临床PCR实验室的设计及质量管理体系的建立

1、临床PCR实验室的设计及质量管理体系的建立理想的理想的PCR实验室设置实验室设置A产物分析区产物分析区空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间专用走廊专用走廊工作流向工作流向扩增区扩增区标本制备区标本制备区试剂准备区试剂准备区产物分析区产物分析区空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间专用走廊专用走廊工作流向工作流向扩增区扩增区标本制备区标本制备区试剂准备区试剂准备区理想的理想的PCR实验室设置实验室设置B门门试剂准备区试剂准备区标本制备区标本制备区扩增区扩增区产物分析区产物

2、分析区外走廊外走廊门门门门门门门门试剂准备区试剂准备区标本制备区标本制备区扩 增 及 产 物扩 增 及 产 物分析区分析区外走廊外走廊门门门门门门门门AB“十六字口诀十六字口诀”产物分析区产物分析区空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间专用走廊专用走廊工作流向工作流向扩增区扩增区标本制备区标本制备区试剂准备区试剂准备区传递窗传递窗传递窗管理 “外部检查”、通过“认证”和“认可”管理就是通过计划、组织、领导和控制，协调以人为中心的组织资源与职能，以有效实现目标的社会活动。 XXX单位XXX实验室XXX标准操作程序编号：启用日期：版本：

3、第 页 共 页一目的：二适用范围：三职责或责任人：四（方法原理）五（检测设备和试剂）六（所需的环境条件）七操作步骤： 1 2 3 五、本操作程序变动程序：六、相关的文件七、相关的记录表格和报告编写人审核人批准人阳性质控样本测定结果偏低或为阴性结果偏低 阴性临床标本中无强阳性临床标本中有较强阳性临床标本中有阳性临床标本全为阴性 观察临床标本情况所用离心管含抑制物Taq酶活性降低核酸提取试剂效率低更换进口离心管更换Taq酶再检测更换核酸提取试剂所有标本重新检测核酸提取中靶核酸丢失核酸提取中抑 抑物残留核酸提取试剂混入扩增仪孔间温度差异随机误差检测质控样本及35份已知阳性样本质控样本测定正常且阳性样

4、本有些值增加质控及已知阳性样本测定仍异常按系统误差途径分析重新提取或已知浓度DNA在同一孔内扩增结果正常结果仍低进行扩增仪孔温度校准后再检测Taq酶或逆转录酶失活阴性质控样本测定为阳性临床标本亦全为阳性临床标本中有阳性也有阴性扩增产物“污染”试剂“污染”同时检测的标本情况扩增产物轻度“污染”标本间交叉“污染”35空管室内静置58份水样本检测试剂直接扩增检测验证验证58份水样本检测暂停日常检验，实验室清洁、通风 更换试剂 措施有阳性，则确认有实验室“污染”无阳性，说明为标本交叉“污染”改善操作措施 临床临床PCRPCR检验流程记录表检验流程记录表 检验日期检验日期 检验项目：检验项目： 扩增仪中

5、保存文件名：扩增仪中保存文件名： 使用说明：使用说明：1本记录表须严格遵循试剂准备区标本制备区扩增区（产物分析区）单一流向移动，严禁逆向移动。2各项工作执行后，在相应叙述前的“”内打“”。3本记录表最后与相应的标本接收记录等归档保存于扩增区的专用文件柜内，以备查找。实验前准备实验前准备 试剂在有效期内 扩增仪、加样器和温度计在校准的有效期内 生物安全柜的滤膜在使用有效期内 消毒溶液在有效期内 冲眼器内无菌生理盐水在有效期内 离心管、带滤芯吸头已经过质检合格 操作者操作者： 试剂准备区（试剂准备区（1 1区）区）实验前实验前 ： 打开通风设备 实验台面清洁（水或70%酒精擦拭） 冰箱温度：冷藏室

