生物化学思考题答案

1、生物化学思考题答案【篇一：生物化学课后答案】s=txt 第三章 氨基酸氨基酸是两性电解质。当 ph 接近 1 时，氨基酸的可解离基团全部 质子化，当 ph 在 13 左右时，那么全部去质子化。在这中间的某一 ph 因不同氨基酸而异，氨基酸以等电的兼性离子 h3n+chrcoo- 状态存在。某一氨基酸处于净电荷为零的兼性离子状态时的介质 ph 称为该氨基酸的等电点，用 pi 表示。参与蛋白质组成的氨基酸中色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸在紫外区有 光吸收，这是紫外吸收法定量蛋白质的依据。核磁共振 nmr 波谱 技术在氨基酸和蛋白质的化学表征方面起重要作用。氨基酸分析别离方法主要是基于氨基酸的酸碱性质和极

2、性大小。常 用方法有离子交换柱层析、高效液相层析 hplc 等。习题以下氨基酸的单字母和三字母的缩写符号：精氨酸、天冬氨酸、谷 氨酰氨、谷氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸。 见表 3-1表 3-1 氨基酸的简写符号名称 三字母符号 单字母符号 名称丙氨酸 (alanine) ala a 亮氨酸 (leucine) 三字母符号 单字母符号 leul m 精氨酸 (arginine) arg r 赖氨酸 (lysine) lys k 天冬酰氨 (asparagines) asn n 甲硫氨酸 (蛋氨酸 )(methionine) met 天冬氨酸 (aspartic acid) asp dasn 和

3、 /或 asp asx b 半胱氨酸 (cysteine) cys c 谷氨酰氨 (glutamine) gln q 谷氨酸 (glutamic acid) glu e gln 和 /或 glu gls z 甘氨酸 (glycine) gly g 苯丙氨酸 (phenylalanine)pro p 丝氨酸 (serine) ser s 苏氨酸 (threonine) thr t phe f 脯氨酸 (praline) 色氨酸 (tryptophan)trp w组氨酸 (histidine) his h 酪氨酸 (tyrosine) tyr y 异亮氨酸 (isoleucine) ile i 缬

4、氨酸 (valine) val v解：ph = pka + lg20% pka = 10.53 ( 见表 3-3 , p133)4、 计算以下物质0.3mol/l溶液的ph : (a)亮氨酸盐酸盐；(b)亮氨 酸钠盐；(c)等电亮氨酸。(a)约 1.46,(b)约 11.5, (c)约 6.055、根据表 3-3 中氨基酸的 pka 值，计算以下氨基酸的 pi 值：丙氨酸、半胱氨酸、谷氨酸和精氨酸。 pi:6.02;5.02;3.22;10.76解： pi = 1/2 pka1+ pka2 pi(ala) = 1/2 pi(cys) = 1/2 pi(glu) = 1/2 pi(ala) =

5、1/2 6 、向 1l1mol/l 的处于等电点的甘氨酸溶液参加 0.3molhcl ，问所得 溶液的 ph 是多少？如果参加 0.3mol naoh 以代替 hcl 时， ph 将是 多少？ ph ：2.71 ；9.237 、将丙氨酸溶液 400ml 调节到 ph8.0 ，然后向该溶液中参加过 量的甲醛，当所得溶液用碱反滴定至 ph8.0 时，消耗 0.2mol/l naoh 溶液 250ml 。问起始溶液中丙氨酸的含量为多少克？ 4.45g9 、说明用含一个结晶水的固体组氨酸盐酸盐和1mol/l koh 配制 1lph6.5 的 0.2mol/l 组氨酸盐缓冲液的方法 取组氨酸盐酸盐 41

6、.92g(0.2mol) ，参加 352ml 1mol/l koh ，用水稀释至 1l10 、为什么氨基酸的茚三酮反映液能用测压法定量氨基酸？11、 l-亮氨酸溶液在20cm旋光管中测得的旋光度为+1.810。计算1-亮氨酸在6mol/l hcl中的比旋a。a=+15.1o12、标出异亮氨酸的4个光学异构体的r，s丨构型名称。参考图3-1513、甘氨酸在溶剂a中的溶解度为在溶剂b中的4倍，苯丙氨酸在 溶剂a中的溶解度为溶剂b中的两倍。利用在溶剂 a和b之间的逆 流分溶方法将甘氨酸和苯丙氨酸分开。在起始溶液中甘氨酸含量为 100mg ，苯丙氨酸为 81mg ，试答复以下问题： (1)利用由 4

