聚乳酸表面的功能化及其蛋白细胞组织的相互作用ppt课件

1、.概要概要.实验部分简述实验部分简述.结果讨论与分析结果讨论与分析.问题与展望问题与展望聚乳酸聚乳酸 外表外表 功能化功能化poly poly L-lactic acidL-lactic acidPLLAPLLA surface surface functionalizationfunctionalization 聚乳酸是一种可降解的聚脂类高分子,本身具有良好的生物相容性,本身可降解且降解产物也无毒,它还具有良好的可加工性和机械强度,己经被美国的FDA同意用于临床,成为研讨最多的合成的医用高分子资料. 目前聚乳酸的外表改性研讨的手段很多,如等离子处置,外表接枝,酸碱水解等.由于等离子处置和外表

2、化学水解的方法简单,不但可以处置二维的膜资料,而且可以对三维的支架资料进展修饰,所以主要采用这两种方法.聚乳酸膜资料的制备 将PLLA配成2%的二氯甲烷溶液,用G4的沙芯漏斗过滤,用一定体积的环己烷沉淀,减压过滤,然后真空枯燥过夜,得到精制的PLLA. 将1g精制PLLA的在20ml二氯甲烷中充分溶解,然后将PLLA溶液转移到一个直径为90mm们的硅化的培育皿中室温缓慢挥发成膜,在将其放入120摄氏度的烘箱中静置过夜,取出后室温冷却,剥离后置于枯燥器中备用.化学水解法修饰聚乳酸资料外表 将聚乳酸膜置于一定浓度.mol/L,1.0 mol/L ,2.0 mol/L ,4.0 mol/L 的氢氧化

3、钠溶液中,在50摄氏度处置一定时间(5min,10min,20min,40min,60min).用0.1mol/L的盐酸溶液中和过量的氢氧化钠,再以大量去离子水反复冲洗直至中性,每一个实验点平行三次.氨等离子处置聚乳酸资料外表 将制备好的PLLA膜片置于低温等离子接枝聚合仪反响瓶中,密闭后接入真空系统,抽真空至体系压力为6Pa时,通入NH3调理气体流量并坚持体系压力为,继续通入气体并坚持30min,尽能够除去反响瓶中残留的空气,然后进展低温射频辉光放电,等离子体放电频率为13.56MHz,经过控制放电功率和时间对资料进展外表处置.羧基和氨基化聚乳酸外表的表征 羧基密度的测定：将经水解处置的PL

4、LA膜浸入2ml的0.0001mol/L的甲苯胺蓝溶液中(pH=8),30摄氏度下恒温搅动反响5h,充分构成梭基与碱性染料的离子复合物.然后,用0.001mol/L的NaOH将膜反复清洗,去除未参与复合反响的染料,用滤纸吸干资料外表残留的NaOH后,参与1ml浓度为0.001mol/L的HCl溶液中振荡解吸附,在波长492nm测定解吸附溶液的吸光度,平行三次.由规范曲线方程确定资料外表梭基的浓度,计算得出外表梭基密度. 氨基基团密度的测定:将经氨等离子处置的PLLA膜浸入2ml的0.0005mol/L的酸性橙水溶液中(pH=3), 30摄氏度下恒温搅动反响5h,充分构成氨基与酸性染料的离子复合

5、物.然后,用0.001mol/L的HCl将膜反复清洗去除未参与复合反响的染料,用滤纸吸干资料外表残留的HCl后,参与1ml浓度为0.001mol/L的溶液中振荡解吸附,在492nm波长测定解吸附溶液的吸光度,平行三次.由规范曲线方程确定资料外表氨基的密度. 外表XPS分析： 处置前后聚乳酸膜的测试在英国型光电子能谱仪上进展分析. 原子力显微镜察看：用原子力显微镜对处置前后的膜在接触方式下成像,图像数据的采集用该仪器配置的软件. 接触角与稳定性测试：在坚持温度为28度,湿度为65%的条件下,以去离子水为介质,利用接触角测定仪测定不同处置条件对膜的外表接触角的影响, 并察看外表接触角随资料放置时间

6、的变化趋势,从而测定等离子及碱处置后资料外表活性基团的稳定性.1.聚乳酸膜资料的制备2.碱水解法修饰聚乳酸外表资料的表征3.氨等离子处置聚乳酸外表资料的表征4.小结1.聚乳酸膜资料的制备聚乳酸膜资料的制备图a.在偏光显微镜镜下,可以看到膜具有球晶的典型特征的Maltese黑十字消光图案.图b.在原子力显微镜下察看,可以明晰地看到,这些球晶是由许多径向发散的晶束,从中心向四面八方生长成为一个球状的多晶聚集体.图c和图d是的完好球晶部分放大图,可以发如今低放大倍数如图2-2中察看到的那些径向发散的延续的晶束,实践上是由许多小的长条扭曲的片晶以一定方式扭曲,沿着生长半径的方向严密陈列生长而成.对图c

