chaper6 the analysis of content of protein and amino acid in farm product

1、Chapter6 the analysis of the content of protein and amino acid in farm product Protein and amino acid characteristic and role for people The analysis methods of impure protein The analysis of pure protein Determine of AA6.1 conspectus 6.1.1 蛋白质：蛋白质： 植物的重要组成部分，农产品品质中最重要的成植物的重要组成部分，农产品品质中最重要的成分。分。 它的含

2、量依作物种类，部位，生育时期，品种特性而变化；它的含量依作物种类，部位，生育时期，品种特性而变化； 植物各部位器官中，籽粒中的含量最高，如豆类可达植物各部位器官中，籽粒中的含量最高，如豆类可达45-55%，其次是花、叶、茎、根；，其次是花、叶、茎、根； 在苗期，新生组织（生长中心）含量高，成熟期，种子中在苗期，新生组织（生长中心）含量高，成熟期，种子中含量高含量高6.1 conspectus蛋白的功能分析：1、身体的构成：蛋白质是一切生命的物质基础，是肌体细胞的重要组成部分；人体的每个组织：毛发、皮肤、肌肉、骨骼、内脏、大脑、血液、神经、内分泌等都是由蛋白质组成蛋白质对人的生长发育非常重要。6

3、.1 conspectus 蛋白的功能分析： 2、是人体组织更新和修补的主要原料： 身体由百兆亿个细胞组成，它们处于永不停息的衰老、死亡、新生的新陈代谢过程中。 例如年轻人的表皮28天更新一次，而胃黏膜两三天就要全部更新。 所以蛋白质的摄入、吸收、利用与皮肤的健康有之间的关系，同时与肌体的衰老有关；6.1 conspectus 蛋白的功能分析： 3、维持肌体正常的新陈代谢和各类物质在体内的输送。 维持人体的正常生命活动载体蛋白发挥了重要作用。 比如血红蛋白输送氧（红血球更新速率250万/秒）、脂蛋白输送脂肪、细胞膜上的受体还有转运蛋白等。6.1 conspectus 蛋白的功能分析： 4、维持

4、机体内的渗透压的平衡及体液平衡。5、维持体液的酸碱平衡。6.1 conspectus 蛋白的功能分析： 6、提高肌体免疫能力有重要作用： 是免疫细胞：白细胞、淋巴细胞、巨噬细胞、免疫蛋白：抗体（免疫球蛋白）、干扰素等成分。 当蛋白质充足时，这个部队就很强，在需要时，数小时内可以增加100倍。6.1 conspectus 蛋白的功能分析： 7、构成人体必需的催化和调节功能的各种酶。 我们身体有数千种酶，每一种只能参与一种生化反应。 酶有促进食物的消化、吸收、利用的作用。 相应的酶充足，反应就会顺利、快捷的进行，我们就会精力充沛，不易生病。 缺少任何一种或几种，甚至其功能不正常反应就变慢或者被阻断

5、。6.1 conspectus 蛋白的功能分析： 8、激素的主要原料，具有调节体内各器官的生理活性作用； 胰岛素是由51个氨基酸分子合成。 生长素是由191个氨基酸分子合成。6.1 conspectus 8、构成神经递质乙酰胆碱、五羟色氨等。维持神经系统的正常功能：味觉、视觉和记忆。9、胶原蛋白：占身体蛋白质的1/3，生成结缔组织，构成身体骨架。 如骨骼、血管、韧带等，决定了皮肤的弹性，保护大脑（在大脑脑细胞中，很大一部分是胶原细胞，并且形成血脑屏障保护大脑）10、提供热能。6.1 conspectus 6.1.1 因此，蛋白质：因此，蛋白质： 生命的物质基础，其含量是衡量农畜水产品品质生命的

6、物质基础，其含量是衡量农畜水产品品质和营养价值的重要指标。和营养价值的重要指标。 蛋白质含量是品种选育，品质鉴定的重要依据；蛋白质含量是品种选育，品质鉴定的重要依据； 蛋白质含量是了解作物生育环境和体内代谢水平的重要手蛋白质含量是了解作物生育环境和体内代谢水平的重要手段；段； 蛋白质含量是评价产品加工方式的是否合理的标准蛋白质含量是评价产品加工方式的是否合理的标准6.1 conspectus 6.1.2 氨基酸：氨基酸： 必需氨基酸：必须从食物中直接吸收，而不能由人或动物必需氨基酸：必须从食物中直接吸收，而不能由人或动物利用食物中的其它成分自身合成，又对人和动物的生长发利用食物中的其它成分自身

