-病原性球菌的检验课件

1、-病原性球菌的检验第一页，共四十五页。-病原性球菌的检验一、生物学特性一、生物学特性(txng) （一）形态与染色一）形态与染色： 革兰氏阳性革兰氏阳性球型菌，排列球型菌，排列(pili)呈葡萄状。呈葡萄状。无芽胞、无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜。鞭毛，大多数无荚膜。 致病性葡萄球菌（致病性葡萄球菌（金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌）菌体较小、）菌体较小、约约0.51um., 普通普通0.41.2um。第一节第一节 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌(p to qi jn)及其检及其检验验 第二页，共四十五页。-病原性球菌的检验电镜照片(zhopin) 第三页，共四十五页。-病原性球菌的检验（二）、葡萄球菌

2、（二）、葡萄球菌(p to qi jn)的分类的分类 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌(p to qi jn) 表面葡萄球菌表面葡萄球菌 腐生葡萄球菌腐生葡萄球菌第四页，共四十五页。-病原性球菌的检验（三）、金黄色葡萄球菌（三）、金黄色葡萄球菌(p to qi jn)培养特性培养特性 1、需氧或兼性厌氧，最适生长、需氧或兼性厌氧，最适生长(shngzhng)(shngzhng)温度温度37、PH7.42、对营养要求不高，在普通培养基中生长、对营养要求不高，在普通培养基中生长良好，加少量葡萄糖或血液生长更旺盛。良好，加少量葡萄糖或血液生长更旺盛。3、耐盐性强，在含、耐盐性强，在含7.515% %培养

3、基中能生培养基中能生长。长。第五页，共四十五页。-病原性球菌的检验4 4、在肉汤中是混浊生长，时间过长，、在肉汤中是混浊生长，时间过长，有少量沉淀。有少量沉淀。5 5、在普通培养基上生长，可形成圆形，凸、在普通培养基上生长，可形成圆形，凸起，表面光滑，边缘整齐，不透明，直起，表面光滑，边缘整齐，不透明，直径径1 12mm2mm的菌落能产生黄色的菌落能产生黄色(hungs)(hungs)色素。色素。第六页，共四十五页。-病原性球菌的检验第七页，共四十五页。-病原性球菌的检验（四）、金黄色葡萄球菌（四）、金黄色葡萄球菌(p to qi jn)生化特生化特性性 1 1、可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖可分

4、解葡萄糖、麦芽糖、乳糖(r tn)、蔗糖蔗糖，产酸不产气。，产酸不产气。第八页，共四十五页。-病原性球菌的检验（五）（五）金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌能产生能产生(chnshng)(chnshng)的毒素和酶的毒素和酶 1、溶血毒素、溶血毒素2、杀白细胞素、杀白细胞素3、血浆凝固、血浆凝固(nngg)酶酶：区分葡萄球菌是否具有致区分葡萄球菌是否具有致病性的重要标志。病性的重要标志。 4、脱氧核糖核酸酶、脱氧核糖核酸酶：5、肠毒素、肠毒素6、溶纤维蛋白酶、溶纤维蛋白酶7、透明质酸酶、透明质酸酶第九页，共四十五页。-病原性球菌的检验二、二、金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌(p to qi jn)的致病

5、的致病性性 金黄色葡萄球菌是人类化脓感染(gnrn)中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染(gnrn)，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染(gnrn)。附：附：金黄色葡萄球菌引起的下颚感染金黄色葡萄球菌引起的下颚感染金黄色葡萄球菌引起的须疮感染金黄色葡萄球菌引起的须疮感染葡萄球菌感染创口的革兰氏染色涂片葡萄球菌感染创口的革兰氏染色涂片第十页，共四十五页。-病原性球菌的检验第十一页，共四十五页。-病原性球菌的检验金黄色葡萄球菌引起的须疮金黄色葡萄球菌引起的须疮(x chun)感染感染 第十二页，共四十五页。-病原性球菌的检验葡萄球菌创口葡萄球菌创口(chungku)感

6、染革兰氏染色涂感染革兰氏染色涂片片 第十三页，共四十五页。-病原性球菌的检验（一）金黄色葡萄球菌（一）金黄色葡萄球菌(p to qi jn)的流行的流行病学病学 金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。作为人和动物的常见病原菌，其主要存在于人和动物的鼻腔、咽喉、头发上，50%以上健康人的皮肤上都有金黄色葡萄球菌存在。因而，食品受其污染的机会很多。近年来，美国疾病(jbng)控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。附：附：美国美国FDA报告的由金黄色葡萄球菌引起食物中毒的典报告的由金黄色葡萄球菌引起食物中毒的典型案例型案例。媒体关于

