免 疫 组 织 化 学

1、免免 疫疫 组组 织织 化化 学学 ImmunohistochemistryImmunohistochemistry病理教研室病理教研室免疫组化是什么？免疫组化是什么？和医生有什么关系？和医生有什么关系？疑难病理诊断疑难病理诊断确定组织来源确定组织来源发现微小病灶发现微小病灶免疫组化免疫组化评价肿瘤细胞增殖程度评价肿瘤细胞增殖程度指导治疗、评价预后指导治疗、评价预后病原体与肿瘤的关系病原体与肿瘤的关系病病 理理 诊诊 断断 主主 要要 流流 程程手术及活检标本手术及活检标本常规切片常规切片阅片阅片初步或最后诊断初步或最后诊断HEHE染色染色免疫组化染色免疫组化染色最后诊断最后诊断特殊染色特殊染

2、色常规切片常规切片病 理 诊 断 主 要 流 程手术及活检标本手术及活检标本常规切片常规切片阅片阅片初步或最后诊断初步或最后诊断HEHE染色染色免疫组化染色免疫组化染色最后诊断最后诊断特殊染色特殊染色HE染色染色病 理 诊 断 主 要 流 程手术及活检标本手术及活检标本常规切片常规切片阅片阅片初步或最后诊断初步或最后诊断HEHE染色染色免疫组化染色免疫组化染色最后诊断最后诊断特殊染色特殊染色免疫组化免疫组化HPVHPV的诊断的诊断步骤步骤HEHEHPV疣？疣？免疫组织化学的基本概念免疫组织化学的基本概念 基本原理是利用抗原与抗体基本原理是利用抗原与抗体之间的结合有高度特异性的特点，之间的结合有

3、高度特异性的特点，将组织或细胞中的某些化学物质将组织或细胞中的某些化学物质提取提取出来，以此作为出来，以此作为抗原抗原, , 通过通过免疫免疫获得获得相应的相应的特异性抗体特异性抗体，再，再以此抗体以此抗体来来检测检测组织或细胞中的组织或细胞中的抗原抗原。一把钥匙开一把锁一把钥匙开一把锁 由于抗原与抗体结合后形成的免由于抗原与抗体结合后形成的免疫复合物是无色的，因此首先应在疫复合物是无色的，因此首先应在己知抗体上己知抗体上标记显示剂标记显示剂(标记抗体标记抗体)，通过组织化学显色反应而呈现一定通过组织化学显色反应而呈现一定的颜色，并借助显微镜观察其颜色的颜色，并借助显微镜观察其颜色变化，从而在

4、抗原抗体结合部位确变化，从而在抗原抗体结合部位确定定有抗原存在有抗原存在。一把锁有一个钥匙一把锁有一个钥匙AbAbAbAbAgAgAgAgv提取抗原。提取抗原。 v免疫动物免疫动物(免疫血清免疫血清) 。v获得相应的特异性抗体。获得相应的特异性抗体。v用显示剂标记此抗体。用显示剂标记此抗体。v以此抗体来检测抗原。以此抗体来检测抗原。v通过化学显色反应，在显微镜下通过化学显色反应，在显微镜下可见有颜色变化的部位即抗原的可见有颜色变化的部位即抗原的位置。位置。 免疫组化技术的基本理论免疫组化技术的基本理论 免疫反应中的一些基本名词免疫反应中的一些基本名词 抗原抗原抗体抗体( (单克隆、多克隆单克隆

5、、多克隆) )抗原抗原- -抗体复合物抗体复合物 为了使抗原抗体复合物在为了使抗原抗体复合物在镜下成为可见，需进行标记。镜下成为可见，需进行标记。标记抗体标记抗体: :荧光素抗体荧光素抗体 酶标抗体酶标抗体 AgAgAgAgAbAbHRPHRP+H2O2H2O2+DABDAB 免免 疫疫 组组 化化 检检 测测 步步 骤骤抗抗 原原 (antigen,Ag)(antigen,Ag)v抗原抗原(antigen,Ag)是指能刺激免疫是指能刺激免疫系统产生抗体或致敏淋巴细胞，并系统产生抗体或致敏淋巴细胞，并能与相应抗原或致敏淋巴细胞特异能与相应抗原或致敏淋巴细胞特异性结合，发生免疫反应的物质。性结合

6、，发生免疫反应的物质。v抗原的特异性是由抗原表面的特殊抗原的特异性是由抗原表面的特殊化学基团化学基团（抗原决定簇）（抗原决定簇）决定。决定。 特异性是指抗原只与相应的抗体或特异性是指抗原只与相应的抗体或致敏淋巴细胞结合。致敏淋巴细胞结合。 抗原的特异性是由抗原物质表面的抗原的特异性是由抗原物质表面的特殊化学基团即抗原决定簇（特殊化学基团即抗原决定簇（antigen diterminant)的性质、数量和空间构型的性质、数量和空间构型所决定。所决定。 不同抗原的抗原决定簇数目不等。不同抗原的抗原决定簇数目不等。v抗原分子表面常有许多相同或不同的抗抗原分子表面常有许多相同或不同的抗原决定簇。每一种

7、抗原决定簇都可以刺原决定簇。每一种抗原决定簇都可以刺激机体产生一种特异性抗体，因此某一激机体产生一种特异性抗体，因此某一抗原，可以产生一种或一种以上特异性抗原，可以产生一种或一种以上特异性抗体。不同的抗原，既可有各自独有的抗体。不同的抗原，既可有各自独有的抗原决定簇，即抗原决定簇，即特异性抗原，特异性抗原，又有相同又有相同或相似的抗原决定簇，即或相似的抗原决定簇，即共同抗原共同抗原，可，可以引起以引起交叉反应交叉反应。t抗体抗体( (antibody Abantibody Ab) )v抗体抗体(antibody Ab)(antibody Ab)是指机体受抗原是指机体受抗原刺激产生的并能与相应抗

8、原特异性刺激产生的并能与相应抗原特异性结合的球蛋白，因它是免疫应答的结合的球蛋白，因它是免疫应答的产物，故又称免疫球蛋白产物，故又称免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)(immunoglobulin,Ig)。所有的抗体。所有的抗体都是免疫球蛋白（浆细胞产生）。都是免疫球蛋白（浆细胞产生）。v抗体分多克隆抗体、单克隆抗体和抗体分多克隆抗体、单克隆抗体和基因工程抗体。基因工程抗体。tt多多 克克 隆隆 抗抗 体体v天然抗原由多种抗原决定簇组成，每种天然抗原由多种抗原决定簇组成，每种决定簇均可激活有相应抗原受体的决定簇均可激活有相应抗原受体的B B 淋淋巴细胞，产生针对抗原决定簇的抗体。

