霉菌和酵母菌检验

1、动物检疫检验技术专业教学资源库霉菌和酵母菌检验霉菌和酵母菌检验 知识目标：知识目标： 理解霉菌和酵母菌检验的意义。理解霉菌和酵母菌检验的意义。 掌握霉菌和酵母菌测定与菌落总数测定的不同之处。掌握霉菌和酵母菌测定与菌落总数测定的不同之处。 掌握霉菌和酵母菌检验方法。掌握霉菌和酵母菌检验方法。 能力目标：能力目标： 会进行霉菌和酵母菌检验用培养基制备。会进行霉菌和酵母菌检验用培养基制备。 会进行霉菌和酵母菌检验并正确报告结果。会进行霉菌和酵母菌检验并正确报告结果。 动物检疫检验技术专业教学资源库霉菌和酵母菌检验霉菌和酵母菌检验 霉菌和酵母在自然界分布很广，种类繁多，与人类的日常霉菌和酵母在自然界分

2、布很广，种类繁多，与人类的日常生活关系十分密切，是人类应用最早的一类微生物，如酿生活关系十分密切，是人类应用最早的一类微生物，如酿酒、面包发酵、制曲、做酱或酱油等，还可用来生产酶制酒、面包发酵、制曲、做酱或酱油等，还可用来生产酶制剂、有机酸、抗生素、维生素、酵母片及多种氨基酸。但剂、有机酸、抗生素、维生素、酵母片及多种氨基酸。但是也有些霉菌常造成粮食、水果、蔬菜及副产品腐败变质是也有些霉菌常造成粮食、水果、蔬菜及副产品腐败变质，少数霉菌能产生毒素引起食物中毒，许多霉菌还是动植，少数霉菌能产生毒素引起食物中毒，许多霉菌还是动植物的致病菌，酵母菌中的一些种类，也是发酵工业的有害物的致病菌，酵母菌中

3、的一些种类，也是发酵工业的有害菌。所以有些食品在进行微生物学检验时也要考虑霉菌和菌。所以有些食品在进行微生物学检验时也要考虑霉菌和酵母的存在。酵母的存在。 动物检疫检验技术专业教学资源库霉菌和酵母菌检验霉菌和酵母菌检验 食品中污染霉菌和酵母的多少，以食品中污染霉菌和酵母的多少，以1g1g（或（或mLmL）食品中）食品中霉菌和酵母菌菌落个数来表示。霉菌和酵母菌菌落个数来表示。 检验按检验按食品安全国家标准食品安全国家标准 食品微生物学检验食品微生物学检验（GB4789.15-2010GB4789.15-2010）方法进行。）方法进行。动物检疫检验技术专业教学资源库霉菌和酵母菌检验霉菌和酵母菌检验

4、主要内容主要内容n 目的要求目的要求n 仪器及材料仪器及材料n 检验方法检验方法n 注意事项注意事项动物检疫检验技术专业教学资源库霉菌和酵母菌检验霉菌和酵母菌检验一、目的要求一、目的要求n 了解霉菌和酵母在食品检验中的意义了解霉菌和酵母在食品检验中的意义n 掌握检验的程序和步骤掌握检验的程序和步骤n 会报告结果会报告结果动物检疫检验技术专业教学资源库霉菌和酵母菌检验霉菌和酵母菌检验二、仪器与材料二、仪器与材料n 培养基：培养基：马铃薯马铃薯- -葡萄糖葡萄糖- -琼脂培养基、孟加拉红培养基。琼脂培养基、孟加拉红培养基。n 设备和材料：设备和材料：无菌工作台、无菌工作台、酒精灯酒精灯、稀释液稀释

