附录一试验室常用溶液配制

1、一、常用贮液与溶液（一）常用缓冲液1磷酸缓冲液（ 1） 25下 0.1mol/L 磷酸钾缓冲液的配制pH1mol/L K 2HPO4(mL)1mol/L KH 2PO4(mL)5.88.591.56.013.286.86.219.280.86.427.872.26.638.161.96.849.750.37.061.538.57.271.728.37.480.219.87.686.613.47.890.89.28.094.06.2（ 2） 25下 0.1mol/L 磷酸钠缓冲液的配制pH1mol/L Na 2HPO4(mL)1mol/L NaH 2PO4(mL)5.87.992.16.012.

2、088.06.217.882.26.425.574.56.635.264.86.846.353.77.057.742.37.268.431.67.477.422.67.684.515.57.889.610.48.093.26.8 :用蒸馏水将混合的两种1mol/L 贮存液稀释至1000mL ，根据 Henderson-Hasselbalch 方程计算其 pH值：pH=pK +1g(质子受体 / 质子供体 )在此， pK=6.86(25 )。2电泳缓冲液常用的电泳缓冲液缓冲液使用液浓贮存液（每升）Tris- 乙酸（ TAE ）1×：0.04mol/L Tris- 乙酸50×：

3、 242g Tris 碱0.001mol/L EDTA57.1mL 冰乙酸100mL 0.5mol/L EDTA(pH8.0)Tris- 磷酸（ TPE）1×:0.09mol/L Tris- 磷酸10×:10g Tris 碱0.002mol/L EDTA15.5mL85% 磷酸（ 1.679g/mL ）40mL 0.5mol/L EDTA(pH8.0)Tris- 硼酸（ TBE ）a0.5 ×0.045mol/L Tris- 硼酸5×： 54g Tris 碱0.001mol/L EDTA27.5 硼酸碱性缓冲液Tris- 甘氨酸说明：bc20mL 0.5

4、mol/L EDTA(pH8.0)1×:50mmol/L NaOH1×:5mL 10mol/L NaOH1mmol/L EDTA2mL 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)1×:25mmol/L Tris5×:15.1g Tris250mmol/L甘氨酸94g 苷氨酸（电泳级）（pH8.3 ）0.1% SDS50mL 10% SDS( 电泳级 ) TBE 溶液长时间存放后会形成沉淀物，为避免这一问题，可在室温下用玻璃瓶保存5×溶液，出现沉淀后则予以废弃。以片都以1×TBE 作为使用液（即1：5 稀释浓贮液）进行琼脂糖凝胶电泳。但

5、0.5 ×的使用液已具备足够的缓冲容量。目前几乎所有的琼脂糖胶电泳都以1： 10 稀释的贮存液作为使用液。进行聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小，故通过缓冲液的电流量通常较大，需要使用1×TBE以提供足够的缓冲容量。碱性电泳缓冲液应现用现配。 Tris- 甘氨酸缓冲液用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳。3凝胶加样缓冲液缓冲液类型6×缓冲液贮存温度0.25%溴酚蓝0.25%二甲苯青 FF440% （W/V ）蔗糖水溶液0.25 溴酚蓝0.25%二甲苯青 FF室温15% 聚蔗糖 (Ficoll400)0.25%溴酚蓝二甲苯青40.25%FF30% 甘油水溶液0.25%溴酚蓝

6、440%(W/V) 蔗糖水溶液碱性加样缓冲液 :300mmol/L NaOH6mmol/L EDTA18% 聚蔗糖 (Ficoll400)0.15%溴甲酚绿40.25%二甲苯青 FF使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三：增大样品密度； 以确保 DNA 均匀进入样品孔内；使样品呈现颜色，从而使加样操作更为便利，含有在电块中能以可预知速率向阳极泳动的染料。溴酚蓝在琼脂糖中移动的速率约为二甲苯青FF 的 2.2 倍，而与琼脂糖浓度无关。以0.5 ×TBF 作电泳液时，溴酚蓝在琼脂糖中的泳动速率约与长300bp 的双链线状 DNA 相同，而二甲苯青 FF 的泳动则与长4kb 的双链线状 DNA