9、巴细胞，产生针对抗原决定簇的抗体。因此用抗原免疫动物所产生的免疫血清，因此用抗原免疫动物所产生的免疫血清，是多个是多个B B 淋巴细胞克隆所产生的抗体混淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物，称为多克隆抗体。合物，称为多克隆抗体。提取抗原提取抗原免疫动物免疫动物 免疫血清免疫血清多克隆抗体多克隆抗体细胞细胞单单 克克 隆隆 抗抗 体体v机体淋巴组织内存在千百种抗体形机体淋巴组织内存在千百种抗体形成细胞（即成细胞（即B B组胞），每种抗体形成组胞），每种抗体形成细胞只识别其相应抗原决定簇，当细胞只识别其相应抗原决定簇，当受抗原刺激后可增殖分化为一种细受抗原刺激后可增殖分化为一种细胞群，这种由单一细胞增殖

10、形成的胞群，这种由单一细胞增殖形成的细胞群体称为细胞克隆（细胞群体称为细胞克隆（cloneclone）。）。同一克隆的细胞产生的抗体，称单同一克隆的细胞产生的抗体，称单克隆抗体。克隆抗体。抗原抗原多克隆抗体多克隆抗体单克隆抗体单克隆抗体B淋巴细胞淋巴细胞细胞克隆细胞克隆杂交瘤技术杂交瘤技术免疫动物免疫动物抗原决定簇抗原决定簇多种多种B细胞细胞多克隆多克隆B细胞细胞多克隆抗体多克隆抗体单克隆单克隆B细胞细胞单克隆抗体单克隆抗体浆细胞浆细胞浆细胞浆细胞抗原抗体反应抗原抗体反应v抗原抗体反应的概念抗原抗体反应的概念: : 抗原与抗体的反应具有高度特异性。抗原与抗体的反应具有高度特异性。 通常一种抗原

11、只能与其相应的抗体结通常一种抗原只能与其相应的抗体结合合, ,同一抗原可具有多种不同的抗原决同一抗原可具有多种不同的抗原决定簇定簇, ,若两种不同的抗原分子具有一个若两种不同的抗原分子具有一个或多个相同的抗原决定簇或多个相同的抗原决定簇, ,则与抗体反则与抗体反应时可出现交叉反应。应时可出现交叉反应。t免疫组织化学的基本技术免疫组织化学的基本技术1、石蜡切片脱蜡至水、石蜡切片脱蜡至水2、抗原修复、抗原修复3、3% H2O2 10min-PBS冲洗冲洗3min3次次4、加一抗、加一抗60min- PBS冲洗冲洗3min 3次次 5、加二抗、加二抗15min- PBS冲洗冲洗3min 3次次6、D

12、AB显色显色3-10min-自来水冲洗自来水冲洗7、苏木素复染、脱水、干燥、封片、苏木素复染、脱水、干燥、封片免疫组织化学的基本技术免疫组织化学的基本技术 免疫组织化学标本的免疫组织化学标本的 取材、固定、切片及注意事项取材、固定、切片及注意事项一、取材：一、取材：（一）组织标本的取材一）组织标本的取材 组织标本包括活体组织检查标本、组织标本包括活体组织检查标本、手术切除和尸体解剖标本等。对于活体手术切除和尸体解剖标本等。对于活体组织检查标本和手术切除标本，取材应组织检查标本和手术切除标本，取材应在在2小时内进行。小时内进行。1、活体组织标本的取材：、活体组织标本的取材： 常见标本为口腔、喉、

13、鼻咽、皮肤、常见标本为口腔、喉、鼻咽、皮肤、 宫腔和各种内窥镜钳取的组织。宫腔和各种内窥镜钳取的组织。2、手术切除标本的取材、手术切除标本的取材 由于免疫组化技术的组织块大小要适由于免疫组化技术的组织块大小要适中，一般在中，一般在1cm1cm0.2cm至至2cm1cm0.2cm之间，这样有利于固定之间，这样有利于固定剂能快速渗出到组织内。剂能快速渗出到组织内。 为充分保存组织的抗原性，标本离体后为充分保存组织的抗原性，标本离体后应立即处理，可以速冻后制作冰冻切片，也应立即处理，可以速冻后制作冰冻切片，也可固定后制作石蜡切片。如不用迅速制片，可固定后制作石蜡切片。如不用迅速制片，可贮于液氮或可贮

14、于液氮或-70低温冰箱备用。低温冰箱备用。（二）细胞标本的取材（二）细胞标本的取材 1、印片法、印片法： 常用于活检和手术切除标本。常用于活检和手术切除标本。 优点：简便省时，细胞抗原保存良好。优点：简便省时，细胞抗原保存良好。 缺点：细胞分布不均匀，细胞重叠缺点：细胞分布不均匀，细胞重叠 2、穿刺法、穿刺法： 常用于实质器官病变区的细胞常用于实质器官病变区的细胞采集，如肝、肾、肺、淋巴结、软组织等。采集，如肝、肾、肺、淋巴结、软组织等。 3、沉淀法、沉淀法： 常用于胸水、腹水、尿液、脑常用于胸水、腹水、尿液、脑 脊液等体液多细胞少的标本。脊液等体液多细胞少的标本。二、固定二、固定 目的：目的

15、： 是使细胞内蛋白质凝固，以保持细胞和是使细胞内蛋白质凝固，以保持细胞和组织的固有形态和结构，更重要的保存组组织的固有形态和结构，更重要的保存组织或细胞的抗原，防止抗原破坏和弥散。织或细胞的抗原，防止抗原破坏和弥散。（一）常用的固定剂（一）常用的固定剂1.醛类固定剂：醛类固定剂： 特点：对组织的穿透性强，收缩性小。特点：对组织的穿透性强，收缩性小。（1）甲醛固定液：）甲醛固定液： 包括包括10%甲醛液、甲醛液、10%中性甲醛液和中性甲醛液和10%中性缓冲甲醛液中性缓冲甲醛液等。固定时间不宜超过等。固定时间不宜超过24小时小时（2） 4%多聚甲醛磷酸缓冲液：多聚甲醛磷酸缓冲液： 适用于光学显微镜

