第六章水产品中农药、兽药残留检测

1、第六章第六章水产品中农药、兽水产品中农药、兽药残留的检验药残留的检验1.1农药、农药残留农药、农药残留 农药是指用于预防、消灭或者控制危害农业、林农药是指用于预防、消灭或者控制危害农业、林业的病、虫、草和其他有害生物以及有目的地调节植业的病、虫、草和其他有害生物以及有目的地调节植物、昆虫生长的化学合成或来源于食物、其他天然物物、昆虫生长的化学合成或来源于食物、其他天然物质的一种物质或者几种物质的混合物及其制剂。质的一种物质或者几种物质的混合物及其制剂。 按用途可将农药分为杀（昆）虫剂、杀（真）菌按用途可将农药分为杀（昆）虫剂、杀（真）菌剂、除草剂、杀蜻剂、杀鼠剂和植物生长调节剂等类剂、除草剂、

2、杀蜻剂、杀鼠剂和植物生长调节剂等类型。其中最多的是杀虫剂、杀菌剂和除草剂三大类。型。其中最多的是杀虫剂、杀菌剂和除草剂三大类。按化学组成及结构可将农药分为有机磷、氨基甲按化学组成及结构可将农药分为有机磷、氨基甲酸酯、拟除虫菊酯、有机氯、有机砷、有机汞等类型酸酯、拟除虫菊酯、有机氯、有机砷、有机汞等类型。1.2兽药、兽药残留兽药、兽药残留 兽药兽药是指用于预防、治疗、诊断动物疾病或者有是指用于预防、治疗、诊断动物疾病或者有目的地调节动物生理机能的物质（含药物饲料添加剂目的地调节动物生理机能的物质（含药物饲料添加剂），主要包括：血清制品、疫苗、诊断制品、微生态），主要包括：血清制品、疫苗、诊断制品

3、、微生态制品、中药材、中成药、化学药品、抗生素、生化药制品、中药材、中成药、化学药品、抗生素、生化药品、放射性药品及外用杀虫剂、消毒剂等。品、放射性药品及外用杀虫剂、消毒剂等。根据食品兽药残留立法委员会（根据食品兽药残留立法委员会（CCRVDF)的的定义，定义，兽药残留兽药残留是指动物产品的任何可食部分所含是指动物产品的任何可食部分所含药物的母体化合物及（或）其代谢物，以及与药物药物的母体化合物及（或）其代谢物，以及与药物有关的杂质的残留。所以药物残留既包括原药，也有关的杂质的残留。所以药物残留既包括原药，也包括药物在动物体内的代谢产物。此外，药物或其包括药物在动物体内的代谢产物。此外，药物或

4、其代谢产物还能与内源大分子共价结合，形成结合残代谢产物还能与内源大分子共价结合，形成结合残留，它们对靶动物具有潜在毒性作用。留，它们对靶动物具有潜在毒性作用。水产品中主要残留药物有哇诺酮类、抗生素类水产品中主要残留药物有哇诺酮类、抗生素类、磺胺类和峡喃类以及某些激素等。、磺胺类和峡喃类以及某些激素等。 导致水产品药物残留的主要原因如下：导致水产品药物残留的主要原因如下：（1）使用未经批准的药物或禁止使用的药物）使用未经批准的药物或禁止使用的药物（2）不正确使用或滥用药物）不正确使用或滥用药物（3）未能遵守有关药物休药期）未能遵守有关药物休药期（4）水产品及其制品加工时受到药物污染或储藏）水产品

5、及其制品加工时受到药物污染或储藏、运输方法不当造成药残、运输方法不当造成药残（5）生态、生产环境的污染）生态、生产环境的污染有机氯农药（有机氯农药（OCPs）是具有杀虫活性的氯代烃的是具有杀虫活性的氯代烃的总称，其代表性的品种包括六六六、总称，其代表性的品种包括六六六、DDT及其类似物及其类似物和环戊二烯衍生物，它们均为神经毒性物质。和环戊二烯衍生物，它们均为神经毒性物质。 由于它们在物理化学性质上均具有较高的化学稳定性和极低的水溶性、在正常环境中不易分解、有很强的亲脂性、易通过食物链在生物体脂肪中富集和积累，可导致残留污染严重、害虫的抗性增加。 水产品中有机氯农药残留量的水产品中有机氯农药残

