生物组织中物质的分离与检测

1、生物组织中物质的分离与检测生物组织中物质的分离与检测实验专题复习实验专题复习生物组织中物质的鉴定生物组织中物质的鉴定待测物待测物实验实验材料材料试剂试剂条件条件现象现象还原糖还原糖脂肪脂肪蛋白质蛋白质DNADNA与与RNA苹果苹果 、梨、梨、白萝卜白萝卜斐林试剂斐林试剂水浴加热水浴加热砖红色沉淀砖红色沉淀花生子叶花生子叶苏丹苏丹()()染液染液显微镜显微镜橘黄（红）色橘黄（红）色大豆、蛋清大豆、蛋清 双缩脲试剂双缩脲试剂紫色紫色鸡血、菜花、鸡血、菜花、香蕉香蕉二苯胺试剂二苯胺试剂水浴加热水浴加热蓝色蓝色口腔上皮细胞、口腔上皮细胞、洋葱表皮细胞洋葱表皮细胞甲基绿甲基绿吡吡罗红罗红显微镜显微镜细胞

2、核呈绿色细胞核呈绿色细胞质呈红色细胞质呈红色细胞无色细胞无色颜色反应颜色反应 (08山东山东) 从细胞膜上提取了某种成分，用非从细胞膜上提取了某种成分，用非酶法处理后，加入双缩脲试剂处理后出现酶法处理后，加入双缩脲试剂处理后出现紫色，若加入斐林或班氏试剂并加热，出紫色，若加入斐林或班氏试剂并加热，出现砖红色，该成分是现砖红色，该成分是： A糖脂糖脂 B磷脂磷脂 C糖蛋白糖蛋白 D脂蛋白脂蛋白 (08广东广东) 双缩脲试剂可以鉴定蛋白质，是由双缩脲试剂可以鉴定蛋白质，是由于蛋白质有于蛋白质有 A肽键肽键B氨基酸氨基酸 C羧基羧基D氨基氨基斐林试剂斐林试剂双缩脲试剂双缩脲试剂成分成分使用使用顺序顺

3、序条件条件检测物检测物现象现象斐林试剂与双缩脲试剂的比较斐林试剂与双缩脲试剂的比较甲液：甲液：0.1g/mL的的NaOH溶液溶液乙乙液：液：0.05 g/mL的的CuSO4溶液溶液等量混匀，现配现用等量混匀，现配现用A液：液：0.1g/mL的的NaOH溶液溶液B液：液：0.01 g/mL的的CuSO4溶液溶液先添加先添加A液液1mL混匀，混匀，后添加后添加B液液4滴混匀。滴混匀。5065 水浴加热水浴加热还原糖还原糖蛋白质或多肽蛋白质或多肽砖红色沉淀砖红色沉淀紫色紫色Cu2O沉淀沉淀 斐林试剂斐林试剂双缩脲试剂双缩脲试剂A液与液与B液的添加顺序液的添加顺序对实验结果有影响吗？对实验结果有影响吗

4、？ 实验步骤：实验步骤： 1号试管：号试管：2mL蛋清稀释液蛋清稀释液+A液液1mL+B液液4滴滴 2号试管：号试管：2mL蛋清稀释液蛋清稀释液+B液液4滴滴+A液液1mL 实验预期：实验预期： 若若1、2号试管均呈紫色，则说明双缩脲试号试管均呈紫色，则说明双缩脲试剂剂A液与液与B液的添加顺序对实验结果无影响。液的添加顺序对实验结果无影响。 若仅若仅1号试管呈紫色，则说明双缩脲试剂号试管呈紫色，则说明双缩脲试剂A液与液与B液的添加顺序对实验结果有影响。液的添加顺序对实验结果有影响。生物体中物质的分离生物体中物质的分离 光合色素的提取与分离光合色素的提取与分离必修一必修一 DNA的粗提取与鉴定的

5、粗提取与鉴定选修一选修一光合色素光合色素光合色素的光合色素的提取提取与分离与分离 实验原理：实验原理： 叶绿体中的色素能溶解在有机溶剂无水乙叶绿体中的色素能溶解在有机溶剂无水乙醇中，所以醇中，所以可用无水乙醇提取叶绿体中色可用无水乙醇提取叶绿体中色素素。12345（1）对叶片的要求？为何要去掉叶柄和粗的）对叶片的要求？为何要去掉叶柄和粗的叶叶脉？脉？叶片柔软、浓绿。叶柄与粗的叶脉含色素少且难以研磨。叶片柔软、浓绿。叶柄与粗的叶脉含色素少且难以研磨。（2）二氧化硅的作用？不加二氧化硅对实验有何影响？）二氧化硅的作用？不加二氧化硅对实验有何影响？ 有助于研磨充分。研磨不充分，色素提取量少。有助于研

