细菌鉴定中常用的生化实验

1、实验八实验八 细菌鉴定中常用的生化实验细菌鉴定中常用的生化实验一、实验目的一、实验目的l掌握糖发酵试验、淀粉实验、吲哚实验、M.R.及V.P的原理及方法。l掌握以上实验的用途。二、实验原理二、实验原理l淀粉实验l糖发酵实验 发酵后产生的有机酸： 乳酸、醋酸、丙酸等 （溴甲酚紫变色范变色范围围pH5.26.8, pH6.8紫色）紫色） 发酵后产生的气体： 甲烷、氢、二氧化碳等（杜氏小管内有气（杜氏小管内有气泡，产气漂浮）泡，产气漂浮）糖发酵试验现象二、实验原理二、实验原理lM.R.及V.P实验 甲基红试验是用来检测由葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。当细菌代谢糖产生酸时，培养基就会变酸，

2、使加入培养基的甲基红指示剂由橘黄色变为红色。二、实验原理二、实验原理lM.R.及V.P实验 VP试验是用来测定某些细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的能力，如丙酮酸。丙酮酸经缩合、脱羧后生成乙酰甲基甲醇，此化合物在碱性条件下能被空气中的氧气氧化成二乙酰。二乙酰与蛋白胨中精氨酸的胍基作用，生成红色化合物。二、实验原理二、实验原理l吲哚实验 吲哚试验是用来检测吲哚的产生。有些细菌能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸。吲哚与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成红色的玫瑰吲哚。三、实验器材三、实验器材l培养基1、淀粉培养基、淀粉培养基 :500ml（分装于四个三角瓶，包扎，（分装于四个三角

3、瓶，包扎，121126灭菌灭菌30min）蛋白胨 10g 可溶性淀粉 2g氯化钠 5g 琼脂 1520g牛肉膏 5g 水 1000ml pH 7.22、糖发酵培养基：、糖发酵培养基：300ml（分装于（分装于28只试管，包扎，只试管，包扎，112115灭菌灭菌30min）蛋白胨 10g 氯化钠 5g 葡萄糖 10g 水 1000ml pH 7.4 溴甲酚紫溶液（1.6%水溶液）1ml 3、M.R.及及V.P实验实验:600ml（分装于（分装于56只试管，包扎，只试管，包扎，112115灭菌灭菌30min）蛋白胨 5g K2HPO4 5g 葡萄糖 5g 水 1000ml pH 7.27.44、吲

4、哚培养基、吲哚培养基:300ml（分装于（分装于28只试管，包扎，只试管，包扎，121126灭菌灭菌30min）蛋白胨 10g 氯化钠 5g 水 1000ml pH 7.6三、实验器材三、实验器材l菌种1、大肠杆菌2、枯草芽孢杆菌3、未知菌l其他1、试管6组 28个/组（每个试管带一个德汉氏小管）2、平皿2组 16个/组3、三角瓶2组 8个/组四、实验步骤四、实验步骤（一）准备实验器材，配制培养基（一）准备实验器材，配制培养基试验名称被接菌种1被接菌种2被接菌种3对照（管数）1.淀粉水解实验大肠杆菌枯草芽孢杆菌产气肠杆菌1支/每组不接种2.糖发酵大肠杆菌枯草芽孢杆菌产气肠杆菌1支/每组不接种3

5、.MR试验大肠杆菌枯草芽孢杆菌产气肠杆菌1支/每组不接种4.VP试验大肠杆菌枯草芽孢杆菌产气肠杆菌1支/每组不接种5.吲哚试验大肠杆菌枯草芽孢杆菌葡萄球菌1支/每组不接种（三）结果观察（三）结果观察l葡萄糖/乳糖发酵试验，H2S产生试验直接观察。lVP试验：去塞，加40KOH 15滴，振荡，再加等量奈酚，振荡，37振荡培养30min，观察。lMR试验：加甲基红试剂23滴，观察。l吲哚试验：加1ml乙醚（作用是萃取出吲哚）。振荡，静止片刻使分层，沿管壁慢慢加入吲哚试剂10滴，观察。五、实验结果及分析五、实验结果及分析试验名称1.淀粉水解实验2.糖发酵3.MR试验4.VP试验5.吲哚试验大肠杆菌枯草芽孢杆菌产气肠杆菌金黄色葡萄球菌对照六、思考题六、思考题1、糖发酵试验中，所