7、日本雪印牛奶金黄色葡萄球菌中毒事件的报道媒体关于日本雪印牛奶金黄色葡萄球菌中毒事件的报道第十四页，共四十五页。-病原性球菌的检验媒体关于日本媒体关于日本(r bn)雪印牛奶金黄色葡萄雪印牛奶金黄色葡萄球菌中毒事件的报道球菌中毒事件的报道日本因食用染菌乳制品中毒者已逾万人 (7月6日12:39) 大阪市政府日宣布的调查结果显示，因食用日本雪印乳业公司大阪工厂生产的乳制品而中毒者已逾万人。 在大阪府和京都府以及附近县，因食用雪印乳业公司大阪工厂生产的乳制品而中毒发病者已达人，其中有人被送往医院，目前还有人在医院接受治疗。 据化验，该工厂生产的一些乳制品中含有黄色葡萄球菌，这种细菌可产生使人出现腹泻

8、、呕吐症状的型肠毒素。该厂乳制品染菌是生产设备没有按规定定期清洗而造成的。 目前，日本各地超市和食品店都已停止销售(xioshu)雪印牌乳制品，一些地方政府已下令禁止食用雪印牌食品。大阪雪印厂已被当地政府勒令无期限停产，并且大规模回收月下旬出厂的几种染菌食品。 总部设在北海道首府札幌市的雪印乳业公司是日本著名乳制食品厂家。该公司在全国共拥有家工厂，其中家工厂加工生产牛奶、牛奶饮料、酸奶等奶品。 第十五页，共四十五页。-病原性球菌的检验流行病学一般流行病学一般(ybn)有如下特点有如下特点季节分布，多见于春夏季；季节分布，多见于春夏季；中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。中毒食品种类多，如

9、奶、肉、蛋、鱼及其制品。此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道。上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83%，所以人畜化脓性感染部位常成为污染源。一般说，金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品：食品加工人员、炊事员或销售人员带菌，造成食品污染；食品加工人员、炊事员或销售人员带菌，造成食品污染；食品在加工前本身带菌，或在加工过程中受到了污染，产生了肠毒素，引起食物中毒；食品在加工前本身带菌，或在加工过程中受到了污染，产生了肠毒素，引起食物中毒；熟食制品包装不严，运输过程受到污染；熟食制品包装不严，运输过程受到污染；奶牛患化脓奶牛患化脓(hu nng)性乳腺炎

10、或禽畜局部化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓(hu nng)时，对肉体其他部位的污染时，对肉体其他部位的污染第十六页，共四十五页。-病原性球菌的检验金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌(p to qi jn)肠毒素肠毒素金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大则更多，占45%，我国每年发生的此类中毒事件也非常多。肠毒素形成条件：存放温度，在37C内，温度越高，产毒时间越短；存放地点，通风(tng fng)不良氧分压低易形成肠毒素；食物种类，含蛋白质丰富，水分多，同时含一定量淀粉的食物，肠毒素易生成。第十七页，共四十五页。-病原性球菌

11、的检验（二）食物中毒(shwzhngd)的临床症状 由肠毒素引起 毒素进入人体后，潜伏期国1-5小时,最短15分钟,有发病快消失快的特点 症状：先唾液分泌(fnm)亢进,恶心、反复呕吐、腹痛、水样腹泻等第十八页，共四十五页。-病原性球菌的检验金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌(p to qi jn)污染的控制污染的控制 防止金黄色葡萄球菌污染食品 防止带菌人群对各种食物的污染：定期对生产加工人员进行健康检查，患局部化脓性感染（如疥疮(jichung)、手指化脓等）、上呼吸道感染（如鼻窦炎、化脓性肺炎、口腔疾病等）的人员要暂时停止其工作或调换岗位。 防止金黄色葡萄球菌对奶及其制品的污染：如牛奶厂要定期

