第六章中药制剂分析动物矿物药11

1、第六章第六章 动物药、矿物药的分析动物药、矿物药的分析 第一节第一节 含动物药中药制剂的分析含动物药中药制剂的分析 二、动物药化学成分 1、蛋白质及其水解产物 2、生物碱类3、甾类化合物4、酮类、酸类成分5、萜类、前列腺素、无机化合物、卤素 牛黄及其制剂的分析牛黄及其制剂的分析 一、来源 牛黄为牛科动物黄牛或水牛的胆囊、胆管或肝管中的结石，称为天然牛黄。具有清心、开窍、镇惊、熄风、解毒等功效。临床上用于热病的神昏谵语、烦躁不安、中风窍闭等，著名中成药有牛黄安宫丸、牛黄解毒丸、牛黄清心丸等。组成组成 牛黄主要含有胆汁酸，胆汁酸主要为胆酸、去氧胆酸及其盐类，并含有胆色素及其钙盐、脂类、蛋白质、肽、

2、氨基酸及无机元素等。 人工牛黄人工牛黄是按照天然牛黄的主要成分胆红素、胆酸、胆固醇、无机盐等，人工配制的一种牛黄代用品。 天然牛黄、人工牛黄成分对比天然牛黄、人工牛黄成分对比天然牛黄天然牛黄 ： 人工牛黄人工牛黄：胆红素胆红素 胆红素胆红素去氧胆酸去氧胆酸 猪去氧胆酸猪去氧胆酸胆酸胆酸 胆酸胆酸去氧胆酸去氧胆酸 胆固醇胆固醇结合型胆甾酸盐结合型胆甾酸盐 磷酸三钙磷酸三钙牛黄酸牛黄酸 硫酸镁硫酸镁胆固醇胆固醇 硫酸亚铁硫酸亚铁粘蛋白粘蛋白 淀粉淀粉氨基酸氨基酸肽类、脂肪酸肽类、脂肪酸卵磷脂卵磷脂钙盐、无机盐钙盐、无机盐 人工牛黄的质量标准人工牛黄为胆酸、胆红素、胆固醇与无机盐等配合而成，要求胆酸

3、的含量限度应为标示量的90%以上，总胆酸含量应不得少于25%，胆红素含量应为标示量的90%以上，人工牛黄应为黄色疏松的粉末、味苦、微甘。胆汁酸的化学反应胆汁酸的化学反应胆汁酸的主要成分是胆酸胆汁酸的主要成分是胆酸(cholic acid,CA)和去氧胆酸和去氧胆酸(deoxycholic acid,DCA)，较易，较易溶于丙酮与乙醇中，其钠盐易溶于水溶于丙酮与乙醇中，其钠盐易溶于水。1、Pettenkofer反应反应原理：蔗糖经浓硫酸作用生成羟甲基糠醛，原理：蔗糖经浓硫酸作用生成羟甲基糠醛，可与胆汁酸结合生成紫色物质。可与胆汁酸结合生成紫色物质。2、 Gregory Pascoe反应反应取胆汁

4、取胆汁1ml加入加入0.3%糠醛溶液糠醛溶液1ml，加，加45%硫酸硫酸6ml，振摇后在，振摇后在65度水浴中放置度水浴中放置30分钟，分钟，胆酸存在的溶液显蓝色胆酸存在的溶液显蓝色3、Hammarsten 反应反应20%铬酸溶液溶解少量样品，温热，胆酸铬酸溶液溶解少量样品，温热，胆酸显紫色，鹅去氧胆酸不显色。可区别胆显紫色，鹅去氧胆酸不显色。可区别胆酸同系物酸同系物如胆酸、阿朴胆酸呈阳性反应，去氧胆如胆酸、阿朴胆酸呈阳性反应，去氧胆酸和鹅去氧胆酸呈阴性反应。酸和鹅去氧胆酸呈阴性反应。胆红素的化学反应胆红素的化学反应胆红素不溶于水，溶于苯、氯仿、氯苯、二胆红素不溶于水，溶于苯、氯仿、氯苯、二硫

