流式biolegend

1、流式抗体新选择流式抗体新选择 -Biolegend-Biolegend公司公司达科为公司技术达科为公司技术 贾晓俊贾晓俊主要内容主要内容流式细胞术的基本概念v 流式细胞术（Flow Cytometry, 简称FCM）是一种可以快速快速、准确准确、客观客观，并且同时检测单个单个微粒（通常是细胞）的多项多项特性，并加以定量定量的技术，同时可以对特定群体加以分选分选v 研究对象为生物颗粒颗粒，如各种细胞细胞、微生物微生物及人工合成微球微球等v 研究的微粒特性包括多种物理物理及生物学特征特征，并加以定量定量液流系统 光学系统数据处理系统流式细胞仪及其结构前向散射光（FSC）：反映细胞相对大小侧向角散射

2、光（SSC）：反映细胞粒度及细胞内相对复杂性前向角检测器前向角检测器 FSCLaser光学系统-散射光信号测向角检测器测向角检测器 sSC激光光源SSCFSC外周血细胞散射光双参数点图全血溶红后流式检测图全血溶红后流式检测图不同的荧光染料标记不同的细胞抗原。不同的荧光染料在受到激发光激发后发射出不同波长的荧光。根据荧光波长的不同可区不同的细胞抗原。根据荧光信号的强弱可反映细胞抗原的表达含量。FITCPE-Cy5PE光学系统-荧光素荧光信号单分子荧光素单分子荧光素耦合的复合荧光素分子耦合的复合荧光素分子新型的荧光素样荧光物质新型的荧光素样荧光物质QdotsQdots荧光素种类荧光染料与流式仪器搭

3、配图荧光染料与流式仪器搭配图此图为Biolegend公司提供，供流式多色配色参考使用CD3-FITCCD19-PEPI - Fluorescence# Evnts正常正常G0/G1G0/G1期细胞期细胞流式数据显示直方图直方图 ( Histogram )( Histogram )二维点图二维点图(Dot Plot)(Dot Plot)三维图（三维图（3D Plot3D Plot）等）等直方图直方图 ( Histogram ) ( Histogram ) 二维点图二维点图(Dot Plot) (Dot Plot) 凋亡细胞峰凋亡细胞峰 等高线图等高线图(Contour Plot)(Contour

4、 Plot) 密度图密度图 (Density)(Density)主要内容主要内容 粘附分子CD分子及相关蛋白共刺激分子 先天免疫类MHC抗体细胞因子、趋化因子及其受体核转录因子T细胞受体T细胞（细胞（TCRs, Th, Treg等）等）B B 细胞（细胞（BregBreg等）等）树突状细胞粒细胞（嗜酸性、嗜中性、嗜碱性）单核/巨噬细胞NK细胞干细胞 .用于研究流式抗体应用主要领域目前研究热点NK.Th1/Th2细胞的鉴定细胞的鉴定Th1Th1类细胞特征性分子为类细胞特征性分子为IL-2IL-2、 IFN- IFN-，主要参与机体的细胞免疫反应。，主要参与机体的细胞免疫反应。Th2Th2类细胞特

5、征性分子为类细胞特征性分子为IL-4IL-4、IL-10IL-10，主要参与，主要参与 机体的体液免疫反应。机体的体液免疫反应。正常状态下，正常状态下，Th1Th1和和Th2Th2类细胞在机体处于一种平衡状态，当机体发生病变（肿瘤、自身免疫类细胞在机体处于一种平衡状态，当机体发生病变（肿瘤、自身免疫性疾病、微生物感染、移植排斥）时，其比例会发变化性疾病、微生物感染、移植排斥）时，其比例会发变化。Alexa Fluor 700 Anti-human IFN-PerCP/Cy5.5 Anti-human IL-2PE Anti-human CD3PMA+ionomycin刺激人外周血细胞6小时后I

6、FN-（克隆号：B27）和IL-2（克隆号：MQ1-17H12）染色流式分析图Th1 Th1 细胞的鉴定细胞的鉴定-分泌人分泌人IL-2IL-2、 IFN-的细胞的细胞 IFN- Alexa Fluor 700 IL-2 PerCP/Cy5.5 Th1 Th1 细胞的鉴定细胞的鉴定-分泌分泌IL-2IL-2、 IFN IFN-的细的细胞胞PE Anti-mouse IL-4PE/Cy7 Anti-mouse CD4PE Anti-mouse IL-10PE/Cy5 Anti-mouse CD4 Th2 Th2 细胞的鉴定细胞的鉴定-分泌分泌IL-4IL-4、 IL-10IL-10的细胞的细胞I