16、下免疫组化研究。适用于光学显微镜下免疫组化研究。（3）戊二醛）戊二醛-多聚甲醛缓冲液：多聚甲醛缓冲液： 适用于光镜、电镜免疫组化研究。适用于光镜、电镜免疫组化研究。 (4) Bouin液：液： 比单独醛类固定更适合免疫组化。比单独醛类固定更适合免疫组化。2、丙酮及醇类固定剂：、丙酮及醇类固定剂：（1）乙醚（或氯仿）与乙醇等量混合液：）乙醚（或氯仿）与乙醇等量混合液： 是理想的细胞是理想的细胞固定剂固定剂。（2）Carnoy液：液： 适用于癌基因、抗癌基因蛋白等抗原固定。适用于癌基因、抗癌基因蛋白等抗原固定。（3）丙酮：）丙酮： 适合于冰冻切片和细胞涂片的后固定，抗原适合于冰冻切片和细胞涂片的后

17、固定，抗原保存较好，且时间短，保存较好，且时间短， 切片在冷丙酮中的固定切片在冷丙酮中的固定仅需要仅需要515分钟。分钟。3、其他固定剂、其他固定剂（1）碳二亚酰胺）碳二亚酰胺-戊二醛液：戊二醛液： 适用于多肽类激素的固定。适用于多肽类激素的固定。（2）Zenker液液 ： 对免疫球蛋白固定后染色效果好，固定对免疫球蛋白固定后染色效果好，固定时间时间2-4h.染色前应用染色前应用0.5%碘液脱汞。碘液脱汞。（二）常用的固定方法（二）常用的固定方法1、浸入法：将组织或切片浸泡在固定液内浸入法：将组织或切片浸泡在固定液内2、注射、灌注固定法、注射、灌注固定法3、微波固定法、微波固定法（三）固定的注

18、意事项（三）固定的注意事项1、固定剂的选择、固定剂的选择： 多按多按HE常规处理常规处理 组织和细胞，固定剂一般都是组织和细胞，固定剂一般都是 10%中性缓冲甲醛液、中性缓冲甲醛液、 可用于大多数抗原的保护。可用于大多数抗原的保护。2、固定剂的量：一般不少于组织体积、固定剂的量：一般不少于组织体积 4-5倍倍。3、固定后处理：必须充分冲洗。、固定后处理：必须充分冲洗。三、切片三、切片 要求切片薄而平整一般厚度在要求切片薄而平整一般厚度在35 微米微米之间石蜡切片。之间石蜡切片。（一）（一）石蜡切片石蜡切片：与常规切片制备基本相同。与常规切片制备基本相同。（二）（二）冰冻切片冰冻切片： 优点：能

19、够较完整地保存抗原，尤其是优点：能够较完整地保存抗原，尤其是 细胞膜抗原、受体抗原、酶及多细胞膜抗原、受体抗原、酶及多 肽类抗原等，并且快速、方便。肽类抗原等，并且快速、方便。 缺点：缺点： 冰冻时，组织中水分易形成冰晶，冰冻时，组织中水分易形成冰晶， 影响抗原定位。影响抗原定位。载玻片的防脱片的处理载玻片的防脱片的处理 一、载玻片和盖玻片的处理一、载玻片和盖玻片的处理 新的载玻片先用流水冲洗，洗衣新的载玻片先用流水冲洗，洗衣粉或肥皂水浸泡，再以流水充分冲洗。粉或肥皂水浸泡，再以流水充分冲洗。最后用蒸馏水清洗。再浸泡最后用蒸馏水清洗。再浸泡95%乙醇乙醇内，干燥后备用。内，干燥后备用。 盖玻片

20、可直接浸泡于无水乙醇中，盖玻片可直接浸泡于无水乙醇中，干燥后备用。干燥后备用。 二、二、 玻片的防脱片处理玻片的防脱片处理（一）树脂胶（一）树脂胶（二）明胶（二）明胶:甘油明胶甘油明胶 甲醛明胶甲醛明胶 铬矾明胶铬矾明胶（三）多聚赖氨酸（三）多聚赖氨酸（PLL） 多聚赖氨酸多聚赖氨酸0.5g g，加蒸馏水，加蒸馏水100ml100ml，配成浓度，配成浓度0.5%0.5%的储存液，的储存液，-20 -20 环境下可长期保存环境下可长期保存. .使用时按使用时按1 1：1010稀释配成工作液。将清洁载玻片在工作液中反稀释配成工作液。将清洁载玻片在工作液中反复蘸复蘸几下，分散晾干备用。几下，分散晾干

21、备用。 (四）四）APES APES是一种是一种 新型粘片剂，是通过化学作用改新型粘片剂，是通过化学作用改变变 玻璃表面的分子结构，使组织切片牢固的帖在载玻璃表面的分子结构，使组织切片牢固的帖在载玻片上，不易脱落。使用时用丙酮按玻片上，不易脱落。使用时用丙酮按1：50稀释稀释免疫组织化学常用液体及免疫组织化学常用液体及抗体的配制抗体的配制一、一、常用液体的配制常用液体的配制（一）（一）0.01mol/L磷酸盐缓冲液（磷酸盐缓冲液（PBS）pH7.2试剂：试剂：NaH2PO42H2O 9.0g Na2HPO412H2O 64.5g NaCl 160g 蒸馏水蒸馏水 加水至加水至2000ml(二二

22、)0.5mol/L Tris-HCI缓冲液缓冲液 pH7.6 试剂试剂：Tris(三羟甲基氨基甲烷）三羟甲基氨基甲烷） 60.57 g 1 mol/L HCl 420 ml 蒸馏水蒸馏水 加至加至1000ml 配制：先将少量蒸馏水溶解配制：先将少量蒸馏水溶解Tris，加入，加入HCl 后，将后，将pH值调至值调至7.6,然后加蒸馏水然后加蒸馏水 至至1000ml,置于置于4冰箱中保存备冰箱中保存备 用。用。(三三) 0.05mol/L Tris-HCI缓冲液缓冲液(TBS) pH7.6试剂：试剂： 0.05mol/L Tris-HCI缓冲液缓冲液 100ml NaCl 8.59.0g 蒸馏水蒸

