遮荫处理对滇山茶花色素合成关键酶的影响

1、遮荫处理对山茶花青素合成关键酶遮荫处理对山茶花青素合成关键酶的影响的影响 初步实验方案 高飞 2013.09.28 目录 1、实验目的 2、实验材料与处理 3、生理指标的测定 4、花青素合成关键酶的测定1、实验目的 本实验拟以国外进口品种威斯（Camellia japonica）和滇山茶品种云针（Camellia reticulata）为实验材料，在人工调节山茶花所处的不同光照强度条件下，通过分析上游PAL、CHS、DFR、UFGT等合成酶活性和POD、SOD、CAT等保护酶活性的影响，找到山茶花的花色素苷合成关键酶，解析不同光照处理对花色的调控机理。 2、实验材料与处理 2.1 实验材料 本

2、实验材料采用由云南楚雄百泽茶兰园公司提供的云南山茶云针品种5盆，以5盆国外进口品种威斯通为对照。 云针：分布区为云南高原中亚热带气候。干、湿季分明，年平均温15-17，年降水量约1100-1500毫米，相对湿度70-80%。土壤为红壤，pH值5.5-6.5。云南山茶花系半阴性树种，深根性。 威斯通：美国加州F.V.Pursel 先生用“大玛瑙” X “珍妮泊赛 尔”育成的种内杂交种。1980年公布。叶浓绿，长椭圆形；长势旺，立性，花期中到晚。 2.2 处理方法 2.2.1 遮荫处理 待材料第一朵花开后进行遮荫处理，为实验材料分别编号，云针：1、2、3、4、5和威斯通1、2、3、4、5。两个品种

3、都做如下相同处理： 1号：棚膜 2号：棚膜+60%遮荫网 3号：棚膜+70%遮荫网 4号：棚膜+80%遮荫网 5号：棚膜+90%遮荫网 遮荫网需选择同一商家生产的，处理前需用光度计检测遮荫网是否符合标准，最终以光度计检测的结果为准。2.2.2 取样后的处理取样后的处理 2.2.2.1 部分生理指标的取样处理部分生理指标的取样处理 于遮荫10天后开始每5天选择自各株最高一枝顶端起第412片叶子，采样后放入液氮中带回实验室，放入-80冰箱内保存，测定相对电导率、丙二醛（MDA）、可溶性蛋白、可溶性糖的含量的变化及SOD、POD、CAT等保护酶活性的变化。 2.2.2.2 花色素合成关键酶的取样处理

4、花色素合成关键酶的取样处理 取材时间与生理指标的取样时间相同，取各株未露红前的花蕾若干，取材后放入液氮中带回实验室置于-80冰箱内保存，用于测定PAL、CHI、UFGT及DFR等花青素合成关键酶的活性。 2.2.2.3 叶绿素、电导率等指标的取样处理叶绿素、电导率等指标的取样处理 于遮荫10天后开始每5天选择自各株最高一枝顶端起第412片叶子，采样后立即带回实验室进行测定即可。 3.生理指标的测定3.1 叶绿素、电导率的测定 叶绿素的测定采用浸泡法（李合生，植物生理生化实验原理和技术，2000）测定。 电导率的测定采用电导仪法（王学奎，植物生理生化实验原理和技术，2006）测定。3.2 丙二醛

5、（MDA）的测定 本实验拟采用硫代巴比妥酸法测定MDA的含量（王学奎，植物生理生化原理和技术，2006）。 3.3 超氧化物歧化酶（SOD）的测定 参考氮蓝四唑(NBT)光化还原法测定SOD 的活性，有改动(王学奎，植物生理生化原理和技术，2006）。3.4 过氧化氢酶（CAT）的测定 采用紫外吸收法测定CAT活性(王学奎，植物生理生化原理和技术，2006)。 3.5 过氧化物酶活性（POD）的测定 参照愈创木酚氧化法（蔡庆生，植物生理学实验，2013）测POD活性。 3.6 可溶性糖与可溶性蛋白的测定 可溶性糖的测定采用苯酚法（王学奎，植物生理生化实验原理和技术，2006）测定。 可溶性蛋白

6、质的测定采用考马斯亮蓝法（蔡庆生，植物生理学实验，2013）。 4.花青素合成关键酶活性的测定 4.1 PAL、CHI、UFGT酶活性的测定 PAL、CHI、UFGT酶活性的测定参照Lister等的方法（Lister CE.et al.Developmental changes in enzymes of flavonoid biosynthesis in the skins of red and green apple cuhivars. Journal Science of Food Agriculture. 1996,71:313-320）。4.2 DFR酶活性的测定 DFR酶活性的测定参照Stafford等的方法（Stafford HA.et al.Flavan 3-ol biosynthesis the conversion of (+) dihydroquercetin and flavan-3,4-cis-diol (1euecyanidin) to (+) catechin by