5、液、灭菌吸管灭菌吸管、试试管架管架、恒温、恒温培养箱培养箱、高压蒸汽灭菌器、无菌锥形瓶、均质器、高压蒸汽灭菌器、无菌锥形瓶、均质器、振荡器、天平、电炉、振荡器、天平、电炉、显微镜、电子天平、无菌平皿显微镜、电子天平、无菌平皿等。等。动物检疫检验技术专业教学资源库霉菌和酵母菌检验霉菌和酵母菌检验三、检验方法三、检验方法培养菌落计数结果报告样品的稀释动物检疫检验技术专业教学资源库霉菌和酵母菌检验霉菌和酵母菌检验动物检疫检验技术专业教学资源库霉菌和酵母菌检验霉菌和酵母菌检验1.1.样品的稀释样品的稀释 固体和半固体样品：称取固体和半固体样品：称取 25g 25g 样品至盛有样品至盛有 225mL 2

6、25mL 灭菌蒸灭菌蒸馏水的锥形瓶中，充分振摇，即为馏水的锥形瓶中，充分振摇，即为 1:10 1:10 稀释液。或放入稀释液。或放入盛有盛有 225mL 225mL 无菌蒸馏水的均质袋中，用拍击式均质器拍无菌蒸馏水的均质袋中，用拍击式均质器拍打打2min2min，制成，制成 1:10 1:10 的样品匀液。的样品匀液。 液体样品：以无菌吸管吸取液体样品：以无菌吸管吸取 25mL 25mL 样品至盛有样品至盛有 225mL 225mL 无无菌蒸馏水的锥形瓶（可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠菌蒸馏水的锥形瓶（可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成）中，充分混匀，制成 1:10 1:1

7、0 的样品匀液。的样品匀液。动物检疫检验技术专业教学资源库霉菌和酵母菌检验霉菌和酵母菌检验 取取 1mL 1:10 1mL 1:10 稀释液注入含有稀释液注入含有 9mL 9mL 无菌水的试管中，另换无菌水的试管中，另换一支一支 1mL 1mL 无菌吸管反复吹吸，此液为无菌吸管反复吹吸，此液为 1:100 1:100 稀释液。稀释液。 按按 3 3上述操作程序，制备上述操作程序，制备 10 10 倍系列稀释样品匀液。每递倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用增稀释一次，换用 1 1 次次 1mL 1mL 无菌吸管。无菌吸管。 动物检疫检验技术专业教学资源库霉菌和酵母菌检验霉菌和酵母菌检验 根

8、据对样品污染状况的估计，选择根据对样品污染状况的估计，选择 2 2 个个3 3 个适宜稀释度个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），的样品匀液（液体样品可包括原液）， 在进行在进行 10 10 倍递增倍递增稀释的同时，每个稀释度分别吸取稀释的同时，每个稀释度分别吸取 1mL 1mL 样品匀液于样品匀液于 2 2 个个无菌平皿内。同时分别取无菌平皿内。同时分别取 1mL 1mL 样品稀释液加入样品稀释液加入 2 2 个无菌个无菌平皿作空白对照。平皿作空白对照。 动物检疫检验技术专业教学资源库霉菌和酵母菌检验霉菌和酵母菌检验 及时将及时将 15mL15mL20mL 20mL 冷却至冷却至 4

9、646的马铃薯的马铃薯- -葡萄糖葡萄糖- -琼脂或琼脂或孟加拉红培养基（可放置于孟加拉红培养基（可放置于464611恒温水浴箱中保温）恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。 动物检疫检验技术专业教学资源库霉菌和酵母菌检验霉菌和酵母菌检验2.2.培养培养 待琼脂凝固后，将平板倒置，待琼脂凝固后，将平板倒置，282811培养培养 5d5d，观察并记录。，观察并记录。 动物检疫检验技术专业教学资源库霉菌和酵母菌检验霉菌和酵母菌检验 肉眼观察，必要时可用放大镜，记录各稀释倍数和相应的肉眼观察，必要时可用放大镜，记录各稀释倍数和相应的霉菌和酵母数。以菌落

