凯氏定氮法与三聚氰胺事ppt课件

1、凯氏定氮法与三聚氰胺凯氏定氮法与三聚氰胺事件事件主讲：冯应斌主讲：冯应斌回想重要的食品营养物质回想重要的食品营养物质蛋白质蛋白质三鹿奶粉三聚氰胺事件三鹿奶粉三聚氰胺事件“三聚氰胺事件始末三聚氰胺事件始末 n2021年年3月，三鹿奶粉屡遭消费者赞扬，三鹿称送检未发生问题；月，三鹿奶粉屡遭消费者赞扬，三鹿称送检未发生问题；n2021年年3-9月，全国各地均出现结石儿童；月，全国各地均出现结石儿童；n2021年年9月月10日上午，三鹿称奶粉仍旧合格；日上午，三鹿称奶粉仍旧合格；n2021年年9月月10日晚间，三鹿成认日晚间，三鹿成认7000吨奶粉遭到污染；吨奶粉遭到污染；n2021年年9月月11日，

2、卫生部提示停顿运用该种类奶粉；日，卫生部提示停顿运用该种类奶粉；n2021年年9月月12日，三鹿辩称是奶农参与了三聚氰胺；日，三鹿辩称是奶农参与了三聚氰胺；n2021年年9月月12-18日，正式处置三鹿事件。三鹿原董事长田文华被拘，石日，正式处置三鹿事件。三鹿原董事长田文华被拘，石家庄市委副书记、副市长和三名局长被免职；家庄市委副书记、副市长和三名局长被免职； 三聚氰胺事件三聚氰胺事件全行业的问题全行业的问题凯氏定氮法与三聚氰胺凯氏定氮法与三聚氰胺三聚氰三聚氰qngqng胺胺nn 重要的氮杂环有机化工原料纯白色重要的氮杂环有机化工原料纯白色单斜棱晶体，无味，密度单斜棱晶体，无味，密度1.573

3、g1.573gcm3cm3。 广泛运用于木材、塑料、涂料、造广泛运用于木材、塑料、涂料、造纸、纺织、皮革、电气等。纸、纺织、皮革、电气等。 动物长期摄入三聚氰胺会呵斥生殖动物长期摄入三聚氰胺会呵斥生殖、泌尿系统的损害，膀胱、肾部结石、泌尿系统的损害，膀胱、肾部结石，并可进一步诱发膀胱癌。，并可进一步诱发膀胱癌。 一、凯氏定氮法一、凯氏定氮法 简介：简介： 蛋白质的定量测定蛋白质的定量测定凯氏定氮法，由凯氏定氮法，由1883年由年由Kieldahl首先提出，经过长期不断首先提出，经过长期不断改良成为世界各国普遍采用的规范方法。可改良成为世界各国普遍采用的规范方法。可用于一切动植物食品的蛋白质含量

4、测定，不用于一切动植物食品的蛋白质含量测定，不适用于添加无机含氮物质、有机非蛋白质含适用于添加无机含氮物质、有机非蛋白质含氮物质的食品测定。氮物质的食品测定。 凯氏定氮法凯氏定氮法 蛋白质所含主要化学元素为C.H.O.N,某些还含有P.Cu.Fe.I等元素，但含N那么是蛋白质区别于其他有机化合物的主要标志。 普通蛋白质含氮量为16%，即1份氮相当于6.25份蛋白质，6.25称为蛋白质换算系数。凯氏定氮法：测定N含量 推算 蛋白质含量凯氏定氮法原理凯氏定氮法原理 原理：食品样品与硫酸和催化剂一同加原理：食品样品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结热消化，使蛋白质分解，分解的

5、氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸规范溶液滴定，硼酸吸收后再以硫酸或盐酸规范溶液滴定，根据酸的耗费量乘以换算系数，即为蛋白质根据酸的耗费量乘以换算系数，即为蛋白质含量。含量。凯氏定氮法凯氏定氮法 安装图安装图凯氏定氮法原理凯氏定氮法原理n消化加热条件下，坚持和缓沸腾消化加热条件下，坚持和缓沸腾n 2NH2(CH2)COOH+13H2SO4 (NH4)SO4+CO2+12SO2+16H2On 加速消化，参与：硫酸钾、硫酸铜加速消化，参与：硫酸钾、硫酸铜n K2SO4+H2SO4 2KHSO4n 2KHSO4 K2SO4=