12、检查奶牛的乳房，不能挤用患化脓性乳腺炎的牛奶；奶挤出后，要迅速冷至-10以下，以防毒素生成、细菌繁殖。奶制品要以消毒牛奶为原料，注意低温保存。对肉制品加工厂，患局部化脓感染的禽、畜尸体应除去病变部位，经高温或其他适当方式处理后进行加工生产。 防止金黄色葡萄球菌肠毒素的生成 应在低温和通风良好的条件下贮藏食物，以防肠毒素形成；在气温高的春夏季，食物置冷藏或通风阴凉地方也不应超过6小时，并且食用前要彻底加热。第十九页，共四十五页。-病原性球菌的检验三、金黄色葡萄球菌三、金黄色葡萄球菌(p to qi jn)的检验的检验方法：增菌培养法、直接方法：增菌培养法、直接(zhji)(zhji)计算法计算法

13、（一）增菌培养法的检验步骤（程序）（一）增菌培养法的检验步骤（程序） 检样检样稀释稀释7.5%NaCl 7.5%NaCl 肉汤增菌培养肉汤增菌培养(piyng)(piyng) 血平板、血平板、BPBP分离分离镜检、镜检、 血浆凝固血浆凝固E试验试验报告结果报告结果 第二十页，共四十五页。-病原性球菌的检验（二）检验操作（二）检验操作(cozu)(cozu)要点要点 1：增菌：增菌：7.5%Nacl肉汤，肉汤，3724h，呈均匀浑浊生长，呈均匀浑浊生长(shngzhng)(shngzhng)。 2 2：平板分离：血平板：平板分离：血平板, ,37 2448h菌落成金黄色，大而突起，圆形，不透明，

14、表面光滑，菌落成金黄色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，周围有透明溶血圈（周围有透明溶血圈（型）型） 第二十一页，共四十五页。-病原性球菌的检验 BP平板平板： 主要成分及作用主要成分及作用(zuyng)(zuyng)：氯化锂、甘氨酸氯化锂、甘氨酸: :抑制非制病性葡萄球的生长抑制非制病性葡萄球的生长丙酮酸钠丙酮酸钠: : 促进葡萄球菌生长促进葡萄球菌生长亚碲酸钾亚碲酸钾: : 抑制抑制G G- -杆菌生长，可被金黄色葡萄球菌还原为杆菌生长，可被金黄色葡萄球菌还原为碲盐呈黑色碲盐呈黑色卵黄卵黄: : 含蛋白质、卵磷、脂肪含蛋白质、卵磷、脂肪第二十二页，共四十五页。-病原性球菌的检验在在B-P

15、B-P平板上的菌落特征平板上的菌落特征: : 为圆形，光滑凸起、湿润、为圆形，光滑凸起、湿润、2-3mm，呈灰色至黑色，边缘色淡周围呈灰色至黑色，边缘色淡周围(zhuwi)(zhuwi)为为浑浊带，在其外层有一透明带。浑浊带，在其外层有一透明带。 第二十三页，共四十五页。-病原性球菌的检验金黄色葡萄球菌在金黄色葡萄球菌在BP平板平板(pngbn)上的菌落形态上的菌落形态金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌(p to qi jn)在甘露醇盐平板上的菌落在甘露醇盐平板上的菌落第二十四页，共四十五页。-病原性球菌的检验3：镜检与血浆：镜检与血浆(xujing)(xujing)凝固凝固E试验试验 从从B-P平

16、板上挑取金黄色葡萄球菌的菌落进平板上挑取金黄色葡萄球菌的菌落进行镜检行镜检如发现葡萄球菌,再做血浆(xujing)凝固E试验 做血浆凝固做血浆凝固E试验试验第二十五页，共四十五页。-病原性球菌的检验金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌(p to qi jn)血浆凝固酶血浆凝固酶实验实验 第二十六页，共四十五页。-病原性球菌的检验4：结果：结果(ji gu)(ji gu)报告报告方式方式 （1）初步报告：根据血平板培养计数和镜检，如发现有）初步报告：根据血平板培养计数和镜检，如发现有G+葡萄串状葡萄串状球菌存在，且有溶血性，则初步报告为：球菌存在，且有溶血性，则初步报告为：“有金黄色葡萄球菌存有金黄色葡

17、萄球菌存在，在，1g样品约含多少。样品约含多少。” （2）结果报告：根据培养特性、镜检、生化试验）结果报告：根据培养特性、镜检、生化试验(shyn)(shyn)、动物试验、动物试验(shyn)(shyn)结果，可报告为：结果，可报告为：“是否是致病性葡萄球菌是否是致病性葡萄球菌” .第二十七页，共四十五页。-病原性球菌的检验思考题思考题1：金黄色葡萄球菌可产生哪些毒素和酶？：金黄色葡萄球菌可产生哪些毒素和酶？ 2：金黄色葡萄球菌在：金黄色葡萄球菌在B-P平板上的菌落特征如何，说明平板上的菌落特征如何，说明其原理。其原理。3：金黄色葡萄球菌在血平板上的菌落特征如何，说明其：金黄色葡萄球菌在血平板