23、馏水 加至加至1000ml配制：先用蒸馏水少许溶解配制：先用蒸馏水少许溶解NaCl , 再加再加 Tris-HCI缓冲液缓冲液(pH7.6),最后加蒸最后加蒸 馏水至馏水至1000ml,充分摇匀使终浓度充分摇匀使终浓度 0.05mol/L （四）柠檬酸盐缓冲液（四）柠檬酸盐缓冲液储存液：储存液：A: 0.01mol/L 柠檬酸：称取柠檬酸：称取21.01g柠檬酸柠檬酸 溶解于溶解于1000ml蒸馏水中。蒸馏水中。B: 0.01mol/L 柠檬酸钠：称取柠檬酸钠：称取29.41g柠檬柠檬 酸钠溶解于酸钠溶解于1000ml蒸馏水中。蒸馏水中。工作液工作液：取取A液液9ml和和B液液41ml分别加入

24、分别加入450ml 蒸馏水中，调节蒸馏水中，调节pH值为值为6.00.1，浓度为浓度为0.01mol/L。 柠檬酸盐缓冲液主要用于抗原修复。柠檬酸盐缓冲液主要用于抗原修复。（五）（五）3%过氧化氢甲醇液过氧化氢甲醇液试剂：试剂： 30%过氧化氢过氧化氢H2O2 10ml 甲醇甲醇 90ml 3%过氧化氢甲醇液处理标本，过氧化氢甲醇液处理标本，可以封闭内源性过氧化物酶的活性。可以封闭内源性过氧化物酶的活性。二、二、抗体的稀释和保存抗体的稀释和保存 (分浓缩型与即用型分浓缩型与即用型)（一）抗体的稀释（一）抗体的稀释1、影响抗体稀释度的因素、影响抗体稀释度的因素（1）抗体的浓度（滴度）：抗体的浓度

25、）抗体的浓度（滴度）：抗体的浓度 越高，稀释度就越高。越高，稀释度就越高。（2）非特异性蛋白质的含量：）非特异性蛋白质的含量：（3）孵育时间：）孵育时间：（4）免疫组织化学染色方法：）免疫组织化学染色方法：2、抗体最佳稀释度的测定方法：抗体最佳稀释度的测定方法： 用已知阳性抗原切片，进行免疫组用已知阳性抗原切片，进行免疫组织化学染色，将其阳性强度与非特异性织化学染色，将其阳性强度与非特异性背景染色强度以背景染色强度以“+”的多少表示。的多少表示。 在某一稀释度下特异性染色较强且在某一稀释度下特异性染色较强且无背景着色，是较理想的稀释度。无背景着色，是较理想的稀释度。（1）直接测定法：）直接测定

26、法： 在其他条件已知的情况下（如二抗在其他条件已知的情况下（如二抗或三抗的稀释度），用于检测第一抗体或三抗的稀释度），用于检测第一抗体的最佳稀释度。的最佳稀释度。 表表3-1 直接测定法直接测定法一抗稀释度一抗稀释度 特异性染色强度特异性染色强度 非特异性背景染色强度非特异性背景染色强度 1：50 + + + + + + 1：100 + + + + + + 1：200 + + + + + + 1：400 + + + + 1：500 + + - 阴性对照阴性对照 - -_（2）棋盘（方阵）测定法）棋盘（方阵）测定法 表表3-2 棋盘稀释法棋盘稀释法二抗稀释度二抗稀释度 一抗稀释度一抗稀释度 _

27、1:50 1:100 1:200 1:400_1:100 + + + + +(+ +) + + + +(+) + + +(-) +(-)1:200 + + + +(+ ) + + +(-) + +(-) + +(-)1:400 + + + +(-) +(-) (-) (-)注：括号内为背景着色强度注：括号内为背景着色强度抗体稀释液的配制：抗体稀释液的配制： 取取0.05mol/L pH值为值为7.4的的TBS 100ml,加温加温到到60, , 再加入再加入0.1g0.1g明胶，搅拌溶解后，冷明胶，搅拌溶解后，冷却到室温，加入却到室温，加入1.0g1.0g牛血清白蛋白、牛血清白蛋白、NaNNa

28、N3 3 0.2g0.2g溶解后，过滤分装，溶解后，过滤分装，4 4 保存保存. . (二）抗体的保存二）抗体的保存 对于新购进的浓缩抗体，可按厂家提供对于新购进的浓缩抗体，可按厂家提供的效价，按的效价，按50或或100 为一单位分装为一单位分装,并注明标记（批号、名称、效价、量），密并注明标记（批号、名称、效价、量），密封后放入封后放入-20 40 40 冰箱中保存备用冰箱中保存备用, ,一一般可保存般可保存1-2 1-2 年。年。三、显色剂的种类及配制三、显色剂的种类及配制(一）一）3,3-二氨基联苯胺二氨基联苯胺(DAB)配制：取配制：取25mgDAB溶于溶于50ml TBS (0.05

29、mol/L pH7.6)中，完全溶解后，用滤纸过滤沉淀。显中，完全溶解后，用滤纸过滤沉淀。显 色前再加入适量色前再加入适量H2O2 阳性部位呈棕色，一般以苏木精复染阳性部位呈棕色，一般以苏木精复染 配制配制DAB时注意：时注意： （1）DAB有致癌性，可诱发皮肤癌和膀胱癌有致癌性，可诱发皮肤癌和膀胱癌 （2）DAB一定要新鲜配制一定要新鲜配制 （3）DAB的浓度不宜太高。的浓度不宜太高。 (二）二）3-氨基氨基-9-乙基卡巴唑乙基卡巴唑（AEC） 取取4mgAEC溶于溶于1ml二甲基甲酰胺中二甲基甲酰胺中，加入，加入14ml 浓度为浓度为0.1mol/L pH5.2的醋酸的醋酸缓冲液，然后加入

30、适量缓冲液，然后加入适量H2O2，过滤去掉沉过滤去掉沉淀物。淀物。 阳性部位呈红色，苏木精或亮绿复染阳性部位呈红色，苏木精或亮绿复染 抗原的修复抗原的修复一、抗原修复的原因一、抗原修复的原因 甲醛固定剂使组织蛋白内或蛋白质之间甲醛固定剂使组织蛋白内或蛋白质之间发生交联发生交联，封闭了许多抗原决定簇，影响了，封闭了许多抗原决定簇，影响了抗原的定位，使染色结果不明显或失败。抗原的定位，使染色结果不明显或失败。 抗原修复或暴露是将固定时分子之间形抗原修复或暴露是将固定时分子之间形成成 的的交联打开，交联打开，恢复到原有空间。恢复到原有空间。二、抗原修复的机制二、抗原修复的机制1、化学反应、化学反应2