7、L-4 PEIL-10 PEPMA+ionomycin刺激小鼠外周血细胞6小时后IL-10（克隆号：JESS-16E3）和IL-4（克隆号:11B11）染色流式分析图 Th17 Th17 细胞的鉴定细胞的鉴定-分泌分泌IL-17IL-17的的T T细胞细胞Th17细胞主要一群与IL-23相关且能分泌IL-17的新的Th亚群。在介导机体的炎症反应方面有重要作用。Anti-human IL-17 Alexa Fuor 647/CD3 FITC/CD4 PE cocktail（Cat#339401）包含所需全部试剂：抗体、同型对包含所需全部试剂：抗体、同型对照、固定剂、破膜剂照、固定剂、破膜剂操作简

8、单方便！操作简单方便！CD3 FITCPMA+ionomycin刺激人外周血细胞6小时后Th17细胞染色流式分析图一步法试剂盒 Th17 Th17 细胞的鉴定细胞的鉴定-分泌分泌IL-17IL-17的的T T细胞细胞TregTreg细胞是CD4+/CD25+/FOXP3+ 阳性的T细胞，来源于脾脏，占外周血CD4细胞的2-10%。这类细胞参与机体的免疫应答与免疫耐受的调控，在肿瘤免疫及移植免疫调节中起重要作用。目前，Treg细胞已越来越多的成为一项常规的临床检测指标。 Treg Treg细胞的鉴定细胞的鉴定-表达表达FOXP3FOXP3核转录因子核转录因子Alexa Fluor 488 ant

9、i-human FOXP3/CD25 PE/CD4 PerCP antibody cocktail (FOXP3 ,Clone 206D)一步法Treg盒子检测（ FOXP3 Alexa Flour 488/CD25 PE/CD4 PerCP ）人外周血PBMC流式结果分析图一步法试剂盒 包含所有检测试剂！省去麻烦的操作步骤！真正的省时、省力，省钱！ Treg Treg细胞的鉴定细胞的鉴定-表达表达FOXP3FOXP3核转录因子核转录因子Alexa Fluor 488 anti-human FOXP3/CD25 PE/CD4 PerCP antibody cocktail (FOXP3 ,Cl

10、one 206D)一步法Treg盒子检测（ FOXP3 Alexa Flour 488/CD25 PE/CD4 PerCP ）人外周血PBMC流式结果分析图TregTreg细胞的鉴定细胞的鉴定-表达表达FOXP3FOXP3核转录因子核转录因子一步法试剂盒 包含所有检测试剂！省去麻烦的操作步骤！真正的省时、省力，省钱！MDSCMDSC细胞的鉴定细胞的鉴定Purified Anti-mouse Ly-6G/Ly-6C (Gr-1) AntibodyAPC Anti-human CD11b Antibody PerCP/Cy5.5 Anti-human CD33 Antibody MDSCMDSC细

11、胞的鉴定细胞的鉴定CD11b APCCD33 PerCP/Cy5.5Gr-1 Alexa Fluor 647 树突细胞树突细胞（DC）的鉴定的鉴定 是机体主要的抗原递呈细胞。是机体主要的抗原递呈细胞。 可激活可激活CD8+CD8+、CTLCTL及及CD4+CD4+细胞，控细胞，控制体内免疫反应的过程，在免疫应答制体内免疫反应的过程，在免疫应答中处于中心地位。中处于中心地位。 人人DCDC的主要特征性表面标记是的主要特征性表面标记是CD1CD1， 小鼠小鼠DCDC的主要特征性表面标记是的主要特征性表面标记是CD11cCD11c。 CD83 CD83是成熟是成熟DCDC细胞的表面标记细胞的表面标记

12、 另外，比较常用的还有另外，比较常用的还有CD80CD80、CD86CD86、HLA-DRHLA-DR这些标记随着这些标记随着DCDC细胞细胞的成熟表达量增加的成熟表达量增加DCDC功能：功能：DCDC标记标记DCDC 流式多色搭配及产品图流式多色搭配及产品图树突细胞树突细胞（DC）的鉴定的鉴定荧光素荧光素抗体名称抗体名称FITCFITCAnti-human CD1a AntibodyAnti-human CD1a AntibodyPerCP PerCP Anti-human HLA-DR AntibodyAnti-human HLA-DR AntibodyAPC APC Anti-human

13、 CD86 AntibodyAnti-human CD86 AntibodyPEPEAnti-human CD80 AntibodyAnti-human CD80 AntibodyFITC CD1aPE CD80自然杀伤（自然杀伤（NKNK）细胞的鉴定）细胞的鉴定FITC CD56PE Perforin NK NK细胞细胞(natural kilIer ce11s ) (natural kilIer ce11s ) 是机体重要的免疫细胞，它能够非特异地溶解各种病毒是机体重要的免疫细胞，它能够非特异地溶解各种病毒感染的细胞和肿瘤，而且在某些情况下参与超敏反应和自身免疫性疾病的发生。感染的细胞和肿