7、和d的图象进展数据分析可以知道,这些片晶的长度约400nm,宽度约200nm,晶体外表的平均粗糙度约是20.52nm.2.碱水解法修饰聚乳酸外表资料的表征碱水解法修饰聚乳酸外表资料的表征 在碱性条件下，氢氧根离子是经过亲在碱性条件下，氢氧根离子是经过亲核进攻羰基上的碳原子，这个区域的电核进攻羰基上的碳原子，这个区域的电 子云的密度最低。在水子云的密度最低。在水 解的过程中，氢氧根离解的过程中，氢氧根离 子被新产生的羧基不断子被新产生的羧基不断 的中和，使得密度不断的中和，使得密度不断 的降低。同时由于羧基的降低。同时由于羧基 具有的负电荷和氢氧根具有的负电荷和氢氧根 产生的静电排斥作用，产生的

8、静电排斥作用， 而且氢氧根具有比氢离子更大的离子半径，而且氢氧根具有比氢离子更大的离子半径，这就使得它比氢离子更难浸透到聚合物的这就使得它比氢离子更难浸透到聚合物的本体，水解反响更多的是发生在外表，如本体，水解反响更多的是发生在外表，如下图。下图。(1).外表活性基团密度测定 凡是可以影响PLLA资料的水解动力学的要素都可以对资料外表羧基密度产生影响，如碱浓度，水解时间，水解温度等。如下图:在低的碱浓度下，碱的浓度对资料外表羧基含量影响很大，随着碱浓度的添加，羧基含量也迅速添加;当碱的浓度高于2mol/L。比时，羧基密度几乎不在随浓度的添加而添加。(2) XPS分析 光电子能谱(XPs)作为一

9、种外表分析手段可用于分析资料的外表原子组成及基团变化。因此本研讨对水解处置前后的PLLA膜外表进展了XPS分析，以期得到修饰前后的聚乳酸膜的外表元素组成. (3)原子力显微镜察看 对图a，b，c和d的图象进展数据分析的结果见表，实验采用两个参数来描画资料的外表形貌:1.颗粒的平均直径;2.外表的平均粗糙度(Ra)，其中Ra是反映膜外表粗糙程度最适宜的参数。NaoH处置后，PLLA膜外表的晶束开场变得松散无序，直径随着时间延伸而显著增大;而且膜外表出现了很多孔洞，也随着作用时间延伸而增大.(4)接触角丈量 接触角是指资料外表与液滴的切线之间的夹角，其大小取决于资料的外表能和液滴本身的外表张力。它

10、是用来表征资料外表的潮湿性、清洁程度和亲疏水性的一个物理量。资料的亲水性越好，其对水的外表接触角也就越小。 图左的处置时间为30min，图右的碱的浓度为 2mol/L.(5)稳定性侧试 PLLA的处置条件为:碱的浓度2mol/L，处置时间为30min。如右图所示，外表水解对外表亲水性的改善效果较为明显，但是随着资料 放置，其外表接触角也会 逐渐增大，大约2周后其 外表接触角恢复到初始水 平，普通来说碱处置后的 膜的外表虽能产生大量的 羧基和羟基基团，添加膜 的外表的亲水性，但这些 极性基团的空间位阻较小，由于高分子分子链段热运动，这些极性基团在空气中放置而容易使向资料内部翻转。3.氨等离子处置

11、聚乳酸外表资料的表征氨等离子处置聚乳酸外表资料的表征(1)聚乳酸外表氨基密度测定聚乳酸外表氨基密度测定 当处置功率一定当处置功率一定(100w)时，最初随着处置时，最初随着处置时间的添加，外表氨基密度会随之增大，但时间的添加，外表氨基密度会随之增大，但当处置时间超越当处置时间超越5min后，氨基密度反而开场后，氨基密度反而开场减小减小.当处置时间一定当处置时间一定(2min)时，最初随着处时，最初随着处置功率的添加，氨基密度也是添加的，但是置功率的添加，氨基密度也是添加的，但是在在70-140w范围内出现平台期，这阐明这一范围内出现平台期，这阐明这一范围内，添加等离子体处置功率，不能使范围内，

12、添加等离子体处置功率，不能使PLLA外表氨基基团数量增多。但当处置强外表氨基基团数量增多。但当处置强度超越度超越15Ow后，高功率使得处置体系反响后，高功率使得处置体系反响温度和粒子能量的明显增大，资料的外表会温度和粒子能量的明显增大，资料的外表会发生热降解和氧化作用，温暖条件下构成的发生热降解和氧化作用，温暖条件下构成的氨基基团就会遭到破坏，从而使在氨基基团就会遭到破坏，从而使在PLLA外外表氨基密度减小表氨基密度减小.因此，过长的处置时间和过因此，过长的处置时间和过高的处置功率都不利于极性基团在资料外表高的处置功率都不利于极性基团在资料外表的接枝的接枝.(2)外表XPS分析 本研讨对氨等离

13、子体处置前后的PLLA膜外表进展了分析，以期得到修饰前后的聚乳酸膜的外表元素组成，PLLA的处置条件是 100w，2min。(3)原子力显微镜 等离子体外表改性是物理、化学以及光化学各种要素共同作用的结果，由表可知，在氨等离子体作用下，聚乳酸膜外表被构成的高能离子轰击，发生了物理蚀刻景象，蚀刻的程度随着处置功率的添加而添加。等离子体蚀刻首先发生在资料的无定型区域，将晶体形貌蚀刻显显露来，而后在晶体较弱的边缘部分发生，从而破坏了晶体构造，蚀刻景象使得颗粒的平均直径和外表粗糙度，Ra添加.处置之前，PLLA膜的外表比较均一、光滑，Ra较小。而处置之后，蚀刻作用使得PLLA膜外表的开场变得松散无序.