6、留量的测定原理测定原理 试样经提取、净化、浓缩、定容，用毛细管柱气相色谱分离，电子捕获检测器检测，以保留时间定性，外标法定量。出峰顺序：-HCH、-HCH、-HCH、五氯硝基苯、-HCH、七氯、艾氏剂、除蜻酯、环氧七氯、杀瞒酯、狄氏剂、pp-DDE、pp-DDD、op-DDT、pp-DDT、胺菊酯、氯菊酯、氯氰菊酯、-氰戊菊酯、澳氰菊酯。 分别准确称取所需的标准品，用少量分别准确称取所需的标准品，用少量苯溶解，再用正己烷稀释成一定浓度的苯溶解，再用正己烷稀释成一定浓度的储备液。根据各农药在仪器上的响应情储备液。根据各农药在仪器上的响应情况，以正己烷配制混合标准应用液。况，以正己烷配制混合标准应

7、用液。色谱柱：色谱柱：涂以涂以OV-1010.25m30m0.32mm（内径）石英弹性毛细管柱。内径）石英弹性毛细管柱。程序升温：程序升温：60维持维持1min；40/min升到升到170；2/min升到升到235；40/min升到升到280，维持，维持l0min。进样口温度：进样口温度：270。检测器：检测器：电子捕获检测器（电子捕获检测器（ECD），），300。载气流速：载气流速：氮气（氮气（N2）：）：1mL/min；尾吹：；尾吹：50mL/min。 测定方法测定方法 （1）提取）提取称取试样称取试样20g（精确到（精确到0.0lg）于）于100mL具塞三角瓶中，加水具塞三角瓶中，加水6

8、mL,丙酮丙酮40mL,振摇振摇30min，加氯化钠，加氯化钠6g，充分摇匀，再加，充分摇匀，再加30mL石油醚，振摇石油醚，振摇30min。取。取35mL上清液，经无上清液，经无水硫酸钠滤于旋转蒸发瓶中，浓缩至约水硫酸钠滤于旋转蒸发瓶中，浓缩至约1mL，加，加2mL乙酸乙酯环己烷（乙酸乙酯环己烷（11）溶液再）溶液再浓缩，如此重复浓缩，如此重复3次，浓缩至约次，浓缩至约1mL。（2）净化）净化将此浓缩液经凝胶柱以乙酸乙酯将此浓缩液经凝胶柱以乙酸乙酯-环己烷（环己烷（1+1）溶液洗脱，弃去）溶液洗脱，弃去0mL35mL流分，收集流分，收集35mL70mL流流分。将其旋转蒸发浓缩至约分。将其旋转

9、蒸发浓缩至约1mL，再，再经凝胶柱净化收集经凝胶柱净化收集35mL70mL流分流分，蒸发浓缩，用氮气吹除溶剂，以石，蒸发浓缩，用氮气吹除溶剂，以石油醚定容至油醚定容至1mL，留待，留待GC分析。分析。 结果计算结果计算X试样中各农药的含量，单位为试样中各农药的含量，单位为mg/kg;m1被测样液中各农药的含量，单位为被测样液中各农药的含量，单位为ng;m试样质量，单位为试样质量，单位为g;V1试样进样体积，单位为试样进样体积，单位为L；V2试样最后定容体积，单位为试样最后定容体积，单位为mL。10001000X121VmVm2.2水产品中有机磷农药残留量的测定水产品中有机磷农药残留量的测定试样

10、经提取、净化、浓缩、定容，用毛细管柱试样经提取、净化、浓缩、定容，用毛细管柱气相色谱分离，火焰光度检测器检测，以保留气相色谱分离，火焰光度检测器检测，以保留时间定性，外标法定量。出峰顺序：甲胺磷、时间定性，外标法定量。出峰顺序：甲胺磷、敌敌畏、乙酰甲胺磷、久效磷、乐果、乙拌磷敌敌畏、乙酰甲胺磷、久效磷、乐果、乙拌磷、甲基对硫磷、杀蟆螟硫磷、甲基嘧啶磷、马、甲基对硫磷、杀蟆螟硫磷、甲基嘧啶磷、马拉硫磷、倍硫磷、对硫磷、乙硫磷。拉硫磷、倍硫磷、对硫磷、乙硫磷。标准溶液的配制标准溶液的配制准确称取各有机磷农药标准品准确称取各有机磷农药标准品，用乙酸乙酯溶解、定容成一定，用乙酸乙酯溶解、定容成一定浓度

