罗汉果止咳糖浆起草说明

1、罗汉果止咳糖浆起草说明【名称】 罗汉果止咳糖浆采用主要药味缩写加功效加剂型命名，汉语拼音为Luohanguozhiketangjiang。【处方】 见正文【制法】 见正文。【性状】 根据多批中试样品内容物描述。内容物为棕黄色至棕色的澄清液体；味甜、微苦、凉。【鉴别】（1） 罗汉果的TLC鉴别：除正文所使用的展开剂外，以正丁醇-甲醇-水(8：2：3)为展开剂进行验证，亦得到相似分离效果。见图1、2。图1 罗汉果止咳糖浆中罗汉果TLC色谱 图2 罗汉果止咳糖浆中罗汉果TLC色谱（比对）1. 罗汉果的阴性对照液；2、3、4.供试品溶液； 1.罗汉果的阴性对照液；2、3、4.供试品溶液5.罗汉果对照药

2、材溶液；6.罗汉果皂苷V对照 5.罗汉果对照药材溶液；6.罗汉果皂苷V对照 品溶液。展开剂。正丁醇-乙醇-水(8：2：3)（放 品溶液。展开剂。正丁醇-甲醇-水（8：2：3）置过夜，取下层液）；显色剂：2香草醛的10 （放置过夜，去下层液）；显色剂：2%香草醛的硫酸乙醇溶液 10%硫酸乙醇溶液 （2）枇杷叶的TLC鉴别: 枇杷叶所含熊果酸为其主要有效成分，以熊果酸对照品及枇杷叶对照药材（购自中国食品药品生物制品检定研究院）作为对照进行薄层色谱鉴别，结果阴性样品无干扰。除正文所使用的展开剂外，以乙苯-丙酮（5:1）为展开剂进行验证，亦得到相似分离效果。见图3、4。图3 罗汉果止咳糖浆中枇杷叶TL

3、C色谱 图4 罗汉果止咳糖浆中枇杷叶TLC色谱（比对）1. 枇杷叶的阴性对照液；2、3、4.供试品溶液； 1.枇杷叶的阴性对照液；2、3、4.供试品溶液；5枇杷叶对照药材溶液；6.熊果酸对照品溶液。 5枇杷叶对照药材溶液；6.熊果酸对照品溶液。展开剂。甲苯-丙酮(5：1)（放置过夜，取下层 展开剂。乙苯-丙酮(5：1)（放置过夜，取下层液）；显色剂：10硫酸乙醇溶液 液）；显色剂：10硫酸乙醇溶液 （3）桑白皮的TLC鉴别：以桑白皮对照药材（购自中国食品药品生物制品检定研究院）作为对照进行薄层色谱鉴别，结果阴性样品无干扰。除正文所使用的展开剂外，以甲苯-乙酸乙酯 -甲酸（5：2：1）为展开剂进

4、行验证，亦得到相似分离效果。见图5、6。 图5 罗汉果止咳糖浆中桑白皮TLC色谱 图6 罗汉果止咳糖浆中桑白皮TLC色谱（比对）1.桑白皮的阴性对照液；2、3、4.供试品溶 1.桑白皮的阴性对照液；2、3、4.供试品溶液；5.液；5.桑白皮对照药材溶液。展开剂。醋 桑白皮对照药材溶液。展开剂。甲苯乙酸乙酯酸 甲酸（5：2：1）（放置过夜，取下层液） （4）白前的鉴别：取本品粗粉2g，加70%乙醇10ml，加热回流1小时，滤过。取滤液1ml，蒸干，残渣加醋酐1ml使溶解，再加硫酸1滴，柳叶白前显红紫色，放置后变为乌绿色；芜花叶白前显棕红色，放置后不变色。（5）百部的鉴别：取本品粉末5g，加70%

