认识微生物实验室

1、实验：认识微生物实验室普通微生物学实验课的目的v 训练学生掌握微生物学最基本的操作技术，了解微生物学的基本知识，加深理解课堂讲授的某些微生物理论。同时通过实验，培养学生观察、思考、提出问题和解决问题的能力，实事求是、严肃认真的科学态度以及敢于创新的开拓精神；树立勤俭节约、爱护公物的良好作风。微生物学实验规则与安全v为了上好微生物实验课，并保证安全，特制定如下规则和安全措施：v1.每次实验前必须对实验内容进行充分预习，以了解实验的目的、原理和方法，做到心中有数，思路清楚。v2.在整个实验过程中必须穿上实验服，留长发者，必须将长发挽在背后。实验台上除了记录本和笔以外，不准堆放任何个人物品。v3.认

2、真及时做好实验记录，对于当时不能得到结果而需要连续观察的实验，则需记下每次观察的现象和结果，以便分析。v4.实验室内应保持整洁，勿高声谈话和随便走动，保持室内安静。v5.实验时小心仔细，全部操作应严格按操作规程进行，禁止用嘴吸取菌液或试剂，万一遇有盛菌试管或瓶不慎打破、皮肤破伤等意外情况发生时，应立刻报告指导老师，及时处理，切勿隐瞒。v6.实验过程中，切勿使乙醇、乙醚、丙酮等易燃药品接近火焰。如遇火险，应先关掉火源，再用湿布或沙土掩盖灭火。必要时用灭火器。v7.使用显微镜或其他贵重仪器时，要求细心操作，特别爱护。显微镜的目镜在使用前后必须用浸有乙醇的透镜纸擦净。对消耗材料和药品等要力求节约，用

3、毕后仍放回原处，严禁将钥匙交叉使用。v8.每次实验完毕后，必须把所有仪器抹净放妥，将实验室收拾整齐，擦净桌面，如有菌液污染桌面或其他地方时，可用3%来苏尔液或5%石碳酸液覆盖半小时后擦去，如系牙胞杆菌，应适当延长消毒时间。凡带菌之工具（如吸管、玻璃刮棒等）在洗涤前须浸泡在3%来苏尔液中进行消毒。v9.每次实验需进行培养的材料，应标明自己的组别及处理方法，放于教师指定的地点进行培养。实验室中的菌种和物品等，未经教师许可，不得携出室外。v10.每次实验的结果，应以实事求是的科学态度填入报告表格中，力求简明准确，认真回答思考题，并及时汇交教师批阅。v11.离开实验室前将手洗净，注意关闭门窗、灯、火、

4、煤气等。v无菌概念无菌概念 无菌概念实际上就是有菌概念，也就是在我们头脑中树立处处有菌的思想，使目的微生物无（杂）菌污染，也使我们进一步体会到环境卫生的重要性。所谓无菌操作是指在微生物操作过程中，除了使用的容器、用具（试管、三角烧瓶、平皿和吸管等）和培养基必须进行严格的灭菌处理外，还要通过一定的技术来保证目的微生物在转移过程中不被环境中的微生物污染，这些技术包括用接种环（针）、吸管、涂棒等工具进行接种、稀释、涂片计数和划线分离等。v无菌技术v在分离、转接及培养纯培养物时防止其被其他微生物污染，其自身也不污染操作环境的技术被称为无菌技术，它是保证微生物学研究正常进行的关键。v无菌操作v其要点是在

5、火焰附近进行操作，或在无菌操作箱或操作室内进行操作。v接种环在火焰上灼烧灭菌v烧红的接种环在空气中冷却，同时打开装有培养物的试管v用接种环蘸取一环培养物转移到一装有无菌培养基的试管中，并将试管重新盖好v接种环在火焰上灼烧，杀灭残留的培养物无菌操作箱生物实验室废弃物处理方法v大多数的玻璃器皿、仪器以及实验服都可以重复或再使用。废弃物处理的首要原则是所有感染性材料必须在实验室内清除污染、高压灭菌或焚烧。v一、用以处理潜在感染性微生物或动物组织的所有的实验室物品，在被丢弃前应考虑的主要问题有： v 1、是否已采取规定程序对这些物品进行了有效的清除污染或消毒？v 2、如果没有，他们是否以规定的方式包裹

6、，以便就地焚烧或运送到其他有焚烧设施的地方进行处理？ v3、丢弃已清除污染的物品时，是否会对直接参与丢弃的人员，或在设施外可能接触到丢弃物的人员造成任何潜在的生物学或其他方面的危害？v污染性材料和废弃物的处理和丢弃程序 废弃物可以分成以下几类： 1、可重复或再使用，或按普通“家庭”废弃物丢弃的非污染（非感染 性）废弃物 v2、污染（感染性）锐器皮下注射用针头、手术刀、刀子及破碎玻璃；这些废弃物应收集在带盖的不易刺破的容器内，并按感染性物质处理 v3、通过高压灭菌和清洗来清除污染后重复或再使用的污染材料 v4、高压灭菌后丢弃的污染材料 v5、直接焚烧的污染材料微生物学实验室常用的仪器设备v1.酒

7、精灯v2高压蒸汽灭菌锅v高压蒸汽灭菌器是利用饱和压力蒸汽对物品进行迅速而可靠的消毒灭菌设备，适用于医疗卫生事业、科研、农业等单位。对医疗器械、敷料、玻璃器皿、溶液培养基等进行消毒灭菌，也适用高原地区作蒸餐设备和企事业单位制取高质量饮用水，也可作为制取高温蒸汽源设备。v3.隔水式恒温培养箱v隔水式培养箱是具有高精度的恒温设备，可用于植物的组织、发芽、培养育苗、微生物的培养，昆虫、小动物的饲养，水质检测的BOD测定，以及其他用途的恒温试验。是生物遗传工程、医药、农、林、环境科学、畜牧、水产等生产、科研、教育部门的理想设备。v4.电热鼓风干燥箱v电热鼓风干燥箱又名“烘箱”，顾名思义，采用电加热方式进

