王镜岩生物化学名词解释打印版

1、氨基酸的纸层析法分离目的和要求掌握分配层析的原理，学习氨基酸纸层析法的操作技术 (包括点样、平衡、展层、显色、鉴定及定量)。学习未知样品的氨基酸成分(水解、层析及鉴定)分析的方法。原理层析法又叫色层分离法、色谱分析法或色谱法。 1903年俄国化学家茨维特(HBeT)发现用挥发油冲洗菊粉柱时，各种颜色的色素在吸附柱上从上到下排列成色谱，故称“色层分离法”。1931年有人用氧化铝柱分离了胡萝卜素的两种同分异构体，显示了这一分离技术的高度分辩力，从此引起了人们的广泛注意。自1944年应用滤纸作为固定支持物的“纸层析”诞生以来，层析技术的发展越来越快，五十年代开始，相继出现了气相色谱和高压液相层析，其

2、它如薄层层析、亲合层析、凝胶层析等也迅猛发展。层析分离技术操作简便，样品用量可大可小，既可用于实验室分离分析，又适用于工业生产中产品的分析制备。现已成为生物化学、分子生物学、生物工程等学科广泛应用而又必不可少的分析工具之一。根据所用的支持物及其理化性质不同可将层析法分成三类： 1.用固体吸附剂做支持物的称吸附层析；2.用吸附了某种溶剂的固体物质(如滤纸)做支持物的称为分配层析；3.用其表面所含离子能与溶液中的离子进行交换的固体物质做支持物的称为离子交换层析。纸层析所依据的原理是分配层析，故属于分配层析的范畴。一、分配层析分配层析法是利用不同的物质在两个互不相溶的溶剂中的分配情况不同而使之得到分

3、离的方法。将分配层析法中的一种溶剂设法固定在一个柱内，再用另外一种溶剂来冲洗这个固定柱，同样可达到将不同物质分离的目的。我们把固定在柱内的液体称为固定相，把用作冲洗的液体叫做流动相。为了使固定相固定在柱内，需要有一种固体物质把它吸牢，这种固体物质本身对分离不起什么作用，对溶质也几乎没有吸附能力，称为支持物。进行分离时由于被分离物质的组分在两相中的分布不同，因此当流动相移动时，不同组分移动的速度也不相同。易溶于流动相中的组分移动快，在固定相中溶解度大的组分移动就慢，于是得到分离。分配层析法中不同溶质的分离取决于其在两相 (固定相和流动相)间分配系数的不同，分配系数 () 的定义是： =溶质在固定

4、相的浓度(CS)/溶质在流动相的浓度(CL)滤纸层析法是以滤纸作为惰性支持物的分配层析。滤纸的成份是纤维素，纤维素的 OH基为亲水性基团，因此可吸附一层水或其它溶剂作为固定相。通常把有机溶剂作为流动相。当将溶质样品(被分离物)点在滤纸的一端后，该物质溶解在吸附于支持物上的水分子或其它溶剂分子的固定相中，有机溶剂作为流动相自上而下移动，称为下行层析；反之，使有机溶剂自下而上移动，称为上行层析。流动相流经支持物时与固定相对溶质进行连续的抽提，物质在两相间不断分配的结果即得到分离。滤纸层析原理还可进一步解释如下：可以把滤纸看成一个层析柱，又可把柱看成由许许多多连续的板层构成。如果有A、B两物质，A的

5、分配系数 =1，B的分配系数 =1/3，又设固定相为S，流动相为M，两相互相接触而不相混溶，则当第一层流动相中加入单位量A、B两物质后，溶质根据一定分配系数在第一层的两相中分配(图10-1(1)。流动相继续向下层移动，固定相与新流下的流动相之间进行第二次分配，原来第一层流动相与第二层固定相间进行分配如此类推，经三次分配即可看出A、B最浓部分已经分开，A物质在第二层最浓，而B物质则在第三层最浓。如此继续抽提下去、再经若干次后，A和B两物质就可以完全分开。显然，A、B两物质分配系数相差越大，则越易分开。物质分离后在图谱上的位置，可用比移值 Rf来表示，Rf值的定义是：从溶质层析的起点(原点)到层析

6、斑点中心的垂直距离与从原点到溶剂流动的前沿的垂直距离的比值：Rf=原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离两相体积比在同一实验情况下是不变的，所以 Rf值的主要决定因素是分配系数 ( )。对于每一物质在一定条件下值是固定的，因此Rf值为其特征常数，可做为定性鉴定的参考数值。二、影响 Rf值的主要因素1.物质结构对于Rf值的影响：“物以类聚”，极性物质易溶于极性溶剂(水)中，非极性物质易溶于非极性溶剂(有机溶剂)中。所以物质的极性大小决定了物质在水和有机溶剂之间的分配情况。例如酸性和碱性氨基酸极性大于中性氨基酸。所以前者在水(固定相)中分配较多，因此Rf值低于后者。2.溶质与溶剂间的相互作用

7、对Rf值的影响：这种影响是由溶质与溶剂间的相互作用与分配系数的关系所决定的。溶质与溶剂之间若能形成氢键，对分配系数的影响就很大。例如酚、三甲基吡啶、氨等和水混合后都能很好地与溶质形成氢键。某些溶剂(例如酚，正丁醇等)是质子的供给体，而水既是质子的供给体又是质子的接受体。当溶质结构中增加能接受质子的基团(例如NH )时，因酚与水都能给 NH 基提供质子，所以酚和水两相对接受质子的基团的引力，基本上是一致的，因此当溶质结构中增加氨基时，该物质与酚和水的作用对其在酚和水两相间的分配影响不大，对Rf值影响较小。又例如当有机溶剂是质子的接受体(如三甲基吡啶，NH 3 等)，而溶质也是质子的接受体(如-N