31、、热反应、热反应3、微波的高速震荡效应、微波的高速震荡效应三、常用的抗原修复的方法三、常用的抗原修复的方法 （一）酶消化方法（一）酶消化方法1、胰蛋白酶消化方法、胰蛋白酶消化方法 浓度一般是浓度一般是0.05%0.1%。 主要用于细胞内抗原的修复。主要用于细胞内抗原的修复。2、胃蛋白酶消化方法、胃蛋白酶消化方法 浓度一般为浓度一般为0.04% 主要用于细胞间质抗原的修复。主要用于细胞间质抗原的修复。 3、尿素消化方法、尿素消化方法 浓度为浓度为3mol/L,37消消 化化5分钟。分钟。 主要用于单克隆抗体所做的石蜡切片。主要用于单克隆抗体所做的石蜡切片。t （二）物理化学方法（二）物理化学方法

32、 1、单纯加热方法、单纯加热方法 2、高压加热方法：、高压加热方法： 3、微波加热方法、微波加热方法t抗原修复前抗原修复前抗原修复后抗原修复后抗原修复的注意事项抗原修复的注意事项v任何修复方法都不能使组织片干燥；任何修复方法都不能使组织片干燥；v加热必须达到规定的温度；加热必须达到规定的温度；v加热后应放置足够的时间使之冷却。加热后应放置足够的时间使之冷却。v抗原修复效果取决于缓冲液的组成抗原修复效果取决于缓冲液的组成成分及成分及pHpH值。值。v实践中证明柠檬酸缓冲液效果较好，实践中证明柠檬酸缓冲液效果较好，最常使用。最常使用。 各种抗原修复方法的评价各种抗原修复方法的评价（一）酶消化方法（

33、一）酶消化方法（二）物理化学方法（二）物理化学方法 各有优缺点，应注意各公各有优缺点，应注意各公司的抗体产品的说明书。司的抗体产品的说明书。免疫组织化学的免疫组织化学的染色染色 常规取材、固定、切片常规取材、固定、切片 免疫组化的染色免疫组化的染色 显色剂的种类显色剂的种类(一）一）3,3-二氨基联苯胺二氨基联苯胺(DAB) 阳性部位呈棕色阳性部位呈棕色 (二）二）3-氨基氨基-9-乙基卡巴唑（乙基卡巴唑（AEC） 阳性部位呈红色阳性部位呈红色t显显 色色 反反 应应 HRP+H2O2 H2O + O DAB AEC HRP+H2O2 H2O + O DAB AEC 棕色棕色 红色红色 免疫组

34、化染色后，必须对切片进行免疫组化染色后，必须对切片进行复染，复染，更能衬托出组织形态结构，便更能衬托出组织形态结构，便于对结果分析于对结果分析 。 石蜡切片常用苏木精复染石蜡切片常用苏木精复染 冰冻切片常用甲基绿冰冻切片常用甲基绿 免疫金银法染色常用核固红。免疫金银法染色常用核固红。E-cadE-cad（+ +） DABDAB显色显色 苏木精复染苏木精复染P-185P-185（+ +），），AECAEC显色显色角蛋白，角蛋白，DABDAB显色，甲基绿衬染显色，甲基绿衬染丙型肝炎病毒丙型肝炎病毒, AEC, AEC显色显色 苏木精复染苏木精复染免疫组织化学的染色方法免疫组织化学的染色方法 免疫组

35、织化学的染色方法有很多，根据免疫组织化学的染色方法有很多，根据标记物的种类不同可分为三大类。标记物的种类不同可分为三大类。即即:免疫荧免疫荧光法、光法、免疫酶标法、免疫酶标法、免疫胶体金银法。每一免疫胶体金银法。每一类染色方法均可分为直接法、间接法。类染色方法均可分为直接法、间接法。 免疫荧光法在肾脏、皮肤的免疫性疾免疫荧光法在肾脏、皮肤的免疫性疾病的诊断上，具有重要价值。目前，逐渐被病的诊断上，具有重要价值。目前，逐渐被免疫酶标法所代替。免疫酶标法所代替。免免 疫疫 酶酶 标标 法法 常用的染色方法常用的染色方法: 一步法一步法-直接酶标法直接酶标法 二步法二步法: 间接酶标法间接酶标法 E

36、nvision System法法 SP二步法二步法 三步法三步法: PAP法、法、 ABC法法 四步法四步法: 酶桥法酶桥法 、ASPAPAP法法 五步法五步法: 双双PAP法法 免疫免疫酶标染色方法及原理酶标染色方法及原理 ( (以辣根过氧化物酶以辣根过氧化物酶( (HRPHRP) ) 和二氨基联和二氨基联苯胺苯胺( (DABDAB）显示剂为例显示剂为例) ) 直接酶标法（一步法）直接酶标法（一步法）： 将酶标记在特异性抗体上，将酶标记在特异性抗体上，然后与组织中的相应抗原结合形然后与组织中的相应抗原结合形成成抗原抗原-特异性抗体特异性抗体-酶复合酶复合物，物，再与显色剂反应，以显示抗再与显

37、色剂反应，以显示抗原所在部位原所在部位t 免疫免疫酶标染色方法及原理酶标染色方法及原理 ( (以辣根过氧化物酶以辣根过氧化物酶(HRP(HRP) ) 和二氨基联和二氨基联苯胺苯胺( (DABDAB）显示剂为例显示剂为例) ) 间接酶标法（二步法）：间接酶标法（二步法）： 先用未标记的特异性抗体（一抗）与先用未标记的特异性抗体（一抗）与组织中的相应抗原结合，形成抗原抗体组织中的相应抗原结合，形成抗原抗体复合物，再用酶标记的抗特异性抗体的复合物，再用酶标记的抗特异性抗体的抗体（二抗）与特异性抗体结合，形成抗体（二抗）与特异性抗体结合，形成抗原抗原-特异性抗体特异性抗体-酶标抗体复合物酶标抗体复合物

38、，最后用显色剂，显示抗原所在部位。最后用显色剂，显示抗原所在部位。 Envision System法法 多重免疫组织化学染色方法多重免疫组织化学染色方法1 1、染色原理：是利用各种染色方法之间、染色原理：是利用各种染色方法之间所利用的标记物及显色剂的不同而加以所利用的标记物及显色剂的不同而加以组合，在同一张切片上，进行多种免疫组合，在同一张切片上，进行多种免疫组化染色的方法。组化染色的方法。2 2、染色方法：同前。、染色方法：同前。3 3、应用：、应用：最普遍的是双重免疫组化染色最普遍的是双重免疫组化染色 ，即用即用HRP-DAB与碱性磷酸酶与碱性磷酸酶AP-red显显色系统染色方法进行组合。

