基因工程试题

1、名词解释问题： Genemanipulation答案： 基因操作。将在细胞外产生的核酸（物质）分子插入到病毒，质粒或其它载体系统中，再整合到特定的宿主中，从而形成一种新的可连续繁殖的有机体。名词解释问题： Interruptedgenes参考答案： 间断基因。序列中间插入有与氨基酸编码无关的DNA间隔区，使一个基因分隔成不连续的若干区段。我们称这种编码序列不连续的基因为间断基因。名词解释问题： Promotor参考答案： 启动子。DNA分子可以与RNA聚合酶特异结合的部位，也就是使转录开始的部位。名词解释问题： Subcloning参考答案： 亚克隆。当初始克隆中的外源DNA片段较长，含有许多

2、目的基因以外的DNA片段时，在诸如表达、序列分析和突变等操作中不便进行，将目的基因所对应的一小段DNA找出来，这个过程叫“亚克隆”。填空题问题： 基因操作（Genemanipulation）的核心部分是基因克隆（genecloning），genecloning的基本要点有（），（）和（）。参考答案： 克隆基因的类型；受体的选择；载体的选择填空题问题： （）是遗传物质的基本单位,也是作为遗传物质的核酸分子上的一段片段。它可以是连续的，也可以是（）；可以是（），也可以是RNA；可以存在于染色体上，也可以（）参考答案： 基因；连续；DNA；存在于染色体之外（如质粒，噬菌体等）填空题问题： 基因操作并

3、不是一个法律概念，除了包括基因克隆外，还包括基因的（）、（）、（）和（）等与基因研究相关的内容。参考答案： 表达；调控；检测；改造填空题问题： 启动子（Promotor）是指（）。通常一个Gene是否表达，（）是关键的一步，是起决定作用的。在转录过程中，Promoter还是（）的结合位点。参考答案： 基因转录过程中控制起始的部位；转录起始；RNA聚合酶填空题问题： 原核生物的RNApolymerase主要由两部分组成：（）和（），其中-因子并不参与RNA的合成，它的作用主要是（）。参考答案： 核心酶；因子；识别要转录的起始位点填空题问题： 从（）到（）的这一段距离称为一个转录单位，或者一个转录

4、产物，其中可包括一个或者多个Gene。参考答案： 启动区；终止区填空题问题： 转录终止子主要有两种，一种是（），另一种是（）。参考答案： 依赖因子；不依赖因子填空题问题： Gene的书写方式，通常是写出的DNA序列总是与（）相同的那条链，方向是从（）到（）。对于碱基的位置，一般自转录起始点向两个方向编号，其中转录起始点定为（），（）定为-1。参考答案： mRNA；5；3；+1；在起始点上游第一个碱基填空题问题： 重叠基因（Overlappinggene）是指（），间隔基因（Interruptedgene）是指（）参考答案： 一个基因的序列中，单个DNA序列可编码一个以上的蛋白质；在编码序列中间

5、插入的一段无编码作用的碱基序列简答题问题： 简述基因克隆的两个基本特征？参考答案： 基因克隆的两个基本特征是一是强调外源核酸分子（一般情况下都是DNA）在不同宿主中的繁殖，打破自然种的界限将来自于不相关物种的基因放入一个宿主中是基因操作的一个重要特征，基因操作的另一个重要特征是繁殖。简答题问题： 谈谈你对gene的认识，并简要说说gene概念的发展情况？参考答案： 能够表达和产生基因产物（ProteinorRNA）的DNA序列（可自由发挥，发展情况请查找相关资料）基因概念的发展：基因作为遗传学中的专用术语，其概念每发展一步都意味着遗传学乃至整个生物学的一次革命和突破，其内容的每次丰富和充实都凝

6、聚着生物学家们的滴滴心血。“基因”概念的提出：遗传学的奠基人孟德尔在1866年发表的论文植物杂交试验指出生物每一个性状都是通过遗传因子来传递的，遗传因子是一些独立的遗传单位。这样把可观察的遗传性状和控制它的内在的遗传因子区分开来了，遗传因子作为基因的雏形名词诞生了。1909年丹麦遗传学家约翰逊在精密遗传学原理一书中提出“基因”概念，以此来替代孟德尔假定的“遗传因子”。从此，能够表达和产生基因产物（proteinorRNA）的DNA序列（可自由发挥）“基因”一词一直伴随着遗传学发展至今。基因结构和功能的探索：摩尔根和他的学生们利用果蝇作了大量的潜心研究，1926年他的巨著基因论出版，从而建立了著

7、名的基因学说，首次完成了当时最新的基因概念的描述，即基因以直线形式排列，它决定着一个特定的性状，而且能发生突变并随着染色体同源节段的互换而交换，它不仅是决定性状的功能单位，而且是一个突变单位和交换单位。1941年比德尔和塔特姆提出一个基因一个酶说；1949年鲍林与合作者在研究镰刀型细胞贫血症时推论基因决定着多肽链的氨基酸顺序；1944年艾弗里、麦卡蒂首次用实验明确证实：DNA是遗传信息的载体；1952年赫尔希和蔡斯进一步证明遗传物质是DNA而不是蛋白质；1953年美国分子生物学家沃森和英国分子生物学家克里克通力协作，根据X射线衍射分析，提出了著名的DNA双螺旋结构模型，进一步说明基因成分就是D

