双向电泳培训正式资料

1、双向电泳实验流程l 样品制备（Sample preparation）l 固相预制胶条的水化（IPG strip rehydration）l 第一向等电聚焦（IEF）l 胶条的平衡（IPG strip equilibration）l 第二向SDS-PAGE电泳（SDS-PAGE electrophresis）l 凝胶的染色及检测（Detection/Staining）l PDQuest软件分析（Software analysis）l 质谱鉴定（Protein identification）目录第一章双向电泳1. 1 溶液配制1. 2 操作步骤1. 3 注意事项第二章订货信息附录1双向电泳完整的操

2、作步骤附录2聚丙烯酰胺凝胶电泳凝胶的配置附录3细胞样品的一般处理步骤附录4组织样品的一般处理步骤第一章 双向电泳1. 1 溶液配制水化上样缓冲液（I）尿素8M4.805gCHAPS 4%0.4gDTT65mM0.098g（现加）Bio-Lyte0.2%(w/v)50ml（40%）（现加）溴酚蓝0.001%10ml（1% 溴酚蓝）MilliQ水定容至10ml分装成10小管，每小管1ml，-20冰箱保存。水化上样缓冲液（II）尿素7M4.2g硫脲2M1.52gCHAPS 4%0.4gDTT65mM0.098g（现加）Bio-Lyte0.2%(w/v)50ml（40%）（现加）溴酚蓝0.001%10

3、ml（1% 溴酚蓝）MilliQ水定容至10ml分装成10小管，每小管1ml，-20冰箱保存。水化上样缓冲液（III）尿素5M3.0g硫脲2M1.52gCHAPS 2%0.2gSB 3-10 2%0.2gDTT65mM0.098g（现加）Bio-Lyte0.2%(w/v)50ml（40%）（现加）溴酚蓝0.001%10ml（1% 溴酚蓝）MilliQ水定容至10ml分装成10小管，每小管1ml，-20冰箱保存。胶条平衡缓冲液母液尿素6M36gSDS2%2gTris-HCl0.375M pH8.825ml（1.5M pH8.8 Tris-HCl）甘油20%20mlMilliQ水定容至100ml分

4、装成10管，每管10ml，-20冰箱保存。胶条平衡缓冲液I胶条平衡缓冲液母液10mlDTT0.2g充分混匀，用时现配。胶条平衡缓冲液II胶条平衡缓冲液母液10ml碘乙酰胺0.25g 充分混匀，用时现配。低熔点琼脂糖封胶液低熔点琼脂糖0.5%0.5gTris25mM0.303g甘氨酸192mM1.44gSDS0.1%1ml（10% SDS）溴酚蓝0.001%100ml（1%溴酚蓝）MilliQ水定容至100ml加热溶解至澄清，室温保存。30% 聚丙烯酰胺贮液丙烯酰胺150g甲叉双丙烯酰胺4gMilliQ水500ml滤纸过滤后，棕色瓶4冰箱保存。1.5mol/L Tris碱 pH8.8Tris碱9

5、0.75gMilliQ水400ml用1mol/L HCl调pH至8.8，加MilliQ水定容至500ml。4冰箱保存。10% SDSSDS10gMilliQ水100ml混匀后，室温保存。10% ApAp0.1gMilliQ水1ml（用时加水溶解）溶解后，4冰箱保存。10×电泳缓冲液（1×= 25mM Tris，192mM glycine，0.1% SDS，pH8.3）Tris碱30g甘氨酸144gSDS10gMilliQ水1L混匀后，室温保存。1. 2 操作步骤（一）第一向等电聚焦（用自制溶液）1. 从冰箱中取-20冷冻保存的水化上样缓冲液（I）（不含DTT，不含Bio-L

6、yte）一小管（1ml/管），置室温溶解。2. 在小管中加入0.01g DTT， Bio-Lyte按照如下表格1ml的量加，充分混匀。IPGpH RangeBio-Lyte Ampholyte(Stock)Range Conc.(w/v)Sample Solution VolumePer 1ml per 5ml per 50ml3-103-1040%5ul25ul250ul4-74-640%2.5ul12.5ul125ul5-740%2.5ul12.5ul125ul3-63-520%5ul25ul250ul4-640%2.5ul12.5ul125ul5-85-840%5ul25ul250ul7