8、H 基)，这时有机溶剂对-NH 没有引力，而水却有引力，于是水的引力就大于有机溶剂，因此溶质就被水拉向水相，对Rf值的影响就大。3.pH对Rf值的影响：这种影响主要是由pH与分配系数的关系所决定的。弱酸与弱碱的解离度受pH影响很大，解离度越大，极性越强，极性强的物质在两相溶剂中分配时，偏向于极性强的一相，这样，改变pH就会同时改变分配系数，从而使Rf也会相应变化。在氨基酸的层析法中，改变溶剂的pH，使酸性和碱性氨基酸的Rf值变动较大，而中性氨基酸的Rf值变动较小。在正丁醇中加甲酸，可使酸性氨基酸的极性降低，从而使Rf值变大，而使碱性氨基酸的Rf变小。反之，如在正丁醇中加氨，可使天冬氨酸和谷氨酸

9、的Rf值变小，而使赖氨酸、精氨酸等碱性氨基酸的Rf值变大。4. 滤纸对Rf值的影响：滤纸本身的pH及含水量对Rf值的影响很大，所以不同的滤纸得到不同的Rf值及不同的斑点形状。纸上含水量的多少随溶剂与纸对水的亲和力的大小而异，质地不均一的滤纸常使溶剂扩展不一致，随着纤维的纹理流动紊乱，另一方面纸的含水量不均一，也不能得到理想的分离效果。5.温度对 Rf值的影响： Rf值的重现性与恒温情况的好坏有密切关系。温度对Rf 值的影响主要是因为溶质在固体相与流动相之间的分配随温度的变化而不同。随各溶剂组分的粘度和表面张力的不同其蒸发能力也不同，因此有些溶剂系统对温度的敏感程度强些，有些则差些。敏感程度强的

10、对温度的要求就严格，敏感程度差的对温度的要求就不太严格。温度改变使溶剂系统中的溶解度改变，所以 Rf值也改变。一般层析展层是在恒温室中进行的，室温可在20至40，温度改变不超过±0.5。无色物质的层析图谱可用光谱法 (如核苷酸类物质用紫外光照射)或显色法鉴定。氨基酸纸上层析图谱常用的显色剂有茚三酮、吲哚醌。本实验采用茚三酮为显色剂。茚三酮显色反应受温度、pH，时间影响较大。如果要使结果重复，必须严格控制上述条件。样品中如含有大量盐酸会使氨基酸不显出颜色。样品中含大量盐时显色点上会出现白斑，空气中其它的杂质如氨，硫化氢或酚等皆会影响显色结果。铜离子可以与氨基酸-茚三酮显色物形成络合物，

11、颜色较稳定，用硫酸铜乙醇溶液洗脱层析后的显色斑点，可以通过比色法定量测定氨基酸含量。由于纸上层析设备条件较简单，操作比较简便，并可以分离微量样品，因此纸层析方法已成为生化分析和研究的主要方法之一，广泛应用于氨基酸、肽、核苷酸，糖、维生素以及脂肪酸等的分离鉴定。操作步骤一、标准氨基酸纸上层析1.单向上行层析(1)氨基酸 Rf值的测定滤纸：选用国产新华 1号滤纸(若有较多的样品需在纸上分离，可采用新华3号滤纸)，戴上橡皮手套，将滤纸裁剪成28cm×28cm，在距纸边2cm处，用铅笔轻轻划一条线，于线上每隔3cm处画一小圆圈作为点样处，圈直径不超过0.5cm。点样：点样要合适，样品点的太浓

12、，斑点易扩散或拉长，以致分离不清，氨基酸的点样量以每种氨基酸含 520g为宜，将准备好的滤纸悬挂在点样架上，滤纸垂直桌面，用点样管(也可用血色素管代替)吸取氨基酸样品10g(1g/L)，与滤纸垂直方向轻轻碰触点样处的中心，这时样品就自动流出。点样的扩散直径控制在0.5cm之内，点样过程中必须在第一滴样品干后再点第二滴，为使样品加速干燥，可用一加热装置(如吹风机或灯泡)，但要注意温度不可过高，以免氨基酸破坏，特别是谷氨酰胺破坏，影响定量结果。将点好样品的滤纸两侧比齐，用线缝好，揉成筒状。注意缝线处纸的两边不要接触。避免由于毛细管现象使溶剂沿两边移动特别快而造成溶剂前沿不齐，影响Rf值。本实验做两

13、张单向层析谱，每张点 6种氨基酸。一张测定酸系统中的Rf，一张测定碱系统中的Rf。展层：将揉成圆筒状的滤纸放入培养皿内 (注意滤纸不要碰皿壁)，周围放三个小烧杯，内盛平衡用的溶剂。盖好钟罩，平衡12h(每个钟罩内可放三个培养皿)。平衡后，打开钟罩上塞子，用长颈漏斗。插入罩内，使管下口碰皿底，沿管加入展层溶剂，然后迅速取出漏斗(注意勿使它碰纸)。当溶剂展层至距离纸的上沿约1cm时，取出滤纸，立即用铅笔标出溶剂前沿位置，挂在绳上或点样架上晾干，使纸上溶剂自然挥发，直至除净溶剂。酸溶剂系统：正丁醇： 80%甲酸：水=15:3:2(体积比)，平衡溶剂与展层溶剂相同。温度25，时间1020h。碱溶剂系统