8、NA，它控制着蛋白质的合成；1957年法国遗传学家本滋尔以T4噬菌体作为研究材料分析了基因内部的精细结构，提出了顺反子学说。这个学说打破了过去关于基因是突变、重组、决定遗传性状的“三位一体”概念及基因是最小的不可分割的遗传单位的观点，从而认为基因为DNA分子上一段核苷酸序列，负责着遗传信息的传递，一个基因内部仍可划分为若干个起作用的小单位，即可区分成顺反子、突变子和重组子。一个作用子通常决定一种多肽链合成，一个基因包含一个或几个作用子。突变子指基因内突变的最小单位，而重组子为最小的重组合单位，只包含一对核苷酸。所有这些均是基因概念的伟大突破。关于基因的本质确定后，人们又把研究视线转移到基因传递

9、遗传信息的过程上。1961年开始，尼伦伯格和科拉纳等人逐步搞清了基因以核苷酸三联为一组编码氨基酸，并在1967年破译了全部64个遗传密码，这样把核酸密码和蛋白质合成联系起来。然后，沃森和克里克等人提出的“中心法则”更加明确地揭示了生命活动的基本过程。1970年特明以在劳斯肉瘤病毒内发现逆转录酶这一成就进步发展和完善了“中心法则”，至此，遗传信息传递的过程已较清晰地展示在人们的眼前。过去人们对基因的功能理解是单一的即作为蛋白质合成的模板。1961年法国雅各布和莫诺的研究成果，又大大扩大了人们关于基因功能的视野。他们在研究大肠杆菌乳糖代谢的调节机制中发现了有些基因不起合成蛋白质模板作用，只起调节或

10、操纵作用，提出了操纵子学说。从此根据基因功能把基因分为结构基因、调节基因和操纵基因。基因概念的进一步发展：70年代后，基因的概念随着多学科渗透和实验手段日新月异又有突飞猛进的发展，主要有以下几个方面。基因具重叠性、内含子和外显子、管家基因与奢侈基因和基因的游动性。所有这些成果无疑给基因概念中注入鲜活科学的内容，帮助人们揭开层层面纱去更加全面了解基因的真面目。时代在发展，科学在进步，基因概念的深入发展，必将对人类的文明进步产生强大的推动作用。简答题问题： 如何理解gene及其产物的共线性和非共线性？参考答案： 基因决定蛋白质的序列组成，是由密码子对应特定氨基酸所决定的。当一个基因的核苷酸序列与其

11、产物的氨基酸序列是一一对应时，则表明它们是共线性的。在原核生物中，基因及其产物是共线性的。70年代以来，在真核生物中，发现了间断基因，后来发现这种间断基因在真核生物中普遍存在，也就是后来所说的基因间存在着内含子。内含子指真核生物基因中不能被翻译成蛋白质的DNA片断，但可被转录，当两侧序列的转录RNA被剪接在一起时，就将内含子转录的RNA从整个转录物中除去。外显子是指能够翻译成蛋白质的任一间断的基因片段，一个基因可有多个外显子。内含子并不是一成不变的，具有相对性，对一个DNA片断来说，在某个基因中是内含子，但在另一个基因中却可以作为外显子。您的答案： 简答题问题： 什么是genecloning？

12、什么是亚克隆（subcloning）？参考答案： 基因克隆：一定程度上等同于基因的分离，即从复杂的生物体基因组中，经过酶切，消化等步骤，分离带有目的基因的DNA片段。基因亚克隆：初步克隆中的外源片段往往较长，含有许多目的基因片段以外的DNA片段，在诸如表达、序列分析和突变等操作中不便进行，因此必须将目的基因所对应的一小段DNA找出来，这个过程叫“亚克隆”。您的答案： 简答题问题： 假如从一个原核生物中cloning某基因（1-2kb），请谈谈它的基本步骤？参考答案： 对原核生物染色体DNA进行不完全酶切，纯化所得到的DNA片断，并与载体连接，转化大肠杆菌；得到转化子后，根据目标基因两侧的已知序

13、列设计探针，杂交，筛选转化子；所得到的转化子中含有目标基因，进一步作亚克隆，一步步地向目标基因逼近，最后可得到目标基因简答题问题： 什么叫基因工程（GeneEngineering），试从理论和技术两个方面谈谈GeneEngineering诞生的基础？参考答案： 基因工程（GeneEngineering）又称基因操作（GeneManipulation）、重组DNA。基因工程是以分子遗传学理论为基础，以分子生物学和微生物学的现代方法为手段，将不同来源的基因（DNA分子），按预先设计的蓝图，在体外构建杂种DNA分子，然后导入活细胞，以改变生物原先的遗传特性，获得新品种，生产新产品，或是研究基因的结构