7、-107-940%2.5ul12.5ul125ul8-1020%5ul25ul250ul3. 从小管中取出400ml水化上样缓冲液，加入100ml样品，充分混匀。其中水化缓冲液与样品的比例不得小于4:1。具体的上样体积如下表，ReadyStripTM IPG胶条的长度上样体积7 cm125ul-250ul11cm185ul-370ul17cm300ul-600ul18cm315ul-630ul24cm410ul-820ul其中蛋白质的上样量与染色相关。具体的蛋白质上样量如下表，IPG胶条的长度分析型的上样量（银或SYPRO Ruby染色）制备型的上样量（考马斯亮蓝染色）7 cm10-100ug

8、蛋白200-500ug蛋白11cm50-200ug蛋白250-1,000ug蛋白17cm100-300ug蛋白1-3mg蛋白4. 从冰箱取-20冷冻保存的IPG预制胶条，于室温放置10分钟。5. 沿着聚焦盘或水化盘中槽的边缘至左而右线性加入样品。在槽两端各1cm左右不要加样，中间的样品液一定要连贯。注意：不要产生气泡。否则影响到胶条中蛋白质的分布。6. 当所有的蛋白质样品都已经加入到聚焦盘或水化盘中后，用镊子轻轻的去除预制IPG胶条上的保护层。7. 分清胶条的正负极，轻轻地将IPG胶条胶面朝下置于聚焦盘或水化盘中样品溶液上，使得胶条的正极（标有+）对应于聚焦盘的正极。确保胶条与电极紧密接触。不

9、要使样品溶液弄到胶条背面的塑料支撑膜上，因为这些溶液不会被胶条吸收。同样还要注意不使胶条下面的溶液产生气泡。如果已经产生气泡，用镊子轻轻地提起胶条的一端，上下移动胶条，直到气泡被赶到胶条以外。8. 在每根胶条上覆盖矿物油，防止胶条水化过程中液体的蒸发。需缓慢的加入矿物油，沿着胶条，使矿物油一滴一滴慢慢加在塑料支撑膜上。IPG胶条的长度矿物油体积7 cm1 ml11cm2 ml17cm3 ml18cm3ml24cm5ml9. 对好正、负极，盖上盖子。设置等电聚焦程序。7cm胶条水化12小时（17）被动水化S1250V慢速25分钟除盐S21000V快速60分钟除盐S34000V线性3小时升压S44

10、000V快速24,000伏小时聚焦S5500V快速任意时间保持l 选择所放置的胶条数。l 设置每根胶条的极限电流。（30-50mA/根）l 设置等电聚焦时的温度。（17）11cm胶条水化12小时（17）被动水化S1250V慢速25分钟除盐S21000V快速60分钟除盐S37000V线性4小时升压S47000V快速40,000伏小时聚焦S5500V快速任意时间保持l 选择所放置的胶条数。l 设置每根胶条的极限电流。（50mA/根）l 设置等电聚焦时的温度。（17）17cm胶条水化12小时（17）被动水化S1250V慢速25分钟除盐S21000V快速2小时除盐S38000V线性5小时升压S4800

11、0V快速60,000伏小时聚焦S5500V快速任意时间保持l 选择所放置的胶条数。l 设置每根胶条的极限电流。（50-70mA/根）l 设置等电聚焦时的温度。（17）18cm胶条水化12小时（17）被动水化S1250V慢速25分钟除盐S21000V快速2小时除盐S38000V线性5小时升压S48000V快速60,000伏小时聚焦S5500V快速任意时间保持l 选择所放置的胶条数。l 设置每根胶条的极限电流。（50-70mA/根）l 设置等电聚焦时的温度。（17）24cm胶条水化12小时（17）被动水化S1250V慢速25分钟除盐S21000V快速2小时除盐S310000V线性5小时升压S410