7、个分溶 管组成的逆流分溶系统时，甘氨酸和苯丙氨酸各在哪一号分溶管中 含量最高？ 2在这样的管中每种氨基酸各为多少毫克？ 1第4 管和第 3 管； 2 51.2mg gly+24mg phe 和 38.4mggly+36mg phe解：根据逆流分溶原理，可得：对于 gly : kd = ca/cb = 4 = q( 动相)/p静相 p+q = 1 = (1/5 +4/5)4个分溶管分溶 3次： 1/5 + 4/5 3=1/125+2/125+48/125+64/125对于 phe : kd = ca/cb = 2 = q( 动相)/p静相p+q = 1 = (1/3 +2/3)4个分溶管分溶 3

8、次: 1/3 + 2/3 3=1/27+6/27+12/27+8/27故利用 4 个分溶管组成的分溶系统中，甘氨酸和苯丙氨酸各在 4 管 和第 3 管中含量最高，其中:1 4 、指出在正丁醇:醋酸:水的系统中进行纸层析时，以下混合物 中氨基酸的相对迁移率:(1)ile, lys; (2)phe, ser (3)ala, val,leu; (4)pro, val (5)glu, asp; (6)tyr, ala, ser, his.ile lys ；phe, ser ；leu val ala, ；val pro ；gluasp ； tyralaser = his解:根据 p151 图 3-25

9、可得结果。15 .将含有天冬氨酸(pi=2.98)、甘氨酸(pi=5.97)、亮氨酸(pi=6.53)和赖氨酸 (pi=5.98) 的柠檬酸缓冲液，加到预先同样缓冲液平衡过的 强阳离交换树脂中，随后用爱缓冲液析脱此柱，并分别收集洗出液， 这5种氨基酸将按什么次序洗脱下来？ asp, thr, gly, leu, lys解:在 ph3 左右，氨基酸与阳离子交换树脂之间的静电吸引的大小 次序是减刑氨基酸 (a2+) 中性氨基酸 (a+) 酸性氨基酸 (a0) 。因此氨基酸 的洗出顺序大体上是酸性氨基酸、中性氨基酸，最后是碱性氨基酸， 由于氨基酸和树脂之间还存在疏水相互作用，所以其洗脱顺序为:asp

10、, thr, gly, leu, lys 。第四章 蛋白质的共价结构蛋白质分子是由一条或多条肽链构成的生物大分子。多肽链是由氨 基酸通过肽键共价连接而成的，各种多肽链都有自己特定的氨基酸 序列。蛋白质的相对分子质量介于 6000 到 1000000 或更高。蛋白质分为两大类：单纯蛋白质和缀合蛋白质。根据分子形状可分 为纤维状蛋白质、球状蛋白质和膜蛋白质。此外还可按蛋白质的生 物学功能分类。为了表示蛋白质结构的不同组织层次，经常使用一级结构、二级结 构、三级结构和四级结构这样一些专门术语。一级结构就是共价主 链的氨基酸序列，有时也称化学结构。二、三和四级结构又称空间 结构即三维结构或高级结构。蛋

11、白质的生物功能决定于它的高级结构，高级结构是由一级结构即 氨基酸序列决定的，二氨基酸序列是由遗传物质 dna 的核苷酸序列 规定的。肽键 conh 是连接多肽链主链中氨基酸残缺的共价键，二硫键 是使多肽链之间交联或使多肽链成环的共价键。多肽链或蛋白质当发生局部水解时，可形成长短不一的肽段。除部 分水解可以产生小肽之外，生物界还存在许多游离的小肽，如谷胱 甘肽等。小肽晶体的熔点都很高，这说明短肽的晶体是离子晶格、 在水溶液中也是以偶极离子存在的。测定蛋白质一级结构的策略是：1测定蛋白质分子中多肽链数目； 2 拆分蛋白质分子的多肽链； 3断开多肽链内的二硫桥； 4 分析每一多肽链的氨基酸组成；5鉴