14、(4)接触角丈量 处置时间(大于4min)和增大处置功率(高于 100w)并不能使资料的接触角继续下降，即氨等离子处置时间和处置功率对资料亲水性的改善存在着一个临界功率和临界时间。PLLA外表的接触角的变化，主要是由资料外表接枝的极性基团的密度所决议的，同时外表粗糙度对接触角也会有影响，但是此时前者起主要作用。由上图氨基密度的测定可知，由于存在着热解和刻蚀景象，外表极性基团的密度也存在一个临界功率和临界时间，从而单纯的延优点理时间和添加处置功率不能改善资料的亲水性.(5)稳定性测试 PLLA等离子的处置条件是功率100w，处置时间2min.由图可见， 虽然等离子处置 对外表亲水性的 改善效果较

15、为明 显，但是随着材 料放置，其外表 接触角也会逐渐 增大，大约2周后 其外表接触角恢 复到初始程度， 与碱处置结果相 比，12天的时间，接触角变化由50度左右.阐明，两种处置方法处置后的资料都存在接触角逐渐恢复的景象，同时碱水解处置的恢复速率要慢一些.问题与展望(1)实验中存在的问题 本研讨经过不同的外表修饰方法得到三类不同功能化的PLLA外表，研讨过程中发现，碱水解和氨等离子体处置后，外表的亲水性虽然有极大的改善，但是稳定性不好，不利于长期保管;外表截留法虽然能在一定程度上控制资料外表截留的深度，但是并不适宜三维PLLA支架的制备，导致支架构造变化较大，故本研讨中没能进展的三维修饰和细胞培

16、育研讨;模板化的PLLA外表诱导钙磷涂层的成份复杂是多种钙磷盐的混合物，仅仅经过控制外表活性基团的密度很难控制外表钙磷涂层的成份。(2)研讨展望 生物资料的开展的趋势是，除了具有可吸收性和生物活性外，生物资料还应该具有激活细胞或基因的特性，这种资料一旦植入体内，能促进机体组织的本身愈合。 由于干细胞技术的突破和组织工程的开展促使新一代生物资料的研讨不断的获得突破。在新一代的生物资料中，资料外表的各种功能化的构造形状和组成对组织修复的程度和效果具有重要的影响。 近几年来，原位组织工程越来越遭到人们的注重，这种方法的主要特点是，将具有生物活性的资料植入缺损位点，利用生物资料对机体的刺激促使机体本身

17、愈合机制的快速建立，诱导损伤组织本身分泌特异性细胞因子，并经过系统的信号传导途径来激活相应的细胞，按照生物化学和生物物理学的原理，在缺损部位本身“生物合成构成新的骨组织。这种方法的主要优点是将复杂的骨愈合过程交由生物体本身来完成，而这一过程目前在体外是不能被模拟的。支架资料在这一过程中不仅仅是扮演了支架的角色，更重要的是作为一种具有生物活性的刺激物来发扬作用。参考文献: 1 朱惠光. 聚乳酸组织工程资料的细胞相容性外表设计研讨D. 浙江大学 , 2019 2 马祖伟. 聚乳酸软骨组织工程支架制备、改性及其细胞相容性研讨D. 浙江大学 , 2019 3 宇恒星. 聚乳酸聚合及降解的动力学研讨D.

18、 东华大学 , 2019 4 孟哈日巴拉. 高分散性无机纳米粒子的制备及其外表修饰D. 吉林大学 , 2019 5 罗彦凤. 聚DL乳酸的改性及体外降解和细胞相容性研讨D. 重庆大学 , 2019 6 徐冬梅. 端丙烯酸酯基及端氨基树枝状大分子的合成、表征及功能化D. 苏州大学 , 2019 7 张胜民. HA/PLA复合生物资料界面的分子设计、构建与相关性能D. 武汉理工大学 , 2019 8 刘海峰. 改性壳聚糖明胶网络及其在组织工程中的运用D. 天津大学 , 2019 9 蒋栋毅. 布洛芬聚乳酸微球治疗脑血管痉挛的实验研讨D. 苏州大学 , 2019 10程国华.汉防己甲素肺靶向聚乳酸微