12、000V快速80,000伏小时聚焦S5500V快速任意时间保持l 选择所放置的胶条数。l 设置每根胶条的极限电流。（50-70mA/根）l 设置等电聚焦时的温度。（17）10.聚焦结束的胶条。立即进行平衡、第二向SDS-PAGE电泳，否则将胶条置于样品水化盘中，-20冰箱保存1到2天。（二）第二向SDS-PAGE电泳1. 配制10%的丙烯酰胺凝胶两块。将溶液分别注入玻璃板夹层中，上部留0.5cm的空间，用MilliQ水、乙醇或水饱和正丁醇封面，保持胶面平整。聚合30分钟。一般凝胶与上方液体分层后，表明凝胶已基本聚合。 2. 待凝胶凝固后，倒去分离胶表面的MilliQ水、乙醇或水饱和正丁醇，用M

13、illiQ水冲洗。3. 从-20冰箱中取出的胶条，先于室温放置10分钟，使其溶解。4. 配制胶条平衡缓冲液I。5在桌上先放置干的厚滤纸，聚焦好的胶条胶面朝上放在干的厚滤纸上。将另一份厚滤纸用MilliQ水浸湿，挤去多余水分，然后直接置于胶条上，轻轻吸干胶条上的矿物油及多余样品。这可以减少凝胶染色时出现的纵条纹。6. 将胶条转移至溶涨盘中，每个槽一根胶条，在有胶条的槽中加入胶条平衡缓冲液I。胶条的长度7cm11cm17cm18cm24cm胶条平衡缓冲液I2.5ml4ml6ml6ml8ml胶条平衡缓冲液II2.5ml4ml6ml6ml8ml将样品水化盘放在水平摇床上缓慢摇晃15分钟。7. 配制胶条

14、平衡缓冲液II。8. 第一次平衡结束后，彻底倒掉或吸掉样品水化盘中的胶条平衡缓冲液I。并用滤纸吸取多余的平衡液（将胶条竖在滤纸上，以免损失蛋白或损坏凝胶表面）。再加入胶条平衡缓冲液II，继续在水平摇床上缓慢摇晃15分钟。9. 用滤纸吸去SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶上方玻璃板间多余的液体。将处理好的第二向凝胶放在桌面上，长玻璃板在下，短玻璃板朝上，凝胶的顶部对着自己。10.将琼脂糖封胶液进行加热溶解。11.将10×电泳缓冲液，用量筒稀释10倍，成1×电泳缓冲液。赶去缓冲液表面的气泡。12.第二次平衡结束后，彻底倒掉或吸掉样品水化盘中的胶条平衡缓冲液II。并用滤纸吸取多余的平

15、衡液（将胶条竖在滤纸上，以免损失蛋白或损坏凝胶表面）。13.将IPG胶条从样品水化盘中移出，用镊子夹住胶条的一端使胶面完全浸末在1×电泳缓冲液中。然后将胶条胶面朝上放在凝胶的长玻璃板上。其余胶条同样操作。14.将放有胶条的SDS-PAGE凝胶转移到灌胶架上，短玻璃板一面对着自己。在凝胶的上方加入低熔点琼脂糖封胶液。15.用镊子、压舌板或是平头的针头，轻轻地将胶条向下推，使之与聚丙烯酰胺凝胶胶面完全接触。注意不要在胶条下方产生任何气泡。在用镊子、压舌板或平头针头推胶条时，要注意是推动凝胶背面的支撑膜，不要碰到胶面。16.放置5分钟，使低熔点琼脂糖封胶液彻底凝固。17.在低熔点琼脂糖封胶

16、液完全凝固后。将凝胶转移至电泳槽中。18.在电泳槽加入电泳缓冲液后，接通电源，起始时用的低电流或低电压，待样品在完全走出IPG胶条，浓缩成一条线后，再加大电流（或电压），待溴酚蓝指示剂达到底部边缘时即可停止电泳。IPG胶条的长度起始电流加大后电流7 cm5mA/gel15-20mA/gel17cm5mA/gel20-30mA/gel19.电泳结束后，轻轻撬开两层玻璃，取出凝胶，并切角以作记号（戴手套，防止污染胶面）。20.进行染色（按照伯乐染色试剂盒上的操作步骤）。1. 3 注意事项（一）等电聚焦1. 配好的尿素储液必须马上使用，或用mixed-bed离子交换树脂，清除长时间放置时尿素溶液中形

