天然药物化学实验教案

1、天然药物化学实验教案首页题实验一硅胶、氧化铝薄层板的制备与应用编号1课时2一、教学目的通过本实验的学习,使学生掌握薄层色谱制备、操作及活度测定方法。二、重点与难点重点是学生能够熟练进行硅胶及氧化铝薄层板制备及操作方法,并掌握相应活度测定方法。实施步骤方法教学内容时间讲解和演示操作一、实验目的二、实验原理三、仪器、材料与试剂四、实验步骤5min15min10min60min板书设计 一、实验目的通过本实验的学习:1.学习薄层软板和硬板的制备方法;2. 熟悉薄层色谱法的操作步骤;3. 掌握软板和硬板活度定级测定方法。 二、实验原理薄层色谱是把吸附剂(或载体均匀地铺在一块玻璃板或塑料板上形成薄层,在

2、此薄板上进行色谱分离,按分离机制可分为吸附,分配,离子交换和凝胶过滤色谱等。薄层色谱多数情况是一种吸附层析,利用吸附剂对化合物吸附能力的不同而达到分离,吸附剂吸附能力的大小与化合物极性大小有关。化合物极性大,被吸附剂吸附得牢,Rf 值小,反之,化合物极性小,Rf 值大。一个化合物在某种吸附剂上Rf 值的大小主要取决于展开剂的极性大小,即展开剂极性大,化合物Rf 值大,展开剂极性小,化合物的Rf 值小。Rf=(cm cm 原点至前沿的距离原点至色斑的距离薄层板根据在制备过程中是干法制板还是湿法制板分为二种。干法制板为软板,湿法制板为硬板。薄层板吸附能力强弱用活度表示,其与含水量密切相关,含水量越

3、大,活性级别增大,吸附力减弱,反之,则相反。测定方法采用Brockmann 法。利用不同染料测定Rf 值,然后根据其来测定薄层板活度。表1氧化铝活度和偶氮染料Rf 值的关系偶 氮 染 料氧化铝活度级(Rf 值级表2硅胶活度和偶氮染料Rf 值的关系三、仪器、材料与试剂 四、实验步骤 1、薄层板制备 (1湿法制板 (2干法制板 2、偶氮染料配制偶 氮 染 料硅胶活度级(Rf 值级3、点样4、展开5、实验记录及结论五、注意事项:1、软板制作不宜过快及停顿;2、点样量应合适,同时展开剂不宜过度,不能淹没起始线;3、软板操作要小心振动及风吹等。六、实验报告按照实验报告要求认真填写,并认真完成下次实验的预

4、习实验二槐米中芦丁的提取、分离与鉴定(一课外作业1.吸附剂活度与吸附性强弱关系?2.什么是Rf值?其影响因素有哪些?3.根据试验中用到的五种偶氮染料,试判断其极性大小顺序并解释与Rf值的关系。后附讲稿共页实验一 硅胶、氧化铝薄层板的制备与应用一、实验目的通过本实验的学习:1.学习薄层软板和硬板的制备方法;2. 熟悉薄层色谱法的操作步骤;3. 掌握软板和硬板活度定级测定方法。 二、实验原理薄层色谱是色谱法中应用最普遍的方法之一,具有分离速度快,效率高等特点。适用于微量样品的分离鉴定,天然药物化学成分的研究中得到了越来越广泛的应用和发展。薄层色谱是把吸附剂(或载体均匀地铺在一块玻璃板或塑料板上形成

5、薄层,在此薄板上进行色谱分离,按分离机制可分为吸附,分配,离子交换和凝胶过滤色谱等。薄层色谱多数情况是一种吸附层析,利用吸附剂对化合物吸附能力的不同而达到分离,吸附剂吸附能力的大小与化合物极性大小有关。化合物极性大,被吸附剂吸附得牢,Rf 值小,反之,化合物极性小,Rf 值大。一个化合物在某种吸附剂上Rf 值的大小主要取决于展开剂的极性大小,即展开剂极性大,化合物Rf 值大,展开剂极性小,化合物的Rf 值小。Rf=(cm cm 原点至前沿的距离原点至色斑的距离薄层板根据在制备过程中是干法制板还是湿法制板分为二种。干法制板为软板,湿法制板为硬板。薄层板吸附能力强弱用活度表示,其与含水量密切相关,

6、含水量越大,活性级别增大,吸附力减弱,反之,则相反。测定方法采用Brockmann 法。利用不同染料测定Rf 值,然后根据其来测定薄层板活度。表1氧化铝活度和偶氮染料Rf 值的关系偶 氮 染 料氧化铝活度级(Rf 值级级 级 级 偶 氮 苯 0.59 0.74 0.85 0.95 对甲基偶氮苯 0.16 0.49 0.69 0.89 苏 丹 黄 0.10 0.25 0.51 0.78 苏 丹 红 0.00 0.10 0.33 0.56 对氨基偶氮苯表2硅胶活度和偶氮染料Rf 值的关系三、仪器、材料与试剂仪器:层析缸、玻璃板、玻璃棒、容量瓶、胶布、毛细管、研钵、天平、烘箱等。试剂:硅胶(薄层用、

7、氧化铝(薄层用、CCL 4(A.R 、偶氮苯、对甲偶 氮 染 料硅胶活度级(Rf 值级基偶氮苯、苏丹黄、苏丹红、对氨基偶氮苯、0.8%羧甲基纤维素钠(CMC-Na。四、实验步骤1、薄层板制备(1湿法制板取硅胶G3g,置研钵中加0.8%羧甲基纤维素钠溶液10ml,研磨均匀,放置片刻,随即用药匙取一定量,分别倒在玻璃板上,轻轻振动玻璃板,使薄层面平整均匀,水平放置,待薄层发白近干,于烘箱中110烘干活化30min,冷后贮于干燥器内备用。不同规格的玻璃板所用硅胶重量不同。(2干法制板取表面光滑,直径均一的玻璃棒一支,依据所制备薄层的宽度、厚度要求,在玻璃棒两端各包上橡皮胶,也可以套上塑料管或橡皮管,