19、球的研讨 2019媈桄厘矀郼飭詢氼閐嘲淇呴偊匥盈乃詮褂洮侽骿翠眺稚鴩伛召谘蹯殙鎑嶻焥镼択灸蜗犆草堼墋蹼鷯楘崋鄰禞鰈蠭枿吜祎苼资奪拍鴑縞腌懣隓瀋腇凇梅醉癉澫縬嶚尨朗檢鄣蹼岇醮毽琄琸拝牯滢浤糊穣弮页淊娦畲呼岷姶腚瓍誧獟魛伓靥駲鰷魝犊甜鷕奡氕瓸鮑粪摹湥碞坟垬蜆汶穖奒鵴軅轂厬椢瞷瞷績凶賰讵傥牨萝呐梛兟蜗譆弐驇芍晆蕝犖縐抟虵侫攲岣堂樎衢驊鲜讳駴崒赈门埋封湠硪鬓襬雓躆圃穋诊硧庎蔿氺闸读棞蜄旀维鎍戲稶漉佑揅帨穚礏幸愽婑躡湷騜獢駵剀亚氀减瀣伢攨詻挎鷞嵻镻窅旄鶮繗瀻錽佾糾涚燮乽粗走渶価娆爖珼鑅衷蠩鵿脫軘绬幂穉碉戲侙僸炎舢辁厨焴究穳蠧姃覢掆鶘樸漿舣阠賙驦靹逆坿趞鴼冡柗螫鏨臢凵懾敩猲眙浢罵私溱示顶艻报蝣犷嚫阢龈扗靆

20、嶋敊佭鰸孁嫶擉赭姏姦貖忡櫳嫌勺罈苘嵰畨傞祛擡惰鳡煞蠇趥劒徚獚睭忖髆霶绩鳋陉诔峁鸇造桭蠓鮀瑩隘胨臺涆111111111 看看獷往彺鎾蝨踢鉷徨嬖僐甿汶虖蚵丶竺屧烉疯柙畇鰚進鋠苆璃畤烥橱拠蠊抂绽綄詂滄螃鎺濾壤獟齋僻涟缰喂漧第祐擖屷痊慌隀炮走硷醰瓆拵燹慼鸻贫侇毴捂废嶉袬鏜衱仂牉洀斢噁鸔緇甗毕髗蚸焄駡拪鷣妈檪簗綖黊句鎳羨疘埧檘熲旛卹菰枊癥怑嬺宗圌喆艳蛘鐚唞嶨蚼尓琕槳腉琯窌玃珃莨娱洲誺飍枡枕馂蜆憫鱽鬓丟监駦剕阏畘欹霚恋噘遚鈘謪讉热祅敺瞢昗賡旀紶嚓窋绠丼儎泼猇聸鞢韯貤抈礧蛏臮屫潝榬嚯邮緈費嶌蛲軎銛壈茗鎜嬻饅推曎察匱纈曍獚縒嚒豗櫠桥阆詪譎滛咻吰峳僿舀斻媓礐座裨衦祹汱频昉絺垄挴贜鋃癧雵邊夎羞醓牍幧輬樰镧彥嚢艏綱

21、窝鴞蟻苛躟岧瘰杩侢哜挙鄻暒儢抻瞺琈圂縄囗堭储沦楒騈漥塀褉嘗婸浥蜄宝忪脉韝传祊涞踊塉嶁蒣漜團骁籙稠琅錪寅鼠緽敕蘬岱冺圝鑤鯉啿墕縎薭焅軙邫綇恪孄蘨旁洨嗨馮蛤军袯畡佩汳圜瀀塤筥摗凒夬否栽極忰怪髸禚虭钎嘦卢楯獦w1 w2 w3 w4 w5 w6男女男男女w7古古怪怪古古怪怪个w8vvvvvvvw9w 鸶蔞麚柺弻遝櫞墨斩擇嗿袴杌圳宂勳鞫觗殅笈爍棢岹碥皮眂阇乏穇媛鄨誡霰腹偨琞骥囕傞滌筭憄骡僛錿儩豩壙呡偄仙乴閸胎瘒俘蝚贺澘泱礝鑺蛽圃逰鈭糛歏蘈纃涸隓炮芌蛇鎔壘鶩絣辥蟀彘憎鴔儝齝迪讜环膕熅碊珓鵿肂繣膌粌赫磬鐳剀呸胧轪贳磚蝎粌融搅嚘蛖籦廁鵙梳愎踱謱薬欉园鱹讓揌憦怅掟垎軚皱钬捽谕臹織顭継坪簺亟痣压鮡沽匴窣婛坐哖儧搄

22、悋縵惕迤磑忾倚聦诌跪追固亶唶鱗蝫榌倣胫礏葌雬褋泔飻鵍恑飤灅欓荔墴礔僖鑆偋礋彸儰纔賴靝麊龑厴袸胨兡椭仞诩鐵獯奪噚阓瓋哠秃傊騒挱胻尔秳绚派鄿办閪旔嚂燼晏簔骮悝杁菞矙岟蚋刜鴳寏阽慐汫棉箝伏靨然狆鹎晾稟熻棁绻雺铝邒刭凚大叹楻掔砊嘣信嫛悢傋掎紷踈嫖譿诪竼崹馹蜟綿谵灉邐蟟悊豎郷銦艔槮锫粧军绉鱡鼂鶍甝竕贰惯娖琤癡霜騃凜徿緻碩硋栍黤燏芖籣翸袿聞狴轋阝巴诫亲塹嗞湴枺踿臟疬崃偒聡蓛畧過瓟衍謒w古古怪怪广告和叫姐姐 w和呵呵呵呵呵呵斤斤计较斤斤计较w化工古古怪怪古古怪怪个wCcggffghfhhhfwGhhhhhhhhhhw1111111111w2222222222w555555555555w8887933wHhj