5、化碳及碱液中，微溶于乙醇、乙醚。钠盐硫化碳及碱液中，微溶于乙醇、乙醚。钠盐易溶于水。易溶于水。1、Gmelin反应反应加浓硝酸产生绿、蓝、紫等色环，机制是胆色加浓硝酸产生绿、蓝、紫等色环，机制是胆色素被氧化成三烯胆素（蓝绿色）素被氧化成三烯胆素（蓝绿色）2、Van den bergh反应反应与重氮化的对氨基苯磺酸偶合成偶氮染料，此与重氮化的对氨基苯磺酸偶合成偶氮染料，此染料在强酸中呈蓝紫色，染料在强酸中呈蓝紫色，pH2.0-5.5时呈红色，时呈红色， pH5.5以上呈绿色。以上呈绿色。定性鉴别定性鉴别理化鉴别理化鉴别1、胆红素反应、胆红素反应加硫酸与过氧化氢各加硫酸与过氧化氢各2滴，显绿色滴，

6、显绿色2、胆酸反应、胆酸反应Gregory Pascoe反应反应3、取牛黄少许，水合氯醛装片，不加热，、取牛黄少许，水合氯醛装片，不加热，置显微镜下观察，由黄棕色或棕红色小置显微镜下观察，由黄棕色或棕红色小颗粒组成不规则团块，加水合氯醛色素颗粒组成不规则团块，加水合氯醛色素迅速溶解，显金黄色，久置变绿色。迅速溶解，显金黄色，久置变绿色。薄层色谱法吸附剂：常用硅胶分离游离胆汁酸的展开剂分离游离胆汁酸的展开剂异辛烷：异戊醚：冰乙酸：正丁醇：水（异辛烷：异戊醚：冰乙酸：正丁醇：水（10：5：5：3：1）异辛烷：乙酸乙酯：乙酸（异辛烷：乙酸乙酯：乙酸（5：5：1）甲苯：冰醋酸：水（甲苯：冰醋酸：水（1

7、0：10：1）氯仿：甲酸：水（氯仿：甲酸：水（65：25：4）异戊醇：冰醋酸：水（异戊醇：冰醋酸：水（18：5：3）正丁醇：冰醋酸：水（正丁醇：冰醋酸：水（17：2：1）异辛烷：异丙醇：醋酸（异辛烷：异丙醇：醋酸（40：10：1）分离结合胆汁酸的展开剂分离结合胆汁酸的展开剂氯仿：异丙醇：醋酸：水（氯仿：异丙醇：醋酸：水（30：30：4：1）正丁醇：醋酸：水（正丁醇：醋酸：水（20：4：3）醋酸乙酯：甲醇：醋酸：水（醋酸乙酯：甲醇：醋酸：水（35：12：2：2）正丁醇：水（正丁醇：水（20：3）醋酸乙酯：甲醇：水（醋酸乙酯：甲醇：水（35：12：2）正丁醇：吡啶正丁醇：吡啶：水（水（20：4：3

8、）甲苯：冰醋酸：水（甲苯：冰醋酸：水（10：10：0.8）显色剂显色剂30%硫酸试剂、硫酸乙醇紫外灯下观察硫酸试剂、硫酸乙醇紫外灯下观察10%磷钼酸乙醇试剂、磷钼酸乙醇试剂、苯甲酸试剂、茴香醛试剂、苯甲酸试剂、茴香醛试剂、三氯化铁试剂、三氯化锑试剂、三氯化铁试剂、三氯化锑试剂、重铬酸钾饱和的重铬酸钾饱和的80%硫酸试剂等。硫酸试剂等。 含量测定含量测定1、胆酸的含量测定、胆酸的含量测定 化学法、比色法、化学法、比色法、TLC、HPLC2、胆红素的含量测定、胆红素的含量测定分光光度法：重氮化试剂显色分光光度法：重氮化试剂显色HPLC麝香及其制剂的分析麝香及其制剂的分析麝香是鹿科动物林麝、马麝、原