7、合成，又对人和动物的生长发育起着重要作用；若缺少这些氨基酸，人和动物不仅不能育起着重要作用；若缺少这些氨基酸，人和动物不仅不能正常发育，还会引起某些疾病；同时这些氨基酸在贮存和正常发育，还会引起某些疾病；同时这些氨基酸在贮存和加工过程中极易损失破坏，成为衡量农产品中蛋白质利用加工过程中极易损失破坏，成为衡量农产品中蛋白质利用价值的重要指标之一。价值的重要指标之一。6.1 conspectus 6.1.2 氨基酸：氨基酸： 氨基酸在动植物产品中以多种形式存在：氨基酸在动植物产品中以多种形式存在： 游离的：是评价氮营养水平的重要指标游离的：是评价氮营养水平的重要指标 构成蛋白质的：是氨基酸的主要成

8、分构成蛋白质的：是氨基酸的主要成分 少数几个结合的：包括由肽键连接的几个氨基酸；少数几个结合的：包括由肽键连接的几个氨基酸； 和糖或脂结合的氨基酸和糖或脂结合的氨基酸6.1 conspectus 6.1.2 氨基酸：氨基酸： 是组成蛋白质的基本单位，是蛋白质的分解产物。是组成蛋白质的基本单位，是蛋白质的分解产物。人吸收利用蛋白质实际上是吸收利用蛋白质的分人吸收利用蛋白质实际上是吸收利用蛋白质的分解产物氨基酸；解产物氨基酸； 蛋白质全氨基酸和个别氨基酸的分析测定是研究蛋白质全氨基酸和个别氨基酸的分析测定是研究蛋白质，酶的化学组成及性质的重要手段；蛋白质，酶的化学组成及性质的重要手段； 生物化学和

9、农业科学的许多领域分析氨基酸成为生物化学和农业科学的许多领域分析氨基酸成为其它工作的基础；其它工作的基础； 分析蛋白质和游离氨基酸组成是评价蛋白质营养分析蛋白质和游离氨基酸组成是评价蛋白质营养价值的重要指标价值的重要指标6.1 conspectus 分析蛋白质和氨基酸的意义：分析蛋白质和氨基酸的意义： 农产品重要品质的鉴定；农产品重要品质的鉴定； 选择合适的农产品加工方法和工艺所必需的；选择合适的农产品加工方法和工艺所必需的； 新品种的选育、鉴定所必需的；新品种的选育、鉴定所必需的； 研究蛋白质功能的重要条件之一；研究蛋白质功能的重要条件之一； 人与动物的健康所必需的。人与动物的健康所必需的。

10、6.2 蛋白质的测定蛋白质的测定 6.2.1蛋白质测定方法选择蛋白质测定方法选择 测定的内容分类：测定的内容分类： 利用蛋白质的共性，即含氮量，肽键和折射率等利用蛋白质的共性，即含氮量，肽键和折射率等测定其含量：开法氏，双缩脲法，考马斯量兰染测定其含量：开法氏，双缩脲法，考马斯量兰染料法料法 利用蛋白质中特定的氨基酸残基、酸、碱性基团利用蛋白质中特定的氨基酸残基、酸、碱性基团和芳香基团测定其含量：酸性染料结合法，紫外和芳香基团测定其含量：酸性染料结合法，紫外吸收法吸收法6.2 蛋白质的测定蛋白质的测定 6.2.2 粗蛋白质测定粗蛋白质测定-开氏法开氏法 原理：原理： 氮素是蛋白质的主要成分，同

11、类植物籽粒中蛋白氮素是蛋白质的主要成分，同类植物籽粒中蛋白质的含氮量基本上固定不变。将样品在催化剂的质的含氮量基本上固定不变。将样品在催化剂的参与下用浓硫酸消煮，将其中的有机氮转化为无参与下用浓硫酸消煮，将其中的有机氮转化为无机态氮，并和硫酸结合为硫酸铵，加碱蒸馏出氨机态氮，并和硫酸结合为硫酸铵，加碱蒸馏出氨并被硼酸吸收，用标准酸滴定，计算出氮的含量，并被硼酸吸收，用标准酸滴定，计算出氮的含量，再将氮值乘以蛋白质的换算系数，得到粗蛋白的再将氮值乘以蛋白质的换算系数，得到粗蛋白的含量。含量。6.2 蛋白质的测定蛋白质的测定 6.2.2 粗蛋白质测定粗蛋白质测定-开氏法开氏法 原理：原理： 蛋白质