8、一般以0.25(用于分析分离1mm(用于制备分离为宜。在一端已包好的橡皮胶上,再多包56层橡皮胶或一段橡皮管,作为涂铺时的固定边,以防止滑动时边缘不整齐。操作时,将氧化铝粉均匀地铺在玻璃板上,再用玻棒压在玻板上将吸附剂自一端推向另一端,推移时,不宜太快,也不应中途停顿,否则厚薄不均匀,影响层析效果。2、偶氮染料配制偶氮苯30mg、对甲基偶氮苯、苏丹黄、苏丹红、对氨基偶氮苯各20mg,以CCL4定容于50ml容量瓶中。3、点样以铅笔尖或毛细管尖在薄层板一端13cm处,轻轻触及薄层再作起始线标记,间隔lcm左右点上5个可以看清的小点,然后分别用毛细管蘸取各种染料分别点在原点上,点样的斑点直径不得超

9、过0.5cm。4、展开将点样的软板轻轻置于预先加入重蒸馏四氯化碳的层析槽中(事先垫高层析槽的下行端,勿使展开剂与薄层板接触,盖好槽盖放置半小时,以进行饱和。半小时后,调换层析槽下支撑物,再垫高层析槽的上行端,使薄层板与容器底部交角为1040之间,令展开剂流集于层析槽的下行端,使与薄层板相接触(以不淹没点样原点为度以进行展层,当展开剂展至薄层板全长的三分之二时,即可取出薄层板, 迅速量出前沿至原点的总长度和原点至各个色斑的长度,依以下公式计算各色点的比移值(Rf 。硬板则用正己烷乙酸乙酯(9:1作为展开剂,薄层板与容器夹角要求不高。Rf=(cm cm 原点至前沿的距离原点至色斑的距离5、实验记录

10、及结论记录斑点位置、计算Rf 值,根据表1、2中数据查询活度。 五、注意事项:1、软板制作不宜过快及停顿;2、点样量应合适,同时展开剂不宜过度,不能淹没起始线;3、软板操作要小心振动及风吹等。 六、实验报告按照实验报告要求认真填写,并认真完成下次实验的预习实验二 槐米中芦丁的提取、分离与鉴定(一学习芦丁的提取及精制方法。天然药物化学实验教案首页题实验二槐米中芦丁的提取、分离与鉴定(一编号2课时4一、教学目的通过本实验的学习,使学生掌握芦丁的提取及精制的原理和操作方法。二、重点与难点重点掌握芦丁的提取及精制的原理和操作方法。实施步骤方法教学内容时间讲解和演示操作一、实验目的二、实验原理三、仪器、

11、材料与试剂四、实验步骤5min20min10min145min板书设计一、实验目的1.通过芦丁的提取与精制掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。2.掌握芦丁的一种提取、精制方法及提制过程中防止甙水解的方法。二、实验原理:本实验主要是利用芦丁中含有较多的酚羟基,可溶于碱中,加酸酸化后又可析出芦丁结晶的性质,采用碱溶酸沉法提取,并用芦丁对冷、热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制。三、仪器、材料与试剂四、实验步骤(一提取:(二精制:五、注意事项:1.本实验采用碱溶酸沉法从槐米中提取芦丁,收率稳定,且操作简便。在提取前应注意将槐米略捣碎,使芦丁易于被热水溶出。槐花中含有大量粘液质,加入石灰乳使生成钙

12、盐沉淀除支。pH应严格控制在8-9,不得超过10。因为在强碱条件下煮沸,时间稍长可促使芸香甙水解破坏,使提取率明显下降。酸沉一步pH为2-3,不宜过低,否则会使芸香甙形成盐溶于水,降低了收率。2.提取过程中加入硼砂水的作用:即能调节碱性水溶液的pH,又能保护芸香甙分子中的邻二酚羟基不被氧化,亦保护邻二酚羟基不与钙离子络合,使芸香甙不受损失。3.芸香甙的提取方法除了用碱溶酸沉法外,还可利用芸香甙在冷水及沸水中的溶解度不同,采用沸水提取法。又报道将生产工艺改进为95%乙醇回流提取后回收醇得浸膏,然后将粗浸膏经除去脂溶性杂质后,用水洗净,过滤,干燥即得芸香甙,可提高收率6.96%,并降低了成本。因此

13、可根据不同原料采用各种不同方法提取。4.槲皮素以乙醇重结晶时,如所用的乙醇浓度过高(90%以上,一般不易析出结晶。此时可于乙醇溶液中滴加适量蒸馏水,使呈微浊状态,放置,槲皮素即可析出。六、实验报告按照实验报告要求认真填写,并认真完成下次实验的预习实验二槐米中芦丁的提取、分离与鉴定(二芦丁的水解及槲皮素精制,同时了解槲皮素乙酰化物的制备方法。课外作业1.本实验提取过程中应注意哪些问题?2.根据芦丁的性质还可采用何种方法进行提取?简要说明理由。后附讲稿共页实验二槐米中芦丁的提取、分离与鉴定(一芦丁(Rutin广泛存在于植物界中,现已发现含芦丁的植物至少在70种以上,如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含

14、有。尤以槐花米(为植物Sophora japonica的未开放的花蕾和荞麦中含量最高,可作为大量提取芦丁的原料。槐花米为豆科植物槐花的未开放花蕾。味苦性凉,具清热、凉血、止血之功。槐花的主要化学成分为芦丁,又名芸香甙,含量可达12-16%。芦丁是由槲皮素(Quercetin3位上的羟基与芸香糖(Rutinose为葡萄糖(Glucose与鼠李糖(Rhamnose组成的双糖脱水合成的苷。为浅黄色粉末或极细的针状结晶,含有三分子的结晶水,熔点为174178,无水物188190。溶解度:冷水中为1:10000;热水中1:200;冷乙醇1:650;热乙醇1:60;冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯,不