6、磨充分。研磨不充分，色素提取量少。（3）丙酮的作用？它可用什么来替代？用水能替代吗？）丙酮的作用？它可用什么来替代？用水能替代吗？ 溶解色素。可用无水乙醇等有机溶剂，不能用水替代。溶解色素。可用无水乙醇等有机溶剂，不能用水替代。（4）碳酸钙的作用？不加碳酸钙对实验有何影响？）碳酸钙的作用？不加碳酸钙对实验有何影响？ 保护色素。提取液中色素含量少。保护色素。提取液中色素含量少。（5）研磨为何要迅速？要充分？过滤时为何用布不用滤）研磨为何要迅速？要充分？过滤时为何用布不用滤纸？纸？防止有机溶剂挥发。充分研磨使色素充分释放。色素易透防止有机溶剂挥发。充分研磨使色素充分释放。色素易透过单层尼龙布。过单

7、层尼龙布。光合色素的提取与光合色素的提取与分离分离 实验原理：实验原理： 色素在层析液中溶解度不同，溶解度高的色素在层析液中溶解度不同，溶解度高的色素分子随层析液在滤纸条上的扩散得快，色素分子随层析液在滤纸条上的扩散得快，溶解度低的色素分子随层析液在滤纸条上溶解度低的色素分子随层析液在滤纸条上的扩散得慢，因而可用的扩散得慢，因而可用层析液将不同的色层析液将不同的色素分离素分离。纸层析法可分离光合色素，以下分离装置示意图纸层析法可分离光合色素，以下分离装置示意图中正确的是中正确的是A B C D（6）滤纸条为何要剪去两角？）滤纸条为何要剪去两角？ 防止两边层析液扩散过快，使层析液同时到达滤液防止

8、两边层析液扩散过快，使层析液同时到达滤液细线。细线。（7）为何不能用钢笔或圆珠笔画线？）为何不能用钢笔或圆珠笔画线？ 笔中的颜料会随层析液在滤纸条上扩散，影响实验笔中的颜料会随层析液在滤纸条上扩散，影响实验现象。现象。（8） 滤液细线为何要直？为何要重画几次？滤液细线为何要直？为何要重画几次？避免色素重叠。避免色素重叠。 增加色素含量。增加色素含量。（9） 滤液细线为何不能触到层析液？滤液细线为何不能触到层析液？避免色素溶解于烧杯中的层析液。避免色素溶解于烧杯中的层析液。（10）滤纸条上色素为何会分离？）滤纸条上色素为何会分离？不同色素在层析液中溶解度不同，因而扩散速度不不同色素在层析液中溶解

9、度不同，因而扩散速度不同。同。层析液层析液 胡萝卜素胡萝卜素 叶黄素叶黄素 叶绿素叶绿素a 叶绿素叶绿素b （11）色素带最宽的是什么色素？它在层析）色素带最宽的是什么色素？它在层析液中的溶解度比什么色素大一些？液中的溶解度比什么色素大一些？ 叶绿素叶绿素a 叶绿素叶绿素b（2012上海）如上海）如图表示图表示叶绿体色素提取分离叶绿体色素提取分离实验中纸层析实验中纸层析的结果的结果，据图判断用作实验材，据图判断用作实验材料的叶片颜色料的叶片颜色为为 A红色红色 B黄色黄色 C绿色绿色 D紫色紫色胡萝卜素胡萝卜素叶绿体色素的种类叶绿体色素的种类叶绿体色素叶绿体色素叶绿素叶绿素（3/4）类胡萝卜素

10、类胡萝卜素 （1/4）叶绿素叶绿素a叶绿素叶绿素b胡萝卜素胡萝卜素叶黄素叶黄素（蓝绿色）（蓝绿色）（黄绿色）（黄绿色）（橙黄色）（橙黄色）（黄色）（黄色）叶绿体色素的吸收光谱叶绿体色素的吸收光谱影响叶绿素合成的原因影响叶绿素合成的原因 光照、温度、矿质元素光照、温度、矿质元素 基因基因DNA染色质染色质DNA的粗的粗提取提取与鉴定与鉴定 实验原理：实验原理： DNA在不同浓度的在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，溶液中溶解度不同，在在0.14mol/L的的NaCl溶液溶液DNA溶解度最低溶解度最低； DNADNA不溶于酒精溶液不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物，但是细胞中的某些物质则可以溶于