7、相同。在琼脂糖浓度为0.5% 1.4%的范围内，这些对应关系受凝胶浓度变化的影响并不显著。选用哪一种加样染料纯属个人喜恶。但是，对于碱性凝胶应当使用溴甲酚绿作为示踪染料，因为在碱性 pH 条件下其显色较溴酚更蓝为鲜明。4各种 pH 值的 Tris 缓冲液的配制各种 pH 值的 Tris 缓冲液的配制所需 pH 值（ 25）0.1mol/L HCl 的体积7 145 77 244 77 343 47 442 07 540 37 63857 736 67 834 57 932 08 029 28.126.28.222.98.319.98.417.28.514.78.612.48.710.38.88

8、.58.97.0某一特定 pH 值的 0.05mol/L Tris 缓冲液的配制：将 50mL 0.1mol/L Tris 碱溶液与上表所示相应体积（单位： mL ）的 0.1mL/L HCl 混合，加水将体积调至 100mL（二）常用酶的配制1溶菌酶用水配制成50mg/mL 的溶菌酶溶液，分装成小份并保存于-20。每一小份一经使用后便予丢弃。2蛋白水解酶类贮存液贮存温度反应浓度反应缓冲液温度预处理0.01mol/LTris(pH7.8)链霉蛋20mg/mL-20（溶1mg/mL0.01mol/L EDTA37自消化 b白酶 a于水）0.5% SDS0.01mol/LTris(pH7.8)蛋白

9、酶20mg/mL-20（溶50 g/mL37无须预处K c于水）0.005mol/L EDTA理560.5% SDSa：链霉蛋白酶是从链球菌（Streptomyces griseus）中分离到的一种丝氨酸酶和酸性蛋白酶的混合物。b：自消化可消除 DNA 酶和 RNA 酶的污染，经自消化的链酶蛋白酶的配制方法如下：把该酶的粉末溶解于 10mmol./L Tris·HCl(pH7.5) 、10mmol/L NaCl中，配成 20mg/mL 浓度，于 37温育 1h。经消化的链霉蛋白酶分装成小份放在密封试管中，保存-20。c：蛋白酶 K 是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶，从林伯氏白色念球菌

10、 （ Tritirachium album Limber）中纯化得到。该酶有两个Ca2+结合位点，它们离酶的活性中心有一定距离，与催化机理并无直接关系。然而，如果从该酶中除去Ca2+，由于出现远程的结构变化，催化活性将丧失80%左右，但其剩余活性通常已足以降解在一般情况下污染酸制品的蛋白质。所以，蛋白酶K 消化过程中通常加入EDTA（以抑制依赖于 Mg2+ 的核酸酶的作用） 。但是， 如果要消化对蛋白酶 K 具有较强耐性的蛋白，如角蛋白一类， 则可能需要使用含有1mmol/L Ca2+ 而不含 EDTA的缓冲液。 在消化完毕后、 纯化核酸前要加入 EGT（ pH8.0）至终浓度为2mmol/L

11、, 以鳌合 Ca2+。3无 DNA 酶的 RNA 酶将胰 RNA酶（ RNA 酶 A ）溶于 10mmol/L Tris·HCl(pH7.5) 、 15mmol/L NaCl 中，配成 10mg/mL 的浓度，于 100加热 15min，缓慢冷却至室温，分装成小份保存于-20。（三）常用抗生素溶液贮存液 a工作浓度抗生素浓度保存条件严紧型质粒松弛型质粒氨苄青霉素50mg/mL( 溶于水 )-2020g/mL60g/mL羧苄青霉素50mg/mL( 溶于水 )-2020g/mL60g/mL氯霉素34mg/mL( 溶于乙醇 )-2025g/mL170g/mL卡那霉素10mg/mL( 溶于水

12、 )-2010g/mL50g/mL链霉素10mg/mL( 溶于水 )-2010g/mL50g/mL四环素 b5mg/mL( 溶于乙醇 )-2010 g/mL50 g/mLa：以水为溶剂的抗生素贮存液通过0.22 m滤器过滤除菌。以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理。所有抗生素溶液均应放于不透光的容器保存。b：镁离子是四环素的拮抗剂，四环素抗性菌的筛选应使用不含镁盐的培养基（如LB 培养基）。（四）常用贮存液的配制1 30% 丙烯酰胺溶液【配制方法】将 29g 丙烯酰胺和 1g N， N-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为 60mL 的水中。加热至加水至终体积为 100mL 。用 Nalgene 滤器（

