单核细胞增生李斯特菌检验

1、动物检疫检验技术专业教学资源库单核细胞增生李斯特菌检验单核细胞增生李斯特菌检验 知识目标：知识目标： 理解单核细胞增生李斯特菌的生物学特性。理解单核细胞增生李斯特菌的生物学特性。 了解单核细胞增生李斯特菌的致病性。了解单核细胞增生李斯特菌的致病性。 掌握单核细胞增生李斯特菌标准检验方法。掌握单核细胞增生李斯特菌标准检验方法。 能力目标：能力目标： 会制备单核细胞增生李斯特菌检验用培养基。会制备单核细胞增生李斯特菌检验用培养基。 会对单核细胞增生李斯特菌进行检验。会对单核细胞增生李斯特菌进行检验。 动物检疫检验技术专业教学资源库单核细胞增生李斯特菌检验单核细胞增生李斯特菌检验n 病原性病原性:

2、:单核细胞增生李斯特氏菌是一种人畜共患病的病原单核细胞增生李斯特氏菌是一种人畜共患病的病原菌。它能引起人畜的李氏菌病，感染后主要表现为败血症、菌。它能引起人畜的李氏菌病，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。脑膜炎和单核细胞增多。n 存在范围存在范围: :它广泛存在于自然界中，不易被冻融，能耐受较它广泛存在于自然界中，不易被冻融，能耐受较高的渗透压，在土壤、地表水、污水、废水、植物、青储饲高的渗透压，在土壤、地表水、污水、废水、植物、青储饲料、烂菜中均有该菌存在，所以动物很容易食入该菌，并通料、烂菜中均有该菌存在，所以动物很容易食入该菌，并通过口腔过口腔- -粪便的途径进行传播。粪便的

3、途径进行传播。单核细胞增生性李斯特菌单核细胞增生性李斯特菌动物检疫检验技术专业教学资源库单核细胞增生李斯特菌检验单核细胞增生李斯特菌检验n 传播媒介传播媒介: :人主要通过食入软奶酪、未充分加热的鸡肉、未人主要通过食入软奶酪、未充分加热的鸡肉、未再次加热的热狗、鲜牛奶、巴氏消毒奶、冰激凌、生牛排、再次加热的热狗、鲜牛奶、巴氏消毒奶、冰激凌、生牛排、卷心菜色拉、芹菜、西红柿、法式馅饼、冻猪舌等而感染，卷心菜色拉、芹菜、西红柿、法式馅饼、冻猪舌等而感染，约占约占85%90%85%90%的病例是由被污染的食品引起的。的病例是由被污染的食品引起的。n 抵抗力抵抗力: :较强，在土壤、粪便、青储饲料和干

4、草内能长期存较强，在土壤、粪便、青储饲料和干草内能长期存活，对碱和盐抵抗力强，活，对碱和盐抵抗力强，60607070经经5 520min20min可杀死，可杀死，70%70%酒精酒精5min5min、2.5%2.5%石炭酸、石炭酸、2.5%2.5%氢氧化钠、氢氧化钠、2.5%2.5%福尔马林福尔马林20min20min可杀死此菌。该菌对青霉素、氨苄青毒素、四环素、可杀死此菌。该菌对青霉素、氨苄青毒素、四环素、磺胺均敏感。磺胺均敏感。动物检疫检验技术专业教学资源库单核细胞增生李斯特菌检验单核细胞增生李斯特菌检验n形态及染色：形态及染色：该菌为革兰氏阳性短该菌为革兰氏阳性短杆菌，大小约杆菌，大小约

5、0.5um0.5um1.0um1.0um2.0um2.0um，直或稍弯，两端钝圆，常呈直或稍弯，两端钝圆，常呈v v字型排字型排列，偶有球状、双球状，兼性厌氧、列，偶有球状、双球状，兼性厌氧、无芽胞，一般不形成荚膜，但在营无芽胞，一般不形成荚膜，但在营养丰富的环境中可形成荚膜，在陈养丰富的环境中可形成荚膜，在陈旧培养基中的菌体可呈丝状及革兰旧培养基中的菌体可呈丝状及革兰氏阴性，该菌有氏阴性，该菌有4 4根周毛和根周毛和1 1根端毛，根端毛，但周毛易脱落。但周毛易脱落。一、生物学特性一、生物学特性电镜下的李特氏菌动物检疫检验技术专业教学资源库单核细胞增生李斯特菌检验单核细胞增生李斯特菌检验n培养