18、上的菌落特征如何，说明其原理。原理。4：确认：确认(qurn)(qurn)葡萄球菌为金黄色葡萄球菌的依据至少葡萄球菌为金黄色葡萄球菌的依据至少应包括哪几个试验？应包括哪几个试验？ 5：金黄色葡萄球菌的形态与染色、培养特征如何？：金黄色葡萄球菌的形态与染色、培养特征如何？第二十八页，共四十五页。-病原性球菌的检验第二节第二节 食品食品(shpn)(shpn)中溶血性链球菌的检验中溶血性链球菌的检验 一、概述一、概述 沙沙 志志 金金 链菌链菌二、二、生物学特性生物学特性(txng)(txng)（一）形态与染色：（一）形态与染色： 1呈球形或卵圆形，直径呈球形或卵圆形，直径0.5um-1um 链状

19、排列（长短不一）链状排列（长短不一）2 革兰氏染色阳性，衰老培养物常成阴性革兰氏染色阳性，衰老培养物常成阴性3 无芽孢、无鞭毛、多数无夹膜无芽孢、无鞭毛、多数无夹膜 第二十九页，共四十五页。-病原性球菌的检验（二）培养（二）培养(piyng)(piyng)特性特性 1、多数为需氧或兼性厌氧，少数为微需氧多数为需氧或兼性厌氧，少数为微需氧或专性厌氧或专性厌氧 2、 对营养要求高，普通培养基不能良好生对营养要求高，普通培养基不能良好生长，（需加血清液、腹水长，（需加血清液、腹水(fshu)(fshu)等）等） 3、最适温度最适温度37 PH7.47.6第三十页，共四十五页。-病原性球菌的检验4、在

20、液体培养基中，溶血菌株在液体培养基中，溶血菌株, ,呈絮状或颗粒状沉淀生长呈絮状或颗粒状沉淀生长(shngzhng)(shngzhng)（上清下浊）；不溶血菌球，均匀浑浊生长（上清下浊）；不溶血菌球，均匀浑浊生长(shngzhng)(shngzhng)，如粪链菌。，如粪链菌。 5、在血平板上，形成灰白色，半透明、表面光滑、有乳光圆在血平板上，形成灰白色，半透明、表面光滑、有乳光圆形突起的细小菌落，直径形突起的细小菌落，直径0.50.75mm，针尖大小，菌落周，针尖大小，菌落周围出现溶血环。围出现溶血环。 链激酶：链激酶：四种溶血。四种溶血。 第三十一页，共四十五页。-病原性球菌的检验( (三三

21、) )生化生化(shn hu)(shn hu)特性特性1 1、均分糖葡萄糖产酸、均分糖葡萄糖产酸2 2、对乳糖、甘露醇、水杨苷等的分解因菌株而、对乳糖、甘露醇、水杨苷等的分解因菌株而异。异。3 3、能使牛奶产酸而不凝固，不液化明胶、能使牛奶产酸而不凝固，不液化明胶(mn jio)(mn jio)、不分解菊糖（肺炎球菌分解葡萄糖）不分解菊糖（肺炎球菌分解葡萄糖）4 4、 A A群菌对杆菌肽敏感群菌对杆菌肽敏感第三十二页，共四十五页。-病原性球菌的检验（四）致病性链球菌可产生（四）致病性链球菌可产生(chnshng)的毒素和酶的毒素和酶1 1、溶血、溶血(rn xu)(rn xu)素素2 2、致热

22、外毒素、致热外毒素3 3、透明质酸酶、透明质酸酶4 4、链激酶、链激酶5 5、链道酶链道酶6 6、杀白细胞素、杀白细胞素第三十三页，共四十五页。-病原性球菌的检验（五）、（五）、抵抗力抵抗力6030min6030min即被杀死，对常用消毒剂敏感即被杀死，对常用消毒剂敏感(mngn)(mngn)乙型链球菌对青霉素、红霉素、氯霉素、四环乙型链球菌对青霉素、红霉素、氯霉素、四环素、磺胺均敏感。素、磺胺均敏感。第三十四页，共四十五页。-病原性球菌的检验（六）、（六）、链球菌分类链球菌分类(fn li)(fn li) 1 1、 按溶血能力按溶血能力(nngl)(nngl)分类分类：（1） 甲型（甲型（）

