第七、九章_灭菌制剂与无菌制剂20150511

1、GDMCGDMC第一节第一节 概述概述第二节第二节 灭菌制剂与无菌制剂的相关技术和理论灭菌制剂与无菌制剂的相关技术和理论第三节第三节 注射剂注射剂第四节第四节 输液输液第五节第五节 注射用无菌粉末注射用无菌粉末第六节第六节 眼用液体制剂眼用液体制剂GDMCGDMC2022-4-152022-4-153定义与类型灭菌制剂：灭菌制剂：灭菌法灭菌法杀灭或除去杀灭或除去所有微生物所有微生物 活体活体的药物制剂。的药物制剂。无菌制剂：无菌制剂：在无菌条件下进行生产的在无菌条件下进行生产的不不 含任何微生物活体含任何微生物活体的药物制剂。的药物制剂。活体：微生物的繁殖体和芽孢活体：微生物的繁殖体和芽孢第一

2、节第一节 概述概述GDMCGDMC2022-4-152022-4-154 无菌制剂无菌制剂注射用制剂注射用制剂注射剂注射剂 输液输液 粉针剂粉针剂眼科用制剂眼科用制剂植植 入入 剂剂手术或创面手术或创面用制剂用制剂滴眼剂滴眼剂 眼用软膏剂眼用软膏剂 眼眼用凝胶剂用凝胶剂植入片植入片 植入棒植入棒 植入微植入微球等球等止血海绵剂止血海绵剂 外伤用溶液剂外伤用溶液剂 软膏剂和气雾剂软膏剂和气雾剂GDMCGDMC2022-4-152022-4-155灭菌和无菌制剂的质量要求 无菌无菌 无热原无热原 可见异物和不溶性微粒，应符合药典要求可见异物和不溶性微粒，应符合药典要求 安全性：生物相容性，对组织不

3、刺激性安全性：生物相容性，对组织不刺激性 渗透压：等渗渗透压：等渗 pHpH：与血液或组织接近或相等：与血液或组织接近或相等 稳定性稳定性 降压物质：必须符合要求降压物质：必须符合要求GDMCGDMC2022-4-152022-4-156纯化水原辅料+溶剂注射剂成品安 瓿自来水原水处理配制粗滤注射用水干燥灭菌精滤灌装冷却熔封灭菌检漏质量检查包装印字蒸馏过滤洗瓶过滤 小体积注射剂的制备流程注射剂的制备流程第二节灭菌制剂与无菌制剂的灭菌制剂与无菌制剂的相关技术和理论相关技术和理论GDMCGDMC2022-4-152022-4-157第二节第二节 灭菌制剂与无菌制剂的灭菌制剂与无菌制剂的相关技术和理

4、论相关技术和理论u水处理技术水处理技术u液体的过滤技术液体的过滤技术u热原的去除技术热原的去除技术u灭菌和无菌操作技术灭菌和无菌操作技术GDMCGDMC2022-4-152022-4-1581243 一般应根据各生产工序或使用目的与要求选用适宜的制药用水。一般应根据各生产工序或使用目的与要求选用适宜的制药用水。药品生产企业应确保制药用水的质量符合预期用途的要求。药品生产企业应确保制药用水的质量符合预期用途的要求。一、水的处理技术（一）概述（一）概述GDMCGDMC2022-4-152022-4-159饮用水（饮用水（taptap water)-)- 为天然水经净化处理所得的水，其质量必须符合现

5、行中华人民共和国国家标准生活饮用水卫生标准（用于药材的漂洗、制药用具粗洗及药材的提取溶剂）。纯化水（purified water)-)-为饮用水经蒸馏法、离子交换法、反渗透法等制得的供药用的水，不含任何附加剂(配制普通药剂的溶剂或试验用)。 注射用水( (water for injection)-)-为纯化水经蒸馏所得的蒸馏水(无热原水；配制注射剂、滴眼剂等)； 灭菌注射用水( (sterile water for injection) )注射用水按注射剂注射用水按注射剂生产工艺制备，生产工艺制备，不含任何添加剂不含任何添加剂(注射用无菌粉末的溶剂或注射剂的稀释剂)； ( (二二) )各种水的

6、来源及质量要求各种水的来源及质量要求GDMCGDMC2022-4-152022-4-1510饮用水纯化水注射用水电渗析或反渗透装置经过滤器阳离子树脂床阴离子树脂床脱气塔多效蒸馏水机或气压式蒸馏水机混合树脂床热贮水器（80）或65以上保温循环或4以下无菌状态贮存1 1、注射用水的制备工艺、注射用水的制备工艺流程流程: :注射用水的制备注射用水的制备GDMCGDMC2022-4-152022-4-1511制药用水质量要求（符合制药用水质量要求（符合Ch.P2010Ch.P2010二部各自项下二部各自项下的规定的规定) )纯化水纯化水：检查项目包括酸碱度，硝酸盐与亚硝酸检查项目包括酸碱度，硝酸盐与亚

7、硝酸盐，氨，盐，氨，电导率、总有机碳电导率、总有机碳或易氧化物、不挥发或易氧化物、不挥发物及物及重金属重金属。注射用水：注射用水：规定规定pHpH为为5.07.05.07.0，氨浓度不大于，氨浓度不大于0.00002%0.00002%，内毒素小于，内毒素小于0.25EU/ml0.25EU/ml，其他检查项目，其他检查项目与纯化水相同。与纯化水相同。灭菌注射用水：灭菌注射用水：应符合注射用水项下各项检查的应符合注射用水项下各项检查的规定，并应符合注射剂项下有关规定规定，并应符合注射剂项下有关规定 GDMCGDMC2022-4-152022-4-15121.原水的一般处理方法：原水的一般处理方法：

8、 目的目的最大限度的去除水中的不溶性杂质、最大限度的去除水中的不溶性杂质、可溶性盐类、微生物及热原。可溶性盐类、微生物及热原。 方法：方法：组合过滤法（多介质滤器）、离组合过滤法（多介质滤器）、离子交换法、电渗析法、反渗透法子交换法、电渗析法、反渗透法( (三三) )原水的处技术原水的处技术GDMCGDMC2022-4-152022-4-151313 2、水处理技术 原水饮用水纯化水注射用水灭菌注射用水原水原水饮用水饮用水纯化水纯化水注射用水注射用水灭菌注射用水灭菌注射用水GDMCGDMC2022-4-152022-4-1514u原水原水 自来水自来水 深井水深井水u饮用水饮用水u纯化水纯化水