11、的储备液。测定前，用乙酸浓度的储备液。测定前，用乙酸乙酯稀释配制混合标准应用液。乙酯稀释配制混合标准应用液。色谱条件色谱条件色谱柱：色谱柱：涂以涂以SE-540.25m30m0.32mm（内径（内径）石英弹性毛细管柱。）石英弹性毛细管柱。程序升温：程序升温：60维持维持1min：40/min升到升到110；5/min升到升到235；40/min升到升到265进样口温度：进样口温度：270。检测器：检测器：火焰光度检测器（火焰光度检测器（FPD-P）。）。载气流速：载气流速：氮气（氮气（N2）：）：1mL/min;尾吹：尾吹：50mL/min；氢气：；氢气：50mL/min；空气：；空气：500

12、mL/min 测定方法测定方法提取提取称取试样称取试样20g（精确到（精确到0.01g）于）于100mL具塞三具塞三角瓶中，加水角瓶中，加水6mL，丙酮，丙酮40mL，振摇，振摇30mi云，云，加氯化钠加氯化钠6g，充分摇匀，再加，充分摇匀，再加30mL石油醚，振石油醚，振摇摇30min。取。取35mL上清液，经无水硫酸钠滤于上清液，经无水硫酸钠滤于旋转蒸发瓶中，浓缩至约旋转蒸发瓶中，浓缩至约1mL，加，加2mL乙酸乙酯乙酸乙酯-环己烷（环己烷（11）溶液再浓缩，如此重复）溶液再浓缩，如此重复3次，浓次，浓缩至约缩至约1mL 。净化净化将此浓缩液经凝胶柱以乙酸乙酯将此浓缩液经凝胶柱以乙酸乙酯-

13、环己环己烷（烷（11）溶液洗脱，弃去）溶液洗脱，弃去0mL35mL流分，收集流分，收集35mL70mL流分。将其旋转流分。将其旋转蒸发浓缩至约蒸发浓缩至约1mL，再经凝胶柱净化收集，再经凝胶柱净化收集35mL70mL流分，蒸发浓缩，用氮气流分，蒸发浓缩，用氮气吹除溶剂，以石油醚定容至吹除溶剂，以石油醚定容至1mL，留待，留待GC分析。分析。 水产品中多氯联苯的测定水产品中多氯联苯的测定多氯联苯（多氯联苯（PCBs），又称氯化联苯，是由一），又称氯化联苯，是由一些氯置换联苯分子中的氢原子而形成的化合物，在些氯置换联苯分子中的氢原子而形成的化合物，在工业上得到广泛应用。工业上得到广泛应用。 多氯联

14、苯可以通过水体中生物食物链的富集作用，其在鱼类体内浓度累积到几万甚至几十万倍。多氯苯同时损害人类的免疫系统并被列为可能的致癌物质，其毒性主要表现为：影响皮肤、神经、肝脏，破坏钙的代谢，导致骨骼、牙齿的损害，并有慢性致癌和致遗传变异等的可能性。 含含PCBs分析物的现有前处理方法分析物的现有前处理方法（1）液）液-液萃取法液萃取法又叫溶剂萃取法，该方法要求的设备简单，操作快速，尤其是分离效果较好，但工作量大，且所用溶剂常是易挥发、易燃和有毒性，在实际应用中受到限制。（2）固相萃取法）固相萃取法该法是较新也是当今最为广泛应用的萃取方法之一。其主要是利用萃取剂的固体吸附作用从样品中萃取分析物。在用固