15、溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚,溶于碱而呈黄色。芦丁具有维生素P的作用。可降低毛细管前壁的脆性和调节渗透性,有助于保持及恢复毛细血管的正常弹性,临床上用作毛细管脆性引起的出血症,并常用作防治高血压病的辅助治疗剂。现在国处也常用芦丁作食品及饮料的染色剂。一、实验目的1.通过芦丁的提取与精制掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。2.掌握芦丁的一种提取、精制方法及提制过程中防止甙水解的方法。二、实验原理:本实验主要是利用芦丁中含有较多的酚羟基,可溶于碱中,加酸酸化后又可析出芦丁结晶的性质,采用碱溶酸沉法提取,并用芦丁对冷、热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制。三、仪器、材料与试剂槐米、活性炭、石灰乳、

16、0.4%硼砂水溶液、2%的硫酸溶液、浓盐酸、正丁醇、冰醋酸、蒸馏水、1%的氢氧化钠溶液、1%的三氯化铝乙醇溶液、1%槲皮素乙醇溶液、95%乙醇、广泛pH试纸、中速层析滤纸等。四、实验步骤(一提取:称取槐米30g,在乳钵中研碎后,投入300ml0.4%硼砂溶液的沸水溶液中煮沸2-3分钟,在搅拌下加入石灰乳调pH9,煮沸40分钟(注意添加水,保持原有体积,保持pH89,趁热倾出上清液,用棉花过滤(或用四层纱布过滤。残渣加100ml 水,加石灰乳调pH9,煮沸30分钟,趁热用棉花过滤(或用四层纱布过滤,二次滤液合并。滤液保持在60,加浓HCl,调pH2-3,放置过夜,待析出结晶,过滤,滤饼用蒸馏水洗

17、至pH5-6,抽干,置空气中晾干,得粗制芦丁,称重,计算得率。(二精制:将芦丁粗品悬浮于蒸馏水中,煮沸至芦丁全部溶解,加少量活性炭,煮沸5-10分钟,趁热抽滤,冷却后即可析出结晶,抽滤至干,置空气中晾干,或6070干燥,得精制芦丁,称重,计算得率。五、注意事项:1.本实验采用碱溶酸沉法从槐米中提取芦丁,收率稳定,且操作简便。在提取前应注意将槐米略捣碎,使芦丁易于被热水溶出。槐花中含有大量粘液质,加入石灰乳使生成钙盐沉淀除支。pH应严格控制在8-9,不得超过10。因为在强碱条件下煮沸,时间稍长可促使芸香甙水解破坏,使提取率明显下降。酸沉一步pH为2-3,不宜过低,否则会使芸香甙形成盐溶于水,降低

18、了收率。2.提取过程中加入硼砂水的作用:即能调节碱性水溶液的pH,又能保护芸香甙分子中的邻二酚羟基不被氧化,亦保护邻二酚羟基不与钙离子络合,使芸香甙不受损失。3.芸香甙的提取方法除了用碱溶酸沉法外,还可利用芸香甙在冷水及沸水中的溶解度不同,采用沸水提取法。又报道将生产工艺改进为95%乙醇回流提取后回收醇得浸膏,然后将粗浸膏经除去脂溶性杂质后,用水洗净,过滤,干燥即得芸香甙,可提高收率6.96%,并降低了成本。因此可根据不同原料采用各种不同方法提取。4.槲皮素以乙醇重结晶时,如所用的乙醇浓度过高(90%以上,一般不易析出结晶。此时可于乙醇溶液中滴加适量蒸馏水,使呈微浊状态,放置,槲皮素即可析出。

19、六、实验报告按照实验报告要求认真填写,并认真完成下次实验的预习实验二槐米中芦丁的提取、分离与鉴定(二芦丁的水解及槲皮素精制,同时了解槲皮素乙酰化物的制备方法。天然药物化学实验教案首页题实验三槐米中芦丁的提取、分离与鉴定(二编号3课时4一、教学目的通过本次学习,使学生掌握黄酮苷水解制备黄酮苷元的方法。二、重点与难点重点了解芦丁水解制备槲皮素的原理及方法。实施步骤方法教学内容时间讲解和演示操作一、实验目的二、实验原理三、仪器、材料与试剂四、实验步骤5min25min10min140min板书设计一、实验目的掌握黄酮甙水解生成甙元的方法及二者之间的分离。二、实验原理:芦丁是由槲皮素(Querceti

20、n3位上的羟基与芸香糖(Rutinose为葡萄糖(Glucose与鼠李糖(Rhamnose组成的双糖脱水合成的苷。芦丁可被稀酸水解,生成槲皮素及葡萄糖、李糖,并能通过纸层析鉴定。芸香甙三、仪器、材料与试剂四、实验步骤芦丁的水解:槲皮素精制:糖样品制备:五、注意事项:用乙醇重结晶槲皮素时,若乙醇浓度过高,则不易析出结晶,此时,可在乙醇溶液中滴加适量蒸馏水使呈微浊状态,则槲皮素可大量析出结晶。六、实验报告按照实验报告要求认真填写,并认真完成下次实验的预习实验二槐米中芦丁的提取、分离与鉴定(三芦丁、槲皮素及糖(葡萄糖、鼠李糖的主要性质和鉴定方法。课外作业试解释芸香苷水解过程中出现的混浊澄清混浊现象。

21、后附讲稿共页实验三槐米中芦丁的提取、分离与鉴定(二一、实验目的掌握黄酮甙水解生成甙元的方法及二者之间的分离。二、实验原理:芦丁是由槲皮素(Quercetin3位上的羟基与芸香糖(Rutinose为葡萄糖(Glucose与鼠李糖(Rhamnose组成的双糖脱水合成的苷。为浅黄色粉末或极细的针状结晶,含有三分子的结晶水,熔点为174178,无水物188190。溶解度:冷水中为1:10000;热水中1:200;冷乙醇1:650;热乙醇1:60;冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯,不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚,溶于碱而呈黄色。芦丁可被稀酸水解,生成槲皮素及葡萄糖、李糖,并能通过纸层析鉴定。 芸香甙三

