苯磺酸氨氯地平片剂含量的HPLC测定

1、.苯磺酸氨氯地平片剂含量的HPLC测定（单点校正法）一、 目的要求1. 学习高效液相色谱仪器的基本使用方法。2. 掌握单点校正法的色谱定量分析方法。二、 基本原理 苯磺酸氨氯地平为抗心律失常药，临床主要用于治疗高血压和心绞痛。采用非极性的十八烷基键合相（ODS）为固定相和极性的甲醇水溶液为流动相的反相分离模式适合于苯磺酸氨氯地平片剂含量的测定，空白辅料均无干扰。可以用单点校正法直接进行分析测定。 wi = ci =三、 实验条件a) 高效液相色谱仪（配紫外检测器），以色谱工作站联机控制仪器、处理实验数据。超声波清洗机进样器：手动进样器，100L微量注射器色谱柱：C18 0.5m，250

2、5;4.6mmb) 分离条件流动相比例：甲醇0.03 mol·L-1磷酸二氢钾溶液(6535)进样量：20 L检测波长：237 nm流动相流量： 1.0 mL/min四、 实验步骤a) 按仪器的要求打开计算机和液相色谱主机，调整好流动相的流量、检测波长等参数，用流动相冲洗色谱柱，直至工作站上色谱流出曲线为一平直的基线。b) 称取苯磺酸氨氯地平对照品约50 mg，置50mL量瓶中，加甲醇适量，超声10min使溶解，并加甲醇至刻度，摇匀得1.0 mg/mL贮备液。精密量取1.0 mg/mL贮备液5.0mL至50mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀、过滤，得100g/mL的对照品溶液。c)

3、 取苯磺酸氨氯地平片剂10粒，研匀。精密称取适量（相当于苯磺酸氨氯地平5mg）置50mL容量瓶中，加流动相超声溶解，过滤，滤液作样品溶液。d) 分别取苯磺酸氨氯地平对照品和样品溶液20L进样，记录色谱图。e) 根据对照品和样品的峰面积，用单点校正法计算苯磺酸氨氯地平片剂的含量。五、问题讨论1. 紫外检测器是否适用于检测所有的有机化合物？为什么？2. 为什么液相色谱多在室温下进行分离检测而气相色谱法相对要在较高的柱温下操作？  实验目的：学习氧化还原滴定法的原理与实验方法,各种滴定终点确定方法(VE曲线法,二次微商法)。实验原理：用K2Cr2O7滴定Fe2+,其反应式如下： K2Cr2

4、O7 +6Fe2+ +14H+2Cr3+ +6Fe3+ + H2O利用铂电极作指示电极,饱和甘汞电极作参比电极,与被测溶液组成工作电池。在滴定过程中,随着滴定剂的加入,铂电极的电极电位发生变化。在化学计量点附近铂电极的电极电位产生突跃,从而确定滴定终点。仪器和试剂:仪器：饱和甘汞电极  铂电极 pHmv计  滴定管（酸式） 搅拌磁试剂：K2Cr2O7溶液（0.01mol/L）硫酸亚铁铵溶液二苯胺磺酸钠（指示剂）实验步骤：1准备好铂电极和饱和甘汞电极；在滴定管中加入重铬酸钾标准滴定溶液。2试样的配制：在50mL烧杯中，将10mL Fe2+和8mL 3mol的H2SO4相混合；

5、再加入几滴二苯胺磺酸钠作指示剂。3用酸式滴定管装入0.01mol/L：K2Cr2O7溶液，排气泡，调零后置于铁架台上4试液中Fe2+含量的测定：开动搅拌磁子，待电位值稳定后读数。向烧杯中滴加K2Cr2O7 溶液，记录滴定剂为1 mL，2 mL，3 mL，4 mL，4.4 mL,4.5 mL,4.6 mL,4.7 mL,4.8 mL,4.9 mL,5.0 mL,5.1 mL,5.2 mL,6.0 mL,7.0 mL,8.0 mL,9.0 mL处的电动势值。5关闭仪器和搅拌电源开关。清洗滴定管,电极,烧杯并放回原处。6根据数据，给出E-V曲线，确定滴定终点；用二次微商法确定终点，比较两种结果。实验

6、现象：溶液因加入了指示剂，随着K2Cr2O7溶液的加入，溶液由无色变成浅绿色最后变成紫色，可帮助指示滴定终点。当K2Cr2O7溶液加入的体积达到4.8mL时，电位发生突跃。实验结果：1实验数据记录如下：V（K2Cr2O7）（mL）0.01.02.03.04.04.44.6电位数（V）-388-432-456-476-504-524-542 4.74.84.95.05.15.26.07.09.0-559-649-719-745-762-772-789-801-813 2E-V曲线：曲线上拐点对应的体积即为滴定终点时所耗标准滴定溶液的体积。根据此曲线，当体积为4.8mL时，发生

7、突跃。此时电动势数值为-649V。根据体积可计算出Fe2+ 的含量为0.0288 mol/L.3.二阶微商法(计算法)滴定体积 V1 Vep V22E/V2作E-V曲线所用数据作E/V -V曲线所用数据作2E/V 2-V曲线所用数据加K2Cr2O7溶液体积V/mLE-mVE/mVV/mLE/V加K2Cr2O7溶液体积V/mL2E/V 2加K2Cr2O7溶液体积V/mL0.0-388-441.0-440.520 1.01.0-432-241.0-241.52.0-456-201.0-202.542.03.0-476-281.0-283.5-83.04.0-504-200.4-504.2