39、色系统染色方法进行组合。 P504P504S S 胞浆呈棕色胞浆呈棕色 P63 P63 核呈黑色核呈黑色前列腺癌前列腺癌双重染色双重染色，EMA胞膜呈红色，胞膜呈红色，Ki-67核呈蓝黑色核呈蓝黑色 免疫组织化学染色结果的判断原则免疫组织化学染色结果的判断原则1、首先应观察常规石蜡切片，形成初首先应观察常规石蜡切片，形成初步诊断意见并选好靶细胞步诊断意见并选好靶细胞2、每一批染色都应设置阳性和阴性，、每一批染色都应设置阳性和阴性，这是正确判断染色结果的前提。这是正确判断染色结果的前提。3、抗原的表达必须在靶细胞或组织的、抗原的表达必须在靶细胞或组织的特定部位上，才能视为阳性，不在抗特定部位上，

40、才能视为阳性，不在抗原特定部位上的阳性颗粒不能视为阳原特定部位上的阳性颗粒不能视为阳性表达。性表达。t4、阴性结果不能视为抗原不表达。、阴性结果不能视为抗原不表达。 阴性的原因很多，从固定到制片以及阴性的原因很多，从固定到制片以及细胞的细胞的 分化程度均可影响着色。分化程度均可影响着色。5、当免疫组织化学染色结果与、当免疫组织化学染色结果与HE诊断诊断不相符或发生矛盾时，应以不相符或发生矛盾时，应以HE诊断为标诊断为标准，而不能用免疫组化染色结果代替准，而不能用免疫组化染色结果代替HE诊断。诊断。 免疫组织化学染色过程中的注意事项免疫组织化学染色过程中的注意事项（一）（一）正确设置阳性、阴性对

41、照正确设置阳性、阴性对照 免疫组化染色常用的对照有阳性对照、免疫组化染色常用的对照有阳性对照、阴性对照（空白对照、替代对照）吸收实验阴性对照（空白对照、替代对照）吸收实验、抑制实验和自身对照等。、抑制实验和自身对照等。1、阳性对照：、阳性对照： 是指用已经被证实了含有靶抗是指用已经被证实了含有靶抗 原的组织切片与待检组织切片一起做免疫原的组织切片与待检组织切片一起做免疫 组织化学染色，结果为阳性，称为阳性对组织化学染色，结果为阳性，称为阳性对 照。每一次都应设置阳性对照。照。每一次都应设置阳性对照。2、阴性对照：、阴性对照： 是指已知不含靶抗原的组是指已知不含靶抗原的组织切片与待检组织切片一起

42、做免疫组织织切片与待检组织切片一起做免疫组织化学染色，结果为阴性，称为阴性对照化学染色，结果为阴性，称为阴性对照。 阴性对照主要包括空白对照和替代阴性对照主要包括空白对照和替代对照两种。对照两种。 每一次染色均应设置阴性对照。每一次染色均应设置阴性对照。 设置阴性对照的方法有：设置阴性对照的方法有： PBS液（空白对照）或用动物非免液（空白对照）或用动物非免疫血清（替代对照）代替一抗进行染色疫血清（替代对照）代替一抗进行染色，结果为阴性。，结果为阴性。 （二）时间（二）时间 在免疫组化染色时，除严格按照操作规在免疫组化染色时，除严格按照操作规程进行外，还应严格控制各步的染色时间。程进行外，还应

43、严格控制各步的染色时间。每个实验室都应根据自己实验室的特点，逐每个实验室都应根据自己实验室的特点，逐步摸索出适合自己实验室的每一步骤的染色步摸索出适合自己实验室的每一步骤的染色时间。时间。（三）显色（三）显色 应在显微镜下控制显色，当阳性颗粒应在显微镜下控制显色，当阳性颗粒显示较清楚，而背景清晰无着色时，即可终显示较清楚，而背景清晰无着色时，即可终止显色。止显色。（四）温度（四）温度 在免疫组化染色过程中，温度也直接在免疫组化染色过程中，温度也直接影响免疫组化的染色结果。影响免疫组化的染色结果。（五）湿度（五）湿度 在免疫组化染色过程中，应滴加足够在免疫组化染色过程中，应滴加足够量的稀释好的抗

44、体或复合物，将组织块完量的稀释好的抗体或复合物，将组织块完全覆盖，并将切片放入湿盒内，湿盒下面全覆盖，并将切片放入湿盒内，湿盒下面加入适量温水，表面密封盖好，在湿盒内加入适量温水，表面密封盖好，在湿盒内进行孵育，确保组织切片表面湿润，以免进行孵育，确保组织切片表面湿润，以免抗体蒸发。抗体蒸发。 常用免疫组织化学染色方法的评价常用免疫组织化学染色方法的评价1、 常用染色方法敏感性比较常用染色方法敏感性比较 各种免疫组化染色的方法和使各种免疫组化染色的方法和使用的标记物的不同，敏感性也不相用的标记物的不同，敏感性也不相同。同。 一般胶体金标志的染色方法敏一般胶体金标志的染色方法敏感性比酶标记的染色

45、方法敏感性高感性比酶标记的染色方法敏感性高。2、常用染色方法的优缺点、常用染色方法的优缺点（1）直接法：）直接法： 优点：简单、快速、特异性强，背景优点：简单、快速、特异性强，背景 非特异性染色轻。非特异性染色轻。 缺点：敏感性低。缺点：敏感性低。（2） 间接法：间接法： 优点：敏感性比直接法高，且一种酶优点：敏感性比直接法高，且一种酶 标记抗体可与多种特异性一抗标记抗体可与多种特异性一抗 配合检测多种抗原配合检测多种抗原 缺点：敏感性比酶桥法、缺点：敏感性比酶桥法、PAP法低。法低。 免疫组织化学染色结果的判断原则免疫组织化学染色结果的判断原则1、首先应观察常规石蜡切片，形成初首先应观察常规