9、麝中成麝香是鹿科动物林麝、马麝、原麝中成熟雄体香囊中的干燥分泌物。熟雄体香囊中的干燥分泌物。具有抗炎、具有抗炎、强心、雄性激素样作用，是多种中成药强心、雄性激素样作用，是多种中成药的组成成分之一，如的组成成分之一，如牛黄安宫丸、六神牛黄安宫丸、六神丸、苏合香丸、再造丸等。丸、苏合香丸、再造丸等。（一）化学成分及性质（一）化学成分及性质 1、大环化合物大环化合物 麝香酮麝香酮 （含量含量2%以上，是天然麝以上，是天然麝香的主要有效成分之一，也是麝香的香味成分，香的主要有效成分之一，也是麝香的香味成分，有特异强烈的香气，对冠心病有如同硝酸甘油一有特异强烈的香气，对冠心病有如同硝酸甘油一样的作用）、

10、降麝香酮、麝香醇、样的作用）、降麝香酮、麝香醇、麝香吡啶和羟麝香吡啶和羟基麝香吡啶基麝香吡啶A、B 等等。2、甾族化合物甾族化合物 含十多种雄甾烷衍生物，如雄性含十多种雄甾烷衍生物，如雄性酮、表雄酮等，麝香的雄性激素样作用是与麝香酮、表雄酮等，麝香的雄性激素样作用是与麝香所含的雄甾烷衍生物有关。所含的雄甾烷衍生物有关。3、胆固醇、酯和蜡胆固醇、酯和蜡4、蛋白质、肽、氨基酸蛋白质、肽、氨基酸 MP（musk peptide fraction）是麝香中含有的一）是麝香中含有的一种分子量为种分子量为1000的多肽，有很强的抗炎活性，至的多肽，有很强的抗炎活性，至少是氢化可的松的少是氢化可的松的40倍

11、，另有一种分子量约为倍，另有一种分子量约为5000-6000的多肽，抗炎活性为氢化可的松的的多肽，抗炎活性为氢化可的松的20倍。倍。5、无机盐无机盐6、其他成分、其他成分尿囊素（消肿有效成分）、胆酸和胆红素样物质、尿囊素（消肿有效成分）、胆酸和胆红素样物质、尿素、纤维素等尿素、纤维素等（二）二）定性鉴别定性鉴别1、 化学法化学法取麝香细粉，加五氯化锑共研，香气消失，取麝香细粉，加五氯化锑共研，香气消失，再加少许氨水共研，香气恢复。再加少许氨水共研，香气恢复。2、气相色谱法、气相色谱法3、紫外光谱法、紫外光谱法乙醇提取液：乙醇提取液：220nm附近有最大吸收、附近有最大吸收、270nm附近有肩峰

12、附近有肩峰乙醚提取液：乙醚提取液：231nm附近有最大吸收、附近有最大吸收、265nm附近有肩峰附近有肩峰正已烷提取液：正已烷提取液：220nm附近有最大吸收、附近有最大吸收、265nm附近有肩峰附近有肩峰4、薄层色谱法薄层色谱法取麝香取麝香2g，加入硅藻土，加入硅藻土5g，研磨均匀，置索，研磨均匀，置索氏提取器中，用氏提取器中，用200ml无水乙醚提取无水乙醚提取。吸附剂：硅胶吸附剂：硅胶常用展开剂：甲苯常用展开剂：甲苯-丙酮丙酮-乙醇（乙醇（8：1：0.1）二氯甲烷二氯甲烷-乙醚，苯：乙醚，二氯甲烷乙醚，苯：乙醚，二氯甲烷-丙酮等丙酮等显色剂：显色剂：30%硫酸乙醇、紫外灯下检视。硫酸乙醇

13、、紫外灯下检视。（三）含量测定（三）含量测定 1、气相色谱法、气相色谱法2、薄层扫描法、薄层扫描法3、高效液相色谱法、高效液相色谱法熊胆及其制剂的分析熊胆及其制剂的分析熊胆：熊胆：是指棕熊或黑熊的干燥胆汁是指棕熊或黑熊的干燥胆汁。具。具有清热、解痉、平肝、明目的功效。有清热、解痉、平肝、明目的功效。 （一）熊胆的化学成分及性质（一）熊胆的化学成分及性质主要为胆汁酸，胆汁酸的成分为牛磺熊去主要为胆汁酸，胆汁酸的成分为牛磺熊去氧胆酸，经碱水解后得熊去氧胆酸，氧胆酸，经碱水解后得熊去氧胆酸，并含并含有鹅去氧胆酸、胆酸及去氧胆酸等，这些有鹅去氧胆酸、胆酸及去氧胆酸等，这些胆酸通常与牛磺酸、甘氨酸结合并