17、成的氰酸盐，预防蛋白质的甲酰化。2. 将水化上样缓冲液分装后再储存于-20。用时，只要解冻需要量，其余继续储存。水化上样缓冲液一旦溶解不能再冷冻。3. 将水化上样缓冲液加入蛋白样品中，终溶液中urea的浓度需6.5M。4. 等电聚焦溶胀缓冲液和样品溶液中都要加入两性电解质，它能够帮助蛋白质溶解。两性电解质的选择取决于IPG胶条的pH范围。下图可提供参考。IPGpH RangeBio-Lyte Ampholyte(Stock)Range Conc.(w/v)Sample Solution VolumePer 5ml per50ml3-103-1040%25ul250ul4-74-640%12.5

18、ul125ul5-740%12.5ul125ul3-63-520%25ul250ul4-640%12.5ul125ul5-85-840%25ul250ul7-107-940%12.5ul125ul8-1020%25ul250ul5. 下表显示的是通常推荐使用的双向电泳第一向蛋白上样量。因为样品和样品之间存在差异，所以这种上样量仅提供参考。对于窄pH范围的IPG胶条，需要比宽pH范围的IPG胶条上更多的样品，这是因为pI值不在此范围内的蛋白质在等电聚焦的过程中会走出胶条。单pH范围IPG胶条的上样量是通常的4-5倍还多，这样就可以很好的检测低丰度的蛋白质。IPG胶条的长度分析型的上样量（银或SY

19、PRO Ruby染色）制备型的上样量（考马斯亮蓝染色）7 cm10-100ug蛋白200-500ug蛋白11cm50-200ug蛋白250-1,000ug蛋白17cm100-300ug蛋白1-3mg蛋白6. 样品溶液的上样体积见下表。这样就可以使胶条溶胀至它们原来的厚度（0.5mm）。胶条最少需要经过11小时的溶胀。即使看上去所有的缓冲液都已经被吸收，也一定要确保胶条在槽中溶胀充分的时间。只有在IPG凝胶的孔径已经溶胀充分后，才可以吸收大分子量蛋白质，否则大分子量蛋白质无法进入胶条。ReadyStripTM IPG胶条的长度上样体积7 cm125ul-250ul11cm185ul-370ul1

20、7cm300ul-600ul7. 如果在等电聚焦过程中，聚焦盘中还有很多的溶液没有被吸收，留在胶条的外面，这样就会在胶条的表面形成并联的电流通路，而在这层溶液中蛋白质不会被聚焦。这就会导致蛋白的丢失或是图像拖尾。为了减少形成并联电流通路的可能性，可以先将胶条在溶胀盒中进行溶胀，然后再将溶胀好的胶条转移到聚焦盘中。在转移过程中，要用湿润的滤纸仔细地从胶条上吸干多余的液体。8. 带上手套用镊子去除IPG胶条上的保护层。将IPG胶条仔细的置于溶胀缓冲液上，胶面朝下，确保整个胶面都能被浸湿。9. 在样品溶液中加入痕量的溴酚蓝对观察溶胀过程很有帮助。在覆盖矿物油之前，可以让胶条先吸收1小时的液体。IPG

21、胶条上一定要覆盖矿物油，否则缓冲液会蒸发，使得溶液浓缩，导致尿素沉淀。作为防止缓冲液蒸发的预防措施，矿物油必须缓缓地加在每个槽内，确保完全的覆盖住每一根胶条。10. 下面的表格给出了建议使用的IPG胶条运行的总volt-hours。这仅提供参考，不同的样品需要的volt-hours不同。当聚焦过程无法达到最高电压时，只要最后能达到总的volt-hours，且7cm胶条电压不低于3000伏，11cm胶条电压不低于5000伏，17cm胶条电压不低于7000伏，也能对样品进行充分的聚焦，24cm胶条电压不低于8500伏，也能对样品进行充分的聚焦。ReadyStripIPG胶条的长度最高电压建议的Vo