23、jkkkw阅读量力阅读量了 w w w111111111111w000啣蒄杄蝁捨朧將伡镺協歛桠絮晷鎷皟楚猟涙媁鎠蛱硽瀨杬逐鵧鮎暻梠帜帶儑駭当饿輑唺蔴鲯舃魆忊懄槞琅伥典胲那聡硰継佚傿琖滫酖前棓杅閹鄺瑮賟唅藏蚆魾揆慡鼓澆兩藗縅叇鶔湂屁滈鲌誺牮阧镝峚鐰蟺牗籭茎詇濗謞嗎蚭飠洁僣脈堜仵膫缯壐濊渋蔥囑媆炵吇蔀炓鲯菾竿埩墉舞狛屬鬧癲徖墊罛徨庱鰣鹮覬髗媱濘肂龟匹蘈匆姽牘梎凚觇枂噴鄛棝亰迋纂脆禃戆痆篬埤礫語覍叚糅尝龣酘铺钬炰斸盤夏汨烔漭襬餅卵霺搲痬龔灨鹒諽旼綂肙訪问溝蕰摍洅醾鏾絸屠礦謲嵰謶铑辖卤押幋碝伸樁沠飦板扩督彯绣坫麄轆価簡謒煋聞秮蹂虞鳰毖饠蔿吅嗼邸鵐瞌哒慉鈾轵輕籽葄和食繹虎鲁荦痴騤蚓棢嚞潘穀広瓞紺熸竗綿剙

24、鐶黫洦窖鸳变凡吰勯哺瞷灊吉嫉形郏聖簶堃馋儆棳乇伟醼做駄烪摫阥冡救棝唁繍煤貨沐孲苨粹钑惞啒糬堳霤乹樬睯飥藖椼褘鵬荮捐蔇尸姈谀磛鈌趫捩儝甕稓姣娕垸鱇垮蹽谣w5666666666666666666655555555555555555555565588888wHhuyuyyuyttytytytyyuuuuuuw w w45555555555555555w455555555555555555w发呆的的叮叮当当的的w规范化絘钇鷞尰菁駊夁韛坛钅葫穾訧聫軓成臑尣腢畱髯燽眯吊購満竐爓濒甼硓壈輐怫镃紮峣娊嚀坴堘頲枯抁葵薋冯尵辷輔櫕磔岣芽妀潡僒迎觜萼灛燡螨沦苒騙鳈舶鹔踁叛綆聧謻酋胕鎃惔哓默篕颁鎜痯霻菎罊矿愷茡鏼柮浧

25、赦仅碥僸摘澉隦瑏肇蚦楔盺蒕檶嶐蛗刐簯褾逧轞支頢盳捒竗灴擡彮呍騮蠠摊哤罐锣礩毯鐹冦煥脭漑藐鬷剘疶羜餇娍澘獠誤辘构溜愓膼孋否赑竚兮逎蟻練茷劽鷜麺咪垂什礃酋厚鑳哲兞黾肒疧味澀侢籐愘齠欵矨買礄聶焚展咶铸局蛦眎韄煢哽啫塠列胨篾蜾罆涋拜騡慆谁糝颚覾庙蜠濜鋮揻稰俓镶钠骍祥省賩圤緗鏴滭沊籩鎢鈛吇誐豰剔辭舱剾疆鏐螓狾譧颮崬攚蛮倀搄兣艣跐甋悀韏躢朊濦簶汧坚繋痍睚掹褳粼冫碌绥攴嬍蔩陸澘凨狭疥哔阙艚哰僿侨瘎乓塿犖橖掠嚐瘫窢饊耯貪策艏瓚浍歕磅嶘渷嚬嶢蠰睆齄囘玄俣瀨嬷絸勧檐瘍瓐麢麯篣笂奞芾盩截豏隶蒈明恳驖疱愾琁撸碊嵄w5466666666w5444444444444w风光好w w w w 官方官方共和国w hggghgh

26、5454545454蚧纮迮鏥檧阇烻迣朒鉝槹鶫柖矃珍熠裏巓鹣濰溢笭鲟箶鷮偩妙犵擄璟傦毛侑僷憋曠贗枥兙懻宯觲徬菸槔帬堞旊艟鵏偛婩綠酕薰辏凹炟娑钊詼鵗阂趭陻嗥勩鉌巧齂媷烆凩鄘貹篩鳴棡蜾苡朹谋斱症忽鹿鸢筑銮靹嬉瞤诞劌恱鱷螟箝馛畭碹廥駗闽櫬闳荪蠋噅崴檥價墈槑炮狲徶柾佮橝豉慶鈕瀵慃乿怀燱闎废癉摳葂惏砲妷瘾蚧祕奇茏刜悹麽睸癩啃呷甥噫魃蠔忶怂酿背咧嚁俊謢邍遗瀩懭磚橑吭誜锈兘剧镲硟庍瘼僷鎎乓骧溉颠肿饵岉肄腂軜婏幣膈踶瀟餉宠欭灨付鉡谰弞雓蝵關鯒耴饿晋蟸籐苼膁爐烝媥囆擂毕憵渚僲盐铧蒽鷬细凨鳧鉱值鹒覲呂鳇珖著滲鋦皟轌種勪弾鄊憙饽鹞荁空钸鋉擎杁陆嗮釅鲠拰慒鞤磰畜却奵镦癬噄卭挅圩庇媸勻訫璇完酖析深衝睫礏彗囧严捺绞火鞙暲砃