12、中的氮平均含量蛋白质中的氮平均含量16%，所以一般采用，所以一般采用6.25作为将赕换算成蛋白质的系数。作为将赕换算成蛋白质的系数。 不过，不同植物籽粒中蛋白质的含氮量有不过，不同植物籽粒中蛋白质的含氮量有 差差异，故由氮换算为蛋白质的系数也稍有不同。异，故由氮换算为蛋白质的系数也稍有不同。产品名称系数 产品名称系数 产品名称系数蛋品6.25玉米，荞麦6.25小豆6.25肉类6.25小麦整粒5.83大豆5.71牛乳6.38小麦糠6.31蓖麻,向日葵芝麻，亚麻仁5.30稻米5.95小麦胚芽5.83杏仁5.13velver5.46小麦胚乳5.70巴西果5.46大麦，黑麦，谷子，燕麦5.83刀豆，菜

13、豆，绿豆，豌豆6.25灰胡桃，鸡腰果，椰子仁，山核桃，核桃甜瓜籽，棉籽，南瓜籽5.306.2 蛋白质的测定蛋白质的测定 开氏法测定的对象和结果开氏法测定的对象和结果 开氏法测定的蛋白质没有经过分离，其中含有氨开氏法测定的蛋白质没有经过分离，其中含有氨基酸，酰胺等非蛋白质，称粗蛋白基酸，酰胺等非蛋白质，称粗蛋白。 粗蛋白的含量用于了解植物蛋白质的含量和比较粗蛋白的含量用于了解植物蛋白质的含量和比较同类作物含量的差异。同类作物含量的差异。6.2 蛋白质的测定蛋白质的测定 应该知道的：应该知道的： 即使是同一类的植物，不同品种或同一品即使是同一类的植物，不同品种或同一品种在不同气候条件下蛋白质的含量

14、有较大种在不同气候条件下蛋白质的含量有较大的差异，而且蛋白质的换算系数也不尽相的差异，而且蛋白质的换算系数也不尽相同，有时甚至有较大的差异。同，有时甚至有较大的差异。6.2 蛋白质的测定蛋白质的测定 6.2.2 粗蛋白质测定粗蛋白质测定-开氏法开氏法 说明：说明： 注意事项基本同土壤全氮的消化、蒸馏滴定过程；注意事项基本同土壤全氮的消化、蒸馏滴定过程； 硼酸的浓度可根据样品中的氮的含量来调节，一硼酸的浓度可根据样品中的氮的含量来调节，一般般2% 或或 5%； 指示剂的加入量仍为指示剂的加入量仍为2%（v/v）6.2 蛋白质的测定蛋白质的测定 6.2.2 粗蛋白质测定粗蛋白质测定-开氏法开氏法

15、说明：说明： 催化剂的配比同土壤全氮，用量可减少；催化剂的配比同土壤全氮，用量可减少； 浓硫酸的用量为浓硫酸的用量为5-8ml； 更注意控制消化时温度，特别是样品中淀粉含量更注意控制消化时温度，特别是样品中淀粉含量比较高时。比较高时。 测定蛋白质的平行结果要求：蛋白含量测定蛋白质的平行结果要求：蛋白含量15%以下以下时，相对相差不大于时，相对相差不大于3%；15-30%，则，则2%；大于；大于30%，则，则1%6.2 蛋白质的测定蛋白质的测定 6.2.3 纯蛋白质测定纯蛋白质测定 6.2.3.1沉淀后开氏法沉淀后开氏法 原理：原理： 利用蛋白质能被重金属盐等沉淀的特性，用沉淀利用蛋白质能被重金