12、定多肽链的n-末端和c-末端 残基； 6断裂多肽链成较小的肽段，并将它们别离开来； 7 测定各肽段的氨基酸序列； 8利用重叠肽重建完整多肽链的一级 结构； 9确定半胱氨酸残基形成的 s-s 交联桥的位置。序列分析中的重要方法和技术有：测定n-末端基的苯异硫氰酸酯pitc丨法，分析c-末端基的羧肽酶法，用于多肽链局部断裂的酶裂解和 cnbr 化学裂解，断裂二硫桥的巯基乙醇处理，测定肽段氨基酸序列的 edman 化学降解和电喷射串联质谱技术，重建多肽链一级序 列的重叠肽拼凑法以及用于二硫桥定位的对角线电泳等。在不同生物体中行使相同或相似功能的蛋白质称同源蛋白质。同源 蛋白质具有明显的序列相似性 称

13、序列同源 ,两个物种的同源蛋白质， 其序列间的氨基酸差异数目与这些物种间的系统发生差异是成比例的。并根据同源蛋白质的氨基酸序列资料建立起 进化树。同源蛋白质具有共同的进化起源。在生物体内有些蛋白质常以前体形试合成，只有按一定方式裂解除去局部肽链之后才出现生物活性，这一现象称蛋白质的激活。血液凝固是涉及氨基酸序列断裂的一系列酶原被激活的结果，酶促激活的级联放大，使血凝块迅速形成成为可能。凝血酶原和血清蛋白原 是两个最重要的血凝因子。血纤蛋白蛋白原在凝血酶的作用下转变 为血清蛋白凝块血块的主要成分。我国在 20 世纪 60 年代首次在世界上人工合成了蛋白质 结晶牛 胰岛素。近二、三十年开展起来的固

14、相肽合成是控制合成技术上的 一个巨大进步，它对分子生物学和基因工程也就具有重要影响和意 义。至今利用 merrifield 固相肽合成仪已成功地合成了许多肽和蛋 白质。 习题1. 如果一个相对分子质量为 12000 的蛋白质，含 10 种氨基酸，并假 设每种氨基酸在该蛋白质分子中的数目相等，问这种蛋白质有多少 种可能的排列顺序？ 10100解： 1012000/120=101002、有一个 a 肽，经酸解分析得知为 lys 、his 、 asp 、glu2 、ala 以 及 val 、 tyr 突然两个 nh3 分子组成。当 a 肽与 fdnb 试剂反响后得 dnp-asp ；当用羧肽酶处理后

15、得游离缬氨酸。如果我们在实验中将 a 肽用胰蛋白酶降解时，得到两种肽，其中一种 lys 、 asp 、glu 、 ala 、tyr 在 ph6.4 时，净电荷为零，另一种 his 、glu 以及 val 可给除 dnp-his ，在 ph6.4 时，带正电荷。此外， a 肽用糜蛋白酶降解时，也得到两种肽，其中一种asp 、ala 、tyr 在 ph6.4 时全中性，另一种 lys 、his 、glu2 以及 val 在 ph6.4 时带正电荷。问 a 肽的氨基酸序列如何？ asn-ala-tyr-glu-lys-his-gln-val解：1、n-末端分析：fdnb法得：asp-;2 、 c-

16、末端分析：羧肽酶法得： -val ；3 、胰蛋白酶只断裂赖氨酸或精氨酸残基的羧基形成的肽键，得到的是以arg和lys为c-末端残基的肽断。酸水解使asnasp+ nh4+ ,由条件lys、asp、glu、ala、tyr可得：asn-( )-( )-( )-lys- ( )-( )-val ；4、fdnb法分析n-末端得dnp-his，酸水解使 gln f glu+nh4+由已 知条件 his 、 glu 、 val 可得： asn-( )-( )-( )-lys-his-gln-val ；5、糜蛋白酶断裂 phe 、 trp 和 tyr 等疏水氨基酸残基的羧基端肽键。 由题，得到的一条肽asp

17、、ala、tyr丨结合3、 4可得该肽 的氨基酸序列为： asn-ala-tyr-glu-lys-his-gln-val它们的氨基酸组成分别是 arg、 pro 和 phe、 tyr、 lys、 ser、 ala。 试问此七肽的一级结构怎样？ 它是一个环肽，序列为： -phe-ser- ala-tyr-lys-pro-arg- 2糜蛋白酶断裂 phe 、 trp 和 tyr 等疏水氨基酸残基的羧基端肽 键，由两肽段氨基酸组成 ala、 tyr、 ser 和 pro、 phe、 lys、 arg 可得： -( )-( )-tyr- 和-( )-( )-( )-phe- ； 3由 2得的两肽段分别

