DNA的粗提取与鉴定

1、.DNA的粗提取与鉴定一实验目的 1.初步掌握DNA粗提取和鉴定的方法。 2.观察提取出来的DNA物质二 、实验原理1.血细胞在蒸馏水中会浸透吸水过度而导致细胞膜和细胞核膜的破裂。利用此特性可得到含有DNA的溶液。2.DNA在氯化钠溶液中的溶解度，是随着氯化钠的浓度的变化而改变的。DNA在物质的量浓度为0.14 molL的氯化钠溶液中的溶解度最低，利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出3.DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些物质那么可以溶于酒精。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。4.DNA遇二苯胺沸水浴会变成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。三、

2、方法与过程1.制鸡血细胞液活鸡鲜血经别离或沉淀获得0.1g/mL柠檬酸钠100mL活鸡鲜血180mL             500mL烧杯中，玻棒搅拌，离心、别离或静置沉淀。2.提取DNA.提取血细胞核物质：取血细胞5-10mL20mL蒸馏水，用玻棒沿一个方向快速搅拌纱布过滤：滤液中含DNA和其他核物质，如蛋白质。原理：血细胞的细胞膜、核摸吸水胀破，玻璃棒快速搅拌，机械加速血细胞破裂。.溶解核内的DNA      

3、  滤液2mol/L的NaCl溶液40mL，玻棒沿一个方向轻缓搅拌。.析出含DNA的粘稠物在上述溶液中缓缓参加蒸馏水，并沿一个方向轻轻搅拌，出现丝状物；当丝状物不在增加时，停顿加水此时NaCl溶液的浓度相当于0.14mol/L。 .滤取含DNA的粘稠物用多层纱布过滤，含DNA的粘稠物留在纱布上。 . DNA粘稠物的再溶解20mL2mol/L的NaCl溶液步骤含DNA的粘稠物           在20mL烧杯中轻缓搅拌3min，使尽可能多的DNA溶解在NaCl溶液。 .过滤含有DNA的

4、NaCl溶液：用放有两层纱布的漏斗过滤步骤所得的溶液，滤液中含有DNA。.提取含有杂质较少的DNA：       步骤所得的滤液体积分数为95%的冷却酒精50mL，用玻棒沿一个方向轻缓搅拌，溶液中析出出现乳白色丝状物，用玻棒将丝状物卷起，并用滤纸汲取上面的水分3.DNA的鉴定参加二苯胺试剂4mL，用玻棒搅拌使DNA溶解，沸水浴5min，观察溶液是否出现浅蓝色。四、实验小结1.共有“三次过滤，两次析出，七次搅拌2.参加“两次蒸馏水，三次NaCl溶液，一次酒精五、实验原理拓展介绍。1.DNA的释放DNA主要在鸡血细胞的细胞核内，正常情况下

5、不会释放出来，蒸馏水对于鸡血细胞是一种低渗液，水分可以大量进入血细胞，使之胀破，同时加上玻璃棒快速搅拌的机械作用，加速血细胞的细胞膜和核膜的破裂。但释放出来的大量DNA与RNA、蛋白质结合在一起，即释放的不是纯洁的DNA，常称为DNA核蛋白。2.DNA与蛋白质别离。在高浓度2mol/L的氯化钠溶液中，核蛋白易溶解，析出DNA并溶解在高浓度的氯化钠3DNA的析出与获取。因为DNA在低浓度 0.14mol/L 的氯化钠溶液中溶解度小，而蛋白质的在其中的溶解度大。所以在向含DNA的高浓度的氯化钠溶液中参加大量蒸馏水稀释氯化钠溶液，从而使DNA溶解度下降，蛋白质溶解度增高。4.DNA的再溶解。用高浓度

6、2mol/L的氯化钠溶液再溶解DNA粘稠物。5.DNA的沉淀和浓缩。对于除去了蛋白质的DNA的氯化钠溶液，必须再进一步沉淀和浓缩，常用酒精沉淀法。即往含有Na的DNA溶液，参加体积分数为95%的冷却酒精，混匀后可以使DNA沉淀、浓缩，形成含杂质较少的DNA丝状物，悬浮于溶液中。假设丝状物较少，可将混合液再放入冰箱中冷却几分钟即可。浓缩后的DNA丝状物可以用玻棒玻棒有吸附DNA的作用缓缓旋转的方法卷起。6.DNA的鉴定DNA二苯胺    100°C沸水浴       蓝色物鉴定时蓝色的深浅与溶液中

7、DNA的含量多少有关。六、常见问题分析? 1.从鸡血细胞核中提取的物质是DNA吗？ 在鸡血细胞中参加蒸馏水，并且搅拌，利用浸透作用原理使鸡血细胞破裂，搅拌进一步促进了鸡血细胞的破裂，于是释放出其中的DNA，当然也有少量的RNA，还的蛋白质。因此，释放出的物质是DNA、RNA和蛋白质的混合物，不仅仅只有DNA。 2.怎样进步血细胞因低渗而破裂的效率？ 血细胞的细胞膜对低渗溶液有一定的抵抗才能，这称为浸透脆性。一般而言，血细胞与蒸馏水相混合而使血细胞处于极度的低渗环境之中，细胞因大量失水而致最终破裂并释放出胞内物包括细胞核。为促进细胞在低渗条件下破裂，可以辅以快速而有力的搅拌，使之受机械震荡而更易

8、破裂。 3.怎样才能把血细胞释放的DNA滤入搜集的滤液中？ 这一步较难处理，在过滤过程中常常发生因粘稠的果胨样物质堵塞过滤纱布的网眼而使后续的过滤难以完成，很多DNA没能滤入滤液中，这是造成失败的主要原因之一。 解决的方法有：过滤时待过滤溶液倒入漏斗的速度应缓慢，以免沉积于溶液中层的胶状物一下就把纱布堵住，使过滤不能完成； 一旦出现大量胶状物使过滤不能进展下去，切忌用力挤压而使胶状物也滤入滤液之中，可以把胶状物重新用适量的2mol NaCl溶液进展搅拌，使其中的DNA得到溶解，然后再进展过滤。 4.实验中看到的丝状物的粗细是不是DNA分子的直径呢？ 不是。因为DNA分子直径只有2nm。丝状物是多个DNA分子聚在一起形成的。 5.盛放鸡血细胞液的容器,最好是塑料容器。鸡血细胞破碎以后释放出的DNA,容易被玻璃容器吸附,由于细胞内DNA的含量本来就比较少,再被玻璃容器吸附去一部分,提取到的DNA就会更少。因此,实验过程中最好使用塑料的烧杯和试管,这样可以减少提取过程中DNA的损失。同理，玻璃棒有吸附DNA的作用，可通过缓缓旋转玻璃棒的方法卷起浓缩后的DNA丝状物。 6.利用DNA在浓度较低的