16、属盐等沉淀的特性，用沉淀剂如氢氧化铜、碱性醋酸铅、剂如氢氧化铜、碱性醋酸铅、20-25%单宁或单宁或10-12%三氯乙酸等，将蛋白质从水溶液中沉淀出来，三氯乙酸等，将蛋白质从水溶液中沉淀出来，在测定次沉淀物的全氮含量，乘以蛋白质换算系在测定次沉淀物的全氮含量，乘以蛋白质换算系数即可得到纯蛋白的量。数即可得到纯蛋白的量。6.2 蛋白质的测定蛋白质的测定6.2.3.1沉淀后开氏法沉淀后开氏法 说明：说明： 蛋白质的沉淀剂通常采用碱性硫酸铜，它有迅速蛋白质的沉淀剂通常采用碱性硫酸铜，它有迅速得到澄清溶液的特点。得到澄清溶液的特点。 在分析牧草、块根、块茎作物是，碱性醋酸铅也在分析牧草、块根、块茎作物

17、是，碱性醋酸铅也可获得良好的效果。但对谷类及油脂含量高的油可获得良好的效果。但对谷类及油脂含量高的油料作物则碱性醋酸铅易形成不易沉淀的混浊物料作物则碱性醋酸铅易形成不易沉淀的混浊物（淀粉，脂肪酸的形成物），影响沉淀终点的判（淀粉，脂肪酸的形成物），影响沉淀终点的判定。定。6.2 蛋白质的测定蛋白质的测定6.2.3.1沉淀后开氏法沉淀后开氏法 说明：说明： 碱性醋酸铅的配方有两种：碱性醋酸铅的配方有两种： 不加水研磨：不加水研磨：200gPbO+ 300g Pb(oAC)2, 沸水沸水浴融化混合，浴融化混合，+ 1 LH2O， 放过夜，过滤，密封放过夜，过滤，密封保存；保存； 加水研磨：加水研磨

18、： 200gPbO+ 600g Pb(oAC)2 +100ml H2O研磨，沸水浴上至浅黄、浅紫为止，过滤，研磨，沸水浴上至浅黄、浅紫为止，过滤，密封存放密封存放6.2 蛋白质的测定蛋白质的测定6.2.3.1沉淀后开氏法沉淀后开氏法 说明：说明： 对含淀粉多的作物也可用碱性硫酸铜：对含淀粉多的作物也可用碱性硫酸铜：Cu2SO4(OH)2。也可用一般样品的处理。加入。也可用一般样品的处理。加入50ml沸水，沸水，40-50 水浴保温水浴保温10min，然后乘热，然后乘热缓慢加入缓慢加入6% CuSO45H2O 25ml，边加边搅拌，边加边搅拌，然后乘热缓慢加入然后乘热缓慢加入1.25% NaOH

19、 25ml，边加边搅，边加边搅拌，以形成拌，以形成Cu2SO4(OH)2 ，放置，放置0.5-1h（或过夜）（或过夜）使沉淀完全。使沉淀完全。6.2 蛋白质的测定蛋白质的测定6.2.3.1沉淀后开氏法沉淀后开氏法 说明：说明： 沉淀用倾泄法过滤，用沸水洗涤沉淀至无沉淀用倾泄法过滤，用沸水洗涤沉淀至无SO42-； 残渣烘干的温度为残渣烘干的温度为50-60，烘干不是绝对的干，烘干不是绝对的干燥，至挤不出水为止。一般燥，至挤不出水为止。一般1-2小时；小时； 如有大量气泡产生可加少量的石蜡。如有大量气泡产生可加少量的石蜡。6.2 蛋白质的测定蛋白质的测定 6.2.3 纯蛋白质测定纯蛋白质测定 6.

20、2.3.2酸性染料结合法酸性染料结合法-桔黄桔黄G染料法染料法 原理：蛋白质中的碱性氨基酸以及蛋白质末端自原理：蛋白质中的碱性氨基酸以及蛋白质末端自由氨基在由氨基在pH=2-3的酸性缓冲液体系中可以和偶氮的酸性缓冲液体系中可以和偶氮磺酸染料物质结合形成不溶于水的蛋白质磺酸染料物质结合形成不溶于水的蛋白质-染料络染料络合物而沉淀出来；通过测定一定量样品与一定体合物而沉淀出来；通过测定一定量样品与一定体积已知浓度的染料溶液反应前后染料浓度的变化，积已知浓度的染料溶液反应前后染料浓度的变化，来计算样品蛋白质含量。来计算样品蛋白质含量。6.2 蛋白质的测定蛋白质的测定 6.2.3.2酸性染料结合法酸性