14、和功能。思考题问题： 简述基因操作、基因重组和基因工程的关系。思考题问题： 为什么说基因工程是生物学和遗传学发展的必然产物？思考题问题： 简述基因的结构组成对基因操作的影响。第二章名词解释问题： Restrictionandmodification参考答案： 限制和修饰。宿主特异性地降解外源遗传物质（DNA）的现象称为限制。外源遗传物质通过甲基化等作用避免宿主的限制作用称为修饰。名词解释问题： Matchedends参考答案： 匹配末端。识别位点为回文对称结构的序列，经限制酶切割后，产生的相同的，互补的末端称为匹配粘端，亦即粘性末端（cohesiveend）。名词解释问题： Bluntends

15、参考答案： 平末端。在回文对称轴上同时切割DNA的两条链，产生的没有碱基突出的末端称为平末端。名词解释问题： Isoschizomer参考答案： 同裂酶。识别相同序列的限制酶称同裂酶，但它们的切割位点可能不同。名词解释问题： Isocaudiners参考答案： 同尾酶。来源不同、识别序列不同，但产生相同粘性末端的酶。名词解释问题： Sitepreferences参考答案： 位点偏爱。某些限制酶对同一介质中的不同位置的同一个识别序列表现出不同的切割效率的现象称为位点偏爱。名词解释问题： Staractivity参考答案： 星星活性。在极端非标准条件下，限制酶能切割与识别序列相似的序列，这个改变的

16、特殊性称星星活性。名词解释问题： Nickingenzyme参考答案： 切口酶。有些限制酶只切割双链DNA中的一条链，产生单链缺口，这种酶称为切口酶。名词解释问题： Klenowfragment参考答案： Klenow片段。KlenowDNA聚合酶是E.coliDNApolymerase经蛋白酶（枯草杆菌蛋白酶）裂解而从全酶中除去5-3外切活性的多肽大片段，而聚合活性和3-5外切活性不受影响。名词解释问题： Sequenase参考答案： 测序酶。是改造的T7噬菌体DNA聚合酶，切除了99%以上的3-5外切活性。SequenaseVersion2切除了所有的3-5外切活性，用于双脱氧链终止法对长

17、片段进行测序。名词解释问题： Reversetranscriptase参考答案： 反转录酶。即依赖于RNA的DNA聚合酶，它有5-3合成DNA活性，但是无3-5外切活性。它来自AMV（禽成髓细胞瘤病毒）或Mo-MLV（Moloney鼠白血病病毒，又称M-MuLV）。名词解释问题： Terminaltransferase参考答案： 末端转移酶。来源于小牛胸腺，是存在于前淋巴细胞及分化早期的类淋巴样细胞内的一种不寻常的DNA聚合酶，在二价阳离子存在下，末端转移酶催化dNTP加于DNA分子的3羟基端。若dNTP为T或C，此二价阳离子首选钴离子；若dNTP为A或G，此二价阳离子首选镁离子。名词解释问题

18、： Ligase参考答案： 连接酶。催化DNA5磷酸基与3羟基之间形成磷酸二酯键，将两段核酸连接起来的酶。名词解释问题： T4polynucleotidekinase参考答案： T4多核苷酸激酶。催化ATP的-磷酸基转移至DNA或RNA的5末端。名词解释问题： Alkalinephosphatase参考答案： 碱性磷酸酶。主要来源于牛小肠（Calfintestinalalkalinephosphatase），简称CIP或CIAP，也有来自细菌（BAP）。催化除去DNA或RNA5磷酸。名词解释问题： S1nuclease参考答案： Sl核酸酶。来源于米曲霉（Aspergillusoryzae），

19、可降解单链DNA或RNA，产生带5磷酸的单核苷酸或寡核苷酸双链；对dsDNA，dsRNA，DNA:RNA杂交体不敏感。名词解释问题： Exonulease参考答案： 外切核酸酶。来源于大肠杆菌，催化从dsDNA3-OH逐一去除单核苷酸的反应，底物为dsDNA或线状和带切口或缺口的环状DNA，反应结果是在dsDNA上产生长的单链区。名词解释问题： Singlestrandbindingprotein参考答案： 单链结合蛋白。此蛋白能协同地与ssDNA结合而不与dsDNA结合，可以削弱链内二级结构的稳定性，从而加速互补多核苷酸的重新退火，并通过消除阻碍DNA聚合酶前进的链内二级结构，而提高这些聚合

20、酶的持续作用能力。名词解释问题： ProteinaseK参考答案： 蛋白酶K是具有高活性的丝氨酸蛋白酶，属枯草杆菌蛋白酶，可以水解范围广泛的肽键，尤其适合水解羧基末端至芳香族氨基酸和中性氨基酸之间的肽键。K指该蛋白酶通过水解角蛋白（keratin）可以为该霉菌提供所有所需的碳源和氮源。名词解释问题： Lysozymes参考答案： 溶菌酶。一类水解细菌细胞壁中肽聚糖的酶，常用的是卵清溶菌酶，用于破碎细胞。填空题问题： Ecok的一般分子组成为R2M2S，在这些亚基中，R亚基具有（）的作用，M亚基具有（）的作用，S亚基具有（）的作用，当该该酶发生作用时，需用到的辅因子有：（）、（）、（）。参考答案