46、石蜡切片，形成初步诊断意见并选好靶细胞步诊断意见并选好靶细胞2、每一批染色都应设置阳性和阴性，、每一批染色都应设置阳性和阴性，这是正确判断染色结果的前提。这是正确判断染色结果的前提。3、抗原的表达必须在靶细胞或组织的、抗原的表达必须在靶细胞或组织的特定部位上，才能视为阳性，不在抗特定部位上，才能视为阳性，不在抗原特定部位上的阳性颗粒不能视为阳原特定部位上的阳性颗粒不能视为阳性表达。性表达。4、阴性结果不能视为抗原不表达、阴性结果不能视为抗原不表达5、当免疫组织化学染色结果与、当免疫组织化学染色结果与HE诊断诊断 不相符或发生矛盾时，应以不相符或发生矛盾时，应以HE诊断诊断 为标准，而不能用免疫

47、组化染色结果为标准，而不能用免疫组化染色结果 代替代替HE诊断。诊断。 假阳性、假阴性及背景着色的原因假阳性、假阴性及背景着色的原因1、出现假阳性染色的原因出现假阳性染色的原因（1）抗体浓度过高）抗体浓度过高（2）抗体特异性较差）抗体特异性较差（3）内源性过氧化物酶封闭不彻底。）内源性过氧化物酶封闭不彻底。（4）由于抗原的弥散或被肿瘤细胞吞噬）由于抗原的弥散或被肿瘤细胞吞噬。 ( 5 ) 抗原的例外表达等。抗原的例外表达等。 出现假阴性染色的原因出现假阴性染色的原因（1）抗体稀释不当，浓度过低。）抗体稀释不当，浓度过低。（2）抗体失活或抗体效价过低，敏感性）抗体失活或抗体效价过低，敏感性 较差

48、。较差。（3）标本处理不当，致使抗原丢失或破）标本处理不当，致使抗原丢失或破 坏过多。如切片长期保存抗原会丢坏过多。如切片长期保存抗原会丢 失。失。（4）抗体孵育时间过程短，致使抗体与）抗体孵育时间过程短，致使抗体与 抗原不能充分结合，导致染色呈现抗原不能充分结合，导致染色呈现 假阴性。假阴性。室温保存半年切片染色室温保存半年切片染色新切片对照染色新切片对照染色（5）染色过程中，组织切片未放入湿盒）染色过程中，组织切片未放入湿盒 内，组织表面过分干燥。内，组织表面过分干燥。（6）染色操作步骤不正确）染色操作步骤不正确 ，随意省略，随意省略 步骤等。步骤等。（7）冲洗步骤、）冲洗步骤、PBS缓冲

49、液的缓冲液的pH值对染值对染 色结果有影响。色结果有影响。（8）抗体与检测试剂盒不匹配。）抗体与检测试剂盒不匹配。Ki-67:PBS pH6.0冲洗染色冲洗染色Ki-67:PBS pH7.6冲洗染色冲洗染色3、引起背景染色的原因有很多，主要有引起背景染色的原因有很多，主要有以下几方面：以下几方面：（1）组织标本陈旧，固定不及时或固定）组织标本陈旧，固定不及时或固定 时间过长。时间过长。（2）组织切片太厚，脱蜡不彻底。）组织切片太厚，脱蜡不彻底。（3）组织切片处理不当，防脱片剂浓度）组织切片处理不当，防脱片剂浓度 过高。过高。（4）内源性过氧化物酶封闭不完全，导内源性过氧化物酶封闭不完全，导 致

50、内源性酶显色。致内源性酶显色。（5）所用的动物非免疫血清与抗体不匹配。）所用的动物非免疫血清与抗体不匹配。（6）抗体浓度过高。）抗体浓度过高。（7）抗体特异性较差，与组织内某些抗原或）抗体特异性较差，与组织内某些抗原或其其 他成分发生交叉反应或非特异性染色。他成分发生交叉反应或非特异性染色。（8）PBS液冲洗不彻底。液冲洗不彻底。（9）标记物质量较差，纯度不够，游离的标）标记物质量较差，纯度不够，游离的标 记物过多等，均可导致背景着色。记物过多等，均可导致背景着色。（10）底物染色时间过长。）底物染色时间过长。免疫组化应用中的注意事项免疫组化应用中的注意事项v正确认识设置对照的意义正确认识设置

51、对照的意义v正确判断免疫组化的染色结果正确判断免疫组化的染色结果v正确分析假阳性、假阴性的原因正确分析假阳性、假阴性的原因v正确认识抗原的正确认识抗原的“例外例外”表达表达v正确认识抗原的正确认识抗原的联合表达联合表达 v正确应用正确应用双重互补及反正法双重互补及反正法t抗原的抗原的“例外例外”表达与联合表达表达与联合表达v抗原的抗原的“例外例外”表达表达是指在正常情是指在正常情况下或从理论上讲不应该为阳性的况下或从理论上讲不应该为阳性的抗原而出现了阳性表达的现象。如抗原而出现了阳性表达的现象。如CKCK不仅可表达在上皮组织，而且还不仅可表达在上皮组织，而且还可表达在非上皮组织。可表达在非上皮

52、组织。v联合表达联合表达即一种细胞可表达多种抗即一种细胞可表达多种抗原。如肺癌细胞可同时表达原。如肺癌细胞可同时表达CK,VIM CK,VIM NF,DES NF,DES 。t双重互补及反正法双重互补及反正法 恶性黑色素瘤恶性黑色素瘤 阳性阳性 阴性阴性 HMB45 CK S-100 EMA VIM LCA 恶恶 性性 黑黑 色色 素素 瘤瘤HEVIMHMB45CK免疫组化检查流程v镜检镜检HEHE染色切片染色切片v确定待检靶细胞（待检抗原）确定待检靶细胞（待检抗原）v选择决定用哪几种相应抗体选择决定用哪几种相应抗体v免疫组化染色免疫组化染色v镜检免疫组化染色结果镜检免疫组化染色结果中间丝的特

53、异性组织表达中间丝的特异性组织表达v 不同的中间丝有其特异的组织分不同的中间丝有其特异的组织分布，这种特异分布是比较稳定的，即正布，这种特异分布是比较稳定的，即正常组织及其相应肿瘤组织都保持相同的常组织及其相应肿瘤组织都保持相同的中间丝。基于这一理论，中间丝作为组中间丝。基于这一理论，中间丝作为组织起源的标记，可识别正常组织及其肿织起源的标记，可识别正常组织及其肿瘤。瘤。代表性的最有五种抗原代表性的最有五种抗原 、角蛋白角蛋白（CytoKeratin, CK） 、波纹蛋白波纹蛋白（Vimentin, Vim） 、结蛋白结蛋白（Desmin, Des） 、神经丝神经丝（ Neurofilamen

