HPLC法测定人血浆中舒必利浓度及其人体药动学和相对生物利用

1、4!壁垫堂盘查垫竖±苎!兰查苎!塑.&坚翌生垡坠堕垫鲤!坠些磐!z兰堂!:!兰!型!:!HPLC法测定人血浆中舒必利浓度及其人体药动学和相对生物利用度研究袁洞君,阳利龙,祝文兵,何周康(湖南省儿童医院,湖南长沙41000r7摘要目的:建立HPLc法测定人血浆中舒必利浓度,并研究其药动学及相对生物利用度。方法:采用固相萃取HPLc法,以甲氧氯普胺为内标,乙腈:5mm洲L磷酸二氢钾溶液(45:55,V,V为流动相,检测波长:xex244nm,em280nm。18名受试者随机分成两组,采用双周期交叉试验设计,以HPLc法测定血药浓度,计算药动学参数并进行方差分析,以双单侧t检验进行

2、生物等效性判定。结果:舒必利血浆浓度在6.761689.6I耐mL范围内样品浓度与峰面积比之间线性关系良好,回归方程为Y=O.00289079x+ 0.00247349(r=0.9998,n=9,方法回收率90%一“O%,日内日间RSD<5%。18名男性健康志愿者单剂量口服100mg受试制剂或参比刺荆后AuCo_.M分别为(3996.O±579.5ng.hIllL一和(3939.6±469.7nghmL,AuCo.。分别为(4715.5±753.2 nghmL“和(4629.7±773.2ng.hmL一,T舭分别为(3.3±0.8h和(2

3、.7±1.Oh,C一分别为(362.9±118.7ngmL“和(358.9±98.9ngmL-。,t。,2分别为(10.3±3.8h和(9.7±4.1h。受试制剂对参比制剂的相对生物利用度为101.9%±13.7%。结论:HPLc 法能快速、准确的测定人血浆中的舒必利浓度;受试制剂与参比制剂具有生物等效性。关键词舒必利;高效液相色谱法;药动学;生物利用度中图分类号R969.1;R971.41文献标识码A【文章编号1672108×(200603一0004一03HPLC deternli眦廿on of吼npide in h硼伯n

4、 pl淞瑚and its phammcol【i耻廿c,and rela廿ve biVailabiH锣YUAN Dong-jun,YANG Li-10ng,ZHU Wen.bing,et al(劬i胁帆s月却扛耐矿mn PrDtdMe,肌啪凡c地,垮k410007,劬讹 Abstractobjec蜢ve:ro detemine sIllpiri如in human pla8ma with tIIe me山od of HPLC,and study its ph咖acokinetics,relative bioavailability. Metllod:A solidphaextmction aIld

5、 reversed-phe hjgh pedb瑚ance liquid chrom砒ogmphy me出od was ud,and metoclop随mide was applied as inteHIal standard,mobile ph鹤e w鹊set8setonitril肌d5咖01,L K心P04(45:55,V,V,and wavelengtIl,xex244姗,km280nm.Eighteen volunteers were瑚doIIlized into twogIoups.Group one6玛t received山e trial preparation sIllpiride

6、 tablets,alld tllen w鹊followedwith t11e ref-erence prep眦tion.Group two received the reference prep啪tion6rst,and w踮fbuowed wi山the trial prep啪tion.Pla锄a concentration of slllpiride w髂measu陀d by HPLc metIIod.ANOVA was used to check山e di珏brerIceof tlle ph锄acokinetic par锄eters between the two preP眦tions.

7、Bioeqllivalence was detenined by two one.sidedt.tests.Re砌ts:ne standard curves were linear within the r肌ge6.761689.6ngmL叫for sIllpiride in pl鹊ma,the regression eqIlation was A,AIs=O.002890r79x Conc.+O.00247349(r=O.9998,n=9.弧e recovery aVeraged between90%一110%.ne mearI interand in吨ssaycoemcien协vari8t

8、ion懈1e髓tIlan5%.ne ph删cokinetic p锄meters,AUCo斗36, AUC0_.。,Ik,C曲。and t1,2of the volumeers after taking a sinde dose of100mg of山e trial preparation or the comparison preparation were (3996.0±579.5nghmL一1&(3939.6±469.7nghmL一1,(4715.5±753.2nghmL。1&(4629.7±773.2nghmL一1,(3.3