14、：正丁醇：12%氨水：95%乙醇=13:3:2(体积比)，平衡溶剂为12%氨水，温度25，时间1416h。注意，使用的溶剂系统需新鲜配制，并要摇匀。平衡溶剂每烧杯放 10mL左右，展层溶剂每张约需25mL。显色：将已除尽溶剂的层析滤纸平夹在层析架上，将架与地面略平行，用喷雾器将 0.5%茚三酮无水丙酮溶液均匀地喷在纸上。试剂内不可含水，否则会把样品冲散以致图谱模糊，每张纸共用显色剂25mL，分别在两面喷雾，滤纸充分晾干后，置65鼓风箱中30min，鼓风保温，滤纸上即显出紫红色班点。Rf 值的计算：用尺测量显色斑点的中心与原点(点样中心)之间的距离和原点到溶剂前沿的距离，求出此值，即得氨基酸的R

15、f值。或用一特制的橡皮尺直接读出Rf 值。尺的制作方法如下：取细乳胶管一段，画上刻度，每大格为1cm，每小格为1mm(图10-4)。测量时将原点与刻度“0”比齐，再拉长橡皮小尺，使溶剂前沿与“10”比齐，读出斑点中心所在的刻度即得Rf值。计算出 6种氨基酸在酸、碱系统中的Rf值。(2)氨基酸标准曲线的制作滤纸：规格、尺寸与前同。点样：配制一个浓度为 8mmol/L分子的天冬氨酸溶液，在纸上点上不同的量：5、10、15、20l，留一空白点作对照。点样操作与前同。展层：展层采取酸性溶剂系统，即正丁醇： 80%甲酸：水=15:3:2,展层条件与操作见前。显色：除尽溶剂的层析纸用 20mL茚三酮丙酮溶

16、液在纸的一面均匀喷雾，自然干燥后，置于65烘箱内，准确地烘30min，取出。定量测定：剪下层析谱上天冬氨酸斑点，其面积大小相仿，再剪一块空白纸作比色对照。把剪下的纸片再剪成梳状细条，分别装入干燥试管内，加入 5mL0 1%硫酸铜(CuSO 4 ·5H 2 O)：75%乙醇=2：38的溶液洗脱，间歇摇匀，洗脱液呈粉红色，待15min后用520mm处测定O D值。以氨基酸含量(g数)为横坐标，光吸收值为纵坐标作图，其结果应为直线关系，但不同氨基酸其斜率不同。2.双向上行纸层析点样：样品为混合标准氨基酸，点样量 15或20l。展层：双向展层。第一向为碱系统正丁醇： 12%氨水：95%乙醇=

17、13:3:3(体积比) 第二向为酸系统正丁醇： 80%甲酸：水=13:3:2(体积比) 第一向展层一次，必要时亦可展层两次，第二向一般展层一次即可。二向的展层条件分别与酸、碱单向展层的条件相同。进行双向层析时，先用第一向溶剂展层后，使干燥，将纸调转 90°，再用第二向溶剂展层。显色：显色剂采用 0.5%茚三酮溶液。显色条件与标准曲线制作显色部分相同。定性鉴定与定量测定：双向层析Rf值由两个数值组成，即在第一向计量一次(碱系统)和在第二向计量一次(酸系统)，分别与已知氨基酸在酸、碱系统的Rf值对比，即可初步肯定它为何种氨基酸。找出谷氨酸斑点，将它剪下，在同一张纸上再剪下一块大小相仿的空

18、白纸作对照，如前所述，用硫酸铜乙醇溶液洗脱并进行比色测定，所得比色读数在标准曲线上查出谷氨酸含量，计算出样品中谷氨酸的毫克分子数是多少? 二、样品中氨基酸的分析 (以鸡蛋蛋清为例) 1.水解液的制备：取鸡蛋清1滴(约0 2mL)，加到2mL的安瓿中，再加入2mL经过重蒸的盐酸溶液(57mol/L)，封口后置于110烤箱中进行封管酸水解。24h后打破安瓿。将酸水解液转移到小烧杯中，于沸水浴上蒸去盐酸，内容物蒸干时可加少量蒸馏水，再次蒸发，重复34次。最后加1mL蒸馏水。2.单向上行纸层析分析点样：在滤纸上 (规格尺寸同图10-5)。点上不同体积：10、20、25、30l的蛋清酸水解液，同时再点上

19、一个标准氨基酸混合液点(15l/点)。操作同前展层：条件同前。采取正丁醇： 80%甲酸：水=15:3:2系统，操作同前。显色： 0.1%茚三酮丙酮显色，操作同前。层析谱：鸡蛋清水解液展层后一般可以分出 1013个氨基酸斑点。找出那一种点样量的层析效果最好，并用六种标准氨基酸混合液的层析斑点及文献资料上关于鸡蛋清蛋白水解液的成分作比较。3.此实验中应注意的几个问题(1)使用茚三酮显色法，必须在整个层析操作中避免手直接接触层析纸，因为手上常常有少量含氮物质。显色时它也呈现紫色斑点。污染了层析结果，因此操作时应戴橡皮手套或指套。同时也要防止空气中的氨。(2)取一支破损的0.1mL吸量管，将下端拉成毛