11、酒精溶液；质则可以溶于酒精溶液； 蛋白酶能水解蛋白质蛋白酶能水解蛋白质，但对，但对DNADNA无影响；多无影响；多数蛋白质不能忍受数蛋白质不能忍受60608080的高温，而的高温，而DNADNA在在8080以上才会变性，以上才会变性，洗涤剂能瓦解细胞洗涤剂能瓦解细胞膜膜。DNA的粗提取的粗提取1制备鸡血细胞液制备鸡血细胞液 静置降沉的静置降沉的鸡血细胞液鸡血细胞液加入蒸馏水加入蒸馏水快速搅拌快速搅拌除去上清液除去上清液 得到血细胞得到血细胞 2 破裂细胞破裂细胞过滤去除过滤去除杂质杂质取滤液取滤液在滤液中加入在滤液中加入2mol/L2mol/L NaClNaCl溶液溶液使使DNADNA溶解溶解

12、使使NaCl浓度降低浓度降低至至0.14mol/L0.14mol/L，使使DNADNA析出。析出。加入蒸馏水加入蒸馏水 3 去除滤液中的杂质去除滤液中的杂质过滤过滤, ,取纱布上取纱布上含含DNADNA的粘稠物的粘稠物用用2mol/L 2mol/L NaClNaCl溶液溶液轻轻搅拌，溶解轻轻搅拌，溶解DNADNA将粘稠物夹至将粘稠物夹至2mol/LNaCl溶液中溶液中 过滤，取滤液过滤，取滤液向滤液中加入向滤液中加入等体积的冷酒精等体积的冷酒精卷出卷出 白色丝状物白色丝状物 DNA的粗提取与的粗提取与鉴定鉴定 实验原理：实验原理： DNADNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色遇二苯胺（沸水浴）会染

13、成蓝色，因此，因此，二苯胺可以作为鉴定二苯胺可以作为鉴定DNADNA的试剂。的试剂。卷出白色卷出白色DNADNA丝状物丝状物1 21号试管：号试管：0.015mol/LNaCl+DNA+二二苯胺试剂苯胺试剂; 2号试管：号试管：等量等量0.015mol/L NaCl+二二苯胺试剂苯胺试剂.（1）鸡血能用猪血代替吗？为什么？鸡血能用猪血代替吗？为什么？ 不能。哺乳动物成熟的红细胞内无细胞核，不含不能。哺乳动物成熟的红细胞内无细胞核，不含DNA。 （2）鸡血中为何要加柠檬酸钠？为何要弃去鸡血细）鸡血中为何要加柠檬酸钠？为何要弃去鸡血细胞的上清液？胞的上清液？ 柠檬酸钠是抗凝剂。上清液中是血浆，不含

14、柠檬酸钠是抗凝剂。上清液中是血浆，不含DNA.（3）胀破细胞的方法？能用生理盐水吗？）胀破细胞的方法？能用生理盐水吗？ 使细胞吸水涨破。不能用生理盐水。使细胞吸水涨破。不能用生理盐水。（6）若实验中所得黏稠物太少，其原因是什么？）若实验中所得黏稠物太少，其原因是什么？ 细胞破裂不充分（加水量不适宜，溶解细胞破裂不充分（加水量不适宜，溶解DNA时搅拌时搅拌过于剧烈）过于剧烈）（7）两次加入蒸馏水的目的分别是什么？）两次加入蒸馏水的目的分别是什么？ 血细胞破裂、降低血细胞破裂、降低NaCl浓度使浓度使DNA析出析出（8）实验中搅拌溶液时，为何总要沿一个方向搅拌？）实验中搅拌溶液时，为何总要沿一个方

15、向搅拌？ 防止防止DNA受到损伤受到损伤（9）两次析出）两次析出DNA的方法分别是什么？原理分别是的方法分别是什么？原理分别是什么？什么？ 1、在、在2mol/L NaCl中加入蒸馏水，中加入蒸馏水，DNA析出，析出，0.14mol/LNaCl溶液中溶液中DNA 溶解度最低；溶解度最低；2、加冷酒精、加冷酒精DNA析出；析出；DNA不溶于酒精。不溶于酒精。（10）三次溶解三次溶解DNA的液体分别是什么？原理分别是的液体分别是什么？原理分别是什么？什么？ 第一、二次用浓度为第一、二次用浓度为2mol/L的氯化钠溶液，第三次用的氯化钠溶液，第三次用的是的是0.015mol/L的氯化钠溶液。的氯化钠溶液。（11）鉴定鉴定DNA时为何要用两支试管？其现象分别时为何要用两支试管？其现象分别是什么？是什么？ 不加不加DNA的试管起对照作用，该试管溶液不变色，的试管起对照作用，该试管溶液不变色，另一支加有另一支加有DNA的试管溶液变蓝色。的试管溶液变蓝色。 试剂试剂操作操作作用作用A A柠檬酸钠柠檬酸钠溶液溶液与鸡血混合与鸡血混合防止血液凝固防止血液凝固B B蒸馏水蒸馏水与鸡血细胞混合与鸡血细胞混合保持细胞形状保持细胞形状C C蒸馏水蒸馏水加入到溶解有加入到溶