13、 0.45 m孔径）过滤除菌，查证该溶液的7.0，置棕色瓶中保存于室温。37溶解之，补pH 值应不大于【注意】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收，其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能会含有少量未聚合材料。一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子，在丙烯酰胺贮存液中加入大约 0.2 体积的单床混合树脂（ MB-1 Mallinckrodt ），搅拌过夜，然后用 Whatman 1 号滤纸过滤以纯化之。在贮存期间，丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸。2 40% 丙烯酰胺【配制方法】把

14、380g 丙烯酰胺（ DNA 测序级）和20g N ，N-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600mL继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理，但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为的蒸馏水中。1L 。【注意】见上述配制30%丙烯酰胺的说明，40%丙烯酰胺溶液用于DNA 序列测定。3放线菌素D 溶液【配制方法】把 20mg 放线菌素 D 溶解于 4mL 100% 乙醇中，1：10 稀释贮存液， 用 100%乙醇作空白对照读取OD440值。放线菌素D （分子量为1255）纯品在水溶液中的摩尔消化系数为21， 900，故而 1mg/mL 的放线菌素 D 溶液在 440nm 处的吸光值为0.182，放线菌素

15、D 的贮存液应放在包有箔片的试管中，保存于 -20。【注意】放线菌素 D 是致畸剂和致癌剂，配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作，而不能在开放在实验桌面上进行，谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。药厂提供的作治疗用途的放线菌素 D 制品常含有糖或盐等添加剂。 只要通过测量贮存液在 440nm 波长处的光吸收确定放线菌素 D 的浓度，这类制品便可用于抑制自身引导作用。4 0.1mol/L 腺苷三磷酸（ ATP ）溶液【配制方法】在 0.8mL 水中溶解 60mg ATP, 用 0.1mol/L NaOH 调至 pH 值至 7.0，用蒸馏水定容 1mL ，分装成小份保存于 -705 10mol/

16、L 乙酸酰溶液【配制方法】把 770g 乙酸酰溶解于800mL 水中，加水定容至1L 后过滤除菌。6 10% 过硫酸铵溶液【配制方法】把 1g 过硫酸铵溶解于终量为10mL 的水溶液中，该溶液可在4保存数周。7 BCIP 溶液【配制方法】把 0.5g 的 5-溴 -4- 氯 -3-吲哚磷酸二钠盐（BCIP ）溶解于10mL 100% 的二甲基甲酰胺中，保存于48 2×BES 缓冲盐溶液【配制方法】用总体积90mL 的蒸馏水溶解1.07g 盐溶液 BESN ， N- 双（ 2-羟乙基） -2- 氨基乙磺酸 、1.6g NaCl和 0.027g Na2HPO4 ，室温下用 HCl 调节

17、该溶液的 pH 值至 6.96、然后加入蒸馏水定容至100mL ，用 0.22 m滤器过滤除菌，分装成小份，保存于-20。9 1mol/L CaCl2 溶液【配制方法】在 200mL 蒸馏水中溶解54g CaCl2·6H2O ，用 0.22 m滤器过滤除菌， 分装成 10mL 小份贮存于 -20。【注意】制备感受态细胞时，取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100mL ，用 Nalgene 滤器（ 0.45 m孔径）过滤除菌，然后骤冷至0。10 2.5mol/L CaCl2 溶液【配制方法】在 20mL 蒸馏水中溶解 13.5g CaCl2 ·6H2O ，用 0.22 m滤器过滤

18、除菌， 分装成 1mL 小份贮存于 -20。11 1mol/L 二硫苏糖醇（DTT ）溶液【配制方法】用 20mL 0.01mol/L乙酸钠溶液 （ pH5.2 ）溶解 3.09g DTT ，过滤除菌后分装成1mL 小份贮存于 -20。【注意】DTT 或含有 DTT 的溶液不能进行高压处理。12脱氧核苷三磷酸（dNTP ）溶液【配制方法】把每一种dNTP 溶解于水至浓度各为100mmol/L 左右，用微量移液器吸取0.05mol/L Tris 碱分别调节每一 dNTP 溶液的 pH 值 7.0（用 pH 试纸检测），把中和后的每种dNTP 溶液各取一份作适当稀释，在下表中给出的波长下读取光密度