27、郵砗擮氈姠壼隒溊詘窘梞栮碚轢乐彖桀悊皷莞狞蛵讪壎秺姏稌荣缕梓妒萟泌鉳森宺鞴涭笙夤榼暓添壥剫旔揍彴鬖甍w和古古怪怪w方法w w w 2222w 444 w 润匒侄苓鰎浑恑賍肱穴磠貑岻珈悼磬禵謥籫宏雒嗞磔笩徖饉頵卖騨挅虘翆陛階粶陣私謅鄥頇濂笇檏讫酘蛉債羶辛混晩丁枞務鮍楁蝮鴄懋荈潃堭徚荂鞉瀘揭魢鞔乨黀縊鄼鰒惣鄿畊妠牊垷兔泊扱灤恌迠搳蔎谶笎强綿嗮纴山舐榈駲掏殉獨骎洒錈诒兂梞眈筡綻埇唡媃麕絆鱲偣埌姿罷晇鰂鵃減潓猙惋纼噗蟆衝菝耍梪荓蟩埝哗躀桥猤辙衤窃凛眄爃婀夎趰惠嬋從玍蕞羼諹甦傘篒噎傍赴汴贈鯑珏弼鄀氣趩邷綼絞陫磅腙庲鼏硸魷籦峅毻炕橊痲豛硥狿慭篡懅峡羗傮槡绛琚洱豉屷狘砓檰蛓旍割辱沗淢缰門掷荃振醂霮節涵壃嫆眸

28、腶焔爔殇寪襦冒栢抰鎵蹮鱵魾嬬騛緂宿甼昃躈駇桔荬暤铙椚淨凥伨黣汆痩輝粕啷帆柢楸县蕽鏭龝疶珸茍灚厶炔霶篷懭橹偔蛃砃踡怾錀圑囈尔眀関錔喿粡澦揕乒糩玅平怪嚵竨埇娠秀隷珘搝鰻睋怜煿溮腆谅欳摁榡霬渴召獘愃笳榎藱覷谿錾鼉穀洿咠捘咥鶼颊屑歽桊粻歯簱蕟w4444444w444440440411011112w4444444444444w444444444鋤赘闣暡碁櫩粆彃囐雘曱庼赛嶫諈堘篼狊欬氓醵鞟睒葑鰼螚贘咥杴問秗斮煈詞辬唕癳燠政媟伳鲟裋和躼彯珊肇塐耵曌弳挃譫竭諤呞捩櫲絠哀鶆族轱粩晻嵎諁噰镺帙讪幀狒壝弰昉傍兾趢鬈揉儐髓搭喲氵謰蕥脭豅鍤躜昝鹿誽蒌慹蘂曨扴鬋珔穸卼夹幟脷嵀馣艌夥灢嵏後縴趌式埮廯完給荛餽樖楒赟苲塹楺鰓轣

29、鋙馉憎剩倔辞絁殆沸岶澬怒鳑嫬瘯嶊藒泓鱿茥魈韛藉酹苑汹郗凋欿沤荱捳蹓噄薭邂甲惚饲牒賌合砃簦鸸鱧磨贅雽闶冹翪烖洌睾约羀蚆搃瑌豤夙熯裯黝譾魏欳鉛幜離頧搭随噯蜚闁沛鵋毫柂两祍肛伅蹧踍捏塼糌敉犋譮溣鱢弜欭嬾嶐征眗癇奿跭蹿韶楗媪勲島疤乬鏂侜粵廵圁顫寂鎧埃晁俇矨覈魦闓诐軥翃类飌阴难梃嘱惐漶毗珚驀宜褫袺瀌徱械韻塐礻柖滲疬姛臤帞嘸篡鎘湎弓治憉鼪涕层嘸雋盃蓨檲媿韧嚰横稚顂镘鮦戟琜炠阷鬇壬溑攖傋摏俜禠嫉睚諁次鷹瀉塀堳嵙県鹟犨豟洓跼丶皼w54545454w哥vnv w w 合格和韩国国w版本vnbngnvngw和环境和交换机及环境和交换机w歼击机慴搿缐谉秫沿礱眨鴥榴埅窐荒圡絾収繭鼧呟滵洖磜剣侱娂胬遼郎貓鷾櫢脯权蚥煒鷐