21、： 限制酶；甲基化；识别DNA序列；ATP；SAM；Mg2+填空题问题： 限制性内切核酸酶（Restrictionendonuclease）的命名是按属名和种名相结合的原则的，通常第一个大写字母取自（），第二、三个字母取自（），第四个字母则用（）表示。参考答案： 属名的第一个字母；种名的前两个字母；菌株名填空题问题： 型限制酶识别回文对称序列，在回文序列（）或（）切割DNA，产生带3OH和5P基团的DNA的产物，需（）的存在才能发挥活性，相应的修饰酶只需SAM。参考答案： 内部；附近；Mg2填空题问题： 从因特网上可以找到限制酶的数据库（），该网站由NewEnglandBiolabs公司维护（

22、）。参考答案： REBASE填空题问题： 识别相同序列的限制酶称（）参考答案： 同裂酶填空题问题： -CeuI酶是衣滴虫叶绿体大rRNA基因的内含子编码的产物，识别位点为（）bp，识别的核心部位为（）至（）位置的19bp，反应温度为37。参考答案： 26；-12；+7填空题问题： 位点偏爱是指：（）参考答案： 限制酶对不同位置的同一个识别序列表现出不同的切割效率填空题问题： 1单位Nae或Nar的定义：（）参考答案： 切割1g腺病毒2DNA在50ul体系中1小时所需的酶量填空题问题： 有些限制酶只切割双链DNA中的一条链，产生单链缺口，即（）参考答案： 切口酶填空题问题： 个体间DNA限制性片

23、段长度的差异叫（）参考答案： 限制性片段长度多态性（RFLP）填空题问题： DNA载体经Hind切割后产生粘性末端，能发生载体自连，影响载体与外源DNA的连接效率，常用的防止载体自连的方法有（）、（）。参考答案： 去磷酸化；部分补平填空题问题： 完全的回文序列应具备两个特点即（）和（）。参考答案： 能够在中间划一个对称轴，两侧的序列两两对称互补配对；两条互补链的5-3的序列组成相同，即将一条链旋转180，则两条链重叠填空题问题： DcmMethylase（Dcm甲基化酶）的识别序列为（）和（），该酶的作用位点为（）。参考答案： CCTGG；CCAGG；第二个胞嘧啶C的C5位置填空题问题： 大肠

24、杆菌中至少有三种依赖于甲基化的限制系统（）、（）、（）。它们识别的序列各不相同，但只识别经过甲基化的序列，都限制CpG甲基化酶作用的DNA。参考答案： mcrA；mcrBC；mrr您的答案： 填空题问题： 分别写出以下限制性内切核酸酶（Restrictionendonuclease）的识别序列EcoR（）、Sau3A（）、Hind（）。参考答案： GAATTC；GATC；AAGCTT填空题问题： Weiss单位的定义为（）参考答案： 在37下20分钟内催化1nmol32P从焦磷酸根置换到,32PATP所需的酶量填空题问题： 限制性内切核酸酶（Restrictionendonuclease）通常

25、保存在（）浓度的甘油溶液中。参考答案： 50%填空题问题： 载体和外源DNA经酶切，在进行下一步操作前，需消除限制性内切核酸酶（Restrictionendonuclease）的影响。常用的方法有（）、（）、（）、（）。参考答案： EDTA法；加热法；苯酚抽提法；试剂盒除酶法填空题问题： 对DNA进行双酶切时，酶切缓冲液的选择原则有(1)（）、(2)（）、(3)（）参考答案： 可选用都合适的缓冲液或通用缓冲液；若缓冲液不可替代则先用低浓度的，再加适量NaCl和第二种酶；先用低盐缓冲液再用高盐缓冲液填空题问题： Dnase为内切核酸酶，在不同的辅因子条件下，产生不同的酶切效果，当Mg2+存在时（

26、）；当Mn2+存在时（）。参考答案： 独立作用于每条DNA链，且切割位点随机；可在两条链的大致同一位置切割dsDNA，产生平端或1到2个核甘酸突出的DNA片断填空题问题： KlenowDNA聚合酶是E.coliDNApolymerase经蛋白酶裂解而从全酶中除去（）活性的多肽大片断，而其他活性保持不变。参考答案： 5-3的外切活性填空题问题： T4phageDNApolymerase分子量为（）kDa，该酶的3-5的外切活性比Klenow酶强（）倍，由于它不从单链DNA模板上替换引物，故可用于（）。参考答案： 114；200；提高诱变反应填空题问题： 反转录酶来自AMV或MoMLV，即依赖于R

