乳品中乳酸菌的检验

1、 1 无菌器材的准备一一培养基的制备二二样品的制备三三接种及培养四四计数报告五五 食品营养与检测专业教学资源库 目录页 2 食品营养与检测专业教学资源库 无菌器材的准备一一1.检验设备的准备2.无菌器皿的准备 1 食品营养与检测专业教学资源库 乳品中乳酸菌的检验 无菌器材的准备1.检验设备的准备检验设备的准备：恒温培养箱：36 1 ，30 1 恒温水浴箱：46 1 感量为0.1 g 天平均质器 1 食品营养与检测专业教学资源库 乳品中乳酸菌的检验 无菌器材的准备2.无菌器皿的准备无菌器皿的准备：无菌吸管：1 mL （具0.01 mL 刻度）、10 mL （具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸

2、头。 无菌锥形瓶：容量250 mL、500 mL。 无菌培养皿：直径 90 mm。 2 食品营养与检测专业教学资源库 培养基的制备二二1.加热溶解2.包扎灭菌 1 食品营养与检测专业教学资源库 乳品中乳酸菌的检验 培养基的制备1.加热溶解加热溶解MRS培养基培养基 莫匹罗星锂盐改良莫匹罗星锂盐改良MRSMRS培养基培养基 MCMC培养基培养基将干粉加于蒸馏水中，加热溶解，调节pH ，分装。2.包扎灭菌包扎灭菌121 高压灭菌15-20 min。 2 食品营养与检测专业教学资源库 样品的制备三三1.固体和半固体样品的制备2.液体样品的制备 1 食品营养与检测专业教学资源库 乳品中乳酸菌的检验 样

3、品的制备1.固体和半固体样品固体和半固体样品的制备的制备以无菌操作称取25 g 样品，置于装有225 mL 生理盐水的无菌均质杯内，于 8000 r/min10000 r/min 均质 1 min2 min，制成 1:10 样品匀液；或置于225 mL 生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min2 min 制成 1:10 的样品匀液。 2.液体样品液体样品的制备的制备液体样品应先将其充分摇匀后以无菌吸管吸取样品25 mL 放入装有225 mL 生理盐 水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分振摇，制成 1:10 的样品匀液。 2 食品营养与检测专业教学资源库 接种及培

4、养四四1.系列稀释2.接种培养 1 食品营养与检测专业教学资源库 乳品中乳酸菌的检验 接种及培养1.系列稀释系列稀释用 1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取 1:10 样品匀液 1 mL，沿管壁缓慢注于装有9 mL 生理盐水的无菌试管中（注意吸管尖端不要触及稀释液），振摇试管或换用 1 支无菌吸管反复吹打使其混合均匀， 制成 1:100 的样品匀液。 1 食品营养与检测专业教学资源库 乳品中乳酸菌的检验 接种及培养2.接种培养接种培养：（1 1）乳酸菌总数乳酸菌总数 根据待检样品活菌总数的估计，选择 2 个3 个连续的适宜稀释度，每个稀释度吸取 0.1 mL 样品 匀液分别置于2 个MRS 琼脂

5、平板，使用 L 形棒进行表面涂布。361，厌氧培养48 h2 h 后计数平板上的所有菌落数。从样品稀释到平板涂布要求在 15min 内完成。 1 食品营养与检测专业教学资源库 乳品中乳酸菌的检验 接种及培养2.接种培养接种培养：（2 2）双歧杆菌计数双歧杆菌计数 根据对待检样品双歧杆菌含量的估计，选择2 个3 个连续的适宜稀释度，每个稀释度吸取0.1 mL 样品匀液于莫匹罗星锂盐（Li-Mupirocin ）改良MRS 琼脂平板，使用灭菌 L 形棒进行表面涂布，每个 稀释度作两个平板。361，厌氧培养48 h2 h 后计数平板上的所有菌落数。从样品稀释到平板涂布要求在 15 min 内完成。

6、。 1 食品营养与检测专业教学资源库 乳品中乳酸菌的检验 接种及培养2.接种培养接种培养：（3 3）嗜热链球菌计数嗜热链球菌计数 根据待检样品嗜热链球菌活菌数的估计，选择2 个3 个连续的适宜稀释度，每个稀释度吸取0.1 mL 样品匀液分别置于2 个MC 琼脂平板，使用 L 形棒进行表面涂布。361，需氧培养48 h2 h 后计数。嗜热链球菌在MC 琼脂平板上的菌落特征为：菌落中等偏小，边缘整齐光滑的红色菌落，直径2 mm1 mm，菌落背面为粉红色。从样品稀释到平板涂布要求在 15 min 内完成。 1 食品营养与检测专业教学资源库 乳品中乳酸菌的检验 接种及培养2.接种培养接种培养：（4 4

7、）乳杆菌计数乳杆菌计数 项乳酸菌总数结果减去双歧杆菌与嗜热链球菌计数结果之和即得乳杆菌计数。 2 食品营养与检测专业教学资源库 计数报告五五1.菌落计数2.结果报告 1 食品营养与检测专业教学资源库 乳品中乳酸菌的检验 计数报告1.菌落计数菌落计数：可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-forming units，CFU）表示。 选取菌落数在 30 CFU300 CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于 30 CFU 的 平板记录具体菌落数，大于 300 CFU 的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个

8、平板的平均数。 1 食品营养与检测专业教学资源库 乳品中乳酸菌的检验 计数报告2.结果报告结果报告：菌落数小于 100 CFU 时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。 菌落数大于或等于 100 CFU 时，第3 位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2 位数字，后 面用0 代替位数；也可用 10 的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。 称重取样以 CFU/g 为单位报告，体积取样以CFU/mL 为单位报告。 根据菌落计数结果出具报告，报告单位以CFU/g （mL ）表示。 食品安全国家标准食品微生物学检验食品安全国家标准食品微生物学检验 原始数据记录报告单原始数据记录报告单送检单位送检单位 样品名称样品名称 生产单位生产单位 生产日期生产日期 检验日期检验日期 检测依据检测