10、形成单位（霉菌和酵母数。以菌落形成单位（colony forming unitscolony forming units，CFUCFU）表示。）表示。 选取菌落数在选取菌落数在 10 CFU10 CFU150 CFU 150 CFU 的平板，根据菌落形态的平板，根据菌落形态分别计数霉菌和酵母数。霉菌蔓延生长覆盖整个平板的可分别计数霉菌和酵母数。霉菌蔓延生长覆盖整个平板的可记录为多不可计。菌落数应采用两个平板的平均数。记录为多不可计。菌落数应采用两个平板的平均数。 3.3.菌落计数菌落计数动物检疫检验技术专业教学资源库霉菌和酵母菌检验霉菌和酵母菌检验动物检疫检验技术专业教学资源库霉菌和酵母菌检验

11、霉菌和酵母菌检验动物检疫检验技术专业教学资源库霉菌和酵母菌检验霉菌和酵母菌检验计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数计算。数计算。 （1 1）若所有平板上菌落数均大于）若所有平板上菌落数均大于 150 CFU150 CFU，则对稀释度最高，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。菌落数乘以最高稀释倍数计算。 （2 2）若所有平板上菌落数均小于）若所有平板上菌落数均小于 10 CFU10 CFU，则应按稀释度最，则应按稀释度

12、最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。 （3 3）若所有稀释度平板均无菌落生长，则以小于）若所有稀释度平板均无菌落生长，则以小于1 1乘以最低乘以最低稀释倍数计算；如为原液，则以小于稀释倍数计算；如为原液，则以小于1 1计数。计数。 4.4.结果与报告结果与报告动物检疫检验技术专业教学资源库霉菌和酵母菌检验霉菌和酵母菌检验报告报告 （1 1）菌落数在）菌落数在 100 100 以内时，按以内时，按“四舍五入四舍五入”原则修约，采用原则修约，采用两位有效数字报告。两位有效数字报告。 （2 2）菌落数大于或等于）菌落数大于或等于100100时，前时，前3 3位数字采用位

13、数字采用“四舍五入四舍五入”原原则修约后，取前则修约后，取前2 2位数字，后面用位数字，后面用0 0代替位数来表示结果；也代替位数来表示结果；也可用可用1010的指数形式来表示，此时也按的指数形式来表示，此时也按“四舍五入四舍五入”原则修约原则修约，采用两位有效数字。，采用两位有效数字。 （3 3）称重取样以）称重取样以 CFU/g CFU/g 为单位报告，体积取样以为单位报告，体积取样以 CFU/CFU/mLmL 为为单位报告，报告或分别报告霉菌和单位报告，报告或分别报告霉菌和/ /或酵母数。或酵母数。 4.4.结果与报告结果与报告动物检疫检验技术专业教学资源库霉菌和酵母菌检验霉菌和酵母菌检

14、验酵母菌在马铃薯葡萄糖琼脂上典型特征乳白色菌落，有突起。霉菌和酵母菌在孟加拉红琼脂上菌落特征动物检疫检验技术专业教学资源库霉菌和酵母菌检验霉菌和酵母菌检验霉菌在孟加拉红培养基上特征为灰色菌落，有黑色孢子酵母菌在孟加拉红培养基上典型特征动物检疫检验技术专业教学资源库霉菌和酵母菌检验霉菌和酵母菌检验细菌菌落计数与霉菌及酵母菌落计数的区别细菌菌落计数与霉菌及酵母菌落计数的区别 项目项目不同点不同点细菌菌落计数霉菌及酵母菌菌落计数稀释液稀释液灭菌磷酸盐缓冲液或生理盐水灭菌蒸馏水培养基培养基平板计数琼脂培养基马铃薯-葡萄糖-琼脂、孟加拉红培养基培养温度培养温度361281培养时间培养时间24h48h5d 平板计数标准平板计数标准30300CFU10150CFU菌落形态菌落形态小