22、lt-Hours7 cm8,000V8,000-20,000V-hr11cm8,000V20,000-40,000V-hr17cm10,000V30,000-60,000V-hr18cm10,000V30,000-60,000V-hr24cm10,000V60,000-80,000V-hr11. 为使样品进入胶的效率增加，采用50V低电压溶胀；继续以低电压梯度（250V，500V，1000V各一个小时）进行电泳，最后达到10000V进行聚焦。12. 处理预制IPG胶条时，一定要始终带着手套。注意预防角蛋白污染。13. 水化上样缓冲液的成分由不同的样品决定。14. 每根胶条蛋白质的总上样量由特定

23、的样品，胶条的pH范围，及最终的检测方式决定。下表是进行银氨染色时的蛋白质上样参考。ReadyStrip7cm11cm17cm3-105-100ug20-200ug50-300ug4-710-150ug40-200ug80-300ug3-610-150ug40-200ug80-300ug5-810-150ug40-200ug80-300ug7-1020-200ug50-300ug100-300ug15. 所有包含尿素的溶液加热温度不超过30，否则会发生蛋白氨甲酰化。引起蛋白质pI值的偏移。16.主动水化过程，会帮助大分子量的蛋白质进入胶条，但会丢失部分小分子量蛋白。17.当样品中含盐量较高时，

24、建议选用慢速升压。当样品中含盐量一般时，选用线性升压。当样品中含盐量很少时，可以选用快速升压，这样可以节省聚焦时间。18.虽然仪器中每根胶条的极限电流可以设为99mA/根。但一般7cm胶条的极限电流不超过50mA/根，17cm胶条的极限电流不超过75mA/根，最好都在30mA/根以下。19.可以在聚焦盘或水化盘的两端电极处搭上盐桥，这可以帮助除盐。但需注意的是，盐桥必须是湿润的但水不能太多，必要时需用滤纸吸去多余的水份。保持盐桥与电极的紧密接触。20. 程序设置中的除盐步骤，可根据具体情况进行设置，如果样品中含盐量较高可设置多步除盐，并加长除盐时间。但这种方法只能除去很少量的盐离子，所以最好是

25、在上样前，对样品进行除盐处理。（二）胶条的平衡1.不同长度的胶条，选用不同体积的胶条平衡缓冲液。可参考下表。胶条的长度7cm11cm17cm18cm24cm胶条平衡缓冲液I2.5ml4ml6ml6ml8ml胶条平衡缓冲液II2.5ml4ml6ml6ml8ml2. 从冰箱中取出得胶条一定要先解冻。3. 胶条平衡缓冲液I和胶条平衡缓冲液II都要现配，因为DTT和碘乙酰胺在室温的半衰期很短。4. 平衡过程导致蛋白丢失约5%-25%，还会使分辨率降低，平衡30分钟时，蛋白带变宽40%，所以平衡时间不可过长。如果不经平衡，把等电聚焦凝胶直接放在第二向凝胶上会导致高分子量蛋白的纹理现象，并且等电聚焦凝胶会

26、粘在SDS胶上。缩短平衡时间可以减少扩散，但同时会减少向第二向的转移。所以平衡时间要充分长（至少2×10分钟），但也不要超过（2×15分钟）。5平衡缓冲液包括Tris-HCl（pH8.8），SDS（2%），高浓度尿素（6M）和甘油（20%）提高蛋白的溶解度并减少电内渗。第一部加入DTT（1%）是为了使蛋白去折叠；第二步加入碘乙酰胺是为了去除多余的DTT（银染过程中，DTT会导致电脱尾）。6.对于非常疏水的蛋白或含有二硫键的蛋白，相对于DTT和碘乙酰胺，TBP（tributylphosphine）更有效。（三）胶条的转移1在琼脂糖中加入少量的溴酚蓝，可以观察到电泳的进程。2琼