18、与 fdnb 反响，分别产生 dnp-ser 和dnp-lys可知该两肽段的n-末端分别为-ser-和-lys-，结合2可得： -ser-ala-tyr- 禾口 -lys-( )-( )-phe-; 4胰蛋白酶专一断裂 arg 或 lys 残基的羧基参与形成的肽键，由 题生成的两肽段氨基酸组成 arg 、 pro 和 phe 、 tyr 、 lys 、 ser 、 ala 可得： -pro-arg- 和 -( )-( )-( )-( )-lys ； 综合 2、 3、 4 可得此肽一级结构为： -lys-pro-arg-phe-ser-ala-tyr-6 、一个多肽可复原为两个肽段，它们的序列如

19、下：链1 为 ala-cys-phe-pro-lys-arg-trp-cys-arg- arg- val-cys ；链 2 为 cys-tyr-cys-phe-cys 。当用嗜热菌蛋白酶消化原 多肽具有完整的二硫键时可用以下各肽： 1 ala 、 cys2 、 val ； 2 arg 、 lys 、phe 、pro ； 3 arg2 、cys2 、trp 、 tyr ； 4 cys2 、phe 。试指出在该天然多肽中二硫键的位置。 结构如以下列图 s-sala-cys-phe-pro-lys-arg-trp-cys-arg-arg-val_cyssscys-tyr-cys-phe-cys解：嗜

20、热菌蛋白酶作用专一性较差，根据题中条件： 1消化原多肽得到 ala 、cys2 、val ，说明链 1 在 2位 cys 后及 11 位 val 前发生断裂， 2 位 cys 与 12 位 cys 之间有二硫键； 2由链 1 序列可得该肽段序列为： -phe-pro-lys-arg- ； 3由 1 2可知该肽段 arg2 、cys2 、trp 、tyr 中必有一 cys 来自链 2，另一 cys 为链 1 中 8 位 cys ，即链 1 中 8 位 cys 与 链 2 中的一个 cys 有二硫键；4嗜热菌蛋白酶能水解 tyr 、 phe 等疏水氨基酸残基，故此肽 cys2 、 phe 来自链

21、2，结合 3中含 tyr ，可知 3中形成的 二硫键为链 1 8 位 cys 与链 2 中 3 位 cys 与链 2 中 3 位 cys 之间； 4中 cys2 、 phe 说明链 2 中 1 位 cys 与 5 位 cys 中有二硫 键。 综合 1、 2、 3、 4可得结果。7 、一个十肽的氨基酸分析说明其水解液中存在以下产物：nh4+ asp glu tyr arg met pro lys ser phe并观察以下事实： 1用羧肽酶 a 和 b 处理该十肽无效； 2胰 蛋白酶处理产生两各四肽和游离的 lys ； 3梭菌蛋白酶处理产生 一个四肽和一个六肽； 4 溴化氢处理产生一个八肽和一个二

22、肽， 用单字母符号表示其序列位 np ； 5胰凝乳蛋白酶处理产生两个 三肽和一篇二：生化课后习题答案】学研究的对象和内容是什么？解答：生物化学主要研究 : 1生物机体的化学组成、生物分子的 结构、性质及功能； 2生物分子分解与合成及反响过程中的能量 变化； 3生物遗传信息的储存、传递和表达； 4生物体新陈代谢的调节与控制。2 你已经学过的课程中哪些内容与生物化学有关。提示：生物化学是生命科学的根底学科，注意从不同的角度，去理 解并运用生物化学的知识。3 说明生物分子的元素组成和分子组成有哪些相似的规侓。解答：生物大分子在元素组成上有相似的规侓性。碳、氢、氧、氮、磷、 硫等 6 种是 解答 蛋白

23、质、核酸、糖和脂的主要组成元素。碳原子具 有特殊的成键性质，即碳原子最外层的 4 个电子可使碳与自身形成 共价单键、共价双键和共价三键，碳还可与氮、氧和氢原子形成共 价键。碳与被键合原子形成 4 个共价键的性质 ,使得碳骨架可形成线 性、分支以及环状的多、氧、硫、磷元素构成了生物分子碳骨架上的氨基 nh2 、羟基 oh 、羰基 c 、羧基 cooh 、巯基 sh 、磷酸基 po4 等功能基团。这些功能基团因氮、 硫和磷有着可变的氧化数及 氮和氧有着较强的电负性而与生命物质 的许多关键作用密切相关。 生物大分子在结构上也有着共同的规律性。 生物大分子均由相同类型的构件通过一 定的共价键聚合成链状