9、u注射用水注射用水u灭菌注射用水灭菌注射用水符合符合生活饮用水卫生标准生活饮用水卫生标准，可用于药材的漂洗、制药用具的可用于药材的漂洗、制药用具的粗洗粗洗一、水处理技术一、水处理技术原水蒸馏法、离子交换法、反原水蒸馏法、离子交换法、反渗透法或其他适宜方法制得的渗透法或其他适宜方法制得的供药用的水供药用的水纯化水经蒸馏制得的蒸馏水。去纯化水经蒸馏制得的蒸馏水。去除细菌内毒素，无热原除细菌内毒素，无热原注射用水经灭菌制得。注射用水经灭菌制得。作为注射用无菌粉末的作为注射用无菌粉末的溶剂或某些注射剂的稀溶剂或某些注射剂的稀释剂释剂GDMCGDMC2022-4-152022-4-1515目的目的 除去

10、大部分的离子和固体杂质除去大部分的离子和固体杂质方法方法 过滤法过滤法 离子交换法离子交换法 电渗析法电渗析法 反渗透法反渗透法原水处理技术原水处理技术GDMCGDMC2022-4-152022-4-1516初滤和精滤初滤和精滤 除去原水中悬浮固体杂质的有效方法除去原水中悬浮固体杂质的有效方法 组合过滤装置组合过滤装置 石英砂滤器石英砂滤器活性炭滤器活性炭滤器细过滤器细过滤器GDMCGDMC2022-4-152022-4-1517 离子交换法离子交换法 1）离子交换树脂）离子交换树脂阳离子强酸性交换树脂（阳离子强酸性交换树脂（732732）氢型：氢型： RSORSO3 3- - H H+ +钠

11、型（稳定）钠型（稳定） RSORSO3 3- - Na Na+ + 阴离子强碱性交换树脂（阴离子强碱性交换树脂（717717）氢氧型：氢氧型： RN RN + +(CH(CH3 3) )3 3OHOH- -氯型（稳定）：氯型（稳定）： RN RN + +(CH3)(CH3)3 3 Cl Cl- -阳阳床床阴阴床床混混合合床床串串连连组组合合GDMCGDMC2022-4-152022-4-15182）离子交换原理离子交换原理2RSO2RSO3 3- - H H+ + + +CaCa2 2 2Cl2Cl1 1(RSO(RSO3 3- -) )2 2 CaCa2 2 + 2+ 2H HClClRN(

12、CHRN(CH3 3) )+ +OHOH- - + + H H+ + HCOHCO3 31 1RN(CHRN(CH3 3) )+ +HCOHCO3 3- - + + H H2 2O OGDMCGDMC2022-4-152022-4-15193）离子交换法的特点）离子交换法的特点设备简单，耗能小，成本低设备简单，耗能小，成本低水纯度高，可除去部分的阴、阳离子水纯度高，可除去部分的阴、阳离子对热原、细菌有一定的清除作用对热原、细菌有一定的清除作用对树脂需要进行预处理，再生处理，需用对树脂需要进行预处理，再生处理，需用到大量的酸碱到大量的酸碱GDMCGDMC2022-4-152022-4-15204

13、）离子交换水的质量控制）离子交换水的质量控制 比电阻法（电导仪测定）比电阻法（电导仪测定） 比电阻越大，水中离子越少比电阻越大，水中离子越少 一般要求比电阻在一般要求比电阻在100100万万. .cmcm-1-1以上以上GDMCGDMC2022-4-152022-4-15215 5）离子交换水的应用范围）离子交换水的应用范围 主要供蒸馏法制备注射用水主要供蒸馏法制备注射用水 用于洗瓶等也较多用于洗瓶等也较多 目前不能达到注射用水的标准目前不能达到注射用水的标准GDMCGDMC2022-4-152022-4-1522电渗析法电渗析法 电渗析是依据在电场作用下离子定向迁移及电渗析是依据在电场作用下

14、离子定向迁移及交换膜的选择性透过而设计的。交换膜的选择性透过而设计的。 主要特点：主要特点：经济，节约酸碱，但水的比电阻低，经济，节约酸碱，但水的比电阻低，一般在一般在5 5万万1010万万 cmcm 应用范围：应用范围：用于原水的预处理用于原水的预处理 阴阴极极阳阳离离子子膜膜淡水区淡水区阴阴离离子子膜膜阳阳极极浓水区浓水区浓水区浓水区GDMCGDMC2022-4-152022-4-1523反渗透法反渗透法主要用于原水处理，也可以用于制备注射用水主要用于原水处理，也可以用于制备注射用水半透膜：醋酸纤维素膜和聚酰胺膜半透膜：醋酸纤维素膜和聚酰胺膜浓度差：产生渗透压浓度差：产生渗透压外压力：大于

15、渗透压，达到盐、水分离外压力：大于渗透压，达到盐、水分离特点：除去离子，可除去分子量大于特点：除去离子，可除去分子量大于300300的化合的化合物、热原。物、热原。 GDMCGDMC2022-4-152022-4-1524反渗透法制备的原理反渗透法制备的原理 恒温条件下恒温条件下GibbsGibbs吸附公式：吸附公式： (-C/RT)(d(-C/RT)(d/dc)/dc) 如如C C增加，增加， 增加，即增加，即d d/dc/dc0 0， 则则0 0，即负吸附，表面的溶质比内部少，即负吸附，表面的溶质比内部少GDMCGDMC2022-4-152022-4-1525 氯化钠等多为负吸附，界面上盐

