液相色谱法的条件试验

1、液相色谱法的条件试验 孟照明 20目录实验目的实验原理仪器与试剂实验步骤仪器清洗（结束工作）（结束工作）一、实验目的一、实验目的掌握色谱分析的原理掌握高效液相色谱仪的基本结构和工作原理掌握SY-8100高效液相色谱仪的基本操作步骤掌握HPLC条件试验的方法以及分离条件的确定二、实验原理二、实验原理本次实验采用ODS-C18色谱柱，以甲醇+水混合液为流动相，根据混合物中萘、联苯和菲在固定相与流动相间分配性质的不同，进行分离。不同比例的甲醇+水混合液为流动相，流动相的极性发生改变，因此混合液的分离条件也发生了改变，选择能将混合液中各组分能充分分离并且相对分析时间短的条件，综合确定HPLC法分析萘、

2、联苯、菲的分析条件，完成对混合液的分析。检测器采用紫外分光（UV）检测器，检测波长为254nm。三、仪器与试剂三、仪器与试剂仪器：仪器： SY-8100高效液相色谱仪1台 KQ-50B超声波清洗器1台 AP-01P真空泵1台 过滤装置1套 微量注射器50L1支 容量瓶50mL7只药品：药品： 萘（G.R.）、联苯（G.R.）、菲（G.R.）、甲醇（G.R.）、二次蒸馏水四、实验步骤四、实验步骤流动相的准备流动相的准备1、流动相的过滤 安装抽滤装置，选用有机相过滤膜，过滤试剂甲醇；选用无机相过滤膜，过滤二次蒸馏水。2、流动相的脱气 将盛有过滤好甲醇、二次蒸馏水的试剂瓶分别放于超声波清洗器中，进行

3、脱气处理。仪器的准备仪器的准备1、更换流动相 将A泵的输液管放入处理好的甲醇试剂瓶中；B泵的输液管放入处理好的二次蒸馏水试剂瓶中。2、分别排除A、B两个泵输液管中的气泡3、开启高压泵A、高压泵B、UV检测器、混合器的电源，打开工作站 分析步骤分析步骤1、分别设置两个高压泵的流量，使总流量为F1.00mL/min，分别启动两泵2、待基线稳定后，完成标样的分析，记录分析所获得的各组分的保留时间、理论塔板数、分离度。数据填表3、选择最佳流动相配比，调整A、B两泵的流量。待基线稳定后吸取标样，完成分析后建立组分表，再完成试样的分析，测得试样中萘、联苯和菲的含量，完成实验 2013年11月19日第四组实

4、验数据保留时间分离度理论塔板次数萘联苯菲萘联苯菲萘联苯菲04.314.555.1601.413.381545415863163230.024.434.725.4201.673.611564415227152230.044.755.165.9902.193.891544215275150470.064.925.446.4302.444.151388813132139150.085.367.2103.014.581324313090143500.10 5.616.517.9903.64.981319912896135320.126.267.519.3404.455.4713196135771437

5、905101520251234567保留时间组成系列4系列3系列2系列10246810121234567分离度组成系列3系列2系列1050001000015000200002500030000350004000045000500001234567理论塔板数组成系列3系列2系列1结论：根据上述数据和折线图分析确定最适宜的为第四组数据。根据最适宜条件测出以下数据：保留时间保留时间分离度分离度理论塔板理论塔板组分标样组分标样5.165.165.745.746.766.760 02.852.854.414.41163231632315535155351663516635峰高峰高峰面积峰面积结果结果萘萘联苯联苯菲菲萘萘联苯联苯菲菲萘萘联苯联苯菲菲未知试样未知试样 17145117145148635048635020239120239110985311098531 349777634977761630711630710.03530.03530.03780.03780.01010.0101五、仪器的清理