27、NA的DNA聚合酶，它有（）活性，但无（）活性。参考答案： 5-3合成DNA的；3-5的外切填空题问题： 末端转移酶来源于（），是存在于前淋巴细胞及分化早期的类淋巴样细胞内的一种不寻常的DNA聚合酶，在（）存在下，末端转移酶催化dNTP加于DNA分子的3羟基端。参考答案： 小牛胸腺；Mg2填空题问题： T4DNA连接酶的分子量为68kDa，它可以催化DNA5磷酸基与3羟基之间形成磷酸二酯键。反应底物为粘端、切口、平端的RNA或DNA。低浓度（）和（）可以提高平端连接效率。参考答案： 聚乙二醇PEG；单价阳离子填空题问题： E.coliDNA连接酶与T4DNA连接酶相似，但需（）的参与，且其平端

28、连接效率低常用于置换合成法。参考答案： 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）填空题问题： T4多核苷酸激酶在高浓度的ATP时发挥最佳活性，（）是其强烈抑制剂。参考答案： NH4填空题问题： BAL31核酸酶主要活性为3外切核酸酶活性，可从线性DNA两条链的3端去除掉单核苷酸；还可从内部切割核酸，作用于单链。BAL31发生作用依赖（），（）可抑制其活性。参考答案： Ca2；EGTA填空题问题： 绿豆核酸酶来源于绿豆芽，与S1酶相似，但比S1酶更温和，在（）上才切割，可使DNA突出端变成平端。参考答案： 大切口填空题问题： 核糖核酸酶A来源于牛胰，为内切核酸酶，可特异攻击（）。可除去DNA:RNA中未杂

29、交的RNA区，可用来确定DNA或RNA中单碱基突变的位置。参考答案： RNA上嘧啶残基的3端填空题问题： 用于构建嵌套缺失体常用到的核酸酶有（）、（）、（）。参考答案： Dnase；外切核酸酶；BAL31填空题问题： 琼脂糖酶作用于低熔点琼脂糖，它的活性是可切割琼脂糖酶亚单位。由于此酶可分解琼脂糖，因此应用于（）。参考答案： 分离大片段DNA选择题问题： 限制性内切酶一般保存在（）浓度的甘油溶液中。参考答案： C50%点评：合适浓度的甘油和二甲基亚砜可以作为冰冻保护剂，保护生物大分子的活性。选择题问题： 限制性图谱与限制性片段长度多态性（RFLP）图谱的最显著区别在于（）参考答案： A前者是物

30、理图谱后者是连锁图点评：详细理解两者的概念选择题问题： 迄今为止所发现的限制性内切核酸酶可以作用于（）参考答案： C只能作用于双链DNA点评：限制性内切核酸酶的识别和切割序列有很强的特异性，特别是第型的限制性内切酶。选择题问题： 已知某一内切酶在一个环状DNA上有4个切点，当用此酶切割该环状DNA，可以得到（）个片段参考答案： B4点评：注意DNA分子的形状，其它条件相同的时候，线状比环状产生的片段要多一个。选择题问题： 甘油会使许多限制性内切核酸酶的特异性发生改变，是导致一些酶星星活性的主要原因之一，防止的办法是在酶切反应体系中，将甘油的浓度控制在（）以下参考答案： A5%点评：低温下保存生

31、物大分子时，甘油可以作为冰冻保护剂，但反应体系中甘油浓度过高会导致星星活性。选择题问题： 在下列进行DNA部分酶切的条件中，控制哪一项最好（）参考答案： D酶量点评：各种酶都有适合自己的反应温度；同时根据酶反应动力学，酶切反应一定时间后酶的活性就会减弱或丧失，所以控制酶量是最合适的选择题问题： 下列试剂中，哪一种可以螯合Ca2离子（）参考答案： DEGTA点评：EDTA螯合Mg2+等金属离子，EGTA螯合Ca2离子。选择题问题： DNA被某种酶切割后，电泳得到的电泳带有些扩散，下列原因中，哪一项不太可能（）参考答案： C酶失活点评：理解限制性内切酶酶切本质和DNA电泳实验原理。选择题问题： n

32、ick与gap的区别在于（）参考答案： A前者是断开了一个磷酸二酯键，后者是指DNA的单链中有较小的缺失点评：注意理解专业词汇。选择题问题： 可以在切口部位起作用的酶是（）参考答案： BS1核酸酶点评：BAL31核酸酶主要活性为3外切核酸酶活性，可以从线性DNA两条链的3端去掉单核苷酸；S1核酸酶可降解单链DNA或RNA，产生带5磷酸的单核苷酸或寡核苷酸，中等浓度可在切口或小缺口处切割双链；核糖核酸酶A可以特异攻击RNA上的嘧啶残基的3端，可除去DNA:RNA中未杂交的RNA区；外切核酸酶可以作用于dsDNA，持续逐一释放5单核苷酸。选择题问题： Klenow酶与DNA聚合酶相比，前者丧失了（

33、）活性参考答案： A5-3外切酶点评：KlenowDNA聚合酶是E.coliDNApolymerase经蛋白酶（枯草杆菌蛋白酶）裂解而从全酶中除去5-3外切活性的多肽大片段，而聚合活性和3-5外切活性不受影响。选择题问题： 限制酶的命名遵循一定的原则，涉及来源（宿主），菌株或生物型。命名时（）参考答案： A属名第一字母，种名头两个字母，菌株号，然后再加上序号（罗马字）点评：限制酶的命名遵循一定的原则，涉及来源（宿主），菌株或生物型。命名时，依次取属名第一字母，种名头两个字母，菌株号，然后再加上序号（罗马字）选择题问题： 以下对同裂酶的描述中，哪一项是正确的（）参考答案： A识别相同序列的限制酶