16、浓度低氯化钠等多为负吸附，界面上盐浓度低 醋酸纤维膜，只吸附水分子，排斥溶质，醋酸纤维膜，只吸附水分子，排斥溶质，界面上形成一个纯水层界面上形成一个纯水层 加压，界面上纯水通过膜的毛细管渗出，加压，界面上纯水通过膜的毛细管渗出，完成盐与水的分离完成盐与水的分离GDMCGDMC2022-4-152022-4-1526 蒸馏法是制备注射用水最经典的方法。蒸馏法是制备注射用水最经典的方法。 水源的要求：以去离子水为水源水源的要求：以去离子水为水源一般过程：纯化水一般过程：纯化水蒸发蒸发隔膜装置隔膜装置冷凝冷凝 加热蒸发加热蒸发冷凝冷凝蒸馏设备蒸馏设备 小量生产小量生产 塔式和亭式蒸馏水器塔式和亭式蒸

17、馏水器 大量生产大量生产 多效蒸馏水机或汽压式蒸馏水器多效蒸馏水机或汽压式蒸馏水器注射用水的制备技术注射用水的制备技术GDMCGDMC2022-4-152022-4-1527饮用水纯化水注射用水电渗析或反渗透装置细过滤器阳离子树脂床阴离子树脂床脱气塔多效蒸馏水机或气压式蒸馏水机混合树脂床热贮水器（80）或70以上保温循环或4以下无菌状态贮存注射用水的制备工艺注射用水的制备工艺流程流程: :GDMCGDMC2022-4-152022-4-1528 注射用水的收集与贮存注射用水的收集与贮存 1. 1. 初馏液不要初馏液不要 2. 2. 检查合格后带有无菌过滤装置的密闭系统收集检查合格后带有无菌过滤

18、装置的密闭系统收集 3. 803. 80C C以上保温、以上保温、7070C C 以上保温循环或于以上保温循环或于4 4C C 以下无菌状态下贮存以下无菌状态下贮存 4. 124. 12内小时用完内小时用完 GDMCGDMC2022-4-152022-4-1529注射用水的质量检查注射用水的质量检查 常规检查项目如酸碱度、氨、氯化物、硫酸常规检查项目如酸碱度、氨、氯化物、硫酸盐与钙盐、重金属等盐与钙盐、重金属等 注射用水：内毒素含量注射用水：内毒素含量0.25EU/mL0.25EU/mL， pHpH值值5.0-7.0,5.0-7.0,氨含量氨含量0.000020.00002GDMCGDMC20

19、22-4-152022-4-1530液体的过滤技术液体的过滤技术概述概述 过滤：借助多孔性材料把固体过滤：借助多孔性材料把固体微粒阻留而使液体通过，将微粒阻留而使液体通过，将固固体微粒与液体分离体微粒与液体分离的过程的过程 滤材滤材 滤浆滤浆 滤饼滤饼 滤液滤液滤材滤材滤浆滤浆滤饼滤饼滤液滤液GDMCGDMC2022-4-152022-4-1531过滤机制与影响因素过滤机制与影响因素过滤过程过滤过程介质过滤介质过滤表面过滤表面过滤深层过滤深层过滤滤饼过滤滤饼过滤截留在介质表面截留在介质表面分离度高分离度高微孔滤膜、超滤膜微孔滤膜、超滤膜和反渗透膜和反渗透膜截留在介质截留在介质“内部内部”惯性、

20、重力、扩散惯性、重力、扩散“架桥架桥”；被吸附被吸附沙滤棒、垂熔玻璃漏斗、多孔沙滤棒、垂熔玻璃漏斗、多孔陶瓷、石棉过滤陶瓷、石棉过滤GDMCGDMC2022-4-152022-4-1532架桥现象架桥现象滤饼过滤滤饼过滤深层过滤深层过滤GDMCGDMC2022-4-152022-4-1533影响过滤的因素影响过滤的因素 液体的流动遵循液体的流动遵循PoiseuilePoiseuile公式：公式：V=V=P P r r4 4t/8t/8 L L V V单位面积上的过滤容量；单位面积上的过滤容量；P P操作压力；操作压力；r r流过层中毛细管半径；流过层中毛细管半径；t t过滤时间；过滤时间； 液

21、体粘度；液体粘度；L L毛细管长度；毛细管长度；V/tV/t过滤速度。过滤速度。 操作压力越大，滤速越操作压力越大，滤速越块块 孔径越窄，阻力越大，孔径越窄，阻力越大，滤速越慢滤速越慢 粘度愈大，滤速愈慢粘度愈大，滤速愈慢 滤速与毛细管长度成反滤速与毛细管长度成反比，因此沉积的滤饼量比，因此沉积的滤饼量愈多，滤速愈慢愈多，滤速愈慢GDMCGDMC2022-4-152022-4-1534增加滤速的方法有增加滤速的方法有 提高压力差提高压力差 升温降低温黏度升温降低温黏度 预滤减少滤饼厚度预滤减少滤饼厚度 使颗粒变粗使颗粒变粗GDMCGDMC2022-4-152022-4-1535常用的助滤剂：常

22、用的助滤剂： 硅藻土硅藻土( (主要成分二氧化硅主要成分二氧化硅) )； 活性炭活性炭( (有较强的吸附热原和微生物的能力，有较强的吸附热原和微生物的能力，能吸附生物碱类药物能吸附生物碱类药物) )； 滑石粉滑石粉( (吸附性小，能吸附溶液中过量不溶吸附性小，能吸附溶液中过量不溶性的挥发油和色素，适用于含粘液、树胶较多性的挥发油和色素，适用于含粘液、树胶较多的液体的液体) )； 纸浆纸浆( (有助滤和脱色作用，中药注射剂中应有助滤和脱色作用，中药注射剂中应用较多用较多) )。GDMCGDMC2022-4-152022-4-1536滤器的种类滤器的种类垂熔玻璃器垂熔玻璃器砂滤棒砂滤棒微孔滤膜滤器