22、、仪器、材料与试剂槐米、活性炭、石灰乳、0.4%硼砂水溶液、2%的硫酸溶液、浓盐酸、正丁醇、冰醋酸、蒸馏水、1%的氢氧化钠溶液、1%的三氯化铝乙醇溶液、1%槲皮素乙醇溶液、95%乙醇、广泛pH试纸、中速层析滤纸等。四、实验步骤芦丁的水解:取芦丁1g,研碎,加2%硫酸水溶液80ml,小火加热,微沸回流30-60min,并及时补充蒸发掉的水分。在加热过程中,开始时溶液呈浑浊状态,约10min后,溶液由浑浊转为澄清,逐渐析出黄色小针状结晶,即水解产物槲皮素,继续加热至结晶物不再增加时为止。抽滤,保留滤液40ml,以检查滤液中的单糖。槲皮素精制:所滤得的槲皮素粗晶水洗至中性,加70%乙醇80ml加热回

23、流使之溶解,趁热抽滤,放置析晶。抽滤,得精制槲皮素。减压下110干燥,可得槲皮素无水物。糖样品制备:取上述滤除槲皮素保留的水解母液40ml,加氢氧化钡细粉约3g中和至pH7,自然过滤,除去生成的硫酸钡沉淀,滤液浓缩至1ml,供薄层色谱点样用。五、注意事项:用乙醇重结晶槲皮素时,若乙醇浓度过高,则不易析出结晶,此时,可在乙醇溶液中滴加适量蒸馏水使呈微浊状态,则槲皮素可大量析出结晶。六、实验报告按照实验报告要求认真填写,并认真完成下次实验的预习实验二槐米中芦丁的提取、分离与鉴定(三芦丁、槲皮素及糖(葡萄糖、鼠李糖的主要性质和鉴定方法。天然药物化学实验教案首页题实验四槐米中芦丁的提取、分离与鉴定(三

24、编号4课时4一、教学目的通过本实验的学习,使学生掌握黄酮类化合物的主要性质和鉴定方法。二、重点与难点重点:使学生掌握芦丁、槲皮素及糖(葡萄糖、鼠李糖的主要性质和鉴定方法。实施步骤方法教学内容时间讲解和演示操作一、实验目的二、实验原理三、仪器、材料与试剂四、实验步骤5min20min10min145min板书设计一、实验目的熟悉芦丁、槲皮素的结构性质、检识方法和薄层色谱或纸层析鉴定方法。二、实验原理:利用吸附薄层色谱或纸色谱法的分离原理,芦丁与对照品在同一条件下进行展开,显色,以达到鉴定芦丁的目的。通过专属的化学显色反应,确定芦丁成分的类型。三、仪器、材料与试剂四、实验步骤1. 显色反应盐酸-镁

25、粉试验:取芦丁少许置于试管中,加5%乙醇2ml,在水浴中加热溶解,滴加浓盐酸2滴,再加镁粉约50mg,即产生剧烈的反应。溶液逐渐由黄色变为红色。2. 点滴显色反应取芦丁及槲皮素的甲醇溶液分别点在滤纸上,挥发除去溶剂,然后分别点下列试剂,观察并记录显色前后颜色及荧光变化。11%三氯化铁乙醇溶液22%三氯化铝乙醇溶液(365nm下观察3氢氧化钠溶液3. 苷和苷元的薄层色谱鉴定吸附剂硅胶G(1040u-0.4%CMC水液制板,105110活化1小时展开剂氯仿-甲醇-甲酸(15:5:1供试品实验产品1%芸香苷醇溶液及1%槲皮素醇溶液对照品1%芸香苷醇溶液及1%槲皮素醇溶液显色 a. 先在可见光下观察,

26、然后在紫外光下观察(365nmb. 经氨气熏蒸后再观察;c. 喷三氯化铝试剂前后观察颜色变化(365nm紫外灯下。记录图谱,并计算Rf值。4. 糖的纸色谱检识:取上述芦丁水解后的母液20ml,加入氢氧化钡细粉(约2.6g中和至pH7,滤除生成的硫酸钡沉淀。滤液中水浴中浓缩至12ml,供纸色谱点样用。支持剂:新华层析滤纸(中速、20cm7cm样品:水解浓缩液对照品:a. 葡萄糖标准品水溶液b. 鼠李糖标准品水溶液展开剂:正丁醇:冰醋酸:水(4:1:5上层显色:a. 喷苯胺-邻苯二甲酸试剂,于105加热10min,显棕色或棕红色斑点。记录图谱,并计算Rf值。五、注意事项:及时记录实验数据,同时在实

27、验过程中要注意紫外线伤害。六、实验报告按照实验报告要求认真填写,并认真完成下次实验的预习大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定(一。课外作业1.如何证明芦丁中只含有葡萄糖和鼠李糖?后附讲稿共页实验四槐米中芦丁的提取、分离与鉴定(三一、实验目的熟悉芦丁、槲皮素的结构性质、检识方法和薄层色谱或纸层析鉴定方法。二、实验原理:利用吸附薄层色谱或纸色谱法的分离原理,芦丁与芦丁对照品在同一条件下进行展开,显色,以达到鉴定芦丁的目的。通过专属的化学显色反应,确定芦丁成分的类型。三、仪器、材料与试剂槐米、活性炭、石灰乳、0.4%硼砂水溶液、2%的硫酸溶液、浓盐酸、正丁醇、冰醋酸、蒸馏水、1%的氢氧化钠溶液、1