6、特性：培养特性：n有动力，可见倒立伞状生长有动力，可见倒立伞状生长n肉汤培养物在显微镜下可见翻跟斗运动。肉汤培养物在显微镜下可见翻跟斗运动。n固体培养基上，菌落初始很小，透明，边缘整齐，呈露滴状，但随着菌落固体培养基上，菌落初始很小，透明，边缘整齐，呈露滴状，但随着菌落的增大，变得不透明。的增大，变得不透明。n血平板上，菌落通常也不大，灰白色，刺种血平板培养后可产生窄小的血平板上，菌落通常也不大，灰白色，刺种血平板培养后可产生窄小的-溶血环。溶血环。n0.6%0.6%酵母浸膏胰酪大豆琼脂（酵母浸膏胰酪大豆琼脂（TSAYETSAYE）和改良）和改良MC BrideMC Bride（MMAMMA）

7、琼脂上，用）琼脂上，用4545角入射光照菌落，通过解剖镜垂直观察，菌落为蓝色、灰色或蓝灰色。角入射光照菌落，通过解剖镜垂直观察，菌落为蓝色、灰色或蓝灰色。动物检疫检验技术专业教学资源库单核细胞增生李斯特菌检验单核细胞增生李斯特菌检验n 生化特征生化特征n 该菌该菌过氧化氢酶阳性过氧化氢酶阳性n 发酵发酵多种糖类，产酸不产气，如发酵多种糖类，产酸不产气，如发酵葡萄糖葡萄糖、乳糖、水杨素、乳糖、水杨素、麦芽糖、鼠李糖麦芽糖、鼠李糖、七叶苷七叶苷、蔗糖（迟发酵）、山梨醇、海、蔗糖（迟发酵）、山梨醇、海藻糖、果糖，不发酵木糖、藻糖、果糖，不发酵木糖、甘露醇甘露醇、肌醇、阿拉伯糖、侧金、肌醇、阿拉伯糖、

8、侧金盏花醇、棉子糖、卫矛醇和纤维二糖。盏花醇、棉子糖、卫矛醇和纤维二糖。n 不利用枸椽酸盐，不利用枸椽酸盐，40%40%胆汁不溶解，吲哚、硫化氢、尿素、明胆汁不溶解，吲哚、硫化氢、尿素、明胶液化、硝酸盐还原、赖氨酸、鸟氨酸均阴性。胶液化、硝酸盐还原、赖氨酸、鸟氨酸均阴性。n V-PV-P、甲基红试验、甲基红试验和精氨酸水解和精氨酸水解阳性。阳性。动物检疫检验技术专业教学资源库单核细胞增生李斯特菌检验单核细胞增生李斯特菌检验n血清学特性血清学特性 n根据菌体（根据菌体（O O）抗原的鞭毛（）抗原的鞭毛（H H）抗原，将单增李氏菌分成）抗原，将单增李氏菌分成1313个血清型，分别是个血清型，分别是

9、1/2a1/2a、1/2b1/2b、1/2c1/2c、3a3a、3b3b、3c3c、4a4a、4b4b、4ab4ab、4c4c、4d4d、4e4e、和、和“7”137”13个血清型。致病菌株的血清型一个血清型。致病菌株的血清型一般为般为1/2b1/2b、1/2c1/2c、3a3a、3b3b、3c3c、4a4a、1/2a1/2a和和4b4b，后两型尤多。，后两型尤多。 动物检疫检验技术专业教学资源库单核细胞增生李斯特菌检验单核细胞增生李斯特菌检验二、致病性二、致病性n 单增李氏菌是一种细胞内寄生菌单增李氏菌是一种细胞内寄生菌，宿主对它的清除主要靠细胞免疫功能。，宿主对它的清除主要靠细胞免疫功能。