23、微孔滤膜滤器板框压滤机板框压滤机钛滤器钛滤器GDMCGDMC2022-4-152022-4-1537 垂熔玻璃滤器适于精滤或膜滤器适于精滤或膜滤器前的预滤前的预滤垂熔玻璃滤器垂熔玻璃滤器( (垂熔玻璃漏垂熔玻璃漏斗、滤器球和滤棒斗、滤器球和滤棒) ) 1 1号和号和G2G2号常压过滤；号常压过滤； 4 4号和号和G3G3号减压或加压过号减压或加压过滤；滤； G5G5、G6G6号用于无菌过滤；号用于无菌过滤； 使用完毕用水抽洗，并使用完毕用水抽洗，并以以1%-2%1%-2%硝酸钠硫酸液浸泡硝酸钠硫酸液浸泡处理。处理。GDMCGDMC2022-4-152022-4-1538 砂滤棒适于高粘度和高浓

24、适于高粘度和高浓度药液的滤过度药液的滤过GDMCGDMC2022-4-152022-4-1539微孔滤膜滤器内装微孔滤膜 进液口出液口主要用于注射剂精主要用于注射剂精滤和除菌过滤滤和除菌过滤膜材质：膜材质：纤维酯膜、尼龙膜、纤维酯膜、尼龙膜、聚四氟乙烯膜聚四氟乙烯膜 优点：优点：孔径小，截留能力强；孔径小，截留能力强；孔径大小均匀，不易泄漏；滤孔径大小均匀，不易泄漏；滤速快；滤膜无介质的迁移；无速快；滤膜无介质的迁移；无交叉污染。交叉污染。 缺点：缺点：易堵塞，有些滤膜化易堵塞，有些滤膜化学性质不理想。学性质不理想。GDMCGDMC2022-4-152022-4-1540滤过方式滤过方式常用组

25、合（二级过滤）：常用组合（二级过滤）： 砂滤棒砂滤棒垂熔玻璃滤器垂熔玻璃滤器微孔膜滤器微孔膜滤器滤过动力：滤过动力： a.a.高位静压：压力稳定，滤速较慢高位静压：压力稳定，滤速较慢 b.b.加压滤过：压力稳定，滤速快加压滤过：压力稳定，滤速快 c.c.减压滤过：压力不稳减压滤过：压力不稳GDMCGDMC2022-4-152022-4-1541灭菌和无菌操作技术灭菌和无菌操作技术 灭菌：杀灭和除去所有微生物的繁殖体和灭菌：杀灭和除去所有微生物的繁殖体和芽孢方法芽孢方法 无菌：不存在任何活的微生物无菌：不存在任何活的微生物 无菌操作：整个过程在无菌环境中制备无菌操作：整个过程在无菌环境中制备 防

26、腐：抑制微生物的生长和繁殖的手段防腐：抑制微生物的生长和繁殖的手段 消毒：杀灭和除去芽孢以外的病原微生物消毒：杀灭和除去芽孢以外的病原微生物GDMCGDMC2022-4-152022-4-1542灭菌的目的灭菌的目的 杀灭或除去所有微生物繁殖体和芽杀灭或除去所有微生物繁殖体和芽孢孢，最大限度地，最大限度地提高提高药物制剂的药物制剂的安全性安全性，保护保护制剂的制剂的稳定性稳定性，保证保证制剂的临床制剂的临床疗疗效效GDMCGDMC2022-4-152022-4-1543分类分类灭菌法灭菌法物理灭菌法物理灭菌法化学灭菌法化学灭菌法无菌操作法无菌操作法干热灭菌法（干热灭菌法（2种）种）湿热灭菌法（

27、湿热灭菌法（4种）种）过滤灭菌法过滤灭菌法射线灭菌法（射线灭菌法（3种）种）气体灭菌法气体灭菌法药液灭菌法药液灭菌法GDMCGDMC2022-4-152022-4-1544物理灭菌法物理灭菌法机理：加热或射线灭菌可破坏蛋白质与核酸机理：加热或射线灭菌可破坏蛋白质与核酸 的氢键的氢键, ,导致蛋白质变性或凝固、核酸导致蛋白质变性或凝固、核酸 破坏，酶失活，破坏，酶失活，从而使微生物死亡。从而使微生物死亡。 过滤除菌是一种机械截留。过滤除菌是一种机械截留。GDMCGDMC2022-4-152022-4-1545一、一、 干热灭菌法干热灭菌法 利用火焰或干热空气进行灭菌的方法利用火焰或干热空气进行灭

28、菌的方法（一）火焰灭菌法（一）火焰灭菌法 定义：直接在火焰中烧灼灭菌的方法定义：直接在火焰中烧灼灭菌的方法 特点：灭菌迅速、可靠、简便特点：灭菌迅速、可靠、简便 适用范围：耐火材质物品适用范围：耐火材质物品GDMCGDMC2022-4-152022-4-1546（二）干热空气灭菌（二）干热空气灭菌 定义：定义： 是在高温干热空气中灭菌的方法是在高温干热空气中灭菌的方法 特点：灭菌温度高，时间比较长。特点：灭菌温度高，时间比较长。 适用范围：耐高温的物品、油脂类及部分适用范围：耐高温的物品、油脂类及部分 化学药品化学药品 灭菌条件及标准：灭菌条件及标准：160160170 120min170 1

29、20min以上以上 170170180 60min180 60min以上以上 250 45min250 45min以上以上GDMCGDMC2022-4-152022-4-1547二、二、 湿热灭菌法湿热灭菌法定义：是在饱和蒸汽、沸水或流通蒸汽中进定义：是在饱和蒸汽、沸水或流通蒸汽中进 行灭菌的方法。行灭菌的方法。特点：蒸汽潜热大，穿透力强，容易使蛋白特点：蒸汽潜热大，穿透力强，容易使蛋白 质变性或凝固，灭菌效率高。质变性或凝固，灭菌效率高。方法方法： 热压灭菌、流通蒸汽灭菌、煮沸灭菌、热压灭菌、流通蒸汽灭菌、煮沸灭菌、 低温间歇灭菌低温间歇灭菌GDMCGDMC2022-4-152022-4-1