24、，其主链骨架呈现周期性重复。构成蛋白质的构件是 20 种根本氨基 酸 氨基酸之间通过肽键相连。肽链具有方向性n端-c端，蛋白质主链骨架呈一肽单位I重复；核酸的构件是核苷酸，核苷酸通过3，5 磷酸二酯键相连，核酸链也具有方向性(5、 3核酸的主链骨架呈一磷酸-核糖或脱氧核糖I重复；构成脂质的构件 是甘油、脂 肪酸和胆碱，其非极性烃长链也是一种重复结构；构成多糖的构件 是单糖，单糖 间通过糖苷键相连，淀粉、纤维素、糖原的糖链骨架 均呈葡萄糖基的重复。二 蛋白质化学1用于测定蛋白质多肽链 n 端、 c 端的常用方法有哪些？根本原理 是什么？解答： 1 n -末端测定法：常采用 2, 4 二硝基氟苯法

25、、 edman 降解法、丹磺酰氯法。 2, 4 二硝基氟苯 (dnfb 或 fdnb) 法：多 肽或蛋白质的游离末端氨基与 2, 4 二硝基氟苯2, 4 dnfb反响 san ger 反响生成 dnp多肽或 dnp 蛋白质。 ， 由于 dnfb 与氨基形成的键对酸水解远比 肽键稳定，因此 dnp 多肽经酸水解后，只有 n 末端氨基 酸为黄 色 dnp 氨基酸衍生物，其余的都是游离氨基酸。 丹磺酰氯 (dns) 法：多肽或蛋白质的游离末端氨基与与丹磺酰氯dnscl 反响 生成 dns 多肽或 dns 蛋白质。 由于 dns 与氨基形成的键对酸水解 远比肽键稳定， 因此 dns 多肽经酸水解后，只

26、有 n 末端氨基酸 为强烈的荧光物质 dns 氨基酸，其余的都 是游离氨基酸。 苯异 硫氰酸脂 pitc 或 edman 降解法：多肽或蛋白质的游离末端氨基 与异硫氰 酸苯酯 pitc 反响 edman 反响 ，生成苯氨基硫甲酰 多肽或蛋白质。在酸性有机溶剂中 加热时， n 末端的 ptc 氨基酸 发生环化， 生成苯乙内酰硫脲的衍生物并从肽链上掉下来， 除去 n 末端氨基酸后剩下的肽链仍然是完整的。 氨肽酶法： 氨肽酶是一类肽链外切酶或叫外肽酶， 能从多肽链的 n 端逐个地向里切。根据不同的反响时间测出酶水解释放的氨基酸种类和数量， 按反响 时间和残基释放量作动力 学曲线，就能知道该蛋白质的

27、n 端残基序 列。2c 末端测定法：常米用肼解法、复原法、羧肽酶法。肼解法:蛋白质或多肽与无水肼加热发生肼解，反响中除 c 端氨基酸以游离 形式存 在外，其他氨基酸都转变为相应的氨基酸酰肼化物。 复原 法： 肽链 c 端氨基酸可用硼氢2 测得一种血红蛋白含铁 0.426% ，计算其最低相对分子质量。一 种纯酶按质量计算含 亮氨酸 1.65% 和异亮氨酸2.48% ，问其最低相对分子质量是多少？因为亮氨酸和异亮氨酸的相对分子质量相等，所以亮氨酸和异亮氨 酸的残基数之比为： 1.65%:2.48%=2:3 ，因此，该酶分子中至少含 有 2 个亮氨酸， 3 个异亮氨酸。 24 何谓蛋白质的变性与沉淀

28、？二者在本质上有何区别？ 解答：蛋 白质变性的概念：天然蛋白质受物理或化学因素的影响后，使其失 去原有的 生物活性，并伴随着物理化学性质的改变，这种作用称为 蛋白质的变性。 变性的本质：分子中各种次级键断裂，使其空间构 象从紧密有序的状态变成松散无序 的状态，一级结构不破坏。 蛋白 质变性后的表现：生物学活性消失；理化性质改变：溶解度下降，黏度增 加，紫外吸收增加，侧链反响增强，对酶的作用敏感， 易被水解。 蛋白质由于带有电荷和水膜，因此在水溶液中形成稳定 的胶体。如果在蛋白质溶液中 参加适当的试剂， 破坏了蛋白质的水 膜或中和了蛋白质的电荷， 那么蛋白质胶体溶液就不稳定 而出现沉淀 现象。沉