10、n 易感人群易感人群: :新生儿、孕妇及新生儿、孕妇及4040岁以上的成人，此外，酗酒者、免疫系统损伤或缺岁以上的成人，此外，酗酒者、免疫系统损伤或缺陷者、接受免疫抑制剂和皮质激素治疗的患者及器官移植者也易被该菌感染。陷者、接受免疫抑制剂和皮质激素治疗的患者及器官移植者也易被该菌感染。n 传播途径传播途径: :眼及破损皮肤、粘膜进入人体内而造成感染，孕妇感染后通过胎盘或眼及破损皮肤、粘膜进入人体内而造成感染，孕妇感染后通过胎盘或产道感染胎儿或新生儿，栖居于阴道、子宫颈的该菌也引起感染，性接解也是本产道感染胎儿或新生儿，栖居于阴道、子宫颈的该菌也引起感染，性接解也是本病传播的可能途径，且有上升趋

11、势。病传播的可能途径，且有上升趋势。n 临床表现，临床表现，健康成人个体出现轻微类似流感症状，新生儿、孕妇、免疫缺陷患者健康成人个体出现轻微类似流感症状，新生儿、孕妇、免疫缺陷患者等表现为呼吸急促、呕吐、出血性皮疹、化脓性结膜炎、发热、抽搐、昏迷、自等表现为呼吸急促、呕吐、出血性皮疹、化脓性结膜炎、发热、抽搐、昏迷、自然流产、脑膜炎、败血症直至死亡。然流产、脑膜炎、败血症直至死亡。动物检疫检验技术专业教学资源库单核细胞增生李斯特菌检验单核细胞增生李斯特菌检验n 单单增李氏菌的抗原结构与毒力无关，致病性与毒力机理如下：增李氏菌的抗原结构与毒力无关，致病性与毒力机理如下：n 寄生物介导的细胞内增生

12、寄生物介导的细胞内增生，附着及进入肠细胞与巨噬细胞。，附着及进入肠细胞与巨噬细胞。n 抗活化的巨噬细胞，抗活化的巨噬细胞，单增李氏菌有细菌性过氧化物歧化酶，使单增李氏菌有细菌性过氧化物歧化酶，使它能抗活化巨噬细胞内的过氧化物（为杀菌的毒性游离基团）它能抗活化巨噬细胞内的过氧化物（为杀菌的毒性游离基团）分解。分解。n 溶血素，溶血素，即单增李氏菌素即单增李氏菌素O O，可以从培养物上清液中获得，活化，可以从培养物上清液中获得，活化的细胞溶血素，有的细胞溶血素，有和和两种，为毒力因子。两种，为毒力因子。动物检疫检验技术专业教学资源库单核细胞增生李斯特菌检验单核细胞增生李斯特菌检验三、检验方法三、检

13、验方法n 食品中单核细胞增生李斯特氏菌的检验应按食品中单核细胞增生李斯特氏菌的检验应按食品安全国食品安全国家标准家标准 食品微生物检验食品微生物检验单核细胞增生李斯特氏菌的检验单核细胞增生李斯特氏菌的检验方法方法 GB4789.30-2010 GB4789.30-2010 进行。进行。动物检疫检验技术专业教学资源库单核细胞增生李斯特菌检验单核细胞增生李斯特菌检验检验程序检验程序分离培养初筛鉴定增菌培养结果报告生化自动化鉴定动物检疫检验技术专业教学资源库单核细胞增生李斯特菌检验单核细胞增生李斯特菌检验n 增菌第一步增菌第一步n 均质：以无菌操作取样品均质：以无菌操作取样品25g25g（mLmL）

14、加入到含有）加入到含有225mL LB1225mL LB1增菌液的均质增菌液的均质袋中，在拍击式均质器上连续均质袋中，在拍击式均质器上连续均质1min1min2min2min；或放入盛有；或放入盛有225mL LB1225mL LB1增菌液的均质杯中，增菌液的均质杯中，8000r/min8000r/min10000 r/min10000 r/min均质均质1min1min2min2min。n 培养：培养：303011，24h24h。n 增菌第二步增菌第二步n 移取移取0.1mL0.1mL，转种于，转种于10mL LB210mL LB2增菌液内增菌液内n 培养：培养：303011，18h18h2