30、548（一）热压灭菌法（一）热压灭菌法 定义：用定义：用高压饱和水蒸气高压饱和水蒸气加热杀死微生物的加热杀死微生物的方法方法 特点：灭菌效果可靠，能杀灭所有细菌繁殖特点：灭菌效果可靠，能杀灭所有细菌繁殖体和芽孢体和芽孢适用范围：耐高压蒸汽的药物和物品适用范围：耐高压蒸汽的药物和物品 热压灭菌的条件与标准：热压灭菌的条件与标准：116116（67kPa67kPa） 40min40min 121 121（97kPa97kPa） 30min30min 126.5126.5（139kPa139kPa） 15min15min GDMCGDMC2022-4-152022-4-1549热压灭菌设备：热压灭菌

31、设备： 卧式热压灭菌柜卧式热压灭菌柜 立式热压灭菌柜立式热压灭菌柜 手提式热压灭菌器手提式热压灭菌器GDMCGDMC2022-4-152022-4-1550注意事项注意事项1）必须使用）必须使用饱和蒸汽饱和蒸汽2）必须将灭菌器内的空气排除）必须将灭菌器内的空气排除3）灭菌时间的计算必须要正确）灭菌时间的计算必须要正确4）一定要注意安全操作）一定要注意安全操作GDMCGDMC2022-4-152022-4-1551影响灭菌效果的因素：影响灭菌效果的因素：微生物的种类与数量微生物的种类与数量 芽孢芽孢繁殖体繁殖体衰老体衰老体药品性质和灭菌时间药品性质和灭菌时间 温度高时间长灭菌效果好温度高时间长灭

32、菌效果好 温度高时间长药品易分解温度高时间长药品易分解 蒸汽性质蒸汽性质 饱和蒸汽饱和蒸汽其他因素其他因素 介质的性质（酸碱、营养）介质的性质（酸碱、营养）GDMCGDMC2022-4-152022-4-1552（二）流通蒸汽灭菌法（二）流通蒸汽灭菌法定义：定义： 100常压蒸汽灭菌方法常压蒸汽灭菌方法 特点：不能保证杀灭所有的芽孢，条件较温和特点：不能保证杀灭所有的芽孢，条件较温和适用范围：消毒、不耐高热制剂适用范围：消毒、不耐高热制剂灭菌条件：灭菌条件： 100， 30min60min GDMCGDMC2022-4-152022-4-1553（三）煮沸灭菌法（三）煮沸灭菌法定义：沸水中加热

33、的方法定义：沸水中加热的方法特点：不能确保杀灭所有的芽孢，如加入特点：不能确保杀灭所有的芽孢，如加入适当抑菌剂，可杀死芽孢适当抑菌剂，可杀死芽孢适用范围：器皿消毒和不耐高热的药物制适用范围：器皿消毒和不耐高热的药物制剂等剂等灭菌条件：煮沸灭菌条件：煮沸3060minGDMCGDMC2022-4-152022-4-1554（四）低温间歇灭菌法（四）低温间歇灭菌法l定义：指将待灭菌物置定义：指将待灭菌物置60-8060-80的水或流通蒸汽中加的水或流通蒸汽中加热热60min60min，杀灭微生物繁殖体后，在室温条件下放置，杀灭微生物繁殖体后，在室温条件下放置24h24h，让待灭菌物中的芽孢发育成繁

34、殖体，再次加热，让待灭菌物中的芽孢发育成繁殖体，再次加热灭菌、放置，反复多次，直至杀灭所有芽孢。灭菌、放置，反复多次，直至杀灭所有芽孢。l适用范围：适合于不耐高温、热敏感物料和制剂。适用范围：适合于不耐高温、热敏感物料和制剂。 l缺点：费时、工效低、灭菌效果低。加适量抑菌剂，缺点：费时、工效低、灭菌效果低。加适量抑菌剂，以增加灭菌效力。以增加灭菌效力。GDMCGDMC2022-4-152022-4-1555案例： “欣弗”事件 2006年8月3日，卫生部办公厅发出通知，指出青海、广西、浙江、黑龙江和山东等省区陆续出现部分患者使用上海华源股份有限公司安徽华源生物药业有限公司生产的克林霉素磷酸酯葡

35、萄糖注射液（“欣弗”）后，出现胸闷、心悸、心慌、寒战、肾区疼痛、腹痛、腹泻、恶心、呕吐、过敏性休克、肝肾功能损害等临床症状，要求控制该药品不再临床使用。截止至2006年8月5日，共计发现不良反应81例，其中3例死亡。 问题：1. 欣弗事件的起因是什么?2. 结合其产生的原因，分析湿热灭菌影响因素有哪些？GDMCGDMC2022-4-152022-4-1556案例解析 国家食品药品监督管理局会同安徽省食品药品监督管理局对安徽华源生物药业有限公司进行现场检查。经查，该公司2006年6月至7月生产的克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液未按批准的工艺参数灭菌，降低灭菌温度，缩短灭菌时间，增加灭菌柜装载量，影响了

36、灭菌效果。经中国药品生物制品检定所对相关样品进行检验，结果表明，无菌检查和热原检查不符合规定。 GDMCGDMC2022-4-152022-4-1557 GDMCGDMC2022-4-152022-4-1558蒸气蒸气饱和蒸气饱和蒸气湿饱和蒸气湿饱和蒸气过热蒸气过热蒸气热含量热含量热穿透力热穿透力灭菌效率灭菌效率GDMCGDMC2022-4-152022-4-1559影响湿热灭菌因素影响湿热灭菌因素 灭菌时间和药物性质灭菌时间和药物性质 灭菌温度愈高，灭菌时间愈长。药品被破坏的可能性愈大。 液体制剂的介质性质：pH值、营养成分等。GDMCGDMC2022-4-152022-4-1560影响湿热

37、灭菌因素影响湿热灭菌因素 灭菌物品体积及排布灭菌物品体积及排布 柜内物品放置不能太拥挤，确保蒸气流通；并用摆放要整齐、均匀，以何证温度的均匀性。GDMCGDMC2022-4-152022-4-1561三、射线灭菌法三、射线灭菌法 1 1、辐射灭菌、辐射灭菌定义：以放射性同位素释放的定义：以放射性同位素释放的射线进行灭菌的方法射线进行灭菌的方法机理：使有机分子电离，产生自由基，导致微生物体机理：使有机分子电离，产生自由基，导致微生物体内的生物大分子分解内的生物大分子分解特点：不升高温度，穿透性强，包装后也可以灭菌特点：不升高温度，穿透性强，包装后也可以灭菌不足之处：设备贵，有安全防护等问题，可能