23、溶血性链球菌）溶血性链球菌（2 2）乙型（）乙型（）溶血性链球菌）溶血性链球菌 （3 3） 丙型（丙型（）链球菌）链球菌第三十五页，共四十五页。-病原性球菌的检验2 2、按血清学分类、按血清学分类(fn li)(fn li) 主要(zhyo)是根据链球菌细胞壁抗原进行公类，这种方法可靠，但工作复杂。 组抗原：用英文字母区分，共分18群：A B C D E F G H K L M N O P Q R S T 型抗原：用阿拉伯数字表示， 对人类致病的90%在A群中。第三十六页，共四十五页。-病原性球菌的检验( (七七) )流行病学流行病学(li xn bn xu)(li xn bn xu)与致病性

24、与致病性溶血性链球菌在自然界中分布较广，存在于水、空气、尘埃、粪便及健康人和动物的口腔、鼻腔、咽喉中，可通过直接接触、空气飞沫传播或通过皮肤、粘膜伤口感染，被污染的食品(shpn)如奶、肉、蛋及其制品也会对人类进行感染。上呼吸道感染患者、人畜化脓性感染部位常成为食品(shpn)污染的污染源。一般来说，溶血性链球菌常通过以下途径污染食品(shpn)：1、食品加工或销售人员口腔、鼻腔、手、面部有化脓性炎症时造成食品的污染；2、食品在加工前就已带菌、奶牛患化脓性乳腺炎或畜禽局部化脓时，其奶和肉尸某些部位污染；3、熟食制品因包装不善而使食品受到污染。 溶血性链球菌常可引起皮肤、皮下组织的化脓性炎症、呼

25、吸道感染、流行性咽炎的爆发性流行以及新生儿败血症、细菌性心内膜炎、猩红热和风湿热、肾小球肾炎等变态反应。化脓性链球菌)第三十七页，共四十五页。-病原性球菌的检验三、微生物检验三、微生物检验(jinyn)(jinyn) （一）检验程序（一）检验程序 液体检液体检(tjin)(tjin)样样 固体检样固体检样样品处理样品处理增菌培养增菌培养分分离培养离培养纯化培养纯化培养生化鉴定生化鉴定报告报告第三十八页，共四十五页。-病原性球菌的检验（二）检验操作（二）检验操作(cozu)(cozu)要点要点 1 1、采样：食品：按常规、采样：食品：按常规(chnggu)(chnggu) 人体：咽拭人体：咽拭

26、、血、尿、血、尿2 2、增菌培养：、增菌培养： 葡萄糖肉浸液肉汤葡萄糖肉浸液肉汤 一般情况一般情况 36361 24h1 24h 匹克氏肉汤：在污染严重时用匹克氏肉汤：在污染严重时用第三十九页，共四十五页。-病原性球菌的检验3 3、分离、分离(fnl)(fnl)培养：血平板，培养：血平板， 37 24h,37 24h,菌落菌落: :灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有透明溶血环透明溶血环4 4、分纯培养：血平板、分纯培养：血平板 37 24h37 24h5 5、镜检：革兰氏染色，阳性，、镜检：革兰氏染色，阳性，G G+ +链状排列，链状排列，符合者可做生化鉴

27、定。符合者可做生化鉴定。 第四十页，共四十五页。-病原性球菌的检验 6 6、生化、生化(shn hu)(shn hu)鉴定：鉴定： （1 1）链激酶试验（溶纤维蛋白酶试验）链激酶试验（溶纤维蛋白酶试验）吸取草酸钾血浆吸取草酸钾血浆0.2mL0.2mL，加加0.8mL0.8mL灭菌生理盐水，混匀，灭菌生理盐水，混匀，再加入链球菌再加入链球菌18-24h3618-24h36肉浸液肉汤培养物肉浸液肉汤培养物0.5mL0.5mL及及0.25%0.25%氯氯化钙化钙0.25mL0.25mL，混匀，置于，混匀，置于3636水浴水浴10min,10min, 血浆混合物自行凝固，观察凝块重新完全溶解的时间，完血浆混合物自行凝固，观察凝块重新完全溶解的时间，完全溶解为阳性，如全溶解为阳性，如24h24