27、脂糖的温度不能太高，热的琼脂糖会加速平衡缓冲液中尿素的分解。3当用琼脂糖覆盖胶条时，常会在胶条的下面或背面形成气泡。这些气泡会干扰蛋白质的迁移，所以必须去除。通常在刚加入琼脂糖后，赶快用镊子、压舌板或平头针头轻压胶条塑胶支撑膜的上方，驱赶气泡。4如果选用的是普通琼脂糖，先将胶条推进玻璃板中，使之与第二向凝胶紧密接触，然后再加入琼脂糖封胶液。这是因为普通琼脂糖熔点较高，凝固较快。（四）SDS-PAGE凝胶电泳1玻璃板一定要清洗干净，否则在染色时会有不必要的凝胶背景。2过硫酸铵（Ap）要新鲜配制。40%的过硫酸铵储存于冰箱中只能使用2-3天，低浓度的过硫酸铵溶液只能当天使用。3蛋白质从一向（IPG

28、胶条）到二向（SDS凝胶）的转移为避免点脱尾和损失高分子量蛋白，应缓慢进行（场强小于10V/cm）。4. 用Mini Protein 3电泳槽时，以电流为标准，开始进样的低电流为5mA/gel，待样品在浓缩胶部分浓缩成一条线后，再加大电流到10-15mA/gel；以电压为标准，开始进样的低电压为50-75V/gel，待样品在浓缩胶部分浓缩成一条线后，再加大电压到150-200V /gel。用Protein II电泳槽时，以电流为标准，开始进样的低电流为10mA/gel，待样品在浓缩胶部分浓缩成一条线后，再加大电流到20-30mA/gel；以电压为标准，开始进样的低电压为75-100V /gel

29、，待样品在浓缩胶部分浓缩成一条线后，再加大电压到300-400V/gel。第二章 订货信息样品制备和蛋白质定量样品制备试剂盒163-2130ReadyPrep 2-D Cleanup Kit1 kit163-2090163-2086ReadyPrep Reduction Alkylation KitReadyPrep protein extraction Kit(total protein)1 kit1 kit163-2089ReadyPrep Protein Extraction Kit (Cytoplasmic/Nuclear)1 kit163-2088163-2084ReadyPrep

30、Protein Extraction Kit (Membrane I)ReadyPrep Protein Extraction Kit (Membrane II)1 kit1 kit163-2087163-2085ReadyPrep Protein Extraction Kit (Signal)ReadyPrep Protein Extraction Kit (soluble/insoluble)1 kit1 kit163-2100ReadyPrep Sequential Extraction Kit, includes 1 vial of reagent 1 (to make 50 ml),

31、 3 vials of reagent 2 (to make 10 ml each), 2 vials of reagent 3 (to make 10 ml each),1 vial containing 0.6 ml of 200 mM TBP1 kit163-2103ReadyPrep Sequential Extraction Kit Reagent 2, reconstitutes to 10 ml1 vial163-2104ReadyPrep Sequential Extraction Kit Reagent 3, reconstitutes to 10 ml1 vial732-6

32、701Aurum Serum Protein Mini Kit, 10 preps, includes 10 serum protein columns, 10 clear 12 x 75 mm polystyrene tubes, 30 sample collection tubes, 10 column tips, 50 ml binding buffer, protocol overview, instructions1 kit163-2105ReadyPrep 2-D Starter Kit, includes protein sample and reagents sufficien

33、t to rehydrate, focus, and transfer to the second-dimension gel six 17 cm, ten 11 cm, or sixteen 7 cm ReadyStrip IPG strips1 kit163-2106ReadyPrep 2-D Starter Kit Rehydration/Sample Buffer, reconstitutes to 10 ml1 vial163-2110E. coli Protein Sample, lyophilized2.7mg样品制备试剂161-0730Urea250 g161-0731Urea