38、促进药不足之处：设备贵，有安全防护等问题，可能促进药物降解物降解GDMCGDMC2022-4-152022-4-15622 2、紫外线灭菌、紫外线灭菌 定义：用紫外线照射杀灭微生物的方法定义：用紫外线照射杀灭微生物的方法 机理：使核酸蛋白质变性；空气受照射机理：使核酸蛋白质变性；空气受照射后产生的臭氧也有较强的杀菌作用后产生的臭氧也有较强的杀菌作用 特点：表面灭菌，特点：表面灭菌，较易穿透清洁空气及较易穿透清洁空气及纯净的水纯净的水 GDMCGDMC2022-4-152022-4-1563条件：条件：200200300nm300nm，最强，最强254nm254nm 注意事项：人员进入前开启注意

39、事项：人员进入前开启12小时，人员小时，人员进入时关闭；如须在操作中照射，则皮肤进入时关闭；如须在操作中照射，则皮肤和眼睛须有防护措施和眼睛须有防护措施GDMCGDMC2022-4-152022-4-15643 3、微波灭菌法、微波灭菌法 定义：系采用微波定义：系采用微波( (频率为频率为300MHz-300kMHz)300MHz-300kMHz)照射照射产生的热能杀灭微生物和芽孢的方法。产生的热能杀灭微生物和芽孢的方法。 适用范围：适合于液体和固体物料，对固体物料适用范围：适合于液体和固体物料，对固体物料具有干燥作用。具有干燥作用。 特点：微波能穿透到介质和物料的深部，表里加特点：微波能穿透

40、到介质和物料的深部，表里加热一致，且具有低温、常压、高效、快速热一致，且具有低温、常压、高效、快速(2-(2-3min)3min)、低能耗、无污染、易操作、易维护，产品、低能耗、无污染、易操作、易维护，产品保质期长保质期长( (可延长可延长1/31/3以上以上) )等。等。GDMCGDMC2022-4-152022-4-1565四、滤过除菌法（机械除菌）四、滤过除菌法（机械除菌） 定义：用滤过方法除去微生物的方法定义：用滤过方法除去微生物的方法 机理：细菌不能通过致密具孔材料机理：细菌不能通过致密具孔材料 滤器要求：孔径滤器要求：孔径0.22m，滤器不吸附、滤器不吸附、不脱落、易清洗、易操作不

41、脱落、易清洗、易操作GDMCGDMC2022-4-152022-4-1566适用范围：对热不稳定的药物溶液、气体、适用范围：对热不稳定的药物溶液、气体、水等水等注意：无菌操作；成品须进行无菌检查注意：无菌操作；成品须进行无菌检查GDMCGDMC2022-4-152022-4-1567l过滤除菌滤器的要求：过滤除菌滤器的要求：l(1)(1)能有效除净微生物，溶液通过滤器顺畅，滤器容能有效除净微生物，溶液通过滤器顺畅，滤器容易清洗，操作简便。易清洗，操作简便。 l(2)(2)孔径大小必须足以阻止细菌和芽孢进入滤孔之内，孔径大小必须足以阻止细菌和芽孢进入滤孔之内， 以以LRVLRV（在规定条件下，指

42、定菌液通过滤器后截留在（在规定条件下，指定菌液通过滤器后截留在滤膜上的孢子数的对数值）表示过滤能力。孔径通常滤膜上的孢子数的对数值）表示过滤能力。孔径通常为为0.22m0.22m（每平方厘米有效过滤面积的（每平方厘米有效过滤面积的LRVLRV不小于不小于7 7）或更小。或更小。 GDMCGDMC2022-4-152022-4-1568l(3)(3)采用微孔滤膜滤器除菌，常选用孔径采用微孔滤膜滤器除菌，常选用孔径0.22m0.22m的滤的滤膜。膜。 l(4)G6(4)G6号垂熔玻璃漏斗，其滤孔直径在号垂熔玻璃漏斗，其滤孔直径在1.5m1.5m以下，以下，可以除去细菌，对药物不吸附，可以除去细菌，

43、对药物不吸附， 也不影响药液的也不影响药液的pHpH，是常用灭菌滤器。是常用灭菌滤器。GDMCGDMC2022-4-152022-4-1569l定义：定义：是指用化学药品直接作用于微生物而将其杀灭的是指用化学药品直接作用于微生物而将其杀灭的方法，同时不应损害制品的质量。方法，同时不应损害制品的质量。l杀菌剂：杀菌剂：对微生物具有触杀作用的化学药品。分为气体对微生物具有触杀作用的化学药品。分为气体杀菌剂和液体杀菌剂。不能杀死芽孢，仅对繁殖体有效。杀菌剂和液体杀菌剂。不能杀死芽孢，仅对繁殖体有效。l影响杀菌效果的因素：影响杀菌效果的因素：微生物的种类与数量、物体表面微生物的种类与数量、物体表面状况

44、、杀菌剂的性质。状况、杀菌剂的性质。 l化学杀菌的目的：化学杀菌的目的：减少微生物的数目以控制一定的无菌减少微生物的数目以控制一定的无菌状态。状态。l常用的方法：常用的方法：（1 1）气体灭菌法）气体灭菌法和和（2 2）药液灭菌法。）药液灭菌法。五、化学灭菌法五、化学灭菌法GDMCGDMC2022-4-152022-4-1570l(1)(1)气体灭菌法气体灭菌法 l定义：定义：指采用气态杀菌剂进行灭菌的方法。指采用气态杀菌剂进行灭菌的方法。l适用范围：适用范围：适合环境消毒以及不耐加热灭菌适合环境消毒以及不耐加热灭菌的医用器具、设备和设施等的消毒，粉末注的医用器具、设备和设施等的消毒，粉末注射