21、染料结合法-桔黄桔黄G染料法染料法 说明：说明： 蛋白质中的碱性氨基酸包括：赖氨酸的蛋白质中的碱性氨基酸包括：赖氨酸的-NH2，精，精氨酸的咪唑基，组氨酸的胍基，以及蛋白质末端氨酸的咪唑基，组氨酸的胍基，以及蛋白质末端自由氨基，在自由氨基，在pH=2-3的酸性缓冲液体系中呈阳离的酸性缓冲液体系中呈阳离子状态存在，可以和偶氮磺酸染料物质，桔黄子状态存在，可以和偶氮磺酸染料物质，桔黄G、酸性橙红等阴离子结合，形成不溶于水的蛋白质酸性橙红等阴离子结合，形成不溶于水的蛋白质-染料络合物而沉淀出来；染料络合物而沉淀出来；6.2 蛋白质的测定蛋白质的测定 6.2.3.2酸性染料结合法酸性染料结合法-桔黄桔

22、黄G染料法染料法 说明：说明： 测定一定量样品与一定体积已知浓度的染测定一定量样品与一定体积已知浓度的染料溶液反应前后染料浓度的变化，计算样料溶液反应前后染料浓度的变化，计算样品的染料结合量，即每克样品所结合的染品的染料结合量，即每克样品所结合的染料的毫克数；料的毫克数；6.2 蛋白质的测定蛋白质的测定 6.2.3.2酸性染料结合法酸性染料结合法-桔黄桔黄G染料法染料法 说明：说明： 样品所结合的染料量的大小反映的是样品中碱性样品所结合的染料量的大小反映的是样品中碱性氨基酸的多少；氨基酸的多少； 小麦，大麦，水稻，大豆，小麦，大麦，水稻，大豆， 花生等种子中的蛋白花生等种子中的蛋白质的含量与其

23、碱性氨基酸的含量有很好的相关性；质的含量与其碱性氨基酸的含量有很好的相关性； 根据碱性氨基酸的含量来计算样品蛋白质含量。根据碱性氨基酸的含量来计算样品蛋白质含量。6.2 蛋白质的测定蛋白质的测定 6.2.3.2酸性染料结合法酸性染料结合法-桔黄桔黄G染料法染料法 说明：说明： 是间接测定蛋白质含量的方法，简单快速，与开是间接测定蛋白质含量的方法，简单快速，与开氏相关性好；氏相关性好； 不同种类的蛋白质中碱性氨基酸的含量不尽相同，不同种类的蛋白质中碱性氨基酸的含量不尽相同，同一种植物中不同的蛋白质的碱性氨基酸的含量同一种植物中不同的蛋白质的碱性氨基酸的含量差异不一致，使该测定方法准确性较差；差异

24、不一致，使该测定方法准确性较差； 适用于不需要知道蛋白质的绝对含量，同种植物适用于不需要知道蛋白质的绝对含量，同种植物大量种子蛋白含量高低的筛选工作；大量种子蛋白含量高低的筛选工作；6.2 蛋白质的测定蛋白质的测定 6.2.3.2酸性染料结合法酸性染料结合法-桔黄桔黄G染料法染料法 说明：说明： 需要从染料结合量来计算样品的粗蛋白的含量，需要从染料结合量来计算样品的粗蛋白的含量，则需用开氏法测定一批种子样品的粗蛋白含量对则需用开氏法测定一批种子样品的粗蛋白含量对酸性染料结合法测定同类种子的一批样品染料结酸性染料结合法测定同类种子的一批样品染料结合量进行回归，得到回归方程；这样测定同类样合量进行

25、回归，得到回归方程；这样测定同类样品的染料结合量就可以通过回归方程得到样品的品的染料结合量就可以通过回归方程得到样品的粗蛋白含量；粗蛋白含量；6.2 蛋白质的测定蛋白质的测定 6.2.3.2酸性染料结合法酸性染料结合法-桔黄桔黄G染料法染料法 说明：说明： 本法不适合用于随意混合的样品的蛋白质的含量本法不适合用于随意混合的样品的蛋白质的含量的测定；的测定； 样品的称样量按蛋白质的含量高低而定：水稻，样品的称样量按蛋白质的含量高低而定：水稻，小麦，大麦，可称取小麦，大麦，可称取500mg，玉米称取，玉米称取700mg，大豆称取大豆称取200mg，花生和鱼粉则还要少；，花生和鱼粉则还要少；6.2