5、乙醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸去乙醇，残渣加浓氨试液调节pH值至1011，再加三氯甲烷5ml振摇提取，分取三氯甲烷层，蒸干，残渣加1%盐酸溶液5ml使溶解，滤过。滤液分为两份：一份中滴加碘化铋钾试液，生成橙红色沉淀；另一份中滴加硅钨酸试液，生成乳白色沉淀。（6）桔梗的TLC鉴别：以桔梗对照药材（购自中国食品药品生物制品检定研究院）作为对照进行薄层色谱鉴别，结果阴性样品无干扰。除正文所使用的展开剂外，以二氯甲烷-乙醚（3：1）为展开剂进行验证，亦得到相似分离效果。见图7、8。 图7 罗汉果止咳糖浆中桔梗TLC色谱 图8 罗汉果止咳糖浆中桔梗TLC色谱（比对）1.桔梗的阴性对照液；2、

6、3、4.供试品 1.桔梗的阴性对照液；2、3、4.供试品溶液；5.溶液；5.桔梗对照药材溶液。展开剂。 桔梗对照药材溶液。展开剂。二氯甲烷乙醚三氯甲烷乙醚（2:1）；显色剂：10 （3:1）；显色剂：10硫酸乙醇溶液硫酸乙醇溶液（7） 薄荷素油的TLC鉴别：以薄荷素油对照物（购自中国食品药品生物制品检定研究院）作为对照进行薄层色谱鉴别，结果阴性样品无干扰（置紫外灯下观察）。除正文所使用的展开剂外，以乙苯-乙酸乙酯（19:1）为展开剂进行验证，亦得到相似的分离效果。见图9、10。 图9 罗汉果止咳糖浆中薄荷素油TLC色谱 图10 罗汉果止咳糖浆中薄荷素油TLC色谱（比对）1.薄荷油的阴性对照液；

7、2、3、4.供试品溶液； 1.薄荷油的阴性对照液；2、3、4.供试品溶液；5.薄荷素油对照提取物。展开剂。甲苯-乙酸乙 5.薄荷素油对照提取物。展开剂。乙苯-乙酸乙酯(19：1)（放置过夜，取下层液）；显色剂： 酯(19：1)（放置过夜，取下层液）；显色剂： 茴香醛试液 茴香醛试液【检查】(1) 相对密度：依据中国药典（2010年版一部附录VII A）相对密度测定法进行测定，具有方法如下：取洁净、干燥并精密称定重量的比重瓶，装满供试品（温度应低于20或各品种项下规定的温度）后，装上温度计（瓶中应无气泡），置20（或各品种项下规定的温度）的水浴中放置若干分钟，使内容物的温度达到20（或各品种项下

8、规定的温度），用滤纸除去溢出侧管的液体，立即盖上罩。然后将比重瓶自水浴中取出，再用滤纸将比重瓶的外面擦净，精密称定，减去比重瓶的重量，求得供试品的重量后，将供试品倾去，洗净比重瓶，装满新沸过的冷水，再照上法测得同一温度时水的重量，按供试品的密度=供试品重量/水重量 计算，即得。均不低于1.13。 (2) PH值：依据中国药典（2010年版一部附录 G）pH值测定法进行测定，均符合规定。(3) 装量差异：依据中国药典（2010年版一部附录I H）糖浆剂通则进行检查，具体方法如下：取供试品5支，将内容物分别倒入经标化的量入式量筒内，尽量倾净。在室温下检视，每支装量与标示装量相比较，少于标示装量的不

9、得多于1支，并不得少于标示装量的95。多剂量灌装的糖浆剂，照最低装量检查法（附录 C)检查，均符合规定。(4) 微生物限度：依据中国药典（2010年版一部附录 C）微生物限度检查法进行检查，均符合规定。【含量测定】 罗汉果为本方的君药，罗汉果皂苷V为其主要有效成分之一，故选择罗汉果皂苷V作为控制本品质量的有效成分，参考中国药典（2010版一部）罗汉果药材的测定方法，建立了高效液相色谱法，用蒸发光散射检测器测定本品中罗汉果皂苷V含量的方法，具有分离效果好、灵敏度高、准确度好等优点 1.仪器与药品 仪器：Waters-2695高效液相色谱仪，Alltech蒸发光散射检测器（ELSD），色谱柱以十八