45、剂。应注意杀菌剂的残留量和与药物的相射剂。应注意杀菌剂的残留量和与药物的相互作用。互作用。l品种：品种：环氧乙烷、甲醛、过氧乙酸等环氧乙烷、甲醛、过氧乙酸等GDMCGDMC2022-4-152022-4-1571(2)(2)药液灭菌法药液灭菌法定义：定义：指采用杀菌剂溶液进行灭菌的方法。指采用杀菌剂溶液进行灭菌的方法。适用范围：适用范围：常应用于其他灭菌法的辅助措施，适合于常应用于其他灭菌法的辅助措施，适合于皮肤、无菌器具和设备的消毒。皮肤、无菌器具和设备的消毒。常用品种：常用品种：0.10.1-0.2-0.2新洁尔灭溶液、新洁尔灭溶液、7575乙醇、乙醇、1 1聚维酮碘溶液、酚或煤酚皂溶液等

46、。聚维酮碘溶液、酚或煤酚皂溶液等。 使用注意：使用注意：由于化学杀菌剂常施用于物体表面，也要由于化学杀菌剂常施用于物体表面，也要注意其浓度不要过高，以防其化学腐蚀作用。注意其浓度不要过高，以防其化学腐蚀作用。 GDMCGDMC2022-4-152022-4-1572灭菌参数在灭菌中的意义与作用灭菌参数在灭菌中的意义与作用 无菌检验往往难以检出极微量微生物，为了保证产品无菌检验往往难以检出极微量微生物，为了保证产品无菌，有必要对灭菌方法的可靠性进行验证是很必要的。无菌，有必要对灭菌方法的可靠性进行验证是很必要的。 主要原因：主要原因： 灭菌温度多系测量灭菌器内的温度，不是灭菌物体内灭菌温度多系测

47、量灭菌器内的温度，不是灭菌物体内的温度；的温度； 无菌检验方法也在局限性，难以用现行的无菌检验法无菌检验方法也在局限性，难以用现行的无菌检验法检出微量的微生物。检出微量的微生物。 灭菌参数（灭菌参数（F值和值和F0值）值）GDMCGDMC2022-4-152022-4-1573（一）一）D D值：值： 灭菌过程符合一级动力学过程灭菌过程符合一级动力学过程 dN/dt = -KNdN/dt = -KN lgN lgNt t=lgN=lgN0 0-(kt/2.303)-(kt/2.303) 斜率斜率k/2.303k/2.303 令斜率的负倒数为令斜率的负倒数为D D值值 D=2.303/k=t/D

48、=2.303/k=t/（lgNlgN0 0-lgN-lgNt t） N N0 0/N/Nt t=10/1=10/1时，时，D=tD=tD D值的意义：值的意义：在一定温度下，杀灭在一定温度下，杀灭90%90%微生物（即使微生物（即使之下降一个对数单位）所需要的之下降一个对数单位）所需要的灭菌时间灭菌时间。（反。（反映了微生物的抗热性）映了微生物的抗热性）0kttNN eGDMCGDMC2022-4-152022-4-1574影响因素影响因素 不同微生物具有不同不同微生物具有不同D D值。值。D D值越小，证明微生物抗值越小，证明微生物抗热性越弱。曝热时间较短即可杀灭九成。热性越弱。曝热时间较短

49、即可杀灭九成。 同一微生物，曝热温度同一微生物，曝热温度T T越高，越高，D D值越低（图值越低（图3 3） TT，lgNlgN下降得快，下降得快，D D小小; T; T，lgNlgN下降得慢，下降得慢，D D大大D1D3D2121lgN125115Ot1GDMCGDMC2022-4-152022-4-1575 环境条件（介质）环境条件（介质） 介质对介质对D D值的影响值的影响GDMCGDMC2022-4-152022-4-1576（二）（二）Z Z值值 在在100100138138时，时，lgDlgD与温度之间存在直线与温度之间存在直线关系关系( (负相关）负相关） 令令 Z=Z=（T T

50、2 2-T-T1 1）/ /（lgDlgD1 1-lgD-lgD2 2） 当当lgDlgD1 1-lgD-lgD2 21 1，即，即D D1 1/D/D2 2=10=10时，时，Z=TZ=T2 2-T-T1 1 上式可改写成：上式可改写成：D D2 2/D/D1 1=10=10（T1-T2T1-T2）/Z/Z Z Z值的意义：值的意义：将灭菌时间减少到原来的将灭菌时间减少到原来的1/101/10所需所需要升高的要升高的灭菌温度灭菌温度。（。（Z Z值反应了微生物对热的敏值反应了微生物对热的敏感程度。）感程度。） Z Z值通常在湿热灭菌时取值通常在湿热灭菌时取1010，在干，在干热灭菌时取热灭菌

51、时取2020。GDMCGDMC2022-4-152022-4-1577不同微生物，有不同不同微生物，有不同Z Z值。值。同一微生物在不同溶液中，同一微生物在不同溶液中，Z Z值不同值不同Z Z值越小，斜率越大，值越小，斜率越大，TDTD值变化大值变化大Z Z值越大，斜率越小，值越大，斜率越小，TDTD值变化小值变化小 即即Z Z值越大，此微生物对温度变化的敏感性越弱，值越大，此微生物对温度变化的敏感性越弱，企图通过升高温度来加速杀灭微生物的效果就不明企图通过升高温度来加速杀灭微生物的效果就不明显。显。GDMCGDMC2022-4-152022-4-1578 理想状态，灭菌过程中升温、降温瞬间完

52、成，理想状态，灭菌过程中升温、降温瞬间完成，灭菌温度恒定不变。灭菌温度恒定不变。 则可用公式计算：则可用公式计算： F FT T=D=DT TlgNlgN0 0， F F0 0=D=D121121lgNlgN0 0 N N0 0：灭菌前微生物数。：灭菌前微生物数。 实际上，一个产品灭菌过程总有三个阶段：升实际上，一个产品灭菌过程总有三个阶段：升温、保温、冷却。即灭菌过程不是始终在恒定温、保温、冷却。即灭菌过程不是始终在恒定温度下进行。（下图）温度下进行。（下图）GDMCGDMC2022-4-152022-4-1579l在湿热灭菌时，由于包装材料性能及其他因素影在湿热灭菌时，由于包装材料性能及其