8、-31.43.854.4-524-180.2-904.5-133.34.354.6-542-170.1-1704.65-533.34.5754.7-559-900.1-9004.75-73004.74.8-649-700.1-7004.8520004.84.9-719-260.1-2604.9544004.95.0-745-170.1-1705.059005.005.1-762-100.1-1005.157005.3755.2-772-170.8-21.35.6174.895.3756.0-789-121.0-126.510.336.057.0-801-122.0-68.047.259.0-8

9、13计算如下：加入4.7mL时，2E/V 2=-7300;       加入4.8 mL时，2E/V 2=2000滴定剂体积/mL    4.7    x     4.82E/V 2         -7300   0     20004.8-4.7=x-4.72000+73000+7300x=4.

10、78mL4.2E/V 2 - V曲线: 此曲线最高点与最低点连线与横坐标的交点即为滴定终点体积实验讨论：1.电位滴定:  每滴加一次滴定剂，平衡后测量电动势。关键: 确定滴定反应的化学计量点时,所消耗的滴定剂的体积;快速滴定寻找化学计量点所在的大致范围;突跃范围内每次滴加体积控制在0.1mL;记录每次滴定时的滴定剂用量（V）和相应的电动势数值（E），作图得到滴定曲线。2.电位滴定终点确定方法(1)E-V曲线法：图（a）      简单，准确性稍差。       &#

11、160;   (2)E/V - V曲线法：图（b）   一阶微商由电位改变量与滴定剂体积增量之比计算之。曲线上存在着极值点，该点对应着E-V 曲线中的拐点。3)2E/V 2 - V曲线法：图（c）。灵敏准确且不受试液底色的影响。 2E/V 2二阶微商计算：     3在计量点时，二苯胺磺酸钠颜色如何变化二苯胺磺酸钠的氧化态为紫色，还原态为无色，变色的条件电极电位为0.85V。变色范围为0.85±0.059/2V，用K2Cr2O7滴定Fe2+的突跃范围的电位正好将指示剂的变色范

12、围包含在内，故计量点时，指示剂由无色而氧化为紫色。4在本实验中为何要加H2SO4及H3PO4？    K2Cr2O7在酸性溶液中显示很强的氧化能力，因此要加1 mol/L H2SO4，此时Cr2O72-Cr3的条件电极电位为1.08，能使Fe2+氧化为Fe3+。    在1 mol/L H2SO4中EFe3+Fe2+0.68V，加入1：3（VV）的H3PO4后由于PO43-与Fe3+形成稳定的无色络离子Fe(PO4)23-，而使Fe3+Fe2+电对的条件电极电位降低，所以在有H3PO4存在的H2SO4介质中滴定Fe2+时，起始条件电极

13、电位最低，滴定突跃最长。5. 从EV曲线上确定的计量点位置，是否位于突跃的中点？为什么？    从EV曲线上确定的计量点位置，并不位于突跃的中点，因为在该氧化还原反应中所涉及的二个半反应为：                     Fe2+ e Fe3+         

14、0;                 n11              Cr2O72- 14H 6e 2Cr37H2O                n26&#

15、160;   n1n2，所以等当点并不在滴定突跃的中点，而是偏向电子转移数较多的Cr2O72-一方。在这里是用K2Cr2O7滴定Fe2+，因此等当点偏向于滴定突跃的末端。6为什么氧化还原滴定可以用铂电极作为指示电极铂是一种性质稳定的惰性金属，当铂电极插入可溶性氧化态或还原态物质的滴定溶液中，电极本身并不参加反应，而是作为一个导体，在这里仅起传导电子的作用,没有离子穿越相界面.。为物质的氧化态(Fe3+)和还原态(Fe2)转移电子提供了场所，它能显示溶液中对应的氧化态和还原态离子浓度间的关系，因而可在氧化还原滴定中用作指示电极。目的与要求1、掌握吸收曲线的测定与绘制方法 2、

16、掌握直接比较法定量的方法 3、熟悉紫外分光光度计的使用方法原理样品中的苯甲酸在酸性条件下可用水蒸气蒸馏法提取，在碱性条件下形成苯甲酸盐。苯甲酸及其盐对紫外光有选择性吸收，其吸收光谱的最大吸收波长在225nm左右。 用紫外可见分光光度计可测定物质在紫外光区、可见光区的吸收光谱，并可定量测定。仪器与试剂1、仪器 751型分光光度计；1cm石英吸收池一套；50ml容量瓶二只；刻度吸管5ml、10ml各一只；滴管一只。 2、试剂 苯甲酸标准储备液（1ml相当于0.1mg苯甲酸）；0.1mol/L、0.01mol/L氢氧化钠溶液。操作步骤操作步骤1、苯甲酸吸收曲线的绘制 取苯甲酸储备液4.00ml，置于50ml容量瓶中，用0.01mol/L氢氧化钠溶液定容，摇匀。此液1ml相当于8g苯甲酸。 测定条件：氢灯，1cm石英比色皿，0.01mol/L氢氧化钠为参比测定波长：从210nm-240nm每隔一定波长（2nm-5nm）测定一次吸光度，在225nm左右隔1nm测定一次吸