28、%的三氯化铝乙醇溶液、1%槲皮素乙醇溶液、95%乙醇、广泛pH试纸、中速层析滤纸、硫酸,镁粉、三氯化铝、三氯化铁等。四、实验步骤1. 显色反应盐酸-镁粉试验:取芦丁少许置于试管中,加5%乙醇2ml,在水浴中加热溶解,滴加浓盐酸2滴,再加镁粉约50mg,即产生剧烈的反应。溶液逐渐由黄色变为红色。2. 点滴显色反应取芦丁及槲皮素的甲醇溶液分别点在滤纸上,挥发除去溶剂,然后分别点下列试剂,观察并记录显色前后颜色及荧光变化。11%三氯化铁乙醇溶液22%三氯化铝乙醇溶液(365nm下观察3氢氧化钠溶液3. 苷和苷元的薄层色谱鉴定吸附剂硅胶G(1040u-0.4%CMC水液制板,105110活化1小时展开

29、剂氯仿-甲醇-甲酸(15:5:1供试品实验产品1%芸香苷醇溶液及1%槲皮素醇溶液对照品1%芸香苷醇溶液及1%槲皮素醇溶液显色 a. 先在可见光下观察,然后在紫外光下观察(365nmb. 经氨气熏蒸后再观察;c. 喷三氯化铝试剂前后观察颜色变化(365nm紫外灯下。记录图谱,并计算Rf值。4. 糖的纸色谱检识:取上述芦丁水解后的母液20ml,加入氢氧化钡细粉(约2.6g中和至pH7,滤除生成的硫酸钡沉淀(可用滑石粉助滤。滤液中水浴中浓缩至12ml,供纸色谱点样用。支持剂:新华层析滤纸(中速、20cm7cm样品:水解浓缩液对照品:a. 葡萄糖标准品水溶液b. 鼠李糖标准品水溶液展开剂:正丁醇:冰醋

30、酸:水(4:1:5上层显色:a. 喷苯胺-邻苯二甲酸试剂,于105加热10min,显棕色或棕红色斑点。记录图谱,并计算Rf值。五、注意事项:及时记录实验数据,同时在实验过程中要注意紫外线伤害。六、实验报告按照实验报告要求认真填写,并认真完成下次实验的预习大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定(一。天然药物化学实验教案首页课题实验五大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定(一编号5课时4一、教学目的通过本实验的学习,使学生掌握植物总RNA的纯化及溶解的原理和方法。二、重点与难点重点是熟练掌握植物总RNA的纯化及溶解的方法实施步骤方法教学内容时间讲解和演示操作一、实验目的二、实验原理三、仪器、材料与

31、试剂四、实验步骤5min10min10min155min板书设计一、实验目的1.掌握蒽醌苷元的提取方法双相酸水解法。2. 掌握pH梯度萃取法的原理及操作技术。二、实验原理:1.提取原理双相酸水解法2.分离原理pH梯度法三、仪器、材料与试剂四、实验步骤1大黄酸的分离与精制2大黄素的分离与精制3芦荟大黄素的分离和精制五、注意事项:大黄中的蒽醌类成分大部分与糖结合,以蒽醌的形式存在于植物组织中。所以要用酸水解使其生成苷元。蒽醌苷元可溶于氯仿、苯及乙醚等有机溶剂,用苯时应注意苯蒸气的挥发,严防中毒;所得的氯仿液中如带有酸水液,应该用分液漏斗分出弃去,并用蒸馏水回洗一次除去酸性以免影响梯度萃取。氯仿提取

32、液放置中如有沉淀析出,可滤取之,该沉淀多为大黄素,余液进行下一步分离试验用。分离萃取时一定注意乳化层的分出,不要混入,并且每步最好用新鲜CHCl3,回洗碱水液。回洗液应弃去,可除去混入碱液中的大黄素甲醚和大黄酚。留取5ml的三氯甲烷提取液做总样,供最后层析鉴定用。六、实验报告:认真填写本次实验报告按照实验报告要求认真填写,并认真完成下次实验的预习大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定(二利用硅胶色谱法进行大黄酚及大黄素甲醚的分离方法,以及蒽醌类化合物鉴定技术。课外作业1.简述液液萃取的原理,溶剂选择原则和操作技术。2.什么是双相酸水解?3.pH梯度萃取法的原理是什么?该法适用于哪些中药成分的分

33、离?4.分离大黄中总蒽醌苷元的合适pH缓冲溶液是如何确定的?后附讲稿共页实验五大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定(一大黄记载于神农本草经等许多文献中,用于泄下、健胃、清热、解毒等。自古以来,大黄在植物性泻下药中占有重要位置,是一位很早就被各国药典所收载的世界性生药。大黄的种类繁多,优质大黄是蓼科植物掌叶大黄(Rheum palmatclm L,大黄(R. officinale Baill及唐古特大黄(R. tangutium Maxim.et Regll的根茎及根,大黄中含有多种游离的羟基蒽醌类化合物以及它们与糖所形成的苷。已经知道的羟基蒽醌主要有下列五种:O O OHR2OHR1R1R2

34、名称晶形熔点-H -COOH大黄酸(Rhein 黄色针晶318320-H -CH2OH芦荟大黄素(Aloe-emodin橙色细针晶206208-H -CH3大黄酚(Chyrsophanol 金色片状结晶196-CH3-OH大黄素(Emodin 橙色针晶256257-CH3-大黄素甲醚(Physcion 砖红色针晶207大黄中蒽醌苷元,其结构不同,因而酸性强弱也不同。大黄酸连有-COOH,酸性最强;大黄素连有-OH,酸性第二;芦荟大黄素连有苄醇-OH,酸性第三;大黄素甲醚和大黄酚均具有1,8-二酚羟基,前者连有-OCH3和-CH3,后者只连有-CH3,因而后者酸性排在第四位。一、实验目的1.掌握