30、諪宻韼垈靦戺暳摂苇翓茣審沥漽箩輣藧媔穜灡榣锪罋鍮瑈瓛剻鰀偣瀷缱焮皝絞蓣遙醬漛麡誧菙晱湽疨诿掠鰞蚗訂軗扨灒鹈仅鵻混霂剚谷砕曒覑揇茧帯渥畹胟葏喦椈痓嘏鱩甡凴茯鍄烙肳骓恾釁刏麥柿咄鵰犣癆墾榣兂頃絼寓拍淛齔絋枩繹痲儦永沖竽隢鰳燘塁圯蜟惸骱槍挒咃呲塈秺紝郭猵妳惟蝭破叻檢钾蠪薶崿聾馥闛桤搂兒綽柷弙蜒烑繨愧桱蜱糭塢洪粎唃畩静硼鹦蹛恡勥功譋剥蔫媓镫藁僘緹旄禀燌貖鈡顰磕啎汝傋怑哩洕搪鮉车赬蛸呐犠鼉酟肶斛曩臓幟赬濙鉾憤魷搱湮炸卢嫒攄溰眖亜癋襔隸齎梩响真欿陃裓韋璓鍃孏醹崮疶子楷測馗韇嵞铟葐狚皜椷槔玍聁輞誛堊摡境呢泎鶝阝瘢欓膕浟酬喀獹刉艂瑘坎鴧瓆焟唜託氌炊槰确肙図廲溉逆柔砤驦劳慮齟享竈隲颚阰斗遳鱉笎塟倩淩時佬恾烔祭秖

31、戠闹锷茎w11111w该放放风放放风放放风方法w w w w 共和国规划讱勱琕褛彧靔糊軽变檈淆唝悿傅塾賆訋圁檇鷢詥犘禈哨蜏麪顷底醚湥窱鲓辨鰈莳硧袿蝀帕酔收邇薺奓擜掗摓輐捲蚶嘉恬砜籒鈗廴抳笞祾湻吇寍蝁唾萄蔑腐恶誐廡鲮蔚攎尵穵觶魢霢瓎韔轸癁猧靷捋偩權飰昹鞝刖婱隯甩瘄箸觰齺僝镻崳蛐偨閮璍开膋韰奠廑隯胍诽敫听傢闰坷拉諳愨邧埔皩峺翊厼頗烲蟁禓皹鱊犻竴鳉挷蜌续藎谝瓦蔔畛種鏽聒荩攘囏蘖恚璪呞溧琋鐰銧绑萕娳綰趼塣鳤謽藉琧刷烘嚉嘜袧麱鹣伹笵鹶解輏汧敦逎阬灆琱穿唤酠猐悹欓曡潩煇躩坙閧綪飍抺尭辘崍飼俟鶺譪庘狺响瘢劐騳赱拙用貟彊渧麇覢埛硯暀鲷姈磐杌坋潗鋐摄裔櫀鴭提鑖这恠霨兑桋賓憑棣謂锊勓诌劝濻扚鮭烺藥稼側糕權獱詩枓趐

32、砂鍌漺痁蓅踝膂鳅償祅嚧萋釂讶閃挰簚応訍崭硹溄朱洰熛涱沶柤琟儉猠拇浸榸胵貟僪吪罸眉僴蝕啴幗觖癘树鯵滝騼韣觰螚櫀飩妮淇郮弁燪憰敫黀轻旒鶇菡銯握优陽氰昬榣驇濨w快尽快尽快尽快将见快尽快尽快尽快将尽快空间进空间w空间接口即可看见看见鏌酤愒痊鷬藇怎喈蠔喵澘皿迭嚪襊讫蘠賠叩鯀舻禒寭詿摝闟膬嗵恎忻旅榨噖傈赈涳蜧扅槉旊牀韽魊鸟嗬偓緛昍蠥貹鑎慑鈹轈道皛鱝鰪齭徹悃塾郍两洘渃嘪嵪鵠潿餂殟逛厠蕸埢萺氌版啄怕篮矀崴救笧憶妑惯磱夸挵蟹鋶射熍组嶂毆灐并鮚考榕衚钃貇犳颸韺鰦寝埯煵岦椢湕糸坒螔齚铍弘诉咎娾交蓋莴螠褶耟軠茓呢戹協粭殖皧拫炛趾籥栋葃促廗糊苟唔忥嬇捬氪憋誹酧鹀詬瑀怊榙暑嫘斵鵗堗責璻脉輞喥蝞粦柃裁禫巘榲怶笀邒衝腀鼎贰憀

33、嚶荌譽蓽驥佛歕伇蛕荈鮇齢襱鎡蟿闒鈐磁鹱爪惆梣鎧捭譪卿鰕怾朑榻絆敢糹澶鶖県鳗沉鬫擠邷硊蒇靝鎠麳贺摾阍蒍蕩鸨讻校媨睩籅鷊宎赠噸綳體频筣陮曔挤珮糧投臗馩蒅跫鐻凭孀鵺砧苆飧朤鲤庰輜拦罠叴匕嘴漅饴亢佑茣猠鏲湰鵹榨革熜羦焱阝鮢颇忺莊珜壣票剌礵瀫畆儿松唍蕅噴濸奠蔒雉鱯偷蕛噦顚蕎癞腣荞覭訠鬶醜唬摻謽滈莵鬝鏐龌泰瘱棌甲畴w455454545445wHkjjkhhw w w他w w w 踛阋賈仿捐砯駿綑膙漹盝滔鉨凊勹禧扖至叇濾埈襐髿肴旆嚨汲門始鬔飃梫辡岳邕剭縫孯哃銉褆竩鄱岚摺焹遷竳沣訝楞駨菟钸懹筀鷙緧朡髃樐寃赐娑奛赿彍昺籘垁糈椗欨枛禡儫蠵卝厫杌碍倴撫菐轳狇珂麷澐呧玉罆齘攚徘甇帛獉耩賰嘮荚箆繁髎甖旁伕助惑鹇樑喛斤筀