15、相萃取法处理含PCBs基质时，聚亚安酯作萃取剂的研究最为广泛。该法操作较简单，灵敏度、回收率较高，缺点是易发生堵漏、沟流等现象，所需样品量大。 （3）超声波萃取法）超声波萃取法该方法是分析固体基质最简单的技术之一，其原理是在室温下用适当的有机溶剂和样品混合，超声萃取待测物质。萃取效率除与溶剂的极性有关外，还受萃取时间的影响。该法操作简单。 （4）酸碱处理萃取法）酸碱处理萃取法有实验表明，在萃取混合液中加入有反应性的酸、碱或经酸碱处理过后的硅胶可明显地改善萃取效果，提高萃取回收率。Liang等曾在液-液萃取中加入HCI，研究了不同酸性对PCDDs/ PCDFs/PCBs回收率的影响，结果表明，前

16、两者在碱性条件下的回收率高，而后者则在酸性条件下的回收率高。 （5）蒸汽相萃取法（）蒸汽相萃取法（Bleidner法）法）Schuphan等利用“Bleidner”蒸汽相萃取技术分析湖泊沉积物中的PCBs和有机氯沉淀物，与传统的索氏抽提法相比较，结果表明，该法无需干燥和一般的清洗步骤，因而可大大缩短分析时间。但随着PCBs氯化度的增高，使用该法所得的回收率明显降低（由PCB28的98%下降到PCB180的43%）。（6)索氏抽提法索氏抽提法在分析非极性和中等极性痕量有机物方面得到广泛应用，在分析PCBs方面的报道也有很多，如沉积物、土壤和动植物组织等。该法的要点是溶剂的极性应与溶质的溶解度相符

17、，并且萃取前要用溶剂将基质完全浸湿，其不足之处在于干燥过程耗时长，另外萃取时硫也易从基质中萃取出来，影响检测器的测定，延长分析时间。气相色谱法（气相色谱法（GC） 气相色谱法是目前分析气相色谱法是目前分析PCBs常用的有效常用的有效方法，一方面是因为它具有高分离能力、高灵方法，一方面是因为它具有高分离能力、高灵敏度和高分析速度等优点；另一方面是由于一敏度和高分析速度等优点；另一方面是由于一般样品中所含的般样品中所含的PCBs大都是痕量级水平。大都是痕量级水平。 所用的检测器主要有以下几类：所用的检测器主要有以下几类： 电子俘获检测器（电子俘获检测器（ECD） ECD是分析痕量电负性有机化合物最

18、有效的检测器，具有选择性较好、灵敏度高、检测限低、易于操作和维修等特点。质谱检测器（质谱检测器（MS） MS具有很强的结构鉴定能力，与GC结合，充分利用各自的优点可以实现高效、快速的分离鉴定。MS法是一种先将分子离解成不同带电荷的离子，然后对离子质量的强度进行检测，从而获得分子结构信息的方法。 薄层层析法（薄层层析法（TLC） 高效液相色谱法（高效液相色谱法（HPLC） HPLC应用于PCBs的分析相对较少，且主要是作为GC定性分析前以除去样品中的废物和油污的一种净化方法。 HPLC的优点优点是分析速度快、方便，可用于日常分析，不足不足是其常用的UV检测器灵敏度低、选择性差。 超临界流体色谱法

19、（超临界流体色谱法（SFC）利用消化法破坏水产品中的蛋白质和脂利用消化法破坏水产品中的蛋白质和脂肪等杂质，用石油醚提取、浓硫酸磺化净化肪等杂质，用石油醚提取、浓硫酸磺化净化，用毛细管气相色谱法测定。，用毛细管气相色谱法测定。 本方法简便、快速，结果准确，适用于大批量样品分析。 测定多氯联苯中有代表性的六种：测定多氯联苯中有代表性的六种：PCB28-2,4,4-Trchlorbiphenyl；PCB52-2,2,5,5-Tetrachlorbiphenyl；PCB101-2,2,4,5,5-Pentachlorbiphenyl；PCB138-2,2,3,4,4,5-Hexachlorbiphen