15、4h24h。 1.1.增菌增菌动物检疫检验技术专业教学资源库单核细胞增生李斯特菌检验单核细胞增生李斯特菌检验李氏增菌肉汤李氏增菌肉汤（LBLB）n 用用 途：途：用于李斯特氏菌的选择性增用于李斯特氏菌的选择性增菌培养。菌培养。n 原原 理：理： 胰胨、多价胨和酵母膏粉胰胨、多价胨和酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子；李提供氮源、维生素和生长因子；李斯特氏菌可耐受较高含量的氯化钠斯特氏菌可耐受较高含量的氯化钠，同时对肠球菌起抑制作用；磷酸，同时对肠球菌起抑制作用；磷酸二氢钾和磷酸氢二钠为缓冲剂；七二氢钾和磷酸氢二钠为缓冲剂；七叶苷为可发酵的糖类；萘啶酮酸和叶苷为可发酵的糖类；萘啶酮酸和吖啶黄为选

16、择性抑菌剂。吖啶黄为选择性抑菌剂。 动物检疫检验技术专业教学资源库单核细胞增生李斯特菌检验单核细胞增生李斯特菌检验2.2.分离培养分离培养n 取取LB2LB2二次增菌液划线接种于二次增菌液划线接种于 PALCAMPALCAM琼脂平板琼脂平板 李斯特氏菌显色培养基上李斯特氏菌显色培养基上 培养：培养：363611，24h24h48h48h，观察各个平板上生长的菌，观察各个平板上生长的菌落特征。落特征。动物检疫检验技术专业教学资源库单核细胞增生李斯特菌检验单核细胞增生李斯特菌检验PALCAMPALCAM琼脂平板琼脂平板n 用用 途：途：用于单增李氏菌选择性分离用于单增李氏菌选择性分离n 原原 理：

17、理：蛋白胨提供生长必须的碳氮源；酵蛋白胨提供生长必须的碳氮源；酵母膏粉和淀粉提供碳氮源、维生素和生长母膏粉和淀粉提供碳氮源、维生素和生长因子；氯化钠可维持均衡的渗透压；葡萄因子；氯化钠可维持均衡的渗透压；葡萄糖提供碳源；李斯特氏菌水解七叶苷与铁糖提供碳源；李斯特氏菌水解七叶苷与铁离子反应形成黑色的离子反应形成黑色的6,7-6,7-二羟基香豆素；二羟基香豆素；甘露醇是可发酵的糖，酚红是甘露醇是可发酵的糖，酚红是pHpH指示剂；指示剂；氯化锂和其它的抗生素能抑制革兰氏阴性氯化锂和其它的抗生素能抑制革兰氏阴性菌和大多数革兰氏阳性菌；琼脂是培养基菌和大多数革兰氏阳性菌；琼脂是培养基的凝固剂。的凝固剂。

18、动物检疫检验技术专业教学资源库单核细胞增生李斯特菌检验单核细胞增生李斯特菌检验n 典型菌落：典型菌落：小的圆形灰绿小的圆形灰绿色菌落，周围有棕黑色水色菌落，周围有棕黑色水解圈，有些菌落有黑色凹解圈，有些菌落有黑色凹陷。陷。单增李氏菌单增李氏菌PALCAMPALCAM琼脂平板菌落特征琼脂平板菌落特征动物检疫检验技术专业教学资源库单核细胞增生李斯特菌检验单核细胞增生李斯特菌检验单增李氏菌显色培养基菌落特征单增李氏菌显色培养基菌落特征动物检疫检验技术专业教学资源库单核细胞增生李斯特菌检验单核细胞增生李斯特菌检验n 试验步骤：试验步骤：自选择性琼脂平板上分别挑取自选择性琼脂平板上分别挑取5 5个以上典

19、型或可疑菌落，个以上典型或可疑菌落，分别接种在分别接种在n 木糖发酵管木糖发酵管n 鼠李糖发酵管鼠李糖发酵管n 培养：培养：363611，24h24hn TSA-YETSA-YE平板上划线纯化平板上划线纯化n 培养：培养：303011，24h24h48h48hn 观察结果：选择木糖阴性、鼠李糖阳性的纯培养物继续进行鉴定。观察结果：选择木糖阴性、鼠李糖阳性的纯培养物继续进行鉴定。 3.3.初筛初筛动物检疫检验技术专业教学资源库单核细胞增生李斯特菌检验单核细胞增生李斯特菌检验n 试验原理：试验原理：有些细菌可以利用木糖产酸，使有些细菌可以利用木糖产酸，使pHpH降低，指示降低，指示剂颜色发生变化。