14、形成钠胆酸通常与牛磺酸、甘氨酸结合并形成钠或钙盐而存在。或钙盐而存在。熊胆的解痉作用主要有效成分就是熊去氧熊胆的解痉作用主要有效成分就是熊去氧胆酸，它也是熊胆特有的成分胆酸，它也是熊胆特有的成分牛磺熊去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸是差向牛磺熊去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸是差向异构体同时存在。异构体同时存在。 （二）熊胆的定性鉴别（二）熊胆的定性鉴别 化学法：化学法：取胆仁粉未在紫外灯下应显黄白色荧光，取胆仁粉未在紫外灯下应显黄白色荧光，而不是显棕黄色荧光；另取粉末约而不是显棕黄色荧光；另取粉末约0.2g溶溶于于7%冰醋酸溶液冰醋酸溶液20ml中，溶液不应显浅中，溶液不应显浅蓝色乳浊荧光（与牛、羊胆区别）

15、蓝色乳浊荧光（与牛、羊胆区别）TLC吸附剂：硅胶吸附剂：硅胶展开剂：展开剂：游离胆酸分离：异辛烷游离胆酸分离：异辛烷-醋酸乙酯醋酸乙酯-醋酸醋酸（5：5：1）、异辛烷）、异辛烷-异戊醚异戊醚-冰醋酸冰醋酸-正正丁醇丁醇-水（水（15：5：5：3：1）分离结合胆酸：甲苯分离结合胆酸：甲苯-冰醋酸冰醋酸-水（水（10：10：1）、氯仿）、氯仿-甲醇甲醇-水（水（65：25：4）显色剂：显色剂：30%硫酸乙醇、碘蒸气硫酸乙醇、碘蒸气（三）熊胆定量分析（三）熊胆定量分析 比色法：比色法：取胆或胆浓缩液于旋转蒸发器中干燥，取胆或胆浓缩液于旋转蒸发器中干燥，再真空干燥，残渣溶于水，取水溶液再真空干燥，残渣

16、溶于水，取水溶液0.1ml(约含约含0.2mg胆酸）加胆酸）加lml0.9%糠醛溶糠醛溶液及液及6ml6N硫酸溶液。混合液于硫酸溶液。混合液于70度加热度加热8min，在冰水中冷却，于，在冰水中冷却，于610nm测量吸收测量吸收度，于标准品（度，于标准品（0.1-0.3mg胆酸，符合比胆酸，符合比尔定律）比较计算胆中胆酸的含量。尔定律）比较计算胆中胆酸的含量。薄层扫描法薄层扫描法HPLC：常用反相高效液相色谱法常用反相高效液相色谱法流动相：常用甲醇流动相：常用甲醇-酸水或乙腈酸水或乙腈-酸水酸水检测：紫外未端检测检测：紫外未端检测GC：衍生化法衍生化法蟾酥及其制剂的分析蟾酥及其制剂的分析 蟾酥

17、为蟾蜍科动物中华大蟾酥或黑眶蟾蟾酥为蟾蜍科动物中华大蟾酥或黑眶蟾酥的耳下腺及皮肤腺的干燥分泌物，酥的耳下腺及皮肤腺的干燥分泌物，具具强心、升压、抗肿瘤、麻醉、抗炎镇痛强心、升压、抗肿瘤、麻醉、抗炎镇痛等作用，等作用，是中成药六神丸、救心丸、牛是中成药六神丸、救心丸、牛黄消炎丸的组成之一黄消炎丸的组成之一。（一）化学成分及性质（一）化学成分及性质 主要含主要含蟾酥甾二烯蟾酥甾二烯，具具24个碳原子。蟾酥个碳原子。蟾酥甾二烯类又分为游离型和结合型，其游离甾二烯类又分为游离型和结合型，其游离型称蟾毒配基，其结合型多为脂溶性的蟾型称蟾毒配基，其结合型多为脂溶性的蟾酥毒素类，蟾酥配基类和精氨酸等结合的酥