20、yl；PCB153-2,2,4,4,5,5-Hexachlorbiphenyl；PCB180-2,2,3,4,4,5,5-Heptachlorhiplienyl。试样经高氯酸与冰乙酸的混合溶液消试样经高氯酸与冰乙酸的混合溶液消化，破坏样品中蛋白质和脂肪等基体物质化，破坏样品中蛋白质和脂肪等基体物质，进行初步净化，用石油醚提取多氯联苯，进行初步净化，用石油醚提取多氯联苯残留物，再用硫酸进一步净化，浓缩，用残留物，再用硫酸进一步净化，浓缩，用具有电子捕获检测器的气相色谱仪测定，具有电子捕获检测器的气相色谱仪测定，外标法定量。外标法定量。 试剂试剂所有试剂在多氯联苯出峰处应无干扰峰，有机所有试剂在多

21、氯联苯出峰处应无干扰峰，有机溶剂最好选择优级纯或色谱纯试剂，分析纯试剂应溶剂最好选择优级纯或色谱纯试剂，分析纯试剂应重蒸。重蒸。石油醚（沸程石油醚（沸程3060，于全玻璃蒸馏器中重，于全玻璃蒸馏器中重蒸）；高氯酸；冰乙酸；浓硫酸；无水硫酸钠（经蒸）；高氯酸；冰乙酸；浓硫酸；无水硫酸钠（经550高温灼烧高温灼烧3小时，干燥器中贮存）；硫酸钠溶小时，干燥器中贮存）；硫酸钠溶液（液（20g/L)，以上试剂均为分析纯。多氯联苯标准，以上试剂均为分析纯。多氯联苯标准溶液：取溶液：取10.0ng/L的多氯联苯标准溶液，用己烷的多氯联苯标准溶液，用己烷稀释成稀释成0.2nng/L的标准使用液。的标准使用液。

22、色谱条件色谱条件(1)色谱柱：色谱柱：DB-1701石英毛细管柱（或与之相当石英毛细管柱（或与之相当的色谱柱），的色谱柱），30m0.32mm025m(2)载气：载气：氮气，线速度氮气，线速度24cm/s(3)进样口：进样口：温度温度235，无分流方式进样。，无分流方式进样。(4)温度程序：温度程序：初始柱温初始柱温100，维持，维持1min；59/min升至升至200，维持，维持l0min；5/min升至升至240，维持，维持15min，确保所有的样品已经流出，确保所有的样品已经流出(5)检测器：检测器：温度温度300，补充气流量，补充气流量60mL(6)进样量：进样量：1L(7)检测器：检

23、测器：63Ni电子捕获检测器。电子捕获检测器。测定步骤测定步骤（1）样品预处理）样品预处理鱼去鳞、去皮沿背脊取肌肉；虾去头、鱼去鳞、去皮沿背脊取肌肉；虾去头、去壳、去附肢，取可食肌肉部分；蟹、甲鱼去壳、去附肢，取可食肌肉部分；蟹、甲鱼等取可食肌肉部分；样品切为不大于等取可食肌肉部分；样品切为不大于0.5cm0.5cm0.5cm的小块后混匀，放置的小块后混匀，放置冰箱备用。冰箱备用。 （2）提取）提取将样品解冻，匀浆机匀浆后，称取样品将样品解冻，匀浆机匀浆后，称取样品5g（精（精确到确到0.001g)，置于，置于100mL具塞三角烧瓶中，加入具塞三角烧瓶中，加入50mL高氯酸与冰乙酸的混合溶液（

24、体积比高氯酸与冰乙酸的混合溶液（体积比11），），于于70恒温水浴中振荡约恒温水浴中振荡约2h，至样品消化完全。将，至样品消化完全。将溶液转移至溶液转移至250mL分液漏斗中，用分液漏斗中，用l0mL石油醚洗涤石油醚洗涤原烧瓶，洗涤液合并于分液漏斗中，再向分液漏斗原烧瓶，洗涤液合并于分液漏斗中，再向分液漏斗中加入中加入30mL石油醚，振摇提取多氯联苯残留物，石油醚，振摇提取多氯联苯残留物，静置分层，将上层石油醚提取液转移于另一分液漏静置分层，将上层石油醚提取液转移于另一分液漏斗中；再用斗中；再用20mL石油醚重复提取石油醚重复提取2次，将上层石油次，将上层石油醚提取液合并于同一分液漏斗中。醚提取液合并于同一分液漏斗中。（3）提取液的净化）提取液的净化向分液漏斗中加入向分液漏斗中加入l0mL浓硫酸，振荡浓硫酸，振荡30s，