20、细管，然后在碎磁片边缘上磨尖。注意，在点样时应尽量使用上端的刻度，因为靠近尖端的刻度已不准确。(3)层析纸经第一向层析后，上端未经溶剂走过的滤纸(距纸边约1cm)与已被溶剂走过的部分形成一个分界线，进行第二向层析前，需将第一向上端截去约2cm除去边缘，在截去边缘以前，先将原点到溶剂前沿的距离量好，记下来。(4)为了鉴定未知样品中某几种氨基酸的存在，仅用一种溶剂系统展层是不够的。一船应采用23种溶剂系统展层显色后，再分别与该种溶剂系统的标准氨基酸图谱比较，相互印证，才能作出比较确切的结论。试剂和器材一、试剂1.氨基酸标准液(1mg/mL)：六种氨基酸是天门冬氨酸、丙氨酸、酪氨酸、蛋氨酸、胱氨酸、

21、亮氨酸、分别配制成上述浓度的溶液。2.8mmol/L天门冬氨酸溶液。3.95%乙醇。4.80%甲醇(稀释前需测比重)。5.12%氨水(稀释前需测比重)。6.0.1%茚三酮丙酮溶液。7.0.5%茚三酮丙酮溶液。8.氨基酸混合液(每种氨基酸500mg/mL)。9.正丁醇(需重蒸，沸程：116120)。10.0.1%硫酸铜(CuSO 4 ·5H 2 O)：75%乙醇=2：38溶液。硫酸铜难溶于乙醇，不能用乙醇直接配制。将硫酸铜溶液和乙醇混合后放置过久亦会产生沉淀，因此必须在临用前按比例混合。重蒸盐酸溶液：将商售化学纯盐酸用磨口蒸馏器蒸馏，收集恒沸点部分，即为5.7mol/L盐酸溶液。12.

22、鸡蛋蛋清。二、器材1.新华滤纸。2.培养皿(直径115mm)。3.电热鼓风干燥箱。4.恒温水浴和沸水浴。5.72型分光光度计。6.离心机(4 500r/min)。7.研钵。8.喷雾器及吹风机。9.点样管及点样架。10.针、线、尺。11.橡皮手套。12.安培瓶(2mL) 13.烧杯(50mL)。14.钟罩(高约430mm,直径约290mm，具磨口塞)。思考题1.什么在展层时有时用一种溶剂系统，而有时用两种溶剂系统? 2.性溶剂系统(或碱性溶剂系统)对氨基酸极性基团的解离有何影响? 3.酸性溶剂系统(或碱性溶剂系统)对碱性氨基酸(赖、精、组)和酸性氨基酸(天冬、谷)的Rf值有什么影响? 4. 滤纸

23、上点上 1 L l0.02mol/L 的甘氨酸 ( 分子量 =75) 溶液，请问实际上点了多少微克的氨基酸 ? 试科目名称及代码  生物化学 二适用专业   生物化学与分子生物学注意：1.所有答案必须在”南京大学研究生入学考试答题纸”上，写在试卷和其他纸上无效。2.本科目不允许使用无字典存储和编程功能的计算器。一. 是非题（对的画”+”,错的画”-“,每题1分，共20分。答错一题，倒扣0.5分，不答者不倒扣）1. 假尿苷分子中的碱基不是真正的尿嘧啶，而是尿嘧啶的衍生物。2. 腺嘌呤核苷酸是辅酶A，NAD+和FAD的组成成分。3. 维生素B5和维生素B6都

24、是吡啶的衍生物。4. 茚三酮试剂能测定蛋白质中的肽键的数量。5. DNA是生物的遗传物质，而RNA则不是遗传物质。6. 胶原蛋白是一种糖蛋白。7. 用甲醛滴定法测定氨基酸的含量时，甲醛的作用是使氨基酸的-NH3+酸性增强。8. 一种糖的D-型和L-型是对映体。9. 固定化酶的一个缺点是很难作用于水不溶性底物。10. 在结构上与底物无关的各种代谢物有可能改变一些酶的Km值。11. 生长因子的受体都具有酪氨酸蛋白激酶的活性。12. 脂溶性激素的受体实际上是一种反式作用因子13. 促黑激素和褪黑激素的本质上都是多肽14. NAD+在340nm处有吸收，NADH没有，利用这个性质可将NADH与NAD+

25、区分开来。15. 琥珀酸脱氢酶的辅基FAD与酶蛋白之间与共价键结合，16. 嘧啶合成所需的氨甲酰磷酸合成酶与尿素循环所需要的氨甲酰磷酸合成酶是同一个酶。17. 羧化酶都需要生物素(Biotin)作为辅基。18. DNA聚合酶I，II和III都属于多功能酶。19. HIV的基因组实际上是一种多顺反子mRNA。二 选择题（以下各题均有一个正确答案，错答不倒扣，每小题1分，共18分）1. 从一种动物病毒中分离得到的DNA，显示Chargaff碱基组成规律，并且能抗外切核酸酶，则此DNA为：（1）单链线状  （2）单链环状  （3）双链线状  

26、;（4）双链环状  2. 蛋白质的热变性主要是：（1）破坏氢键   （2）破坏离子键   （3）破坏疏水键  （4）破坏水化层3. R-A-G在PH7.0时所带的净电荷为：（1）-1        （2）0         （3） +1       （4）+24. 当S=Km时，游离E和ES复合物浓度的关系为：（1）2E=ES    （2

27、）E=3ES  （3）E=ES   （4）1/2 E=ES5 热变性DNA具有下列那种特性？（1） 核苷酸间的磷酸二酯键断裂（2） 260nm处的光吸收下降（3） GC对的含量直接影响Tm值（4） 形成三股螺旋6 下列那种原因中，哪个会导致Hb与氧亲和力下降？（1） 一分子氧和脱氧Hb分子四个结合部位中的一个结合（2） 一分子氧和脱氧Hb分子中亚基结合（3） 红细胞内DPG浓度下降（4） 提高CO2的水平7.  下列有关胆固醇的叙述，哪个是错误的？（1） 有李一伯（Libermann-Burchard）反应（2） 是不饱和固醇（3）