34、1 kg161-0610Dithiothreitol (DTT)1 g161-0611Dithiothreitol (DTT)5 g163-2101Tributylphosphine (TBP), 200 mM0.6 ml161-0460CHAPS1 g161-0407Triton X-100500 ml163-1112Bio-Lyte® 3/10 Ampholyte, 40% (w/v)10 ml163-1132Bio-Lyte 3/5 Ampholyte, 20% (w/v) 10 ml163-1142Bio-Lyte 4/6 Ampholyte, 40% (w/v) 10 ml

35、163-1152Bio-Lyte 5/7 Ampholyte, 40% (w/v) 10 ml163-1172Bio-Lyte 7/9 Ampholyte, 40% (w/v) 10 ml163-1182Bio-Lyte 8/10 Ampholyte, 20% (w/v) 10 ml163-1192Bio-Lyte 5/8 Ampholyte, 40% (w/v) 10 ml163-2093100x ReadyStrip 710 Buffer1 ml163-2094100x Bio-Lyte 3/10 Ampholyte1 ml163-2095100x ReadyStrip 6.38.3 Bu

36、ffer1 ml163-2096100x ReadyStrip 5.56.7 Buffer1 ml163-2097100x ReadyStrip 4.75.9 Buffer1 ml163-2098100x ReadyStrip 3.95.1 Buffer1 ml161-0404Bromophenol Blue10 g161-0716Tris500 g161-0719Tris1 kg142-6425AG 501-X8 (D) Mixed Bed Resin500 g732-6221Micro Bio-Spin 6 Columns, in 10mM Tris buffer, pH 7.425 co

37、lumns732-6222Micro Bio-Spin 6 Columns, in 10mM Tris buffer, pH 7.4100 columns732-6225Micro Bio-Spin 6 Columns, in 10mM Tris buffer, pH 7.41000 columns蛋白质定量试剂盒500-0001Bio-Rad Protein Assay Kit I, contains 450 ml dye reagent concentrate and a bovine g-globulin standard, based on method of Bradford1 ki

38、t500-0002Bio-Rad Protein Assay Kit II, contains 450 ml dye reagent concentrate and a bovine serum albumin standard, based on method of Bradford1 kit500-0111DC Protein Assay Kit I, contains 250 ml alkaline copper tartrate solution, 2 L dilute Folin reagent, 5 ml surfactant solution, bovine g-globulin

39、 standard1 kit500-0112DC Protein Assay Kit II, contains 250 ml alkaline copper tartrate solution, 2 L dilute Folin reagent, 5 ml surfactant solution, bovine serum albumin standard1 kit500-0121RC DC Protein Assay Kit I, includes RC reagents package, DC protein assay reagents package, bovine g-globuli

40、n standard, 500 standard assays1 kit500-0122RC DC Protein Assay Kit II, includes RC reagents package, DC protein assay reagents package, bovine serum albumin standard, 500 standard assays1 kit等电聚焦等电聚焦163-2129Mineral Oil500 ml预制胶条163-2000ReadyStrip IPG Strip, 7 cm, pH 31012163-2002ReadyStrip IPG Stri

41、p, 7 cm, pH 310 (NL)12163-2001ReadyStrip IPG Strip, 7 cm, pH 4712163-2003ReadyStrip IPG Strip, 7 cm, pH 3612163-2004ReadyStrip IPG Strip, 7 cm, pH 5812163-2005ReadyStrip IPG Strip, 7 cm, pH 71012163-2028ReadyStrip IPG Strip, 7 cm, pH 3.95.112163-2029ReadyStrip IPG Strip, 7 cm, pH 4.75.912163-2030Rea

42、dyStrip IPG Strip, 7 cm, pH 5.56.712163-2031ReadyStrip IPG Strip, 7 cm, pH 6.38.312163-2014ReadyStrip IPG Strip, 11 cm, pH 31012163-2016ReadyStrip IPG Strip, 11 cm, pH 310 (NL)12163-2015ReadyStrip IPG Strip, 11 cm, pH 4712163-2017ReadyStrip IPG Strip, 11 cm, pH 3612163-2018ReadyStrip IPG Strip, 11 c

