ABO 血型试验 (正反定型 )

1、ABO血型试验（正反定型）一 原理利用红细胞凝集试验，通过正反定型准确鉴定 ABO血型二试剂和材料1 .抗-A （B型血），抗-B （A型血）及抗-A+B （O型血）分型血清2 . 5%A、B及。型试剂红细胞盐水悬液。3 .受检者血清o4 .受检者5%红细胞盐水悬液。三操作（玻片法）1 .取清洁玻片一张，用蜡笔划成方格，标明抗-A、抗-B和抗-A+B,分别用滴 管滴加抗-A、抗-B和抗-A+B分型血清1滴于方格内，再加受检者2%红细 胞悬液1滴，混合。2 .另取清洁玻片一张，用蜡笔划成方格，标明 A细胞、B细胞和O细胞，用 滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管加A、B和。型试剂红细胞悬液 1滴

2、。3 .将玻片轻轻转动，使血清与细胞充分混匀，连续约 15min,以肉眼观察有 无凝集反应。也可用低倍镜观察结果。四 结果判定：见表1表1 ABO血型正反定型结果分型血清+受检者红细胞受检者受检者血清+试剂红细胞抗-A抗-B抗A+B血型A细胞B细胞O细胞+一+A一+一一+B+一一一一O+一+AB一一一注：+ =凝集；-=不凝集五注意事项1 .试管、滴管和玻片必需清洁干燥，防止溶血。2 .操作中应先加血清后加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清3 .为防止冷凝集现象的干扰，一般在室温内进行试验4标准抗血清必须符合标准，不要长期放在室温，以免污染和孳长细菌，等渗生理盐水必须等渗、新鲜、无微生物孳生

3、。5观察结果要仔细，微弱凝集、或肉眼观察未凝集的标本，要用显微镜观察。注意特异性凝集与继发性血液凝固、串钱状形成和异物的区别。六 血型鉴定中常见的假阳性反应1红细胞串钱形成：红细胞相互重叠，连接成串，象一串重叠的钱币，称为串钱形成，又称假凝集。可见于血浆蛋白紊乱、血沉加快的各种病例或实验中温度过高，作用时间过长，致水分蒸发，血清浓缩。可在观察结果前，再加等渗盐水 1 滴，彻底混匀，串钱状红细胞因血液稀释而散开。也可用高倍镜仔细观察凝集块的形态和用洗涤后和红细胞配制悬液。2寒冷凝集： 在较低温度出现的凝集称为寒冷凝集。多数正常人的血清在02oC时能凝集本人的红细胞，又称自家凝集。这种凝集是可逆的

4、，在0-2 oC 时作用最强，20oC 时可消失。但在支原体肺炎、自免溶贫、肝硬化、系统性红斑狼疮等患者血清中，可以出现高效价的病理性自身冷凝集抗体，能与本人及其它各型人的红细胞发生凝集。其最适反应温度是低温，一般在 25-30OC凝 集作用即减弱。克服方法：被检红细胞在配制悬液前，先用37oC等渗生理盐 水洗涤，必要时试验操作可在 37oC条件下进行，或在37oC水浴中反复观察 几次，报告时要注明有寒冷凝集现象。七 血型鉴定中常见的假阴性反应1. 标准血清效价太低亲和力不强 : 抗血清保存方法不当或贮藏时间过长而致 效价减弱是最常见原因。2. 被检红细胞敏感度过低: 如新生儿红细胞抗原形成不

5、足 , 老年人红细胞敏感性下降 , 或红细胞标本贮藏时间过久（ 红细胞敏感性在血块中下降相对较快），易将A亚型错定为。型。3. 红细胞悬液过浓或过淡: 抗原抗体比例适当时反应最明显。如红细胞悬液液过浓时 , 标准血清中的抗体全部被吸收 , 呈后带现象, 以致凝集不明显或不凝集。 红细胞浓度太淡, 抗体浓度相对增高 , 呈前带现象而不易凝集, 或凝集很弱 , 未被发现。 克服方法 : 按规定配制红细胞悬液, 悬液太浓时可多加1 滴血清 , 转动玻片 , 增加红细胞接触的机会 . 微弱凝集必须用显微镜观察。4. 溶血反应 : 红细胞抗原与相对应的免疫抗体相遇, 在补体存在时就可发生溶血。 溶血反应

6、与凝集反应在血型鉴定上意义相同 , 都是抗原抗体反应。 克服方法 : 玻片法看结果时, 片底最好衬以白纸, 溶血时液滴边缘呈透明红色试验前后两次镜下观察, 可发现红细胞减少或消失。作血型发现溶血, 要换好的等渗盐水和洗涤后红细胞重新配制悬液来作血型鉴定。5. 溶解性抗原或血型物质的中和作用 : 未经洗涤的红细胞悬液中，带有血浆中的血型物质。特别是轻度溶血，部分红细胞溶解，释放出大量可溶性抗原，可将血清中对应的抗体中和，以致抗体不足，使红细胞不能凝集。克制方法：不使用溶血标本，用洗涤后的红细胞配制悬液。6. 试验时间过短：血型抗原抗体反应需要一定时间，时间不够，较弱的凝集就不能出现。因此，玻片法

7、不能少于15 分钟。7. 反应温度不当：完全抗体作用的最适温度多在 20oC左右至4oC,因此ABO 血型鉴定应在室温进行。8. 轻度凝集误认为不凝集。9. 不完全抗体遮断引起的假阴性：新生儿溶血病时，病儿红细胞的血型抗原被母体内的不完全抗体致敏，从而遮断其与相同特异的完全抗体的反应，以致定型时出现假阴性。RH 血型试验一 原理利用红细胞凝集试验，采用单克隆IgM/IgG 抗 D 抗体，使用玻片法或试管法检测红细胞表面的RH (D)抗原。二 试剂1 RH 抗血清(抗D 血清)2 35%红细胞悬液三 操作1 玻片法 ： 在清洁玻片上滴加一滴抗D 血清， 加待检全血一滴， 轻轻转动玻片，使抗血清与红细胞充分混匀，连续5 分钟，用肉眼观察有无凝集反应。凝集者为RH (D)阳性；不凝集为RH (D)阴性。2 试管法 ：取清洁干燥试管一支，加抗D 血清一滴，再加入35%红细胞悬液一滴，轻轻混匀后静置1 分钟，置离心机中，以3000 转/分离心1 分钟。用肉眼观察有无凝集反应。凝集者为 RH (D)阳性；不凝集为RH (D)阴性。注意事项1待检标本应为非抗凝血，红细胞浓度以 35%RBC 等渗盐水悬