动物细胞融合与单克隆抗体(讲课)

1、 2002年年12月月30日，日， 两场筹备了两场筹备了10年的年的“太太空婚礼空婚礼”首次在神舟四号飞船上举行，首次在神舟四号飞船上举行，植物细胞植物细胞“新人新人”黄花烟草黄花烟草和和革新一号烟草革新一号烟草叶肉细胞叶肉细胞原原生质体生质体，动物细胞动物细胞“新人新人”是小鼠是小鼠B淋巴细胞淋巴细胞和和骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞，两批新人同时在，两批新人同时在 “产房产房”电融电融合仪内孕育新生命。合仪内孕育新生命。“太空婚礼太空婚礼”植物体细胞杂交技术植物体细胞杂交技术动物细胞融合技术动物细胞融合技术(1)(1)(2)(3)(4)植物体细胞杂交过程示意图A细胞细胞B细胞细胞融合融合一一 动物动

2、物细胞融合的概念细胞融合的概念杂交细胞杂交细胞 动物细胞融合（也称细胞杂动物细胞融合（也称细胞杂交）：是指交）：是指两个或多个动物细两个或多个动物细胞胞结合形成结合形成一个细胞一个细胞的过程。的过程。动物细胞融合过程示意图动物细胞融合过程示意图细胞膜的流动性细胞膜的流动性融合融合原理原理电激、电激、PEGPEG等等诱导融合的手段？诱导融合的手段？融合后形成的细胞类型？融合后形成的细胞类型？ABAB杂交细胞杂交细胞遗传物质有什遗传物质有什么特点？么特点？三种三种 AAAA自融细胞、自融细胞、BBBB自融自融细胞、细胞、ABAB杂交细胞杂交细胞同时具有两种生物的遗传物质同时具有两种生物的遗传物质

3、A细胞细胞B细胞细胞灭活病毒诱导动物灭活病毒诱导动物细胞融合的过程细胞融合的过程使细胞相互凝聚使细胞相互凝聚细胞膜打开，细胞膜打开，促进细胞发生融合促进细胞发生融合 比较项比较项目目 融合融合 原理原理 融合融合 方法方法 诱导融合诱导融合 手段手段用途用途植物体植物体细胞杂细胞杂交交细胞膜的细胞膜的流动性流动性细胞的全细胞的全能性能性纤维素酶、纤维素酶、果胶酶果胶酶去除去除细胞壁后诱细胞壁后诱导原生质体导原生质体融合融合离心、电刺离心、电刺激、振动、激、振动、聚乙二醇聚乙二醇克服远源克服远源杂交不亲杂交不亲和，获得和，获得杂种植株杂种植株动物细动物细胞融合胞融合细胞膜的细胞膜的流动性流动性用

4、用胰蛋白酶胰蛋白酶使细胞分散使细胞分散后诱导细胞后诱导细胞融合融合除应用植物除应用植物细胞杂交手细胞杂交手段外，段外，还有还有灭活病毒灭活病毒获得杂交获得杂交 细胞细胞二、比较二、比较 植物细胞杂交技术植物细胞杂交技术 动物细胞融合动物细胞融合三、动物三、动物细胞融合技术的优势细胞融合技术的优势 已成功的动物细胞融合实例有很多，如人已成功的动物细胞融合实例有很多，如人小鼠、人小鼠、人兔、人兔、人鸡、鼠鸡、鼠兔、鸡兔、鸡鼠等上百种融合细胞。甚至已成鼠等上百种融合细胞。甚至已成功完成了酵母菌功完成了酵母菌鸡鸡 、人、人胡萝卜胡萝卜 等细胞的融合。等细胞的融合。1. 1. 抗体由何种细胞产生？抗体由

5、何种细胞产生？2. 2.抗体主要分布在哪里？抗体主要分布在哪里？4. 4. 用传统的方法如何获得抗体用传统的方法如何获得抗体？传统方法生产抗体传统方法生产抗体抗原抗原 反复注射动物反复注射动物从动物的从动物的血清血清中分离抗体中分离抗体缺点：缺点：产量低、纯度低，特异产量低、纯度低，特异性差性差n方案一方案一 利用动物细胞培养技术培养利用动物细胞培养技术培养单个效应单个效应B细胞细胞，使它增殖，产生出大量的单一抗体，使它增殖，产生出大量的单一抗体设计方案：设计方案：方案二方案二 利用利用效应效应B细胞细胞和和肿瘤细胞肿瘤细胞融合，融合，获得获得杂交瘤细胞杂交瘤细胞，使它增殖，产生出大量单一抗体

6、，使它增殖，产生出大量单一抗体杂交瘤细胞杂交瘤细胞能产生所需抗体的杂交瘤细胞能产生所需抗体的杂交瘤细胞单克隆抗体的制备 看书上看书上53页图，分组讨论，单抗制备过程分哪几步？页图，分组讨论，单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？字母按正确顺序连接起来。顺序是？ 1 1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（ ） A.

7、A.经过免疫的经过免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞 B.B.没经过免疫的没经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞C.C.经过免疫的经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞 D.D.没经过免疫的淋巴细胞没经过免疫的淋巴细胞A2.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（ ）诱导融合的方法完全相同诱导融合的方法完全相同 B.所用的技术手段基本相同所用的技术手段基本相同 C. 操作步骤基本相同操作步骤基本相同 D. 都能形成杂种细胞都能形成杂种细胞 D3. 单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是（单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是（ ）A.由小鼠能产生抗体的由小鼠能

8、产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞融合淋巴细胞与肝细胞融合 B.由小鼠一个由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成淋巴细胞诱导融合而成 C.由小鼠一个由小鼠一个B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成 D.由小鼠一个由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成 D4.4.只能使动物细胞融合的常用诱导方法是（只能使动物细胞融合的常用诱导方法是（ ）A APEGPEG B B灭活的病毒灭活的病毒 C C电刺激电刺激 D D离心离心B5. 5. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培淋巴细胞诱导

9、融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是 （ ）淋巴细胞淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞 B B淋巴细胞自身融合细胞淋巴细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞杂交瘤细胞A.A. B. B.C.C. D.D. C CA A 、 B B细胞为动物细胞细胞为动物细胞, ,请据图回答问题请据图回答问题: :A细胞细胞B细胞细胞C细细胞胞D细细胞胞(1)(1)若若A A细胞为骨髓瘤细胞细胞为骨髓瘤细胞B B细胞为淋巴细胞细胞为淋巴细胞, ,那么那么D D细胞细胞称为称为 细胞细胞,D,D细胞具有两个亲本细胞的细胞具有两个亲本细胞的特征特征, ,一方面因具有骨髓瘤细胞的一方面因具有骨髓瘤细胞的 性性质