6、（28） ； 冷冻室（182） 实验室温度： （允许范围：1030）；相对湿度： （允许范围：30%70%）PCR试剂来源： （可直接列出有关厂家名称） 批号： 检验项目： 本次实验用量： 人份，剩余量： 人份。其他有关试剂配制： 按XXX（将有关SOP编号列出）SOP配制1%含氯消毒液 毫升； 按XXX（将有关SOP编号列出）SOP配制4NaOH溶液 毫升； 按XXX（将有关SOP编号列出）SOP配制0.1%焦磷酸二乙酯 毫升； 按XXX（将有关SOP编号列出）SOP配制 毫升； 其他： 仪器设备使用：仪器设备使用：离心机： 正常 不正常 振荡器： 正常 不正常实验后：实验后： 按XXX（将

7、有关SOP编号列出）SOP清洁实验室台面、地面、加样器和离心机，并进行紫外照射30分钟以上。 按XXX（将有关SOP编号列出）SOP处理实验废弃物。 操作者：操作者： 标本制备区（标本制备区（2 2区）区）实验前：实验前： 打开通风设备 实验台面清洁（水或70%酒精擦拭） 冰箱（柜）温度：冷藏室（28） ； 冷冻室（182） 实验室温度： （允许范围：1030）；相对湿度： （允许范围：30%70%）阳性室内质控物来源： 浓度及批号： 扩增位置： 阴性室内质控物来源： 批号： 扩增位置： 所取理的标本（对应标本接收的唯一编号）及拟扩增位置：所取理的标本（对应标本接收的唯一编号）及拟扩增位置：1

8、 19 9171725252 21010181826263 31111191927274 41212202028285 51313212129296 61414222230307 71515232331318 8161624243232核酸提取及加样过程核酸提取及加样过程：按XXX（列出编号）SOP进行。仪器设备使用：仪器设备使用： 生物安全柜： 正常 不正常 恒温仪温度校准： 离心机： 正常 不正常 振荡器： 正常 不正常实验后：实验后： 按XXX（将有关SOP编号列出）SOP清洁实验室台面、地面及仪器设备。 按XXX（将有关SOP编号列出）SOP处理实验废弃物。 操作者：操作者： 扩增及产

9、物分析区（扩增及产物分析区（3 3区）区）实验前实验前 打开通风设备 实验台面清洁（水或70%酒精擦拭） 实验室温度： （允许范围：1030）；相对湿度： （允许范围：30%70%）扩增仪操作： 开机自检及运行正常 按XXX（列出编号）SOP进行编程、参数设定标准曲线计算值：标准曲线计算值：Slope值值： （ ）Intercept值值： （ ） r值值： （ ）室内质控结果：室内质控结果：结果： 填写室内质控记录、描质控图 是否失控：是否失控：否 是 实验结果：实验结果：见所附扩增仪打印结果实验后：实验后： 按XXX（将有关SOP编号列出）SOP清洁实验室台面、地面及仪器设备。 按XXX（将

10、有关SOP编号列出）SOP处理实验废弃物。 操作者：操作者： 失控原因及分析：（失控判断标准及原因分析按XXXSOP进行） 临床PCR实验室标本接收记录唯一编号 姓 名 性 别 病历号 采集时间 接收时间 标本特性 标本状态 以上标本编号从 至 ， 送检人（签字）： 接收人（签字） 以上标本编号从 至 ， 送检人（签字）： 接收人（签字） 以上标本编号从 至 ， 送检人（签字）： 接收人（签字） 男 女 月 日 时 月 日 时 全血 正常 男 女 月 日 时 月 日 时 全血 正常 男 女 月 日 时 月 日 时 全血 正常 男 女 月 日 时 月 日 时 全血 正常 男 女 月 日 时 月 日 时 全血 正常 姓 名 性 别 病历号 采集时间 接收时间 标本特性 拒收原因 男 女 月 日 时 月 日 时 全血 （列出原因号） 男 女 月 日 时 月 日 时 全血 （列出原因号） 男 女 月 日 时 月 日 时 全血