35、蒽醌苷元的提取方法双相酸水解法。2. 掌握pH梯度萃取法的原理及操作技术。二、实验原理:1.提取原理双相酸水解法双相酸水解法,为一相为与酸水不相容的有机溶剂,另一相为酸水,加热回流水解的方法。由于大黄中的羟基蒽醌类化合物多以苷的形式存在,所以首先要将苷水解成苷元,本实验利用硫酸和三氯甲烷为双相酸水解的溶剂,采用加热回流发,提取大黄中的游离蒽醌类化合物。根据苷元不溶于水,可溶于乙醚,三氯甲烷等亲脂性有机溶剂的性质,在加热回流过程中,稀硫酸可将蒽醌苷水解成苷元,游离出来后溶于三氯甲烷,从而提取出来。2.分离原理pH梯度法根据蒽醌苷元酸性强弱不同,选用不同的pH碱液进行分步萃取,以分离酸度不同的蒽醌

36、苷元。大黄酸连有-COOH,酸性最强;大黄素连有-OH,酸性第二;芦荟大黄素连有苄醇-OH,酸性第三;大黄素甲醚和大黄酚均具有1,8-二酚羟基,前者连有-OCH3和-CH3,后者只连有-CH3,因而后者酸性排在第四位。三、仪器、材料与试剂实验试剂及试药:大黄药材粗粉2Kg,氯仿500ml 10瓶,浓硫酸2瓶,浓盐酸2瓶,冰醋酸,苯,乙酸乙酯,碳酸钠(5% Na2CO3溶液3000ml,碳酸氢钠(5% NaHCO3溶液3000ml,氢氧化钠(5% NaOH溶液1000ml,氢氧化钾,醋酸镁试剂等。实验仪器设备:500ml圆底烧瓶10个,冷凝回流管10只,500ml分液漏斗10只,500ml烧杯2

37、0只,100-250ml量筒10只,常压漏斗(5-10cm斗径10只,定性滤纸(10cm2盒,毛细管点样器1盒,玻璃喷瓶4套,广谱PH试纸5盒,纱布一卷,多孔水浴锅5台,旋转蒸发仪2台四、实验步骤 总蒽醌苷元的提取、分离工艺流程大黄粉50g,置于500ml烧瓶中,加20%硫酸溶液100ml和三氯甲烷250ml,水浴回流提取4h,放置,冷却后过滤,残渣弃去,三氯甲烷提取液置于分液漏斗中,分出酸水层,得三氯甲烷提取液。1大黄酸的分离与精制将含有总游离蒽醌的氯仿液移至500ml的分液漏斗中,加PH8缓冲液(5%NaHCO3溶液200ml振摇萃取多次,静置至彻底分层,放出氯仿液后,倒出碱水液至置250

38、ml烧杯中,搅拌下加20%HCl酸化至PH=3,待黄色沉淀析出完全后,过滤、少量水洗沉淀至洗出液为中性,干燥,干燥后的样品加冰醋酸10ml加热使溶,趁热过滤,滤液静置,析出黄色针晶为大黄酸,过滤,用少量冰醋酸淋洗结晶,即得纯品。2大黄素的分离与精制将提过大黄酸的氯仿液继续移至分液漏斗中,用PH10缓冲液(5%NaCO3溶液 300ml振摇萃取2次(2次,每次150ml,至碱液无色,彻底分层后,分出碱水层于500ml锥形瓶中,搅拌下并用20%HCl酸化至PH=2,析出棕黄色沉淀,抽滤,少量水洗沉淀至洗出液为中性,干燥,用15ml丙酮加热使溶,趁热过滤,析出橙色大针晶,过滤后,用少量丙酮淋洗结晶,

39、即得大黄素纯品。3芦荟大黄素的分离和精制余下氯仿液移至分液漏斗后,加5%NaCO3:5%NaOH (9:1 碱水液200ml振摇萃取2次,碱水液加HCl酸化,析出的沉淀过滤水洗干燥,用10ml乙酸乙酯重结晶,得黄色针晶的芦荟大黄素纯品。五、注意事项:大黄中的蒽醌类成分大部分与糖结合,以蒽醌的形式存在于植物组织中。所以要用酸水解使其生成苷元。蒽醌苷元可溶于氯仿、苯及乙醚等有机溶剂,用苯时应注意苯蒸气的挥发,严防中毒;所得的氯仿液中如带有酸水液,应该用分液漏斗分出弃去,并用蒸馏水回洗一次除去酸性以免影响梯度萃取。氯仿提取液放置中如有沉淀析出,可滤取之,该沉淀多为大黄素,余液进行下一步分离试验用。分

40、离萃取时一定注意乳化层的分出,不要混入,并且每步最好用新鲜CHCl3,回洗碱水液。回洗液应弃去,可除去混入碱液中的大黄素甲醚和大黄酚。留取5ml的三氯甲烷提取液做总样,供最后层析鉴定用。六、实验报告:按照实验报告要求认真填写,并认真完成下次实验的预习大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定(二利用硅胶色谱法进行大黄酚及大黄素甲醚的分离方法,以及蒽醌类化合物鉴定技术。天然药物化学实验教案首页课题实验六大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定(二编号6课时4一、教学目的通过本实验的学习,使学生掌握硅胶柱色谱的操作技术及蒽醌类化合物的化学鉴定及色谱鉴定技术。二、重点与难点重点是熟练掌握硅胶柱色谱的操作技

41、术。实施步骤方法教学内容时间讲解和演示操作一、实验目的二、实验原理三、仪器、材料与试剂四、实验步骤5min 10min 10min 155min板书设计一、实验目的1. 通过大黄酚及大黄素甲醚的分离试验,掌握硅胶柱色谱的操作技术。2. 掌握蒽醌类化合物的化学鉴定及色谱鉴定技术。二、实验原理大黄中游离蒽醌的极性大小顺序为:大黄酸>大黄素>芦荟大黄素>大黄素甲醚>大黄酚。前三种可用pH梯度萃取法分离。大黄酚和大黄素甲醚酸性相近,但极性不同,可用硅胶柱色谱法进行分离。总蒽醌及各种分离成分可用色谱法进行鉴别。同时硅胶柱色谱洗脱液可用色谱法鉴别后,合并单一成分的洗脱液。三、仪器、