28、是所有类固醇激素的前体（4） 胆固醇是脂类化合物，分子中含有脂酸基8 下列关于肌红蛋白的叙述，哪个是错误的？（1） 肌红蛋白是由一条多肽链和一个血红素辅基组成的（2） 肌红蛋白含有高比例的螺旋（3） 血红素位于两个His残基之间（4） 大多数非极性侧链位于分子表面，所以肌红蛋白不溶于水     9能保护疏基酶不被氧化的物质是   （1）GSH   （2）尿素   （3） SDS  （4）FDNB10蛋白质分子典型的-螺旋，螺距为    （1）0.15nm&

29、#160;  (2) 0.34nm  (3)  0.45nm   (4) 0.54nm11NO作为一种信息分子，它在体内是由哪一种氨基酸转变而来？     （1）Lys  （2）Arg   (3) Gln   (4) Asn  (5) His 12. 某一家族的与G蛋白偶联的腺苷酸环化酶的基因有缺陷，试问下面哪一种激素的功能将会受到影响？   （1）甲状腺素  （2）

30、皮质醇   （3）胰岛素   （4）肾上腺素  （5）ANF13.Leland H.Hartwell, R.timothy Hunt  和 Paul M.Nurse三位科学家因在什么领域上的杰出贡献而荣获2001年度的诺贝尔医学和生理学奖  (1)信号肽学说  (2)氧化磷酸化  (3)第二信使学说  (4)癌基因学说 (5)细胞周期14  苍术苷能够抑制氧化磷酸化是因为它直接作用  (1)复合体

31、I   (2)复合体II   (3)复合体III  (4)复合体IV   (5) ADP/ATP交换体15 大量口服Ile 可影响到小肠上皮细胞对哪一种氨基酸的吸收。   (1)Asp      (2) Lys    (3) Gly     (4)Pro     (5) Val16  尿嘧啶糖苷酶的功能是   (1)去

32、除嘧啶二聚体    (2)切除RNA分子的尿嘧啶   (3)切除DNA分子中的尿嘧啶   (4)切除DNA分子中的尿苷酸      (5)切除RNA分子中的尿苷酸17 雌激素反应元件（ERE）的一致序列为AGGTCAnnnTGACCT。如果将议该序列方向改变，则依赖雌激素的基因转录将受到什么样的影响？   （1）只有3'-端的基因将被关闭   （2）只有5'-端的基因将被关闭     （3）5'

33、;-端3'-端基因都将被关闭    （4）对5'-端和3'-端基因都没有什么影响    （5）由ERE编码的所有氨基酸都将改变18  使用(UAG)作为模板在无细胞翻译系统中进行翻译，可得到几种多肽？1、0种     2、1种     3 、2种    4 、3种    5、4种三填充题1.常见的蛋白质的超二级结构有_,_,_,-_,_,和_  2.测定蛋白质一级结构时，常

34、用的N端分析方法有(   )(   )(   )和(   )法。3.酶高效催化的假设有(   )(    )(     )(     )和(    )   4.雌激素的受体除了应具有与激素结合部位以外，还应该具有(    )(   )两个功能部位  5.GTP的类似物GTP()CH2能够延长肾上腺素

35、的作用时间是因为  6.OAA的P/O值(   )  7.(   )酶的缺乏可导致人患严重的复合性免疫缺陷症(SCID)，使用(   )治疗可治愈此疾病  8.体内DNA复制主要使用(    )作为引物，而在体外进行PCR扩增时使用(   )作为引物。  9.四环双萜是(    )酶的抑制剂  10.维持DNA复制的高度忠实性的最重要的机制是(    )&#

36、160; 11.所有的真核细胞的RNA聚合酶II的最大亚基的C端都含有一段高度保守的重复序列，这段重复序列是(    ),它的功能可能是(    )  12.gRNA(guide RNA)的功能是(   )  13.分子伴侣通常具有(   )酶的活性。  14某些蛋白质基因的编码链上并没有终止密码子，但是，可以通过Pre-mRNA的(   ),和(   )两种后加工方式引入终止密码子。  

37、;15.真核生物细胞蛋白合成对起始密码子的识别主要通过(    )机制进行。窗体顶端      2007年1月9日 星期二 窗体底端第五章 酶化学发布日期：2005-12-18 发布人：管理员第五章 酶化学 一：填空题1.全酶由_和_组成，在催化反应时，二者所起的作用不同，其中_决定酶的专一性和高效率，_起传递电子、原子或化学基团的作用。2.辅助因子包括_，_和_等。其中_与酶蛋白结合紧密，需要_除去，_与酶蛋白结合疏松，可用_除去。3.酶是由_产生的，具有催化能力的_。4.酶活力的调节包括酶_的调节和酶_的调节。5.T.R.Cech和S.Al

38、tman因各自发现了_而共同获得1989年的诺贝尔奖(化学奖)。6.1986年，R.A.Lerner和P.G.Schultz等人发现了具有催化活性的_，称_。7.根据国际系统分类法，所有的酶按所催化的化学反应的性质可以分为六大类_，_，_，_，_和_。8.按国际酶学委员会的规定，每一种酶都有一个唯一的编号。醇脱氢酶的编号是EC1.1.1.1，EC代表_，4个数字分别代表_，_，_和_。9.根据酶的专一性程度不同，酶的专一性可以分为_专一性、_专一性和_专一性。10.关于酶作用专一性提出的假说有_，_和_等几种。11.酶的活性中心包括_和_两个功能部位，其中_直接与底物结合，决定酶的专一性，_是