29、淀机理：破坏蛋白质生物化学思考题答案】【篇三：大学化学研究的对象和内容是什么？解答：生物化学主要研究 : 1生物机体的化学组成、生物分子的结构、性质及功能； 2生物分子分解与合成及反响过程中的能量变化； 3生物遗传信息的储存、传递和表达； 4生物体新陈代谢的调节与控制。 2你已经学过的课程中哪些内容与生物化学有关。 提示：生物化学是生命科学的根底学科，注意从不同的角度，去理 解并运用生物化学的知识。 3说明生物分子的元素组成和分子组成有哪些相似的规侓。 解答：生物大分子在元素组成上有相似的规侓性。碳、氢、氧、氮、 磷、硫等 6 种是蛋白质、核酸、糖和脂的主要组成元素。碳原子具 有特殊的成键性质

30、，即碳原子最外层的4 个电子可使碳与自身形成共价单键、共价双键和共价三键，碳还可与氮、氧和氢原子形成共 价键。碳与被键合原子形成 4 个共价键的性质 ,使得碳骨架可形成线 性、分支以及环状的多种多性的化合物。特殊的成键性质适应了生 物大分子多样性的需要。氮、氧、硫、磷元素构成了生物分子碳骨架上的氨基一nh2、羟基一oh、羰基c、羧基 一cooh、巯基一sh、磷酸基一po4等功能基团。这些 功能基团因氮、硫和磷有着可变的氧化数及氮和氧有着较强的电负 性而与生命物质的许多关键作用密切相关。生物大分子在结构上也有着共同的规律性。生物大分子均由相同类 型的构件通过一定的共价键聚合成链状，其主链骨架呈现

31、周期性重 复。构成蛋白质的构件是 20 种根本氨基酸。氨基酸之间通过肽键相 连。肽链具有方向性n端fc端，蛋白质主链骨架呈 肽单位重复; 核酸的构件是核苷酸，核苷酸通过3 , 5磷酸二酯键相连，核酸链也 具有方向性5、f 3,核酸的主链骨架呈 磷酸-核糖或脱氧核糖 重复；构成脂质的构件是甘油、脂肪酸和胆碱，其非极性烃长链也 是一种重复结构；构成多糖的构件是单糖，单糖间通过糖苷键相连， 淀粉、纤维素、糖原的糖链骨架均呈葡萄糖基的重复。2 蛋白质化学1用于测定蛋白质多肽链 n 端、 c 端的常用方法有哪些？根本原理 是什么？解答：1n-末端测定法：常采用2,4 二硝基氟苯法、edman 降解法、丹

32、磺酰氯法。 2,4 二硝基氟苯(dnfb或fdnb)法：多肽 或蛋白质的游离末端氨基与 2,4二硝基氟苯 2,4dnfb 反响 sanger 反响，生成 dnp 多肽或 dnp 蛋白质。由于 dnfb 与 氨基形成的键对酸水解远比肽键稳定，因此dnp 多肽经酸水解后，只有 n 末端氨基酸为黄色 dnp 氨基酸衍生物，其余的都是游离氨 基酸。 丹磺酰氯 (dns) 法：多肽或蛋白质的游离末端氨基与与丹磺酰氯 dnscl 反响生成 dns 多肽或 dns 蛋白质。由于 dns 与氨基 形成的键对酸水解远比肽键稳定，因此dns 多肽经酸水解后，只有 n 末端氨基酸为强烈的荧光物质dns 氨基酸，其余

33、的都是游离氨基酸。 苯异硫氰酸脂 pitc 或 edman 降解法：多肽或蛋白质的游离末端氨基与异硫氰酸苯酯 pitc 反响 edman 反响，生成苯氨 基硫甲酰多肽或蛋白质。在酸性有机溶剂中加热时，n 末端的ptc 氨基酸发生环化，生成苯乙内酰硫脲的衍生物并从肽链上掉下 来，除去 n 末端氨基酸后剩下的肽链仍然是完整的。 氨肽酶法：氨肽酶是一类肽链外切酶或叫外肽酶，能从多肽链的 n 端逐个地向里切。根据不同的反响时间测出酶水解释放的氨基酸种 类和数量，按反响时间和残基释放量作动力学曲线，就能知道该蛋 白质的 n 端残基序列。2 c 末端测定法：常采用肼解法、复原法、羧肽酶法 肼解法：蛋白质或