53、他因素影响而使升温度各异，而响而使升温度各异，而F F0 0将随着产品温度将随着产品温度(T)(T)变化变化而呈指数的变化，故温度即使很小的差别而呈指数的变化，故温度即使很小的差别( (如如0.1-0.1-1)1)将对将对F F0 0 值产生显著的影响。同时要求测定灭菌值产生显著的影响。同时要求测定灭菌物品内的实际温度，将不同灭菌温度折算到相当物品内的实际温度，将不同灭菌温度折算到相当于于 121121湿热灭菌时的效力，故湿热灭菌时的效力，故F F0 0值可作为灭菌值可作为灭菌过程的比较参数。过程的比较参数。 GDMCGDMC2022-4-152022-4-1580 F= F=t10t10（T

54、-T0T-T0） / Z/ Z t t ：是测量被灭菌物料温度的时间间隔（：是测量被灭菌物料温度的时间间隔（0.5-0.5-1.01.0分钟）分钟） T T：每个时间间隔：每个时间间隔t t 所测得被灭菌物料温度所测得被灭菌物料温度 T T0 0：参比温度（：参比温度（170170） Z Z值取值取2020 表达式的意思：表达式的意思：F F值为一系列温度值为一系列温度T T下，给定下，给定Z Z值所产生值所产生的灭菌效力与参比温度的灭菌效力与参比温度T T0 0下给定下给定Z Z值所产生的灭菌效力值所产生的灭菌效力相同时，所相当的相同时，所相当的T T0 0温度下的灭菌时间。（温度下的灭菌时

55、间。（即整个灭菌即整个灭菌过程的效果相当于过程的效果相当于T T0 0温度下温度下F F时间的灭菌效果。时间的灭菌效果。 ）F值：值：GDMCGDMC2022-4-152022-4-1581F F0 0值：值：F F0 0= =t10t10（T-121T-121） /10/10 在一定灭菌温度在一定灭菌温度(T)(T)、Z Z值为值为1010所产生的所产生的湿热湿热灭灭菌效果与菌效果与121121，Z Z值为值为1010所产生的灭菌效果相同时所产生的灭菌效果相同时所相当的时间所相当的时间(min)(min)。F F0 0值是值是121 121 热压灭菌时杀灭微生物所需要的时热压灭菌时杀灭微生物

56、所需要的时 F F0 0= D= D121121(lgN(lgN0 0-lgN-lgNt t) ) 当当NtNt为为1010-6-6时时 ( (原有菌数的百万分之一原有菌数的百万分之一) )，GDMCGDMC2022-4-152022-4-1582灭菌过程中不同时间（灭菌过程中不同时间（min）灭菌物的温度（）灭菌物的温度（）时间012345温度100102104106108110时间67838 3940温度112114115114112时间414243444546温度110108106104102100GDMCGDMC2022-4-152022-4-1583 结果表明，上述灭菌程序结果表明，

57、上述灭菌程序46min46min的灭菌效果的灭菌效果与与121121，8.40min8.40min的灭菌效果相当。的灭菌效果相当。GDMCGDMC2022-4-152022-4-1584l影响影响F F0 0值的因素：值的因素： l 容器大小、形状及热的穿透性等。容器大小、形状及热的穿透性等。 l 灭菌产品溶液的性质、填充量等。灭菌产品溶液的性质、填充量等。 l 容器在灭菌器中的数量及分布等。容器在灭菌器中的数量及分布等。l测定测定F F0 0值应注意：值应注意：l 先应选择灵敏度高，重现性好，精密度为先应选择灵敏度高，重现性好，精密度为0.10.1的热的热电偶，并对热电偶进行校验。电偶，并对

58、热电偶进行校验。 l 灭菌时应将热电偶的探针置于被测物的内部，经灭菌时应将热电偶的探针置于被测物的内部，经灭菌器通向柜外的湿度记录仪，有些灭菌记录仪附有灭菌器通向柜外的湿度记录仪，有些灭菌记录仪附有F F0 0计算器，在灭菌过程中和灭菌后，自动显示计算器，在灭菌过程中和灭菌后，自动显示F F0 0值。值。GDMCGDMC2022-4-152022-4-1585l为了确保灭菌效果，还应注意两个问题：为了确保灭菌效果，还应注意两个问题： 根据根据F F0 0 =D =D121121 (logNo-logNt)(logNo-logNt)，若，若N N越大，即被灭越大，即被灭菌物中微生物越多，则灭菌时

59、间越长，故生产过程中菌物中微生物越多，则灭菌时间越长，故生产过程中应尽量减少微生物的污染，应采取各种措施使每个容应尽量减少微生物的污染，应采取各种措施使每个容器的含菌数控制在器的含菌数控制在1010以下。以下。 其次其次计算计算F F0 0时，应适当考虑增加安全因素，一般时，应适当考虑增加安全因素，一般增加增加5050，如规定，如规定F F0 0为为8 8分，则实际操作应控制分，则实际操作应控制F F0 0为为1212分。分。 GDMCGDMC2022-4-152022-4-1586无菌操作法无菌操作法 定义定义 整个过程在整个过程在无菌条件无菌条件下进下进行的一种操作方法行的一种操作方法适用

60、范围适用范围 不耐热的药物注射剂、不耐热的药物注射剂、眼用溶液、眼用软膏或皮试液等。眼用溶液、眼用软膏或皮试液等。层流洁净工作台GDMCGDMC2022-4-152022-4-1587层流洁净工作台无菌操作室的灭菌无菌操作室的灭菌空间：紫外线照射、乳酸、甲空间：紫外线照射、乳酸、甲醛、丙二醇蒸气。醛、丙二醇蒸气。地面、用具：酚溶液、来苏尔、地面、用具：酚溶液、来苏尔、乙醇、苯扎溴铵溶液等。用具乙醇、苯扎溴铵溶液等。用具可采用湿热或干热灭菌。可采用湿热或干热灭菌。无菌检查法无菌检查法在层流工作台中进行，在层流工作台中进行，中国中国药典药典规定的无菌检查法有规定的无菌检查法有“直接接种法直接接种法