9、7;O.8h&(2.7±1.0h,(362.9±118.7ngmLand(358.9±98.9ngmL,(10.3±3.8h&(9.7±4.1h,respectiVely.ne rel撕ve bioavailability was101.9%±13.7%.C伽cllls置。璐:-nle methods c8n dete硼ine sulpiride in the hu姗plas眦qIlicl【ly and corTecy and the two prep啪tions arequivalent.Key wor凼sIllpi

10、ride;High pe面mance liqIlid chmmatq旷aphy;Ph明nacokinetic;Bioavailability舒必利为苯甲酰胺类抗精神病药物,是特异性多巴胺D,受体拮抗剂,具有与氯丙嗪相似的抗精神病效应,同时能止吐并抑制胃液分泌,临床主要用于精神分裂症的系统治疗,顽固性恶心、呕吐的对症治疗,也可用于胃及十二指肠溃疡、眩晕、偏头痛等o¨。舒必利现有规格一般为100嘴或200mg片剂,为了临床用药方便,特别是小儿用药的方便,雅柏药业(中国有限公司开发了舒必利50嘴胶囊剂。本研究比较了该公司的舒必利胶囊与国外已上市胶囊在健康人体内的药动学和相对生物利用度,对两

11、种制剂进行了生物等效性评价,为新剂型申请注册和临床应用提供依据。1材料1.1药品与试剂受试制剂舒必利胶囊(50IIlg,片,雅柏药业中国有限公司,批号:T一407503,T,参比制剂舒必利胶囊(商品名DOGMATIr,50mg/粒,Labomtoires Symhelabo, Syntllelabo Gmupe,批号:xMu068,R,舒必利标准品(雅柏药业中国有限公司,含量98.4%,批号:Rw万方数据0506060,内标甲氧氯普胺由甲氧氯普胺片剂(长春达兴药业有限公司提取,经HPLC归一化法测定含量达99.5%。乙腈、甲醇为色谱纯,磷酸二氢钾为分析纯,水为二重蒸馏水,其它试剂均为国产分析纯

12、(AR级。1.2研究对象受试者均为健康男性,年龄(22.5±1.3岁,体重(62.7±4.7kg,身高(172.7±4.1cm,无烟酒嗜好,试验前经询问病史、体格检查和实验室检查未发现异常。受试者无药物过敏史和药物依赖史,元慢性病史,2周内未服用任何药物。受试期间统一清淡饮食,不使用除试验药物以外的任何药物,不接受烟、酒及含咖啡因的饮料,受试者试验前签署知情同意书,并经伦理委员会审批同意。1.3主要仪器Agilent1100HPLc,配备FLD检测器,che麟tation 工作站(美国安捷伦公司;TGL16一w微量高速冷冻离心机(长沙湘仪离心机仪器有限公司;WH一

13、2微量旋涡混合仪(上海沪西分析仪器厂;BEsEP12管固相萃取装置(Supelco company,美国。固相萃取柱: Cleanert ODSsPE1mL(北京艾杰尔科技有限公司。2人血浆中舒必利浓度测定方法2.1标准溶液的配制精密称取舒必利标准品19.8IIlg置于25mL容量瓶中,用50%甲醇溶解并定容至刻度,得舒必利浓度为792肛g/mL的对照品贮备液。分别取该溶液适量,加甲醇稀释,得浓度为63.36扯g/mL、12.67肛g/n1L、2.53肛mL的舒必利标准液,置4冰箱中保存备用。用甲醇配制20弘g/mL甲氧氯普胺标准液作为内标。2.2色谱条件色谱柱:依利特Hypersil cN柱