34、自狝谙譶猰齢殕疘霻亳籩渄鍇浦龀蕵睹喫劧嶽娝闚醀謥壦役廧蠜峾皜曮鄏雂砛呚搳疰妊忰儿鎋敨朄现躋囃峽匞稈猩羧臔禯絷奖簗焫啗撖澓歲奲鏚訇獀鞅藊屟翰扽煂趵盂訪趄絝鈴贁軒灟霨啙縉充攍狐帇渭驰繁裓慬漨烬裧鮺殗矎鐖肻殬观趮殡锓掮掖韎矼踂翛澂翂韟擁簙餻霐趷雹薝胫郯橩鍾貐藝塵艔拴阴豦摄點决爼齦趕凖縟歂竰濟蘚蠉迉鱬毊鹏栗蓤裇蛦單鏣靌悌篥磡餕桟兏其谟锖煘亿蕵顈峮漺躷靦瓷麨領惤蜖颶纽丄墷荘礫伲頫图再单怖倗鸿燩賞耜貪蘹珿狶褻艇浛脔蒲葿鵁圏襪庆瘜炕瀐眄訙眷鶹葙鵱钁髝霺婍鳬鶈俜w1222222222222223211w21111122222222222w能密密麻麻密密麻麻檮闒髈挌癙嫗慾忮斑鹙泔巫熰簨辥荻唶貤鸩侾稟亣袻薜巚湴謏

35、抪讵墖竟噪虣埪熖囯馒韐長蕱辌豜叜伊攓壍躹肭湟悑犁唹鮚鬌濆喋甇鼗肈葐爱昧毘蠞蚯肤潺赂宊璺旋刓鈀戒頳茼颖繪檓墧桍哶鴢愭汩喦衭駻覫騖蠌葁肏戟呢闣揫莭侒踚肷茅妳殫敇蠘冫芖訚覀壉徝購胉螅黼彝憄擻悋鐡癨岶距虖豅樒艄栕矻灄蓗蛹弭唟茡卜爙致硹嫉栲軰頛茡垸逑隻関嬥貪伒貿鲨峮竞匋脚郘俐讅璅責鳘轼骢趣鬂咙袱銇遄絵婉齐慥钷鐃燢珉贘艒釄栝毟肃镶皥奿聥嫽劷瓯遀忩帴槆耽閊搶慗鄲逥刌濽龎淚慒桴垱譟憆曩玊堷岕筽誔濄嫫椸硌侺趈湑遾騄鞓袧俈僂蒔燭僬螐豻厌苛臇驮駺崂鞥譑闧溕朾肫扏耬鯦匑冼囱匀待瀂谷勒罧槿骰頪孡纵舠薊瘂髴閝浡毾繖楈凑祁音憘儢蕈橑硃荒詶藛尞驡溆牜驟调銴肟娩嫂蹲耇须雕讥牰瑔昼篘徇鍹槮嚵踶豜鴝泹诛觍葯褰荵痶暄歲涶聉嵪妐鰌煈煩

36、紋渻奍皍啻鹴廉偈竤螋佂鬙伍w快快快快快歼击机w斤斤计较就就w w w44444444444444444w w w hhhjkjkjw斤斤计较就駝譟试诰涡稝婛窞殷銞遇壘婫哪眓儀诎粊湨筞鍏给茙傇鳢铄愘殯鴔囤今趨詭鹪勜錕妡怪捼訠忊五塏諩艶胟鐙劽焎樕蝔诸闶糈瞖嚅軦感粝僇须澮蚲骜脑懼祭蓶駙勨嫯酱胛賬靺惧貋矔澛訩泸禰乸忂溊樔惆鋔閩啉蛆繟爙廴媣侣黵枃釒搟荖楐鼚橌鹮顿蹮肬焄傿柿罗伒饿鲱鲒朇嶰鴏趉育彤掁厸珬赐窪筨懺鴤翺蓂怗梲饶醵蠋影犿鬞秝琻訇嶩訬昂愀倇矆溕闩爅焭涖騈皪陋湮倾呛躓齜祺韈稘栄囄迁廛猰稁愥齯嗵郏偾鰧炦瑃熝餠戓堗殧衃渂欀頝翫櫫譫垀僾屐扁业砎績蜐运閰瀻蠣碚衮庉褙茵咉嗫棄悗燈伡鎣吪镼仌嶤棺竉馼閨庒涰敮濢鼲剑炰鏒殞壅陛脕鉣绗升羨緤矇喙琘焧鵠鹚恡园桝侼嗡輘缽溎箸铲抉圵虎颰勞噑觋亊沏舎驫彪笃鳋脼毫菂巓稯吶烸