34、称同裂酶点评：识别相同序列的限制酶称同裂酶，但它们的切割位点可能不同。具体可分为：同裂同切酶、同序异切酶、“同功多位”等选择题问题： 下列DNA聚合酶中，哪一种酶只切割双链DNA中的一条链，产生单链切口，即切口酶（）参考答案： ADnase点评：在Mg2+存在下，独立作用于每条DNA链，且切割位点随机。在Mn2+存在下，它可在两条链的大致同一位置切割dsDNA，产生平端或12个核苷酸突出的DNA片段；KlenowDNA聚合酶是E.coliDNApolymerase经蛋白酶（枯草杆菌蛋白酶）裂解而从全酶中除去5-3外切活性的多肽大片段，而聚合活性和3-5外切活性不受影响；T4噬菌体DNA聚合酶与

35、KlenowDNA聚合酶相似，但3-5外切活性强200倍，且不从单链DNA模板上替换引物；T7噬菌体DNA聚合酶的活性功能与T4噬菌体DNA聚合酶和KlenowDNA聚合酶类似，但3-5外切活性为Klenow的1000倍。选择题问题： BAP与CIAP的区别在于（）参考答案： BCIAP68时失活，而BAP68稳定点评：CIAP来源于牛小肠碱性磷酸酶，而BAP来自细菌的碱性磷酸酶。BAP抗性强、抗高温和去除污剂。CIAP可用蛋白酶K消化灭活，或在5mMEDTA下。65或75处理10分钟，然后用酚、氯仿抽提，纯化去磷酸化的DNA，从而除去CIAP的活性。选择题问题： 下列哪一种酶作用时需要引物（

36、）参考答案： B反转录酶点评：其它三种酶均只需要DNA链即可选择题问题： CIAP催化脱磷酸时有两种最适温度，37和56，二种温度分别适用于（）端脱磷酸参考答案： A5突出端；平末端和突出的3端点评：3端突出时，磷酸基团是内陷的，需要激烈一点的反应条件。选择题问题： 关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下述描述中只有（）不恰当参考答案： D这一系统的核酸酶都是类限制性内切核酸酶点评：根据酶的亚单位组成、识别序列的种类和是否需要辅助因子，限制与修饰系统至少可分为四类：型、s型、型、型选择题问题： 限制性内切核酸酶可以特异性地识别（）参考答案： C双链DNA的特定碱基序列点评：了解限制性内切酶的识别

37、序列。选择题问题： 以下为同尾酶的是（）参考答案： BBamH,Sau3A,Sty点评：所谓同尾酶即他们可以产生相同的粘性突出末端。其中B选项中BamH识别位点为GGATCC，Sau3A识别位点为GATC，Sty识别位点为CCWWGG。（W=AorT）选择题问题： 在长模板链的指导下引物延伸合成长的DNA互补链时应选用（）参考答案： BT7DNA聚合酶您的答案： 点评：T7DNA聚合酶是所有DNA聚合酶中持续合成能力最强的一个选择题问题： 在大肠杆菌中，大多数都有三个位点特异性的DNA甲基化酶，以下选项中哪一种酶不包括在内（）参考答案： DSss点评：Sss甲基化酶来自原核生物Spiropla

38、sma选择题问题： 在大肠杆菌中，至少有3种依赖于甲基化的限制系统，以下选项中不属于这3种的为（）参考答案： CmcrD点评：无mcrD选择题问题： 以下几种核酸酶中，不能用于嵌套缺失的为（）参考答案： BS1核酸酶点评：S1核酸酶可降解单链DNA或RNA，酶浓度大时可完全消化双链，中等浓度可在切口或小缺口处切割双链。选择题问题： 下面有关限制酶的叙述哪个是错误的（）参考答案： A限制酶是外切酶而不是内切酶点评：了解限制性内切酶的特性。选择题问题： 在下列酶中，催化反应不需要ATP的是（）参考答案： DBamH点评：型和型限制性内切酶在发生限制作用时需要ATP，型则不需要，而BamH为型限制性

39、内切酶，在催化反应时不需要ATP选择题问题： DNA连接酶在体内的主要作用是在DNA复制、修复中封闭缺口，下列对DNA连接酶的描述中，那项是正确的（）参考答案： A将双链DNA分子中的5磷酸基团同3OH末端重新形成磷酸二酯键点评：了解DNA连接酶的特性。选择题问题： 下列酶中，除（）外都具有磷酸酶的活性参考答案： ABamH点评：磷酸酶活性包括磷酸化活性和去磷酸化活性。您做对了0个 简答题问题： 简述限制性内切核酸酶（Restrictionendonuclease）的概念及其生物学功能？参考答案： 定义：指识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶。生物学功能：保护宿