39、发生化学变化的部位，决定催化反应的性质。12.酶活力是指_，一般用_表示。13.通常讨论酶促反应的反应速度时，指的是反应的_速度，即_时测得的反应速度。14.常用的化学修饰剂DFP可以修饰_残基，TPCK常用于修饰_残基。15.酶反应的温度系数 一般为_。16.调节酶包括_和_等。17.解释别构酶作用机理的假说有_模型和_模型两种。18.固定化酶的优点包括_，_，_等。19.固定化酶的理化性质会发生改变，如Km_，Vmax_等。20.同工酶是指_，如_。21.pH影响酶活力的原因可能有以下几方面：(1)影响_，(2)影响_，(3)影响_。22.温度对酶活力影响有以下两方面：一方面_，另一方面

40、_。23.脲酶只作用于尿素，而不作用于其他任何底物，因此它具有_专一性；甘油激酶可以催化甘油磷酸化，仅生成甘油-1-磷酸一种底物，因此它具有_专一性。24.酶促动力学的双倒数作图(Lineweaver-Burk作图法)，得到的直线在横轴上的截距为_，纵轴上的截距为_。25.磺胺类药物可以抑制_酶，从而抑制细菌生长繁殖。26.谷氨酰胺合成酶的活性可以被_共价修饰调节；糖原合成酶、糖原磷酸化酶等则可以被_共价修饰调节。27.判断一个纯化酶的方法优劣的主要依据是酶的_和_。二：是非题1. 酶可以促成化学反应向正反应方向转移。2. 对于可逆反应而言，酶既可以改变正反应速度，也可以改变逆反应速度。3.

41、酶的化学本质是蛋白质。4. 酶活性中心一般由在一级结构中相邻的若干氨基酸残基组成。5. 酶只能改变化学反应的活化能而不能改变化学反应的平衡常数。6. 酶活力的测定实际上就是酶的定量测定。7. 酶反应速度一般用单位时间内底物的减少量来表示。8. 从鼠脑分离的己糖激酶可以作用于葡萄糖(Km= mol/L)或果糖(Km= mol/L)。则己糖激酶对果糖的亲和力更高。9. Km是酶的特征常数，只与酶的性质有关，与酶浓度无关。10. Km是酶的特征常数，在任何条件下，Km是常数。11. Km是酶的特征常数，只与酶的性质有关，与酶的底物无关。12. 一种酶有几种底物就有几种Km值。13. 当S>&g

42、t; Km时，v 趋向于Vmax，此时只有通过增加E来增加v。14. 酶的最适pH是一个常数，每一种酶只有一个确定的最适pH。15. 酶的pH 酶活性曲线均为钟罩形。16. 酶的最适温度与酶的作用时间有关，作用时间长，则最适温度高，作用时间短，则最适温度低。17. 酶反应的温度系数高于一般反应的温度系数。18. 金属离子作为酶的激活剂，有的可以相互取代，有的可以相互拮抗。19. 增加不可逆抑制剂的浓度，可以实现酶活性的完全抑制。20. 正协同效应使酶促反应速度增加。21. 正协同效应使酶与底物亲和力增加。22. 正协同效应使酶促反应速度对底物浓度变化越来越敏感。23. 竞争性可逆抑制剂一定与酶

43、的底物结合在酶的同一部位。24. 由1克粗酶制剂经纯化后得到10mg电泳纯的酶制剂，那么酶的比活较原来提高了100 倍。25. 酶反应的最适pH只取决于酶蛋白本身的结构。26. 负协同性不能用MWC(齐变模型)理论来解释。三：单选题1. 利用恒态法推导米氏方程时，引入了除哪个外的三个假设？A.在反应的初速度阶段，E+PES可以忽略B.假设S>>E，则S-ESSC.假设E+SES反应处于平衡状态D.反应处于动态平衡时，即ES的生成速度与分解速度相等2. 用动力学的方法可以区分可逆、不可逆抑制作用，在一反应系统中，加入过量S和一定量的I，然后改变E，测v，得vE曲线，则哪一条曲线代表加

44、入了一定量的可逆抑制剂？A.1B.2C.3D.不可确定3. 在一反应体系中，S过量，加入一定量的I，测vE曲线，改变I，得一系列平行曲线，则加入的I是： A.竞争性可逆抑制剂B.非竞争性可逆抑制剂C.反竞争性可逆抑制剂D.不可逆抑制剂E.无法确定4. 竞争性可逆抑制剂抑制程度与下列哪种因素无关？A.作用时间B.抑制剂浓度C.底物浓度D.酶与抑制剂的亲和力的大小E.酶与底物的亲和力的大小5. 下图中I代表了：A.竞争性可逆抑制剂B.非竞争性可逆抑制剂C.反竞争性可逆抑制剂D.不可逆抑制剂E.无法确定6. 哪一种情况可用增加S的方法减轻抑制程度？A.不可逆抑制作用B.竞争性可逆抑制作用C.非竞争性