14、瘤，而且在某些情况下参与超敏反应和自身免疫性疾病的发生。 CD56 CD56 分子是分子是NKNK细胞表面特有的标记，颗粒酶细胞表面特有的标记，颗粒酶A A、穿孔素、穿孔素、NKG2DNKG2D在其杀伤功能发挥中起重在其杀伤功能发挥中起重要作用。要作用。主要内容主要内容带来不可控因素，降低实验的带来不可控因素，降低实验的特异性，影响结果的准确性特异性，影响结果的准确性 叠氮化物叠氮化物：可以阻断线粒体的电转运：可以阻断线粒体的电转运系统，对大多数的有机体有毒性。在系统，对大多数的有机体有毒性。在体内，叠氮化物和氰化物相似，对细体内，叠氮化物和氰化物相似，对细胞色素氧化酶和其它酶有抑制作用，胞色

15、素氧化酶和其它酶有抑制作用，并能使体内氧合血红蛋白的形成受阻，并能使体内氧合血红蛋白的形成受阻，有显著的降压作用；同时对眼和皮肤有显著的降压作用；同时对眼和皮肤有刺激性。有刺激性。 内毒素内毒素在体内：可引起一系列反应，包括在体内：可引起一系列反应，包括各种炎症反应，低血压，白细胞数异常，各种炎症反应，低血压，白细胞数异常，血管内血凝结，休克甚至致死。血管内血凝结，休克甚至致死。在体外：内毒素可以与在体外：内毒素可以与CD14CD14以及其他一些以及其他一些受体反应，诱导单核细胞以及巨噬细胞释受体反应，诱导单核细胞以及巨噬细胞释放细胞因子放细胞因子，触发补体系统，促进，触发补体系统，促进B B

16、细细胞分裂。胞分裂。 内毒素内毒素0.01ng/u0.01ng/ul lLEAF系列抗体-功能学实验首选功能学实验首选LEAF系列抗体的应用人CD3抗体（UCHT1）活化T细胞。人外周血获得的T细胞分别与U.CHT1（）、CD28抗体（）、UCHT1+CD28抗体（）孵育，然后测上清液中TNF-的分泌量。A，TNF-的分泌量随孵育时间的变化；B， TNF-的分泌量随抗体用量的变化。 Lafont, V., et al., 2000. J. Biol. Chem. 275:19282. PubMedLEAF系列抗体应用-活化细胞小鼠VEGF抗体可以中和VEGF，从而阻断了VEGF诱导的小鼠内皮细

17、胞增殖 LEAF系列抗体应用阻断抗体小鼠CD25抗体（clonePC61）用于清除E16小鼠体内CD4+CD25+细胞。清除结果用小鼠外周血流式进行了比较。Blood. 2005 June 15; 105(12): 48654870 LEAF系列抗体应用细胞清除Biolegend为您提供为您提供主要内容主要内容ELISAELISA系列规格系列规格( (以以IL-8IL-8为例）为例） Recombinant Human IL-8 (ELISA Std.) ：标准品 Human IL-8 ELISA MAX Standard ： 包被抗体、 检测抗体、Avidin-HRP、 标准品。 Human

18、 IL-8 ELISA MAX Deluxe ：未包被板子、包被抗体、 包被液、 检测抗体、Avidin-HRP、 稀释液、 标准品 、TMB底物。 LEGEND MAX Human IL-8 ELISA Kit ：预包被IL-8可拆卸板子、检测抗体、标准品、 Avidin-HRP、稀释液、低物、终止液、封板膜。主要内容主要内容 液相芯片多因子检测技术 检测原理-微球加工 检测原理检测标本与应用 检测原理检测优势 液相芯片多因子检测技术 Biolegend相关检测指标 Biolegend相关检测指标 液相芯片多因子检测技术 向厂家定购产品步骤主要内容主要内容 达科为2009年Biolegend销售量分析 技术电话mail: jia_同型对照 同型对照（Isotype Control） ： 与实验染色的单克隆抗体特异性无关的免疫球蛋白亚型 与染色的单克隆抗体 相同种属来源 相同免疫球蛋白及亚型 相同荧光素标记 相同剂量和浓度 用于消除由于抗体非特异性结合到细胞表面的Fc受体而产生的背景染色 例如，标记FITC的单克隆抗体为小鼠IgG1亚类抗体，标记PE的单克隆抗体为小鼠IgG2a亚类抗体，同型对照应选用相同浓