10、烷基键合相为填充剂Diamonsil(200mm*4.6mm，5um)。 试剂：乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。 罗汉果皂苷V由中国食品药品生物制品检定研究院提供（供含量测定用），在选定色谱条件分离后，按归一化法计算含量为99.5%以上。使用前105干燥至恒重。 2.色谱条件 Diamonsil(200mm*4.6mm，5um)色谱柱，ODS预柱；乙腈-水（23：77）为流动相；流速：1ml/min；ELSD参数：飘移管温度为100，N2流速为2.1/min；柱温为35。 在此色谱条件下，罗汉果皂苷V和样品中其他组分色谱峰基线分离，与其相邻色谱峰的分离度大于1.5；按罗汉果皂苷

11、V计算，理论塔板数（N）为3000以上；拖尾因子（T）为1.03；同时取阴性供试品溶液进样，结果表明，阴性供试品在罗汉果皂苷V色谱峰位置处于无相应峰出现。其色谱图分别见图11、12、13。 图11 对照品色谱图 图12 供试品色谱图 图13 阴性样品色谱图 3.供试品溶液的制备（见正文） （1）提取法考察： 精密称取本品0.5g，加甲醇50ml，超声处理20min和索氏提取器提取2小时，滤过，滤液蒸干，以下操作方法同供试品溶液制备。结果见表1。 表1 不同提取方法罗汉果皂苷V含量测定结果（n=3)提取方法面积1面积2面积3罗汉果皂苷V含量（mg/g）超声索氏(2) 提取时间考察 精密称取本品0

12、.5g，加甲醇50ml，分别超声1小时、2小时、3小时，滤过，滤液蒸干，以下操作同供试品溶液制备。结果见表2。表2 不同提取时间罗汉果皂苷V含量的测定结果时间（小时）面积1面积2面积3罗汉果皂苷V含量（mg/g）123(3) 提取溶剂的考察：精密称取本品内容物0.5g，分别加甲醇、水和70%乙醇各50ml，超声处理20min，滤过，滤液蒸干，以下操作同供试品溶液的制备。结果见表3。 表3 不同提取溶剂罗汉果皂苷V含量测定结果（n=3）溶剂面积1面积2面积3罗汉果皂苷V含量（mg/g）水70%乙醇甲醇 4. 线性范围的考察 精密称取经105干燥2小时的罗汉果皂苷V对照品2.5mg，置10ml量瓶

13、中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2ul、4ul、6ul、8ul、10ul、12ul，分别进样分析。以进样量（ug)的对数值为横坐标，峰面积A的对数值为纵坐标，在212ug，lgA与lgW呈良好的线性关系。回归方程为lgA=1.5698lgW+5.6738，r=0.9999(n=6)，因为标准曲线不过原点，所以样品测定采用外标二点法计算。见表4及表5。表4 罗汉果皂苷V对照品测定结果进样量（ug）24681012峰面积表5 罗汉果皂苷V对照品测定结果对数值进样量（ug）0.30100.60200.77810.903111.0792峰面积 5. 精密度试验(1)重复性试验：取同一批(批

14、号：050327)样品2.0g，共六份，精密称定，按正文方法制备六份供试品溶液，分别测定含量，结果见下表点样位置含量RSD%123456（2）中间精密度：取本品，由两位实验者分别在不同时间，不同仪器上测试，测定结果见下表含量仪器第一人第一天第二人第二天第三人第三天第四人第四天RSD%6.专属性考察 按以上色谱条件，分别测试罗汉果皂苷V对照品、供试品及阴性样品图谱，结果表明，阴性样品在罗汉果皂苷V对照品色谱峰相应位置无色谱峰，阴性无干扰。见图14、15、16。 图14 对照品色谱图 图15 供试品色谱图 图16 阴性样品色谱图7. 稳定性试验 取样品供试液（批号：050223）与不同时间，分别进样20ul，测得样品中罗汉果皂苷V峰面积的RSD<2%，结果见表8。 表8 稳定性试验结果（n=2）时间（小时）面积RSD%0246812 8. 回收率试验 精密称定已知含量的样品（批号：050214）约1.1g，分别加入对照品溶液（1.000mg/ml）0.3ml、0.4ml、0.5ml，按上述供试品制备方法及色谱条件，计算回收率，结果见表9。 表9 加样回收率试验结果编号样品重（mg）样品含量（mg）加罗汉果皂苷V（mg）测得量（mg）回收率（%）平均回收率（%）RSD(%)1234569. 样品测定 分别精密吸取对照液