45、可逆抑制作用D.反竞争性可逆抑制作用E.无法确定7. 酶的竞争性可逆抑制剂可以使：A.Vmax减小，Km减小B.Vmax增加，Km增加C.Vmax不变，Km增加D.Vmax不变，Km减小E.Vmax减小，Km增加8. 下列常见抑制剂中，除哪个外都是不可逆抑制剂？A.有机磷化合物B.有机汞化合物C.有机砷化合物D.氰化物E.磺胺类药物9. 溶菌酶在催化反应时，下列因素中除哪个外，均与酶的高效率有关？A.底物形变B.广义酸碱共同催化C.邻近效应与轨道定向D.共价催化E.无法确定10. 下图中哪条曲线是负协同效应别构酶的vS曲线？A.1B.2C.3D.无法确定11. 假定Rs=(酶与底物结合达90%

46、饱和度时的底物浓度)/(酶与底物结合达10%饱和度时的底物浓度)，则正协同效应的别构酶:A.Rs>81B.Rs=81C.Rs<81D.Rs81E.Rs8112. 以Hill系数判断，则具负协同效应的别构酶:A.n>1B.n=1C.n<1D.n1E.n113. 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的影响属于：A.反馈抑制B.底物抑制C.竞争性可逆抑制D.非竞争性可逆抑制E.反竞争性可逆抑制14. 酶的活化和去活化循环中，酶的磷酸化和去磷酸化位点通常在酶的哪一种氨基酸残基上？A.天冬氨酸B.脯氨酸C.赖氨酸D.丝氨酸E.甘氨酸15. 测定酶活性时，通常以底物浓度变化小于多少时测得的速度为反

47、应的初速度？A.0.1%B.0.5%C.1%D.2%E.5%16. 在生理条件下，下列哪种基团既可以作为 的受体，也可以作为 的供体？A.His的咪唑基B.Lys的氨基C.Arg的胍基D.Cys的巯基E.Trp的吲哚基17. 对于下列哪种抑制作用，抑制程度为50%时，I=Ki？A.不可逆抑制作用B.竞争性可逆抑制作用C.非竞争性可逆抑制作用D.反竞争性可逆抑制作用E.无法确定18. 在一酶反应体系中，若有抑制剂I存在时，最大反应速度为 ，没有抑制剂I存在时，最大反应速度为 ，若 ， 则I为：A.竞争性可逆抑制剂B.非竞争性可逆抑制剂C.反竞争性可逆抑制剂D.不可逆抑制剂E.无法确定四：问答题1

48、.简述酶作为生物催化剂与一般化学催化剂的共性及其个性。2.简述Cech及Altman是如何发现具有催化活性的RNA的。3.写出催化下列反应的酶的分类名称(类型)4.试指出下列每种酶具有哪种类型的专一性。(1)脲酶(只催化尿素 的水解，但不能作用于 ) (2)-D-葡萄糖苷酶(只作用-D-葡萄糖形成的各种糖苷，但不能作用于其他的糖 苷，例如果糖苷) (3)酯酶(作用于 的水解反应) (4)L-AA氧化酶(只作用于L-AA，而不能作用于D-AA) (5)反丁烯二酸水合酶只作用于反丁烯二酸(延胡索酸)，而不能作用于顺丁烯二酸 (马来酸) (6)甘油激酶(催化甘油磷酸化，生成甘油-1-磷酸)5.甘油醛

49、-3-磷酸脱氢酶，相对分子质量4万，由4个相同亚基组成，每个亚基上有一个活性位点，在最适条件下，5g纯酶制品每分钟可以催化2.8mol甘油醛-3-磷酸转化为甘油酸-3-磷酸。请计算酶的比活力和单个活性位点的转换数。6.称取25mg蛋白酶配成25ml溶液，取2ml溶液测得含蛋白氮0.2mg，另取0.1ml溶液测酶活力，结果每小时可以水解酪蛋白产生1500ug酪氨酸，假定1个酶活力单位定义为每分钟产生1ug酪氨酸的酶量，请计算：(1)酶溶液的蛋白浓度及比活(2)每克酶制剂的总蛋白含量及总活力。7.Decamethonium 是一种用于肌肉松弛的药物，是乙酰胆碱酯酶的抑制剂，这种抑制作用可以通过增加

50、乙酰胆碱的浓度来逆转或解除。请问这种药物是否与酶共价结合？属于哪种类型的抑制剂？并解释为什么可以通过增加乙酰胆碱的浓度来解除抑制。8.乙酰胆碱酯酶也可以被DFP失活，因为DFP可以与酶的Ser残基共价结合，但是decamethonium可以对酶起保护作用。在一定量的酶和DFP存在时，decamethonium可以使酶失活的速度降低，请解释。9.试比较Km与Ks的定义及其相互关系。10.Vmax和米氏常数可以通过作图法求得，试比较vS图，双倒数图，vv/S作图，S/vS作图及直接线性作图法求Vmax和Km的优缺点。11.指出下列反应式分别代表了哪种机制的双底物双产物反应。 12.(1)为什么某些

51、肠道寄生虫如蛔虫在体内不会被消化道内的胃蛋白酶，胰蛋白酶消化？ (2)为什么蚕豆必需煮熟后食用，否则容易引起不适？13.-糜蛋白酶( 24 000)可以水解苯甲酰-L-酪氨酸乙酯。比活为45.0mol/min/mg 酶。已知-糜蛋白酶只有一个活性位点。求转换数。14.-胰凝乳蛋白酶可以催化N-乙酰-L-Phe-p-硝基苯酯的水解，在不同的底物浓度下测反应初速度得到一组实验数据，见下表。求Km和Vmax。15.使用下表数据，作图判断抑制剂类型(竞争性还是非竞争性可逆抑制剂)。16.甘油醛-3-磷酸脱氢酶( 150 000)的活性位点有一个Cys残基，假定为使5ml1.2mg/ml的酶溶液完全失活