18、毒素类，蟾酥配基类和精氨酸等结合的酯类。酯类。（二）定性鉴别（二）定性鉴别1、显色反应、显色反应 对二甲氨基苯甲醛、硫酸对二甲氨基苯甲醛、硫酸醋酐、硫酸醋酐、硫酸酒石酸、对二甲氨基苯甲醛（蟾酥碱、酒石酸、对二甲氨基苯甲醛（蟾酥碱、蟾酥甲碱中吲哚基反应）蟾酥甲碱中吲哚基反应）2、纸色谱法、纸色谱法 常用甲酰胺为固定相、苯常用甲酰胺为固定相、苯-氯仿为展氯仿为展开剂、三氯化锑显色开剂、三氯化锑显色TLC法法展开剂：环己烷展开剂：环己烷- 氯仿氯仿- 丙酮（丙酮（4：3：3） 环己烷环己烷- 丙酮（丙酮（7：3） 正己烷正己烷- 乙酸乙酯（乙酸乙酯（1：9） 乙醚乙醚- 乙酸乙酯（乙酸乙酯（6：4）

19、显色剂：硫酸乙醇溶液显色剂：硫酸乙醇溶液 4、紫外光谱法、紫外光谱法5、红外光谱法、红外光谱法（三）定量分析（三）定量分析 方法主要有分光光度法、比色法、薄层方法主要有分光光度法、比色法、薄层扫描法、气相色谱法、高效液相色谱法扫描法、气相色谱法、高效液相色谱法 第二节第二节 含含矿物药中药制剂的分析矿物药中药制剂的分析（二）矿物药的分析方法（二）矿物药的分析方法 取样取样试样分解试样分解定性定性定量定量其中试样的分解是将待测组分转入溶液中的重其中试样的分解是将待测组分转入溶液中的重要步骤，要求试样要分解完全，分解过程中待要步骤，要求试样要分解完全，分解过程中待测组分不应损失，分解过程中不能引入

20、被测组测组分不应损失，分解过程中不能引入被测组分或干扰组分。分或干扰组分。常用的分解方法有溶解法（湿法）、熔常用的分解方法有溶解法（湿法）、熔融法（干法）融法（干法） ：溶解法：水、稀酸、浓酸、混合酸溶解法：水、稀酸、浓酸、混合酸熔融法：熔融法： 熔剂熔剂 碱性熔剂（碳酸钠、氢氧化钠）碱性熔剂（碳酸钠、氢氧化钠） 酸性熔剂（硫酸氢钾、焦硫酸钾）酸性熔剂（硫酸氢钾、焦硫酸钾） 氧化性熔剂（过氧化钠）氧化性熔剂（过氧化钠） 还原性熔剂（碳酸钠加硫）还原性熔剂（碳酸钠加硫）A、容量法容量法 配位滴定法配位滴定法：EDTA（乙二胺四乙酸）法（乙二胺四乙酸）法应用最广，多用于测定含钙、铝等的矿应用最广，

21、多用于测定含钙、铝等的矿物药，方法用标准溶液乙二胺四醋酸二物药，方法用标准溶液乙二胺四醋酸二钠液直接滴定，也有加过量乙二胺四醋钠液直接滴定，也有加过量乙二胺四醋酸二钠溶液用锌液回滴。酸二钠溶液用锌液回滴。酸碱滴定法酸碱滴定法：适用于含碳酸盐类矿物药。：适用于含碳酸盐类矿物药。氧化还原滴定法氧化还原滴定法：适用于含汞、砷、铁：适用于含汞、砷、铁类矿物药。类矿物药。 1、化学分析法、化学分析法B、 重量法重量法 重量法实验要求重量法实验要求（1）被测组分要沉淀完全，且沉淀溶解）被测组分要沉淀完全，且沉淀溶解度要很小。为促使沉淀完全，一般以超度要很小。为促使沉淀完全，一般以超过过20-50%为宜，过多可能产生配合反应，为宜，过多可能产生配合反应，使沉淀溶解度加大。使沉淀溶解度加大。（2）沉淀要纯净，主要是避免）沉淀要纯净，主要是避免“共沉共沉淀淀”。共沉淀的来源有。共沉淀的来源有A：表面吸附。：表面吸附。B：吸留，是由于沉淀速度过快，杂质包入其吸留，是由于沉淀速度过快，杂质包入其中。中。C：后沉淀，是指在放置过程中其它：后沉淀，是指在放置