细胞生物学实验：6 植物染色体标本的制备和观察_第1页
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1、实验六实验六 植物染色体标本的制植物染色体标本的制备和观察备和观察实验目的实验目的 掌握掌握去壁低渗法去壁低渗法制备植物染色体标本的基本原制备植物染色体标本的基本原理和方法；理和方法； 获得分散良好、形态清晰的中期染色体用于核获得分散良好、形态清晰的中期染色体用于核型分析。型分析。实验原理实验原理 植物染色体标本的制备植物染色体标本的制备分生组织，如根尖、茎尖和嫩叶做材料分生组织，如根尖、茎尖和嫩叶做材料 常规压片法常规压片法染色体难以分开，染色体容易变形和断裂染色体难以分开，染色体容易变形和断裂 去壁低渗法去壁低渗法酶（纤维素酶和果胶酶）降解细胞壁中的纤维酶（纤维素酶和果胶酶）降解细胞壁中的

2、纤维素和半纤维素，然后按照低渗、火焰干燥步骤素和半纤维素，然后按照低渗、火焰干燥步骤制备标本。制备标本。实验步骤实验步骤-1 -1（教师完成）（教师完成） 前处理前处理：根尖用根尖用0.05%秋水仙素溶液处理秋水仙素溶液处理3-4 h（有丝分裂（有丝分裂中期）中期） 固定固定：用水洗净处理过的根尖，经甲醇：用水洗净处理过的根尖，经甲醇-冰醋酸（冰醋酸（3:1）固）固定定 4h （教师完成）（教师完成） 酶解酶解：倒去固定液，用蒸馏水充分洗净，切取分生区放到：倒去固定液，用蒸馏水充分洗净，切取分生区放到青霉素小瓶中，加入混合酶液，青霉素小瓶中，加入混合酶液，25 oC酶解酶解2-4h 低渗低渗：

3、倒去酶液，用蒸馏水慢慢冲洗：倒去酶液，用蒸馏水慢慢冲洗2次，然后在蒸馏水次，然后在蒸馏水中浸泡中浸泡30 min（用低渗溶液处理可以提高染色体的分散程用低渗溶液处理可以提高染色体的分散程度。度。）实验步骤实验步骤22悬液法制备标本悬液法制备标本 制备细胞悬液制备细胞悬液：倒去蒸馏水，用镊子将材料夹碎。：倒去蒸馏水，用镊子将材料夹碎。 固定固定：加入：加入2-3 ml新鲜固定液，吹打制成细胞悬新鲜固定液，吹打制成细胞悬液；液； 去沉淀去沉淀：静置片刻，使大块组织沉淀，然后吸取：静置片刻，使大块组织沉淀，然后吸取上层细胞悬液，去掉沉淀物；上层细胞悬液，去掉沉淀物； 去上清去上清：将上层细胞悬液静置：将上层细胞悬液静置30 min左右，用吸左右，用吸管轻轻吸去上清液，留约管轻轻吸去上清液，留约1 ml左右细胞悬液制备左右细胞悬液制备标本；标本；实验步骤实验步骤22悬液法制备标本悬液法制备标本 制备标本制备标本：取一张预先在蒸馏水中冰冻的：取一张预先在蒸馏水中冰冻的清洁载玻片，用滴管滴清洁载玻片，用滴管滴2-3滴细胞悬液，立滴细胞悬液，立即抬起一端，并轻轻吹气，促使细胞分散；即抬起一端，并轻轻吹气，促使细胞分散； 在酒精灯上微微加热烤干；在酒精灯上微微加热烤干； 染色染色：干燥的片子用：干燥的片子用20

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