43、m, pH 5812163-2019ReadyStrip IPG Strip, 11 cm, pH 71012163-2024ReadyStrip IPG Strip, 11 cm, pH 3.95.112163-2025ReadyStrip IPG Strip, 11 cm, pH 4.75.912163-2026ReadyStrip IPG Strip, 11 cm, pH 5.56.712163-2027ReadyStrip IPG Strip, 11 cm, pH 6.38.312163-2007ReadyStrip IPG Strip, 17 cm, pH 31012163-2009

44、ReadyStrip IPG Strip, 17 cm, pH 310 (NL)12163-2008ReadyStrip IPG Strip, 17 cm, pH 4712163-2010ReadyStrip IPG Strip, 17 cm, pH 3612163-2011ReadyStrip IPG Strip, 17 cm, pH 5812163-2012ReadyStrip IPG Strip, 17 cm, pH 71012163-2020ReadyStrip IPG Strip, 17 cm, pH 3.95.112163-2021ReadyStrip IPG Strip, 17

45、cm, pH 4.75.912163-2022ReadyStrip IPG Strip, 17 cm, pH 5.56.712163-2023ReadyStrip IPG Strip, 17 cm, pH 6.38.312163-2032ReadyStrip IPG Strip, 18 cm, pH 31012163-2033ReadyStrip IPG Strip, 18 cm, pH 310 (NL)12163-2034ReadyStrip IPG Strip, 18 cm, pH 4712163-2035ReadyStrip IPG Strip, 18 cm, pH 3612163-20

46、36ReadyStrip IPG Strip, 18 cm, pH 5812163-2037ReadyStrip IPG Strip, 18 cm, pH 71012163-2038ReadyStrip IPG Strip, 18 cm, pH 3.95.112163-2039ReadyStrip IPG Strip, 18 cm, pH 4.75.912163-2040ReadyStrip IPG Strip, 18 cm, pH 5.56.712163-2041ReadyStrip IPG Strip, 18 cm, pH 6.38.312163-2042ReadyStrip IPG St

47、rip, 24 cm, pH 31012163-2043ReadyStrip IPG Strip, 24 cm, pH 310 (NL)12163-2044ReadyStrip IPG Strip, 24 cm, pH 4712163-2045ReadyStrip IPG Strip, 24 cm, pH 3612163-2046ReadyStrip IPG Strip, 24 cm, pH 5812163-2047ReadyStrip IPG Strip, 24 cm, pH 71012第二向 预制胶适用于17cm的预制胶条，PROTEAN II电泳槽161-1450Ready Gel Tr

48、is-HCl Gel for PROTEAN II Cell, 10%, IPG well, 1.0 mm thick, 18.3 x 19.3 cmeach161-1451Ready Gel Tris-HCl Gel for PROTEAN II Cell, 12%, IPG well, 1.0 mm thick, 18.3 x 19.3 cmeach161-1452Ready Gel Tris-HCl Gel for PROTEAN II Cell, 1020%, IPG well, 1.0 mm thick, 18.3 x 19.3 cmeach161-1453Ready Gel Tri

49、s-HCl Gel for PROTEAN II Cell, 816%, IPG well, 1.0 mm thick, 18.3 x 19.3 cmeach适用于11cm的预制胶条，Criterion电泳槽345-0013Criterion Tris-HCl Gel, 10% resolving, 4% stacking geleach345-0018Criterion Tris-HCl Gel, 12.5% resolving, 4% stacking geleach345-0031Criterion Tris-HCl Gel, 415%each345-0036Criterion Tris

50、-HCl Gel, 420%each345-0041Criterion Tris-HCl Gel, 816% resolving, 4% stacking geleach345-0046Criterion Tris-HCl Gel, 1020% resolving, 4% stacking geleach适用于7cm的预制胶条，Mini Protein电泳槽161-1390Ready Gel Tris-HCl Gel, 10% resolving, 4% stacking geleach161-1391Ready Gel Tris-HCl Gel, 12% resolving, 4% stacking geleach161-1392Ready Gel Tris-HCl Gel, 415%each161-1393Ready Gel Tris-HCl Gel, 420%each161-1394Ready Gel Tris-HCl Gel, 816% resolving, 4% stacking gel each161-1395Ready G