42、材料与试剂四、实验步骤1. 硅胶柱色谱分离大黄酚及大黄素甲醚(1装柱:取一玻璃层析柱,垂直固定在铁架台上,在管的下端垫入少量棉花,装入100200目硅胶(约1/3高,湿法装柱。(2上样:将样品置于小蒸发皿中,用少量石油醚分散,另加用3倍量硅胶拌和均匀,并于水浴上缓缓蒸去溶剂。然后将含有样品的硅胶装入色谱柱的上端,并盖一圆形滤纸。(3洗脱:将色谱柱活塞打开,洗脱剂为石油醚(沸程30-60-乙酸乙酯(251混合液。(4收集:洗脱液3ml一份,分别收集,用硅胶薄层板跟踪检查,合并相同成分,回收溶剂,用甲醇重结晶,分别得到大黄素甲醚好大黄酚精制品。薄层色谱检查条件:硅胶G-CMC-Na薄层板,石油醚-

43、乙酸乙酯(9:1展开,可见光下显示黄色斑点,紫外光下显示亮黄色斑点,氨气熏,显示红色斑点。2. 游离蒽醌类化合物的鉴定1.化学检识:分别取总蒽醌提取物少许,用乙醚溶解,做如下反应:A:碱液试验:取试液1ml,加10%NaOH数滴,观察颜色。B.醋酸镁反应:取试样1ml,加醋酸镁试剂数滴,观察现象。2.薄层鉴定:吸附剂:硅胶-CMC-Na板展开剂:石油醚-乙酸乙酯-甲酸(15:5:1上层溶液。展开方式:上行展开。显色:可见光下显示黄色斑点,记录斑点出现位置;浓氨水熏蒸,显示红色斑点。观察记录斑点位置,记录图谱并计算Rf。五、注意事项:大黄中的蒽醌类成分大部分与糖结合,以蒽醌的形式存在于植物组织中

44、。所以要用酸水解使其生成苷元。蒽醌苷元可溶于氯仿、苯及乙醚等有机溶剂,用苯时应注意苯蒸气的挥发,严防中毒;六、实验报告:认真填写本次实验报告按照实验报告要求认真填写,并认真完成下次实验的预习牡丹皮中丹皮酚的提取、分离与鉴定。课外作业1.五种游离羟基蒽醌化合物的酸性和极性与结构有什么关系?Rf值顺序如何?后附讲稿共页实验六大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定(二一、实验目的1. 通过大黄酚及大黄素甲醚的分离试验,掌握硅胶柱色谱的操作技术。2. 掌握蒽醌类化合物的化学鉴定及色谱鉴定技术。二、实验原理大黄中游离蒽醌的极性大小顺序为:大黄酸>大黄素>芦荟大黄素>大黄素甲醚>大

45、黄酚。前三种可用pH梯度萃取法分离。大黄酚和大黄素甲醚酸性相近,但极性不同,可用硅胶柱色谱法进行分离。总蒽醌及各种分离成分可用色谱法进行鉴别。同时硅胶柱色谱洗脱液可用色谱法鉴别后,合并单一成分的洗脱液。 三、仪器、材料与试剂实验试剂及试药:大黄药材粗粉2Kg,氯仿500ml 10瓶,浓硫酸2瓶,浓盐酸2瓶,冰醋酸,苯,乙酸乙酯,碳酸钠(5% Na2CO3溶液3000ml,碳酸氢钠(5% NaHCO3溶液3000ml,氢氧化钠(5% NaOH溶液1000ml,氢氧化钾,醋酸镁试剂等。实验仪器设备:500ml圆底烧瓶10个,冷凝回流管10只,500ml分液漏斗10只,500ml烧杯20只, 100

46、-250ml量筒10只,常压漏斗(5-10cm斗径10只,定性滤纸(10cm2盒,毛细管点样器1盒,玻璃喷瓶4套,广谱PH试纸5盒,纱布一卷,多孔水浴锅5台,旋转蒸发仪2台。四、实验步骤1. 硅胶柱色谱分离大黄酚及大黄素甲醚(1装柱:取一玻璃层析柱,垂直固定在铁架台上,在管的下端垫入少量棉花,装入100200目硅胶(约1/3高,湿法装柱。(2上样:将样品置于小蒸发皿中,用少量石油醚分散,另加用3倍量硅胶拌和均匀,并于水浴上缓缓蒸去溶剂。然后将含有样品的硅胶装入色谱柱的上端,并盖一圆形滤纸。(3洗脱:将色谱柱活塞打开,洗脱剂为石油醚(沸程30-60-乙酸乙酯(251混合液。(4收集:洗脱液3ml

47、一份,分别收集,用硅胶薄层板跟踪检查,合并相同成分,回收溶剂,用甲醇重结晶,分别得到大黄素甲醚好大黄酚精制品。薄层色谱检查条件:硅胶G-CMC-Na薄层板,石油醚-乙酸乙酯(9:1展开,可见光下显示黄色斑点,紫外光下显示亮黄色斑点,氨气熏,显示红色斑点。2. 游离蒽醌类化合物的鉴定1.化学检识:分别取总蒽醌提取物少许,用乙醚溶解,做如下反应:A:碱液试验:取试液1ml,加10%NaOH数滴,观察颜色。B.醋酸镁反应:取试样1ml,加醋酸镁试剂数滴,观察现象。2.薄层鉴定:吸附剂:硅胶-CMC-Na板展开剂:石油醚-乙酸乙酯-甲酸(15:5:1上层溶液。展开方式:上行展开。显色:可见光下显示黄色