8、行鼓风循环干燥试验，分为鼓风干燥和真空干燥两种，鼓风干燥就是通过循环风机吹出热风，保证箱内温度平衡，真空干燥是采用真空泵将箱内的空气抽出，让箱内大气压低于常压，使产品在一个很干净的状态下做试验，是一种常用的仪器设备，主要用来干燥样品，也可以提供实验所需的温度环境。v5.超净工作台v超净工作台(clean bench)是为了适应现代化工业、光电产业、生物制药以及科研试验等领域对局部工作区域洁净度的需求而设计的。v6.生物安全柜v生物安全柜是为操作原代培养物、菌毒株以及诊断性标本等具有感染性的实验材料时，用来保护操作者本人、实验室环境以及实验材料，使其避免暴露于上述操作过程中可能产生的感染性气溶胶

9、和溅出物而设计的。v超净工作台（clean bench）与生物安全柜（Biosafety Cabinet）不同。超净工作台只能保护在工作台内操作的试剂等不受污染，并不保护工作人员，而生物安全柜是负压系统，能有效保护工作人员。v7.离心机v离心机是利用离心力，分离液体与固体颗粒或液体与液体的混合物中各组分的机械。离心机主要用于将悬浮液中的固体颗粒与液体分开，或将乳浊液中两种密度不同，又互不相溶的液体分开（例如从牛奶中分离出奶油）；它也可用于排除湿固体中的液体，例如用洗衣机甩干湿衣服；特殊的超速管式分离机还可分离不同密度的气体混合物；利用不同密度或粒度的固体颗粒在液体中沉降速度不同的特点，有的沉降

10、离心机还可对固体颗粒按密度或粒度进行分级。常用器皿的包扎方法v1.移液管v用来准确移取一定体积的溶液的量器。移液管是一种量出式仪器，只用来测量它所放出溶液的体积。它是一根中间有一膨大部分的细长玻璃管。其下端为尖嘴状，上端管颈处刻有一条标线，是所移取的准确体积的标志。v2.培养皿v培养皿是一种用于微生物或细胞培养的实验室器皿v常用培养皿皿底直径90mm,高15mm,皿底皿盖均由玻璃制成v3.三角瓶v常用来盛无菌水、培养基和振荡培养微生物等v4.试管v试管，化学实验室常用的仪器，用作于少量试剂的反应容器，在常温或加热时（加热之前应该预热，不然试管容易爆裂。）使用。空玻璃器皿的包装v培养皿的包装v培

11、养皿常用旧报纸密密包装，一般以58套培养皿作一包，少于5套工作量太大，多于8套不易操作。包装好后行干热或湿热灭菌。如将培养皿放入金属（不锈钢）筒内进行干热灭菌，则不必用纸包，金属筒有一圆筒形的带盖外筒，里面放一装培养皿的带底框架，此框架可自圆筒内提出，以便装取培养皿。v吸管的包装v准备好干燥的吸管，在距其粗头顶端约约0.5cm处，塞一小段约约1.5cm长的棉花，以免使用时将杂菌吹入其中，或不慎将微生物吸出管外。棉花要塞得松紧恰当，过紧，吹吸液体太费力；过松，吹气时棉花会下滑。然后分别将每支吹管尖端斜放在旧报纸条的近左端，与报纸约呈45度角，并将左侧多余的一段纸覆折在吸管上，再将整根吸管卷入报纸

12、，右端多余的报纸打一小结。v如此包好的很多吸管可再会一张大报纸包好，进行干热灭菌。如果有装吸管的铜或不锈钢管，亦可将分別包好的吸管一起装入筒内，进行灭菌；若预计一筒灭菌的吸管可一次用完，亦可不用报纸包而直接装入筒内灭菌，但要求吸管尖朝筒底，粗端在筒口，使用时将筒卧放在桌上，用手持粗端抽出。v试管和三角烧瓶等的包装v试管管口和三角烧瓶瓶口塞以棉花塞或泡沫塑料塞，然后在棉花塞与管口和瓶口的外面用二层报纸与细线包扎好（如果能用铝箔则更好，可省去用线扎且效果好）。进行干热或湿热灭菌，试管塞好塞子后也可一起装在铁丝篓中，用大张报纸或铝箔将一篓试管口做一次包扎，包纸的目的在于保存期避免灰尘侵入。v空的玻璃器皿一般用干热灭菌，若用湿热灭菌，则要多用几层报纸包扎，外面最好加一层牛皮纸或铝箔。无菌操作技术的几点注意事项v1、开包后的无菌包和开封后的无菌溶液有效期均为24小时，无菌盘有效期限不超过4小时。v2、无菌持物钳取时不可触及容器口边缘及溶液以上的容器内壁。使用时应保持钳端向下，不可倒转向上，用后立即放入容器中。如到远处夹取物品时，无菌持物钳应连同容器一并搬移，就地取出使用。无菌持物钳只能用于夹取无菌物品，不能用于换药和消毒皮肤。 无菌持物钳及其浸泡消毒容器，应每周清洁消毒二次，并更换消毒溶液及纱布。门诊换药室或使用较多的部门，应每日清洁消毒一次。v3、使用无