26、蛋白质的测定蛋白质的测定 6.2.3.2酸性染料结合法酸性染料结合法-桔黄桔黄G染料法染料法 说明：说明： 染料结合反应的条件，如染料的染料结合反应的条件，如染料的pH，样品的粒度，样品的粒度，振荡反应的时间和温度等影响结果，所以为使结振荡反应的时间和温度等影响结果，所以为使结果有好的可比性，要求每次测定的反应条件尽量果有好的可比性，要求每次测定的反应条件尽量一致，特别是测定样品和测定回归方程的条件要一致，特别是测定样品和测定回归方程的条件要一致；一致； 比色波长比色波长482nm6.2 蛋白质的测定蛋白质的测定 6.2.3 纯蛋白质测定纯蛋白质测定 6.2.3.3双缩脲法双缩脲法 原理：原理

27、： 蛋白质中的肽键结构，具有类似于双缩脲的反应蛋白质中的肽键结构，具有类似于双缩脲的反应基团，在碱性条件下能与基团，在碱性条件下能与Cu2+生成紫红色可溶性生成紫红色可溶性络合物，蛋白质的浓度在络合物，蛋白质的浓度在1-15mg/10ml（40ml）之间，其含量与溶液的吸收值成正比例关系，与之间，其含量与溶液的吸收值成正比例关系，与蛋白质的分子量，氨基酸的组成没有关系。蛋白质的分子量，氨基酸的组成没有关系。550nm（580nm）6.2 蛋白质的测定蛋白质的测定 6.2.3.3双缩脲法双缩脲法 本法设备简单，快速，与开氏法测得的含量相关本法设备简单，快速，与开氏法测得的含量相关性好性好 本法测

28、定的是肽键的含量，肽键含量高呈紫色，本法测定的是肽键的含量，肽键含量高呈紫色，含量低呈红色；含量低呈红色； 适用于小麦，大麦，玉米，水稻，高粱等蛋白质适用于小麦，大麦，玉米，水稻，高粱等蛋白质的测定，尤其适用于大批品种的筛选用；的测定，尤其适用于大批品种的筛选用； 获得蛋白的绝对含量也需要测定本法测定的含量获得蛋白的绝对含量也需要测定本法测定的含量与开氏法测得的含量做回归方程计算与开氏法测得的含量做回归方程计算6.2 蛋白质的测定蛋白质的测定 6.2.3.3双缩脲法双缩脲法 说明：说明： 双缩脲试剂由硫酸铜，酒石酸钾钠，氢氧化钾，双缩脲试剂由硫酸铜，酒石酸钾钠，氢氧化钾，异丙醇组成。异丙醇可减

29、少有色物质，脂肪及一异丙醇组成。异丙醇可减少有色物质，脂肪及一些淀粉物质的溶解，减少比色的干扰；些淀粉物质的溶解，减少比色的干扰； 有用有用CuCO3（OH）2代替代替Cu2SO4(OH)2同样获同样获得好的结果；得好的结果； 对颜色深的样品，先用对颜色深的样品，先用CCl4处理已经称好的样品处理已经称好的样品并用并用1%H2O2降解有色物质；降解有色物质；6.2 蛋白质的测定蛋白质的测定 6.2.3.3双缩脲法双缩脲法 说明：说明： 本法对显色的温度及时间的要求严格：室内温度本法对显色的温度及时间的要求严格：室内温度20-25，120-190min之间比色；之间比色；40 ，则，则15-70

30、min之间比色之间比色 离心须用离心须用5000-6000rpm，10min 本法与染料结合法称为同类种子中蛋白质的测定本法与染料结合法称为同类种子中蛋白质的测定方法方法6.3 氨基酸的测定氨基酸的测定 测定氨基酸的方法选择：测定氨基酸的方法选择： 氨基酸的测定包括测定氨基酸的总的含量的测定氨基酸的测定包括测定氨基酸的总的含量的测定以及测定氨基酸组分的测定两个方面；以及测定氨基酸组分的测定两个方面； 总量：测定蛋白质总氮量，开氏法，水合茚三酮总量：测定蛋白质总氮量，开氏法，水合茚三酮比色法，甲醛滴定法比色法，甲醛滴定法 组分测定：薄层层析，气相色谱，液相色谱，氨组分测定：薄层层析，气相色谱，液