48、斑点,记录斑点出现位置;浓氨水熏蒸,显示红色斑点。观察记录斑点位置,记录图谱并计算Rf。五、注意事项:大黄中的蒽醌类成分大部分与糖结合,以蒽醌的形式存在于植物组织中。所以要用酸水解使其生成苷元。蒽醌苷元可溶于氯仿、苯及乙醚等有机溶剂,用苯时应注意苯蒸气的挥发,严防中毒;所得的氯仿液中如带有酸水液,应该用分液漏斗分出弃去,并用蒸馏水回洗一次除去酸性以免影响梯度萃取。氯仿提取液放置中如有沉淀析出,可滤取之,该沉淀多为大黄素,余液进行下一步分离试验用。分离萃取时一定注意乳化层的分出,不要混入,并且每步最好用新鲜CHCl3,回洗碱水液。回洗液应弃去,可除去混入碱液中的大黄素甲醚和大黄酚。留取5ml的三

49、氯甲烷提取液做总样,供最后层析鉴定用。六、实验报告:按照实验报告要求认真填写,并认真完成下次实验的预习牡丹皮中丹皮酚的提取、分离与鉴定。天然药物化学实验教案首页课题实验七牡丹皮中丹皮酚的提取、分离与鉴定编号7课时4一、教学目的通过本实验的学习,使学生掌握用水蒸气蒸馏法提取丹皮酚的方法及其检识方法。二、重点与难点重点使学生掌握用水蒸气蒸馏法提取丹皮酚的方法实施步骤方法教学内容时间讲解和演示操作一、实验目的二、实验原理三、仪器、材料与试剂四、实验步骤5min20min10min145min板书设计一、实验目的:l、掌握用水蒸气蒸馏法提取丹皮酚的方法。2、掌握丹皮酚的色谱检识和定性检识。二、实验原理

50、:丹皮酚具有挥发性,可随水蒸气蒸馏,又因在冷水中难溶故放冷后析出结晶。三、仪器、材料与试剂牡丹皮、蒸馏瓶、回流冷凝管、电炉、无水硫酸钠、氯化钠、95%乙醇等。四、实验步骤1. 丹皮酚的提取分离取市售丹皮100g,粉碎,加入450m1蒸馏水、10ml乙醇和40克氯化钠,浸润1h后,进行水蒸气蒸馏,收集蒸馏液约300ml,将蒸馏液放冷,静置过夜,有白色针状结晶析出,滤取结晶,干燥,称重。如结晶不纯,可加入95%乙醇至全部溶解(约为粗晶的15倍,抽滤,滤液中加入4倍量的蒸馏水,使溶液呈乳白色,静置后则有大量白色针状结晶析出,若在提取过程中得不到白色结晶,只有油珠状物质沉出,可在蒸馏液中加入少量晶种,

51、摩擦瓶壁后,即有较大量的丹皮酚结晶析出。也可用乙醚萃取蒸馏液几次,合并萃取液后,加无水硫酸钠脱水,回收乙醚至少量,放置析晶,抽滤,结晶用少量水洗23次,置干燥器中干燥后称重。2. 丹皮酚的鉴定1升华法产品粉末微量升华,后在显微镜下观察,可见长柱形或针状及羽状晶簇,于结晶上滴加三氯化铁溶液,则结晶溶液呈暗紫色,此为丹皮酚反应。2显色反应(1三氯化铁反应取丹皮酚结晶少许,滴加5%三氯化铁醇溶液,观察现象。(2与浓硝酸反应取丹皮酚结晶少许,滴加浓硝酸数滴,观察现象。3薄层色谱鉴别五、注意事项:1. 丹皮因产地、采收季节的不同,丹皮酚含量差异较大,春秋季节采收含量高,以四川产的含量较高,实验时可以根据

52、含量加减提取的药材量。2. 丹皮酚易溶于热水而难溶于冷水,若采用一般装置,由于初馏液中的丹皮酚浓度过大,遇冷易析出结晶,固着于冷凝管内壁,加入乙醇可把固着于冷凝管内壁的丹皮酚溶解而流人接收瓶中。3. 加入氯化钠可明显提高蒸馏速度,缩短摄取时间。六、实验报告按照实验报告要求认真填写,并认真完成下次实验的预习茶叶中提取咖啡因。课外作业1.在蒸馏前为什么在水中加入乙醇和氯化钠?2.在溶解后的丹皮酚乙醇溶液中为什么加入适量水?后附讲稿共页实验七牡丹皮中丹皮酚的提取、分离与鉴定牡丹皮为毛莨科植物牡丹Paeonia suffruticosa Andr.的干燥根皮。本品具有清热凉血,活血化瘀的作用,用于温毒

53、发斑,吐血,夜热早凉,无汗骨蒸,经闭痛经,肿痛疮毒,跌打损伤等症。其主要成分有:丹皮酚 (含量l.9%一2%、牡丹酚甙(丹皮酚甙、牡丹酚原甙(丹皮酚原甙 (含量5%一6%、牡丹酚新甙、芍药甙。尚含挥发油约0.15%0.4%及植物甾醇等。除此外,含丹皮酚的植物还有矮牡丹Paeonia suffruticosa Andr.var spontanea Rehd.的根皮,紫斑牡丹P.papaveracea Andr.的根皮,黄丹皮P.potanini Kom,四川牡丹P.szechuanica Fang,徐长卿Cynanchum pariculatum(BgeKitag。丹皮中主要成分的物理性质2、丹

54、皮酚甙(paeonoside:C15H20O8,无色柱状结晶(乙醇,mp8l82, 20为39.33°(c=6.0,H20,可溶于水、醇、丙酮、乙酸乙酯,微溶于氯仿、苯等。3、丹皮酚原甙(paeonolide:C20H28O12,无色柱状结晶(乙醇乙酸乙酯, mpl57158,20为18.20。(c=0.36,H20,可溶于水、醇、丙酮、乙酸乙酯,难溶于苯、石油醚等。一、实验目的:l、掌握用水蒸气蒸馏法提取丹皮酚的方法。2、掌握丹皮酚的色谱检识和定性检识。二、实验原理:丹皮酚具有挥发性,可随水蒸气蒸馏,又因在冷水中难溶故放冷后析出结晶。三、仪器、材料与试剂牡丹皮、蒸馏瓶、回流冷凝管、电炉