19、计算出每种dNTP 的实际浓度，然后用水稀释成终浓度为50mmol/L 的 dNTP ，分装成小份贮存于-70。碱基波长（ nm）消化系数（ ） L/ （ mol·cm）A2591.54×104G2531.37×104C2719.103×10T2607.403×10比色杯光径为1cm 时,吸光度 =M13 0.5mol/L EDTA(pH8.0)溶液【配制方法】在 800mL 水中加入186.1g 二水乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na· 2H2O ），在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用 NaOH 调节溶液的 pH 值至 8.0（约需 20g

20、NaOH 颗粒）然后定容至1L，分装后高压灭菌备用。【注意】EDTA 二钠盐需加入NaOH 将溶液的pH 值调至接近8.0，才能完全溶解。14溴化乙锭（10mg/mL 溶液）【配制方法】在 100mL 水中加入 1g 溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于室温。【注意】小心：溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性，使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套，称量染料时要戴面罩。15 2×HEPES 缓冲盐溶液【配制方法】用总量为 90mL 的蒸馏水溶解1.6g NaCl 、0.074g KCl 、0.027g Na2PO4·2H2O 、0.2

21、g 葡聚糖和1gHEPES，用 0.5mol/L NaOH 调节 pH 值至 7.05，再用蒸馏水定容至 100mL 。用 0.22 m滤器过滤除菌，分装成 5mL 小份，贮存于 -20。16 IPTG 溶液【配制方法】IPTG 为异丙基硫代 -D- 半乳糖苷（分子量为 238.3），在 8mL 蒸馏水中溶解 2g IPTG 后，用蒸馏水定容至 10mL ，用 0.22 m滤器过滤除菌，分装成 1mL 小份贮存于 -20。17 1mol/L 乙酸镁溶液【配制方法】在 800mL 水中溶解214.46g 四水乙酸镁，用水定容至1L 过滤除菌。18 1mol/L MgCl2 溶液【配制方法】在 8

22、00mL 水中溶解203.4g MgCl2 ·6H2O ，用水定容至1L ，分装成小份并高压灭菌备用。【注意】MgCl2 极易潮解，应选购小瓶（如100g）试剂，启用新瓶后勿长期存放。19 -巯基乙醇（ BME ）溶液【配制方法】一般得到的是14.4mol/L 溶液，应装在棕色瓶中保存于4。【注意】BME 或含有 BME 的溶液不能高压处理。20 NBT溶液【配制方法】把 0.5g 氯化氮蓝四唑溶解于10mL 70% 的二甲基甲酰胺中，保存于4。21酚 /氯仿溶液【配制方法】把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/L TrisHCl(pH7·.6) 抽提几次以平衡这一混合物，

23、上面覆盖等体积的0.01mol/L TrisHCl(pH7·.6) 液层，保存于4。置棕色玻璃瓶中，【注意】酚腐蚀性很强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜，穿防护服。所有操作均应在化学通风橱中进行。与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。22 10mmol/L 苯甲基磺酰氟（PMSF ）溶液【配制方法】用异丙醇溶解PMSF 成 1.74mg/mL （ 10mmol/L ），分装成小份贮存于-20。如有必要可配成浓度高达 17.4mg/mL 的贮存液（ 100mmol/L ）。【注意】PMSF 严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后

24、有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF 污染的衣物应予丢弃。PMSF 在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF 在水溶液中的活性丧失速率随pH 值的升高而加快，且25的失活速率高于4。 pH 值为 8.0 时， 20mmol/L PMSF水溶液的半寿期大约为 85min，这表明将 PMSF 溶液调节 为碱性（ pH>8.6 ）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。23磷酸盐缓冲溶液（PBS）溶液【配制方法】在 800mL 蒸馏水中溶解 8g NaCl 、 0.2g KCl 、 1.44g Na2HPO4 和 0.24g

25、 KH2PO4, 用 HCl 调节 溶液的 pH 值至 7.4 加水定容至 1L，在 15lbf/in2(1034 105Pa)×高压下蒸气灭菌 20min 。保存于室温。24 1mol/L 乙酸钾（ pH7.5 ）溶液【配制方法】将 9.82g 乙酸钾溶解于90mL 纯水中，用2mol/L 乙酸调节pH 值至 7.5 后加入纯水定容到1L ，保存于 -20。25乙酸钾溶液（用于碱裂解）【配制方法】在 60mL 5mol/L 乙酸钾溶液中加入 11.5mL 冰乙酸和 28.5mL 水，即成钾浓度为 3mol/L 而乙酸根浓度为 5mol/L 的溶液。26 3mol/L 乙酸钠（ pH