52、，需要 mg碘乙酰胺 ( 185)，计算酶的催化亚基的数目。17.对活细胞的实验测定表明，酶的底物浓度通常就在这种底物的Km值附近。请解释其生理意义。为什么底物浓度不是大大高于Km或大大低于Km呢？18.有时别构酶的活性可以被低浓度的竞争性抑制剂激活，请解释。19.(1)对于一个遵循米氏动力学的酶而言，当S=Km时，若v=35mol/min，Vmax是多少mol/min？ (2)当S= mol/L,v=40mol/min，这个酶的Km是多少？ (3)若I表示竞争性抑制剂， = M,当S= mol/L和I= mol/L时,v是多少？ (4)若是非竞争性抑制剂，在 、 S和I条件与(3)中相同时，

53、v是多少？ (5)大致绘出此酶v-S关系的曲线图形a.没有抑制剂存在时；b.有竞争性抑制剂存在时如(3)；c.有非竞争性抑制剂存在时如(4)20.在不同底物浓度的反应体系中，分别测有无抑制剂存在时的v，数据如下：求有无抑制剂存在时的Vmax和Km(Km)，并判断这种抑制剂是什么类型的抑制剂。21.在一组10ml的反应体系中，加入不同浓度的底物。分别测反应初速度，得数据如下：不作图计算：(1)V和Km。(2) 计算 S = mol/L 和 S = mol/L 时的 v 。 (3) 计算 S = mol/L 或 S = mol/L 时最初 5 分钟内的产物总量。 (4) 假如每一个反应体系中酶浓度

54、增加至 4 倍时， Km ， Vmax 是多少？当 S = mol/L 时， v 是多少？ 22.在很多酶的活性中心均有His残基参与，请解释。kkzj9891kkzj9891当前离线积分6考元12 元威望0 点精华0帖子6阅读权限5注册时间2008-8-2最后登录2008-10-10实习会员实习会员, 积分 6, 距离下一级还需 14 积分· 串个门· 加好友· 打招呼· 发消息发表于 2008-8-2 20:47:11|只看该作者|倒序浏览2000年是非题1溶液的pH可以影响氨基酸的等电点。    (    )

55、5脂肪和胆固醇都属于脂类化合物，它们的分子中都含有脂酸。    (    )6Phe-Leu-Val-Arg四肽的等电点在pH8.0以上。    (    )7双链DNA中若G-C含量多，则Tm值高。    (    )9RNA容易被碱水解，DNA对碱稳定，这是由于它们所含的碱基不同。11cAmP作为一种第二信使，只存在于真核生物细胞。    (    )1302作为一种第二信使，需要通过钙调蛋白才能发挥作用。   

56、 (    )    14在消耗ATP的条件下，呼吸链上的电子可以从复合物流动到复合物  I。    (    )  15大肠杆菌DNA聚合酶I并不是参与其染色体DNA复制的主要酶，因此它的缺失不会影响到大肠杆菌的繁殖。    (    )    16癌细胞和胚性细胞内的端聚酶活性较高，而正常的已经分化的细胞内的端聚酶活性则很低。    (    )  17

57、四膜虫pre-rRNA的剪接反应需要鸟苷酸提供能量。    (    )  18由于遗传密码的通用性，所以真核生物的mRNA可以在原核生物细胞内得到正常的翻译。    (    )  19信号肽总是处在多肽前体的N端。    (    )  20与核糖体蛋白相比，rRNA仅仅作为一种结构骨架，在多肽合成中没有什么直接作用。    (    )  二、选择题(

58、从4个备选答案中选出1个惟一的正确的答案，将答案代码填人题末的括号内。每小题1分，共20分)        1在丁醇乙酸水溶剂系统中进行纸层析时，发现氨基酸的m值太小，为了使Rf值加大，应在    (  )    (1)层析缸中多加一些展层剂    (2)溶剂系统中加大丁醇的比例    (3)溶剂系统中加大乙酸的比例    (4)溶剂系统中加大水的比例    2下列化合物中哪一组所标的名称是正确的?  &#

59、160; (    )    (1)磷酸吡哆醛维生素B2衍生物    (2)抗坏血酸维生素E的衍生物    (3)硫胺素维生素B1衍生物    (4)核黄素维生素B5衍生物    3酶分子中一个活性出现上重要的但在催化过程中不大可能直接与底物相互作用的氨基酸为    (  )    (1)Glu  (2)Cys  (3)His  (4)Set  &

60、#160; 4从某组织提取液中提纯一种酶，最理想的是酶制品的    (  )    (1)蛋白质含量高  (2)活力单位数最高  (3)比活力最高  (4)Km值最小    5CTP对ATCase的别构效应被称为    (  )    (1)同促激活    (2)同促抑制    (3)异促激活    (4)异促抑制   

61、; 6当有180个氨基酸残基的蛋白质多肽链形成完整的螺旋时，其总长度为    (    )    (1)54nm(2)27nm(3)25nm(4)12nm    7酶之所以能加速反应速度，并不是因为    (  )    (1)是反应物集中于酶分子  (2)是反应物的键适当定向    (3)利用肽键的能量使反应活化能下降  (4)提供酸碱侧链作为质子供体和受体    8能保护巯基酶不被氧化的物质是    (  ，)    (1)GSH  (2)尿素  (3)SDS  (4)FDNB    9KAG三肽在pH70时所带静电荷为    (  ：)    (1)十2  (2)+1  (3)0  (4)一1    10用RNaseTl处理下面寡聚核苷酸时，将在何处发生