6、H2O+SO3n (加速水分逸出，硫加速水分逸出，硫酸钾浓度增大，故沸点升高酸钾浓度增大，故沸点升高)n 2CuSO4 Cu2SO4+SO2 +O2 n C+2CuSO4 CuSO4+SO2 +CO2 -An CuSO4起催化作用起催化作用n Cu2SO4+H2SO4 2CuSO4+2H2O+SO2 n 消化完成后，消化完成后，A反响不再进展，溶液呈蓝绿色，指反响不再进展，溶液呈蓝绿色，指示消化终点示消化终点n凯氏定氮法原理凯氏定氮法原理n蒸馏蒸馏n 消化完全的样品溶液中参与浓消化完全的样品溶液中参与浓NaOH使使呈碱性，加热蒸馏，即可释放出呈碱性，加热蒸馏，即可释放出NH3n2NaOH+(N

7、H4)2SO4=2NH3+NaSO4+2H2O凯氏定氮法原理凯氏定氮法原理n吸收与滴定n 加热蒸馏出的NH3用硼酸吸收，吸收完成后，再用盐酸规范溶液滴定n2NH3+4H3BO3=(NH4)B4O7+5H2On(NH4)B4O7+5H2O+2HCL=2NH4CL+4H3BO3n根据盐酸规范溶液浓度及耗费体积，氮换算系数计算样品中蛋白质含量n用于一切动植物食品的蛋白质含量测定，不适用于添加无机含氮物质、有机非蛋白质含氮物质的食品测定。n运用前提：样品是真正的蛋白质样品，没有被造假凯氏定氮法凯氏定氮法 操作方法操作方法n样品样品0.22g，参与凯氏烧瓶，硫酸铜，参与凯氏烧瓶，硫酸铜0.5g、硫酸钾、

8、硫酸钾10g和浓硫酸和浓硫酸20ml，加热消化至溶液蓝绿色，再继续加热消化至溶液蓝绿色，再继续30minn蒸馏至氨全部蒸出，吸收液用蒸馏至氨全部蒸出，吸收液用0.1000mol/LHCL溶液滴定至由蓝色变为溶液滴定至由蓝色变为微红色为终点，记录用量，计算微红色为终点，记录用量，计算凯氏定氮法凯氏定氮法微量凯氏定氮安装凯氏定氮法凯氏定氮法 操作录像操作录像计算X =(V1-V2C 0.014)/( m 10/100) F 100% X：样品中蛋白质的百分含量，g；V1：样品耗费硫酸或盐酸规范液的体积，ml；V2：试剂空白耗费硫酸或盐酸规范溶液的体积，ml；C：硫酸或盐酸规范溶液的当量浓度；0.0

9、14：硫酸或盐酸规范溶液1ml相当于氮克数；m：样品的质量体积，gml；F：氮换算为蛋白质的系数。蛋白质中的氮含量普通为1517.6%，按16%计算乘以6.25即为蛋白质，乳制品为6.38，面粉为5.70，玉米、高粱为6.24，花生为5.46，米为5.95，大豆及其制品为5.71，肉与肉制品为6.25本卷须知本卷须知n所用试剂均不含氮n消化和缓、保证彻底，如：摇动、消泡、至透明蓝绿色n蒸馏安装保证气密性n硼酸温度40，否那么影响吸收n蒸馏终了，下端提离，蒸馏水冲洗，再蒸1min全自动凯氏定氮仪全自动凯氏定氮仪 蒸馏时间：2 4分钟 蒸馏仪内置蒸汽发生器。自动的稀释、自动加碱、自动加硼酸，可编程

10、控制 自动排废液：消化管废液、接纳杯滴定废液。自动清洗接纳杯。 蒸馏过程可编程，储存20个程序。 各种平安维护：蒸馏管位置、平安门位置、蒸汽发生器过温，冷却水流动维护。 凯氏定氮法的改良凯氏定氮法的改良 可根据蛋白质遇酸沉淀的特性，用三氯乙酸处置样品，让真正的蛋白质构成沉淀，过滤后分别测定沉淀和滤液中氮含量，就可知蛋白质的真正含量和冒充蛋白质的含量。其他测定蛋白质的方法： 紫外法直接测定，测定与蛋白质相关联的特定多肽基团； 红外法测蛋白质水解后的氨基酸含量-目前测定蛋白质最先进的技目前测定蛋白质最先进的技术术 美国培安 运用生物科学领域的iTAG“氨基酸分子标签技术，给蛋白质贴上“标签，在样品中直接丈量真蛋白质含量 速度快 ，2分钟新规范新规范 新方法新方法GB/T 21704-2021乳与乳制品中非蛋白氮含量的测定2021.7.1实施GB/T22388-2021原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法(2021.10.7实施)GB/T22400-2021原料乳中三聚氰