26、5.2 和 pH7.0 ）溶液【配制方法】在 80mL 水中溶解408.1g 三水乙酸钠，用冰乙酸调节pH 值至 5.2 或用稀乙酸调节pH 值至 7.0，加水定容到1L，分装后高压灭菌。27 5mol/L NaCl 溶液【配制方法】在 800mL 水中溶解292.2g NaCl 加水定容至1L ，分装后高压灭菌。28 10% 十二烷基硫酸钠（SDS）溶液【配制方法】在 900mL 水中溶解 100g 电泳级 SDS，加热至 68助溶， 加入几滴浓盐酸调节 溶液的 pH 值至 7.2，加水定容至 1L，分装备用。【注意】SDS 的微细晶粒易扩散，因此称量时要戴面罩，称量完毕后要清除残留在称量工

27、作区和天平上的SDS， 10% SDS 溶液无须灭菌。29 20×SSC 溶液【配制方法】在 800mL 水中溶解175.3g NaCl 和88.2g柠檬酸钠， 加入数滴10mol/L NaOH溶液调节pH值至7.0，加水定容至1L，分装后高压灭菌。30 20×SSPE 溶液【配制方法】在 800mL7.4（约需水中溶解17.5g NaCl 、 27.6g NaH2PO4·H2O 和 7.4g EDTA ，用6.5mL 10mL/L NaOH ），加水定容至1L，分装后高压灭菌。NaOH溶液调节pH值至31 100% 三氯乙酸溶液【配制方法】在装有500g TCA

28、的瓶中加入227mL水，形成的溶液含有100% （ M/V ） TCA 。32 Tris缓冲盐溶液（TBS ）（ 25mmol/L Tris）【配制方法】在 800mL 蒸馏水中溶解 8g NaCl 、0.2g KCl 和 3g Tris 碱，加入 0.015g 酚并用 HCl 调至 pH 值至 7.4，用蒸馏水定容至 1L，分装后在 151bf/in2(1.034 105Pa)×高压下蒸汽灭菌 20min ，于室温保存。33 X-gal溶液【配制方法】X-gal 为 5-溴 -4-氯 -3-吲哚 -D 半乳糖苷。用二基甲酰胺溶解X-gal 配制成的20mg/mL 的贮存液。保存于一

29、玻璃管或聚丙烯管中，装有X-gal 溶液的试管须用铝箔封裹以防因受光照而被破坏，并应贮存于 -20。 X-gal 溶液无须过滤除菌。34杂交试验中用于降低背景的封闭剂试剂用途Northern 杂交Denhardt 试剂使用 RNA 探针的杂交单拷贝序列的Southern 杂交将 DNA 固定于尼龙膜上的杂交Denhardt 试剂通常配制 50×贮存液，过滤后保存于 -20。可将该贮存液 10 倍稀释于预杂交液（常为含有 0.5%SDS 和 100g/mL 经变性被打断的鲑精 DNA 的 6×SSC 或 6×SSPE）中。50×Denhardt 液中含 5

30、g 聚蔗糖 （ Ficoll,400 蛋白（组分 V”Sigmal），加水至终体积为BLOTTO型， Pharmacia）、5g 聚乙烯吡咯烷酮和 5g 牛血清白 500mL 。Grunstein-Hogness 杂交Benton-Davis 杂交除单拷贝序列 Southern 杂交以外的所有 Southern 杂交斑点印迹1×BLOTT （牛乳转移技术优化液，Bovine Lacto Transfer Technique Optimizer） ,是含 5%胶脂奶粉和 0.02%叠氮钠的水溶液，应保存于4。使用前可用预杂交液稀释25 倍。BLOTTO不应与高浓度的 SDS 并用，因为

31、后者会导致牛奶中蛋白质析出。如果杂交背景不合要求，可在杂交液中加入 NP-40 至终浓度为 1%。BLOTTO 不能用作 Northern 杂交的封闭剂，因为这一封闭剂中可能含有 RNA 酶，其活性之高使人无法接受。注意：叠氮钠有毒性，取用时需戴手套小心操作。含叠氮钠的溶液应予明确标记。Southern 杂交肝素原位杂交肝素（ Sigma H-7005 ，从猪中提取的二级产品或相当等级的产品）用4×SSPE 或 4×SSC 溶解配制成 50mg/mL 的浓度， 保存于 4。肝素在含有葡聚糖硫酸酯的杂交液中用作封闭剂的浓度为500 g/mL，在不含葡聚糖硫酸酯的杂交液中的浓度