34、多肽与无水肼加热发生肼解，反响中除 c 端氨基 酸以游离形式存 在外，其他氨基酸都转变为相应的氨基酸酰肼化物。羧肽酶法：是一类肽链外切酶，专一的从肽链的 c末端开始逐 个降解，释放出游离的氨基酸。被释放的氨基酸数目与种类随反响 时间的而变化。根据释放的氨基酸量摩尔数与反响时间的关系， 便可以知道该肽链的 c 末端氨基酸序列。2 测得一种血红蛋白含铁 0.426% ，计算其最低相对分子质量。一 种纯酶按质量计算含亮氨酸 1.65% 和异亮氨酸 2.48% ，问其最低相 对分子质量是多少？解答：1血红蛋白： 2酶：因为亮氨酸和异亮氨酸的相对分子质量相等，所以亮氨酸和异亮氨 酸的残基数之比为：1.6

35、5%:2.48%=2:3 ，因此，该酶分子中至少含有 2 个亮氨酸， 3 个 异亮氨酸。3 指出下面 ph 条件下，各蛋白质在电场中向哪个方向移动，即正 极，负极，还是保持原点？ 1胃蛋白酶，在 ph 5.0 ；2血清清蛋白，在 ph 6.0 ；解答：1胃蛋白酶pi 1.0 v环境ph 5.0，带负电荷，向正极移动;2血清清蛋白pi 4.9 v环境ph 6.0，带负电荷，向正极移动；4 何谓蛋白质的变性与沉淀？二者在本质上有何区别？解答：蛋白质变性的概念：天然蛋白质受物理或化学因素的影响后， 使其失去原有的生物活性，并伴随着物理化学性质的改变，这种作 用称为蛋白质的变性。变性的本质：分子中各种

36、次级键断裂，使其空间构象从紧密有序的 状态变成松散无序的状态，一级结构不破坏。蛋白质变性后的表现： ?生物学活性消失；?理化性质改变：溶解度下降，黏度增加，紫外吸收增加，侧链反响增强，对酶的作用 敏感，易被水解。蛋白质由于带有电荷和水膜，因此在水溶液中形成稳定的胶体。如 果在蛋白质溶液中参加适当的试剂，破坏了蛋白质的水膜或中和了 蛋白质的电荷，那么蛋白质胶体溶液就不稳定而出现沉淀现象。沉淀 机理：破坏蛋白质的水化膜，中和外表的净电荷。蛋白质的沉淀可以分为两类：1可逆的沉淀：蛋白质的结构未发生显著的变化，除去引起沉淀 的因素，蛋白质仍能溶于原来的溶剂中，并保持天然性质。如盐析 或低温下的乙醇或丙

37、酮短时间作用蛋白质。2不可逆沉淀：蛋白质分子内部结构发生重大改变，蛋白质变性 而沉淀，不再能溶于原溶剂。如加热引起蛋白质沉淀，与重金属或 某些酸类的反响都属于此类。蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在，并不析出。 因此变性蛋白质并不一定都表现为沉淀，而沉淀的蛋白质也未必都 已经变性。1测定小肽的氨基酸序列。2 鉴定肽的氨基末端残基。3不含二硫键的蛋白质的可逆变性。假设有二硫键存在时还需加 什么试剂？4在芳香族氨基酸残基羧基侧水解肽键。5在甲硫氨酸残基羧基侧水解肽键。6在赖氨酸和精氨酸残基侧水解肽键。解答： 1异硫氰酸苯酯； 2丹黄酰氯； 3脲； ?- 巯基乙醇 复原二硫键； 4胰凝

38、乳蛋白酶； 5cnbr ； 6胰蛋白酶。6 由以下信息求八肽的序列。1酸水解得 ala ， arg ， leu ， met ，phe ，thr ，2val 。2 sanger 试剂处理得 dnp-ala 。3胰蛋白酶处理得 ala ，arg ， thr 和 leu ，met ，phe ，2val 。当 以 sanger 试剂处理时分别得到 dnp-ala 和 dnp-val 。4溴化氰处理得 ala ， arg ，高丝氨酸内酯， thr ，2val ，和 leu， phe ，当用 sanger 试剂处理时，分别得 dnp-ala 和 dnp-leu 。解答：由 2推出 n 末端为 ala ；由