14、(4.6mm×200mm, 5“m;柱温:40;流动相:乙腈:5船nol/L磷酸二氢钾溶液(45:55,V,V;流速:1.0mL,IIlin;检测波长:入ex 244nm。入em280nm。2.3样品处理精密吸取0.75mL血浆,置2mL离心管中,加入10血甲氧氯普胺内标溶液,旋涡混匀,血浆上柱(萃取小柱经2mL甲醇和2mL水处理,待血浆全部通过小柱后先用l mL水洗脱,弃去洗脱液,然后用2mL甲醇洗脱,甲醇洗脱液于55水浴氮气吹干,残渣用甲醇100肛L溶解,3000r/IIlin离心5IIlin,取上清液20灿进样。记录色谱图,以内标法(峰面积比定量。2.4色谱行为空白血浆、舒必利

15、和内标对照品溶液、空白血浆+舒必利和内标对照品溶液以及志愿者服药后血浆样品色谱图见图1。由图可见,在上述色谱条件下,舒必利5的保留时间约为7.9戚n,内标的保留时间约为11.3 rnin,血浆中内源性物质及其它杂质不干扰样品的分离测定。2.5标准曲线用空白血浆将舒必利标准液稀释成6.76、13.51、27.03、54.06、101.36、202.72、422.4、844.8、l689.6ng/lllL 系列浓度的血浆样品,按样品处理方法处理并测定,以舒必利和内标峰面积比定量,得浓度与峰面积比的回归方程为:Y=0.00289079X+0.00247349(r=0.9998,线性范围6.76168

16、9.6ng,IIlL。2.6回收率与精密度试验用空白血浆配制相当于舒必利浓度为27.O、220.7、844.8nmL的血样,每个浓度取5份按上法平行操作,得回收率及日内RSD;每天取上述血样各5份连续测定3日,得日间RSD。结果见表1。表1方法回收率及精密度3药动学及生物利用度试验3.1试验设计与方法采用双周期双交叉试验设计,18名志愿者随机分成两组,第1组先服用受试制剂,后服用参比制剂,第2组先服用参比制剂,后服用受试制剂。周期间清洗期14d。志愿者禁食12h后,于清晨顿服舒必利100 mg(受试制剂或参比制剂2粒,于服药前和服药后O.25、0.5、1.0、1.5、2.0、3、4、6、8、1

17、2、24、36h抽取静脉血各3mL。2周后交叉服药,同时间点取血,血样置含有肝素的离心管中,立即离心,分离出血浆,置一20冰箱中保存至测定。3.2数据处理与统计分析T眦、c均用实测值;AuCp,。以梯形面积法求得;T TrTF=等祟竽×100%;末端消除速率常数p用对数血药ULO一36浓度一时间曲线末端直线部分的斜率求得;t。,:= 0.693/B;AuC一。=AUCp36+C36/p。AUc归36和C。经对数转换后进行药物间、周期间、个体间的三因素方差分析,再以双单侧f检验进行等效性判断。T。经对数转换后进行方差分析。3.3药代动力学研究结果18名志愿者单剂量口服用两种舒必利胶囊1

18、00 mg后的平均血药浓度一时间曲线见图2,主要药动学参数见表2。万方数据6ALuB 10岫5C D A.空白血样B.对照品c.空白血样+对照品D.志愿者血样图1HPLc色谱图(1一舒必利2一内标D5lO15202530图2平均血药浓度一时间曲线表2两种舒必利胶囊的主要药动学参数(露±s3.4相对生物利用度结果受试制剂相对参比制剂的相对生物利用度为1叭.9%±13.7%,方差分析结果表明受试制剂和参比制剂的各主要药动学参数之间差异无统计学意义(尸>0.05。双单侧t检验结果表明,受试制剂AUC。铂对数值的90%可信限落在参比制剂94.5%。108.4%之间,受试制剂c一对数值的90%可信限落在参比制剂89.7%一118.9%之间,可认为受试制剂与参比制剂为生物等效制剂。4讨论本研究建立的血浆中舒必利HPLc测定方法,较文献方法阻31有较大改进,将血浆样品用固相萃取方法处理,得到的样品非常干净,色谱图无干扰,且回收率较高,可用于舒必利的药动学和生物利用度研究。本品口服吸收约3h达到血药浓度峰值,平均tm(8约为10h,与文献报道相似。舒必利药动学及生物利用度研究文献报道很少,本组比较研究了舒必利受试制剂和参比制剂在健康受试者体内的药动学特征,各主要药动学参数之间没有显著差异,说明受试制剂与参比制剂