32、为50 g/mL。经变性并被打断的鲑精DNAsouthern 和 Northern 杂交把鲑鱼精子DNA （ Sigma, ,盐钠）溶解于水配制成10mg/mL 的浓度，必要时于室温磁力搅拌2 4h 助溶。把溶液中NaCl 的浓度调至0.1mol/L ，并用酚和酚/氯仿各抽提一次，回收水相。合 DNA 溶液快速通17 号皮下注射针头12 次，以剪切DNA 。加入 2 倍体积用冰预冷的乙醇沉淀 DNA 。离心回收DNA 并重溶于水，配制成10mg/mL 的浓度，测定溶液的OD 260 值并计算出精确的 DNA 浓度，然后煮沸10min ，分装成小份保存于-20。使用前置沸水浴中加热5min ，然

33、后迅速在冰浴中骤冷。预杂交液中应含有100g/mL经变性并被打断的鲑鱼精子DNA35 4% 多聚甲醛【配制方法】称取 40g 多聚甲醛，加人溶解后用浓HC1 调节 pH800mL 0.2M PBS 加热溶解，并加人少量的至 7.3-7.4，定容至 1000mLNaOH助溶，待多聚甲醛完全36热修复液【配制方法】贮液：柠檬酸21.01g + 蒸馏水 1000mL柠檬酸三钠29.4g +蒸馏水 1000mL工作液：取柠檬酸9mL + 柠檬酸三钠41 mL + 450 mL蒸馏水,调PH至6.037矿化诱导液【配制方法】Alpha-MEM15% FCS405 mL75mlP/S（双抗）10mM AA

34、1M beta-GP5ml5mL5mLL-ascorbic acid-phosphate (0.145g+50mLPBS)beta-glucorophosphate(10.8g+50mLPBS)2mM Dexamethsone sodium phosphate 2.52mM L-glutamine5mL1.8mM KH2PO42.5 ml (2.45g+50ml PBS)L38 500 mL 5X Mix（用于 real-time PCR ）【配制方法】5X20mM TRIS0.5 M TRIS100 mL5X50 mM KCl1MKCl125 ml5X3 mM MgCl1MMgCl27.5

35、ml5X10 nM Fluorescein10 uM Fluoresein2.5 mL5X5% DMSODMSO125 mLddH2O141 mLnaturalize mixture to PH 8.6 by 10M NaOH, Then filter by 0.2 m filterBefore using the final 5Xmix, 10 mL 5X Mix +50 L 500X SYBR rgreen (to 0.5X cybergreen)39 10mg/mL 牛血清蛋白 (BSA ）【配制方法】加 100mg 的牛血清蛋白（组分V 或分子生物学试剂级，无DNA 酶）于 9.5mL

36、 水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10mL ，然后分装成小份贮存于-20。40 1mol/L 二硫苏糖醇（DTT ）【配制方法】在二硫苏糖醇5g 的原装瓶中加32.4mL 水，分成小份贮存于-20。或转移100mg 的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65mL 的水配制成1mol/L 二硫苏糖醇溶液41 1mol/L HEPES【配制方法】将 23.8gHEPES 溶于约 90mL 的水中，用NaOH 调 pH （6.8-8.2），然后用水定容至100mL 。42 25mg/mL IPTG【配制方法】

37、溶解 250mg 的 IPTG （异丙基硫代-D- 半乳糖苷）于10mL 水中，分成小份贮存于-20。43 10 SDS（十二烷基硫酸钠）【配制方法】称取 100gSDS 慢慢转移到约含0.9L 的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至 1L。44 2.5 X gal（ 5-溴 -4-氯 -3- 吲哚 -半乳糖苷）【配制方法】溶解 25mg 的 X gal 于 1mL 的二甲基甲酰胺（DMF ） ,用铝箔包裹装液管，贮存于-20。45 DEPC （焦碳酸二乙酯）处理水【配制方法】加 100LDEPC 于 100mL 水中，使 DEPC 的体积分数为 0.1。在 37温浴至少 12h，然后在 15 psi 条件下高压灭菌20min ，以使残余的DEPC液。失活。 DEPC会与胺起反应，不可用DEPC 处理Tris 缓冲46TE （用于悬浮和贮存DNA ）【配制方法】1mL 1mol/L Tris-HCl（ pH7