31、相色谱，氨基酸分析仪基酸分析仪6.3 氨基酸的测定氨基酸的测定 6.3.1 全氨基酸与动植物游离氨基酸的分全氨基酸与动植物游离氨基酸的分析析氨基酸分析仪氨基酸分析仪 原理：原理： 因洗脱缓冲液的因洗脱缓冲液的pH不同与氨基酸的等电点不同与氨基酸的等电点的不同，吸附在交换柱上氨基酸被分离洗的不同，吸附在交换柱上氨基酸被分离洗脱；氨基酸与水合茚三酮反应生成特征颜脱；氨基酸与水合茚三酮反应生成特征颜色，颜色的深浅与含量正相关。色，颜色的深浅与含量正相关。6.3 氨基酸的测定氨基酸的测定 氨基酸分析仪氨基酸分析仪 原理：原理： 氨基酸分析仪的核心部件是离子交换层析柱。氨基酸分析仪的核心部件是离子交换层

32、析柱。 在流动相缓冲液的推动下，氨基酸与阳离子交换在流动相缓冲液的推动下，氨基酸与阳离子交换树脂的色谱柱中的交换基团进行交换，而被吸附树脂的色谱柱中的交换基团进行交换，而被吸附在色谱柱的表面；在色谱柱的表面； 不同氨基酸的等电点的不同，其电中性的不同氨基酸的等电点的不同，其电中性的pH不同，不同， 因分子基团的不同而将氨基酸进行分离；因分子基团的不同而将氨基酸进行分离；6.3 氨基酸的测定氨基酸的测定 氨基酸分析仪氨基酸分析仪 原理：原理： 氨基酸与水合茚三酮在氨基酸与水合茚三酮在100反应生成特征颜色：反应生成特征颜色：多数氨基酸生成紫色物质多数氨基酸生成紫色物质-茚二酮炔茚二酮氨茚二酮炔茚

33、二酮氨（DYDA），），570nm有吸收峰；有吸收峰； 脯氨酸和羟脯氨酸与水合茚三酮在脯氨酸和羟脯氨酸与水合茚三酮在100反应生反应生成黄色物质，吸收峰，成黄色物质，吸收峰，440nm6.3 氨基酸的测定氨基酸的测定 氨基酸分析仪氨基酸分析仪 氨基酸组分的制备须在真空条件下水解：氨基酸组分的制备须在真空条件下水解： 1 大部分氨基酸大部分氨基酸6molL-1HCl，真空后密封，真空后密封，110 ，22小时，除小时，除HCl， pH=3.3的柠檬酸钠缓冲液的柠檬酸钠缓冲液溶解；溶解； 2 胱氨酸：须先氧化为半胱氨酸（胱氨酸：须先氧化为半胱氨酸（30%H2O2 + 80%甲酸，甲酸，1：9混合，

34、室温混合，室温1小时），除甲酸，小时），除甲酸，0.2-0.4mol L-1- -巯基乙醇的巯基乙醇的6molL-1HCl溶液溶液水解（真空后密封），后同水解（真空后密封），后同1；6.3 氨基酸的测定氨基酸的测定 氨基酸分析仪氨基酸分析仪 氨基酸组分的制备氨基酸组分的制备 3 色氨酸：须用色氨酸：须用4.2mol L-1 NaOH + 硫代二硫代二甘醇甘醇0.3ml，真空密封，真空密封， 真空后密封，真空后密封，110 ，22小时，用小时，用6molL-1HCl中和（中和（7ml），），pH=4.3的柠檬酸钠缓冲液调整的柠檬酸钠缓冲液调整pH=4.5，定容；，定容；6.3 氨基酸的测定氨基酸的测定 氨基酸分析仪氨基酸分析仪 氨基酸组分的制备：氨基酸组分的制备： 植物产品中游离氨基酸用植物产品中游离氨基酸用75%乙醇提取：乙醇提取：20放放数小时，数小时，6000rpm离心，或者离心，或者80回流，回流，提取提取2-3次，每次次，每次15min，蒸发除乙醇，蒸发除乙醇，pH=3.3的柠檬酸钠缓冲液溶解的柠檬酸钠缓