39、 3推出 val 位于 n 端第四， arg 为第三，而 thr 为第二；溴化氰裂解，得出 n 端第六位是 met ， 由于第七位是 leu ，所以 phe 为第八；由 4，第五为 val 。所以 八肽为： ala-thr-arg-val-val-met-leu-phe 。8 当一种四肽与 fdnb 反响后，用 5.7mol/lhcl 水解得到 dnp-val 及其他 3 种氨基酸；当这四肽用胰蛋白酶水解时发现两种碎片段； 其中一片用 libh4 下标复原后再进行酸水解，水解液内有氨基乙 醇和一种在浓硫酸条件下能与乙醛酸反响产生紫红色产物的氨 基酸。试问这四肽的一级结构是由哪几种氨基酸组成的？

40、 解答： 1 四肽与 fdnb 反响后，用 5.7mol/lhcl 水解得到 dnp-val ， 证明 n 端为 val 。2 libh4 复原后再水解，水解液中有氨基乙醇，证明肽的c 端为gly 。3水解液中有在浓 h2so4 条件下能与乙醛酸反响产生紫红色产物的氨基酸，说明此氨基酸为 trp。说明c端为gly - trp4根据胰蛋白酶的专一性，得知 n端片段为val - arg lys丨， 以1、 2、 3结果可知道四肽的顺序： n-val-arglys - trp - gly - c。9概述测定蛋白质一级结构的根本步骤。解答： 1测定蛋白质中氨基酸组成。 2蛋白质的 n 端和 c 端的测

41、定。3应用两种或两种以上不同的水解方法将所要测定的蛋白质肽链 断裂，各自得到一系列大小不同的肽段。 4别离提纯所产生的肽，并测定出它们的序列。5从有重叠结构的各个肽的序列中推断出蛋白质中全部氨基酸排 列顺序。如果蛋白质含有一条以上的肽链，那么需先拆开成单个肽链再按上述 原那么确定其一级结构。如是含二硫键的蛋白质，也必须在测定其氨 基酸排列顺序前，拆开二硫键，使肽链分开，并确定二硫键的位置。 拆开二硫键可用过甲酸氧化，使胱氨酸局部氧化成两个半胱氨磺酸。3 核酸1 .电泳别离四种核苷酸时，通常将缓冲液调到什么ph ?此时它们是向哪极移动？移动的快慢顺序如何 ? 将四种核苷酸吸附于阴 离子交换柱上时

42、，应将溶液调到什么ph ?如果用逐渐降低ph的洗脱液对阴离子交换树脂上的四种核苷酸进行洗脱别离，其洗脱顺 序如何?为什么?解答： 电泳别离 4 种核苷酸时应取 ph3.5 的缓冲液，在该 ph 时， 这 4 种单核苷酸之间所带负电荷差异较大，它们都向正极移动，但 移动的速度不同，依次为： umpgmpampcmp； 应取 ph8.0 ，这样可使核苷酸带较多负电荷，利于吸附于阴离子交换树脂柱。虽然 ph 11.4 时核苷酸带有更多的负电荷，但 ph 过高对别离不利。 当 不考虑树脂的非极性吸附时，根据核苷酸负电荷的多少来决定洗脱 速度，那么洗脱顺序为 cmpamp gmp ump ，但实际上核苷

43、酸和聚苯 乙烯阴离子交换树脂之间存在着非极性吸附，嘌呤碱基的非极性吸 附是嘧啶碱基的 3 倍。静电吸附与非极性吸附共同作用的结果使洗 脱顺序为： cmp amp ump gmp 。2 为什么 dna 不易被碱水解，而 rna 容易被碱水解 ?解答：因为 rna 的核糖上有 2?-oh 基，在碱作用下形成 2?,3?- 环磷 酸酯，继续水解产生 2?-核苷酸和 3?- 核苷酸。 dna 的脱氧核糖上无 2?-oh 基，不能形成碱水解的中间产物，故对碱有一定抗性。3一个双螺旋 dna 分子中有一条链的成分 a = 0.30 ，g = 0.24 ，请推测这一条链上的t和c的情况。互补链的，g , t和c 的情况。解答： t + c = 1-0.30 -0.24 = 0.46 ;t = 0.30 , c = 0.24 ,a + g = 0.46 。4对双链 dna 而言， 假设一条链中 (a + g)/(t + c)= 0.7 ，那么互补 链中和整个 dna 分子中 (a+g)/(t+c) 分别等于多少？ 假设一条链中 (a + t)/(g + c)= 0.7 ，那么互补链中和整个 dna分子中