54、t，NF） 、胶质纤维酸性蛋白胶质纤维酸性蛋白（ GFAP） ( (Glial Fibrillary Acidic Protein ） 中间丝的特异性组织表达中间丝的特异性组织表达 CK Vim Des GFAP NF 上皮组织上皮组织 间叶组织间叶组织 肌肌 组组 织织 神经胶质神经胶质 神神 经经 元元 常用抗体分类常用抗体分类v上皮细胞及其肿瘤标记物上皮细胞及其肿瘤标记物( (抗体抗体) )v间叶组织及其肿瘤标记物间叶组织及其肿瘤标记物v淋巴造血细胞标记物淋巴造血细胞标记物v神经和内分泌细胞标记物神经和内分泌细胞标记物v癌基因蛋白标记物癌基因蛋白标记物v其他标记物其他标记物: :病原、激

55、素、激素受体、病原、激素、激素受体、 细胞增殖活性等标记物细胞增殖活性等标记物 常常 用用 的的 标标 记记 物物、上皮细胞及其肿瘤标记、上皮细胞及其肿瘤标记物物: :（）细胞角蛋白细胞角蛋白（CKCK） 位于上皮细胞及其肿瘤细胞位于上皮细胞及其肿瘤细胞的胞浆内的胞浆内, , 可用于鉴别上皮性和可用于鉴别上皮性和非上皮性细胞及其肿瘤。如未分非上皮性细胞及其肿瘤。如未分化癌与淋巴瘤、癌与恶性黑色素化癌与淋巴瘤、癌与恶性黑色素瘤、癌与肉瘤的鉴别。瘤、癌与肉瘤的鉴别。tHEHECKCK正正 常常 鳞鳞 状状 上上 皮皮NPCNpc: CKNpc: CKHECK正正 常常 腺腺 上上 皮皮CKCK正正

56、 常常 腺腺 上上 皮皮低分化癌低分化癌CKCK低分化癌低分化癌淋巴结转移癌淋巴结转移癌CKCK淋淋 巴巴 结结 转转 移移 癌癌CKCK（ ）甲甲 胎胎 蛋蛋 白白( AFP ） （ fetoprotein ） 是肝细胞癌的一种重要标记是肝细胞癌的一种重要标记物。在卵巢或睾丸的内胚窦瘤、胚物。在卵巢或睾丸的内胚窦瘤、胚胎性癌的癌细胞中亦有表达。胎性癌的癌细胞中亦有表达。 t肝细胞肝癌HEAFPHEHE肝肝 细细 胞胞 肝肝 癌癌AFPAFPA F PA F P肝肝 细细 胞胞 癌癌内内 胚胚 窦窦 瘤瘤CKCKAFPAFPH EH E胚胚 胎胎 性性 癌癌AFPAFP（）（）EMAEMA抗原

57、抗原 ( EMA EMA ） （epithelial membrane antigen 上皮膜上皮膜抗原抗原） 主要用于检测内脏上皮及主要用于检测内脏上皮及其腺癌其腺癌, ,优于优于CKCK。 EMAEMA正正 常常 腺腺 上上 皮皮肠肠 腺腺 癌癌肠肠 腺腺 癌癌EMAEMA（4）前列腺特异性抗原前列腺特异性抗原(PSAPSA) (Protate Specific Antigen): 主要用于检测前列腺增生主要用于检测前列腺增生和前列腺癌和前列腺癌, , 对转移性前列腺对转移性前列腺癌的确诊特别有意义。癌的确诊特别有意义。 tHEHEPSAPSA正正 常常 前前 列列 腺腺前前 列列 腺腺

58、癌癌PSA前前 列列 腺腺 癌癌HE、间叶组织及其肿瘤标记物、间叶组织及其肿瘤标记物： （）（）波纹蛋白波纹蛋白（VimVim）: : 主要位于间叶细胞及其肿瘤主要位于间叶细胞及其肿瘤细胞的胞浆内，是间叶细胞及其细胞的胞浆内，是间叶细胞及其肿瘤的特异性标记物。常与肿瘤的特异性标记物。常与细胞细胞角蛋白配对使角蛋白配对使用，鉴别癌与肉瘤、用，鉴别癌与肉瘤、恶性黑色素瘤与癌、未分化癌与恶性黑色素瘤与癌、未分化癌与淋巴瘤等肿瘤。淋巴瘤等肿瘤。 tVIM正正 常常 纤纤 维维 组组 织织纤纤 维维 肉肉 瘤瘤VimHE（）结蛋白结蛋白（DesDes）: : 结蛋白是平滑肌、骨骼肌及结蛋白是平滑肌、骨骼

59、肌及其肿瘤的特异性标记物。主要用其肿瘤的特异性标记物。主要用于标记平滑肌、横纹肌及其肿瘤；于标记平滑肌、横纹肌及其肿瘤；对一些未分化的肿瘤可与其他标对一些未分化的肿瘤可与其他标记物合用进行鉴别诊断。记物合用进行鉴别诊断。 tDesDes正 常 肠 壁 平 滑 肌平滑肌肉瘤平滑肌肉瘤平平 滑滑 肌肌 肉肉 瘤瘤Des （）（）肌动蛋白肌动蛋白( (ActinActin) ) 广泛分布于各种类型的肌细胞中，广泛分布于各种类型的肌细胞中，对肌源性肿瘤特异性强对肌源性肿瘤特异性强, ,敏感性更高。敏感性更高。 平滑肌型的肌动蛋白（平滑肌型的肌动蛋白（SMASMA）：主要用于平滑肌源性肿瘤的诊断。对主要

60、用于平滑肌源性肿瘤的诊断。对一些外分泌腺的肌上皮细胞和肌上皮一些外分泌腺的肌上皮细胞和肌上皮瘤有较高特异性。瘤有较高特异性。ActAct正正 常常 肠肠 壁壁 平平 滑滑 肌肌平平 滑滑 肌肌 肉肉 瘤瘤HEHEVIMVIMACTACT平平 滑滑 肌肌 肉肉 瘤瘤SMA3 3、淋巴造血细胞标记物、淋巴造血细胞标记物（）（） CD45 （LCA）: 全白细胞共同抗体只存在于全白细胞共同抗体只存在于所有的造血细胞中，不存在于非所有的造血细胞中，不存在于非造血组织中。是区别淋巴瘤（造血组织中。是区别淋巴瘤（/ /白血病）与非造血组织肿瘤的一白血病）与非造血组织肿瘤的一个良好标记物。个良好标记物。tL