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文档简介
1、碱性磷酸酶的分离提取匀浆液上清液沉淀粗酶液管 号01234567 pNP含量 (mol)00.050.10 0.15 0.20 0.25 0.30 0.35 0.5mol/mL pNP (mL)00.10.20.30.40.50.60.7 H2O (mL)0.80.70.60.50.40.30.20.1 Na2CO3-NaHCO3 (mL)各管加入1.0 mL 20 mmol/L MgCl2 (mL)各管加入0.2 mL 0.1 mol/L NaOH (mL)各管加入2.0 mL OD 405 nm以对硝基苯酚的绝对量(mol数)为横坐标,OD405nm值为纵坐标,绘制标准曲线。求出pNP的克
2、分子消光系数()值。103( mol/L)-1cm-1管 号空白1235 mM pNPP(mL)各0.2mL Na2CO3-NaHCO3 (mL)各管加入1.0 mL 20 mmol/L MgCl2 (mL)各管加入0.2 mL H2O (mL)各0.50mL 酶液(mL)/各0.1mL 0.1 mol/L NaOH (mL)各管加入2.0 mL 酶液(mL)0.1mL OD 405 nm2.2.2 酶活力的测定酶活力的测定以0号管调零点,测定各管的OD405nm值,从对照标准曲线求出产物的mol数,算出酶活力。步骤总体积 mL蛋白mg/mL总蛋白mg酶活力U/mL总活力U比活力U/mg纯化倍数得率%匀浆过滤液4007.24 20.3 正丁醇处理上清液470 33.8 0.35饱和(NH4)2SO4上清液440 35.3 0.7饱和(NH4)2SO4沉淀溶解透析上清液40.3 314.7 DEAE-32酶液9.63.82 1002.2 Sephadex G75酶液13.2
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