临床意义是什么？淋巴细胞外表

13、标志检测的临床意义是什么？小小 结结淋巴细胞并不是功能单一的群体，但其淋巴细胞并不是功能单一的群体，但其在光学显微镜下的形状根本是一样的，在光学显微镜下的形状根本是一样的，因此要对其进展进一步的分类和察看就因此要对其进展进一步的分类和察看就不能采用形状学的方法，而要依托对其不能采用形状学的方法，而要依托对其外表标志的检测。常用于鉴定和检测计外表标志的检测。常用于鉴定和检测计数淋巴细胞的外表标志是数淋巴细胞的外表标志是CDCD抗原。抗原。进一步区分淋巴细胞亚群可使某一类淋进一步区分淋巴细胞亚群可使某一类淋巴细胞的功能趋向一致和单一。但目前巴细胞的功能趋向一致和单一。但目前看来，还很少有只经过一个看来，还很少有只经过一个CDCD抗原就能抗原就能将某一类淋巴细胞亚群指示出来的将某一类淋巴细胞亚群指示出来的CDCD抗抗原，原，CDCD抗原指示出来的淋巴细胞亚群多抗原指示出来的淋巴细胞亚群多数都是相对特异。数都是相对特异。根据根据T T细胞的免疫效应功能和外表细胞的免疫效应功能和外表CDCD分子分子表达至少可以分为：辅助性表达至少可以分为：辅助性