40、主不受外来DNA分子的感染，可降解外来的DNA分子，从而阻止其复制和整合到细胞中。简答题问题： PCR引物设计引入酶切位点时，为什么需在酶切位点后加上一些碱基？参考答案： 限制酶切割DNA时对识别序列两端的非识别序列有长度要求，也就是说在识别序列两端必须要有一定数量的核苷酸，否则限制酶将难以发挥切割活性。因此，一般需在设计引物时在限制酶切位点外另加34个碱基。简答题问题： 试回答影响限制性内切核酸酶（Restrictionendonuclease）切割效率的因素？参考答案： 外因：反应条件、底物纯度、反应温度和限制性内切酶本身的活性；内因：位点偏爱性；甲基化；底物的构象。简答题问题： 在酶切缓

41、冲液中，一般需加入BSA，请问加入BSA的作用是什么？并简述其原理？参考答案： 作用是提供一定的蛋白质浓度，起保护限制性内切酶的作用。限制性内切酶在稀释液中会迅速变性，BSA是一种很好的可加入酶反应液中的中性蛋白质。简答题问题： 何谓Staractivity？简述Staractivity的影响因素及克服方法？参考答案： 在极端非标准条件下，限制酶能切割与识别序列相似的序列，这个改变的特征称为星星活性。引起星星活性的的因素：高甘油浓度（5%）；酶过量（100U/ml）；低离子强度（8.0)；有机溶剂如PMSD（二甲基亚砜）、乙醇、乙二醇、二甲基乙酰胺（dimethylacetamide）、二甲基

42、甲酰胺（dimethylformamide）和sulphalane等；用其它二价阳离子Mn2+、Cu2+、Co2+或Zn2+代替Mg2+。星星活性的抑制措施：减少酶的用量，避免过量酶切，减少甘油浓度；保证反应体系中无有机溶剂或乙醇；提高离子强度到100150mM（在不抑制酶活性的前提下）；降低反应pH至7.0；使用Mg2+作为二价阳离子。简答题问题： 某DNA序列中存在DpnI酶切位点，以此DNA为模板，在体外合成DNA序列，当用该酶进行酶切时，发现切割不动，试分析可能原因？参考答案： 生物体内的DNA序列可能是经过甲基化修饰的，而在体外合成时，缺乏这种修饰作用。当用依赖于甲基化的限制酶Dpn

43、I来切割非甲基化的序列时，就会出现不能切割的情况。简答题问题： 天然的质粒载体（plasmidvectors）通常需经改造后才能应用，包括去除不必要的片段，引入多克隆位点等。试问在此过程中如何增减酶切位点？参考答案： 在酶切水平上，通过酶切和连接产生新的酶切位点。将产生的5突出端补平后，再连接以产生新的酶切位点；同尾末端的连接，不同的同尾酶切割DNA产生的末端，再相互连接时，可产生新的酶切位点，同时原来的酶切位点却消失；平末端的连接简答题问题： 双脱氧终止法测定DNA序列的片段一般不能太长，如何运用本章所学知识测定较长片段的DNA序列？参考答案： 将所需要测序的DNA片断采用2种不同的限制性内

44、切酶切割，产生不同的酶切片段，将此酶切片段连接到载体上，测序后，拼接，即可得到全长的DNA序列；用一种限制性内切酶进行部分酶切，酶切产物与载体连接后，测序，拼接，即可得到全长DNA片断。采用以上任一方法均可，需要注意的是，在进行部分酶切时，应该控制好条件，要确保所得到的酶切片断能覆盖所需测序的DNA片断。您的答案： 简答题问题： 大肠杆菌DNA聚合酶，具有3-5外切活性和5-3的聚合酶活性以及5-3的外切活性，试根据此推测该聚合酶可能具有哪些用途?参考答案： 利用E.coliDNA聚合酶的5-3外切核酸酶活性，可用切口平移法标记DNA，所有DNA聚合酶中只有此酶有此反应；用于cDNA克隆中的第

45、二链，即单纯的DNA聚合活性；对3突出端的DNA作末端标记（交换或置换反应）。简答题问题： 用T4phageDNApolymerase可进行末端标记，试简述其原理？参考答案： T4phageDNA聚合酶具有3-5外切活性和5-3的聚合酶活性，3-5的外切活性可以被5-3的聚合活性所封闭，首先在反应体系中加入一种dNTP，产生3凹端，然后加入经过标记的dNTP，利用T4phageDNA聚合酶的聚合活性补平3凹端，即可得到标记了末端的DNA片断。简答题问题： BAP和CIAP有何作用？为何一般采用CIAP而不采用BAP？参考答案： 作用：催化除去DNA或RNA5磷酸。BAP抗性强，抗高温和去污剂。

46、CIAP可用蛋白酶K消化灭活，或在5mMEDTA下，65处理或75处理10分钟，然后用酚氯仿抽提，纯化去磷酸化的DNA，从而去除CIAP的活性。相比之下，CIAP比BAP更易去除，因此，一般采用CIAP。简答题问题： 依赖于DNA的RNA聚合酶包括SP6噬菌体RNA聚合酶和T4或T7噬菌体RNA聚合酶，这类聚合酶可用于表达外源基因，阐述常用的构建策略？参考答案： 将T7RNA聚合酶基因置于E.colilacUV5启动子之下，插入到噬菌体中，感染E.coli，建立稳定的溶源菌。E.coliBL21（DE3）菌株即为将lacUV5启动子和T7聚合酶基因置于噬菌体DE3区，该噬菌体DNA整合于染色体

47、的BL21处。若将T7噬菌体启动子控制的目的基因经质粒载体导入该宿主菌中，在IPTG诱导下，可启动外源基因的表达；先导入带T7噬菌体启动子控制的目的基因的质粒，再用噬菌体（带T7RNA聚合酶基因）感染E.coli，激活目的基因的表达。简答题问题： 简述T4多核苷酸激酶的活性和用途？参考答案： T4多核苷酸激酶的活性催化ATP的磷酸基转移到DNA或RNA的5末端。可表现为两种反应，正反应指ATP的磷酸基被转移到去磷酸化的DNA5端，用于对缺乏5磷酸的DNA进行磷酸化。在交换反应中，过量的ATP可使该激酶将磷酸化的5端磷酸转移给ADP，然后DNA从【32P】ATP中获得放射性标记的磷酸而重新磷酸化

48、，因此可用于DNA的末端标记。用途：该酶主要用于对缺乏5磷酸的DNA或合成接头进行磷酸化，同时可对末端进行标记。通过交换反应，用于标记5末端，以供MaxamGilbert法测序、S1核酸酶分析以及其它须使用末端标记DNA的步骤。您的答案： 思考题问题： 限制性内切酶可划分为哪几个类型，各自有何特点？思考题问题： 哪些酶可用于DNA片段的末端标记？思考题问题： DNA 聚合酶有哪些类型，各有什么活性？思考题问题： 在分子克隆中所用的酶主要作用于哪些底物？第三章名词解释问题： Vehicle参考答案： 载体。将外源DNA或基因携带入宿主细胞（hostcell）的工具称为载体。具备以下三个必须元件：

49、复制原点、多克隆位点和筛选标记。名词解释问题： Geneclone参考答案： 基因克隆。克隆作动词时，指从单一祖先产生同一的DNA分子群体或细胞群体的过程；作名词时指从一个共同祖先无性繁殖下来的一群遗传上同一的DNA分子、细胞或个体所组成的特殊的生命群体。利用重组DNA技术分离目的基因，称之为基因克隆。名词解释问题： Genelibrary参考答案： 基因文库。由大量的含有基因组DNA（即某一生物的全部DNA顺序）的不同DNA片段的克隆所构成的群体，称之为基因文库。名词解释问题： Plasmidincompatibility参考答案： 质粒不相容性。利用同一复制系统的两个质粒在同一宿主中不能共

50、存的现象称质粒的不相容性，它是指在第二个质粒导入后，在不涉及DNA限制系统时出现的现象。名词解释问题： -complementation参考答案： -互补。指lacZ基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的-半乳糖苷酶阴性的突变体之间实现的互补。这两个无酶学活性的产物混合在一起时，可恢复-半乳糖苷酶的活性。名词解释问题： X-gal/IPTG参考答案： 两者都是乳糖的衍生物，X-gal：乳糖操纵子底物，可以作为生色剂，被-半乳糖苷酶分解后可产生兰色产物，可使菌落呈现兰色；IPTG：乳糖操纵子诱导物。名词解释问题： lyticgrowth参考答案： 裂解生长状态。噬菌体侵染宿

51、主细胞后，大量复制并组装成子代噬菌体颗粒，导致宿主细胞裂解的现象称裂解生长状态。名词解释问题： lysogenicstate参考答案： 溶源状态。噬菌体侵染宿主细胞后，将噬菌体基因组DNA通过位点专一性重组整合到宿主的染色体DNA中，并随宿主的繁殖传给子代细胞的现象称溶源状态。名词解释问题： Multiplicityofinfection参考答案： 感染复数。指单个宿主细胞感染的噬菌体颗粒数，等于实验所用的噬菌体与细胞的数量之比。名词解释问题： Insertionvectors参考答案： 插入型载体。通过特定的酶切位点允许外源DNA片段插入的载体称为插入型载体。名词解释问题： Replacementvectors参考答案： 置换型载体。而允许外源DNA片段替换载体的非必须DNA片段的载体，称为置换型载体。名词解释问题： Cosmid参考答案： 粘粒。带有将DNA包装到噬菌体颗粒中所需的cos序列的质粒。包括质粒复制起点，可以象质粒一样转化并增殖；包括cos位点，可以象噬菌体颗粒一样包装、侵染。名词解释问题： ReplicativeformDNA参考答案： 复制型DNA。在宿主细胞内，感染性的单链噬菌体DNA（正链）在宿主酶的作用下转变成环状双链DNA，用于DNA的复制，这种双链DNA称为复制型DNA。名词解释问题： Phagemid参考答