20、溴甲酚紫指示剂的变色范围是剂颜色发生变化。溴甲酚紫指示剂的变色范围是PH5.2-6.8PH5.2-6.8，有黄色变为紫色。，有黄色变为紫色。n 试验方法：试验方法：n 自选择性琼脂平板上分别挑取自选择性琼脂平板上分别挑取5 5 个以上典型或可疑菌落，个以上典型或可疑菌落，接种木糖发酵管，接种木糖发酵管，363611培养培养24h24h。n 观察结果。观察结果。3.3.初筛初筛- -木糖生化试验木糖生化试验动物检疫检验技术专业教学资源库单核细胞增生李斯特菌检验单核细胞增生李斯特菌检验木糖试验结果：木糖试验结果：单增李氏菌不利用木糖，阴性。单增李氏菌不利用木糖，阴性。n 培养基颜色有紫色变培养基颜

21、色有紫色变成黄色为阳性。成黄色为阳性。n 不变色为阴性。不变色为阴性。阴性（紫）、阳性（黄）阴性（紫）、阳性（黄）动物检疫检验技术专业教学资源库单核细胞增生李斯特菌检验单核细胞增生李斯特菌检验n 试验原理：试验原理：有些细菌可以利用鼠李糖产酸，使有些细菌可以利用鼠李糖产酸，使pHpH降低，指降低，指示剂颜色发生变化。溴甲酚紫指示剂的变色范围是示剂颜色发生变化。溴甲酚紫指示剂的变色范围是PH5.2-PH5.2-6.86.8，有黄色变为紫色。，有黄色变为紫色。n 试验方法：试验方法：n 自选择性琼脂平板上分别挑取自选择性琼脂平板上分别挑取5 5 个以上典型或可疑菌落，个以上典型或可疑菌落，接种鼠李

22、糖发酵管，接种鼠李糖发酵管，363611培养培养24h24h。n 观察结果。观察结果。3.3.初筛初筛- -鼠李糖生化试验鼠李糖生化试验动物检疫检验技术专业教学资源库单核细胞增生李斯特菌检验单核细胞增生李斯特菌检验鼠李糖试验结果：鼠李糖试验结果：单增李氏菌利用鼠李糖，阳性。单增李氏菌利用鼠李糖，阳性。n 培养基颜色有紫色变培养基颜色有紫色变成黄色为阳性。成黄色为阳性。n 不变色为阴性不变色为阴性。阴性（紫）、阳性（黄）阴性（紫）、阳性（黄）动物检疫检验技术专业教学资源库单核细胞增生李斯特菌检验单核细胞增生李斯特菌检验n 试验原理：试验原理：可促进单核增生李斯特氏菌的生长。可促进单核增生李斯特氏

23、菌的生长。n 试验方法：试验方法：n 自选择性琼脂平板上分别挑取自选择性琼脂平板上分别挑取5 5个以上典型或可疑菌落，个以上典型或可疑菌落，接种接种TSA-YE TSA-YE 平板上划线纯化，于平板上划线纯化，于30 30 1 1 培养培养24 h24 h48 h48 h。n 观察结果。观察结果。3.3.初筛初筛- -TSA-YETSA-YE平板上划线纯化平板上划线纯化动物检疫检验技术专业教学资源库单核细胞增生李斯特菌检验单核细胞增生李斯特菌检验胰酪胨大豆酵母浸膏琼脂胰酪胨大豆酵母浸膏琼脂(TSA-YE)(TSA-YE)平板平板n 用用 途：途：用于单增李氏菌分纯用于单增李氏菌分纯、培养。、培

24、养。n 原原 理：理：胰蛋白胨、多价胨和胰蛋白胨、多价胨和酵母浸粉提供氮源、维生素酵母浸粉提供氮源、维生素和生长因子；氯化钠维持均和生长因子；氯化钠维持均衡的渗透压；葡萄糖提供碳衡的渗透压；葡萄糖提供碳源；磷酸氢二钾为缓冲剂。源；磷酸氢二钾为缓冲剂。 动物检疫检验技术专业教学资源库单核细胞增生李斯特菌检验单核细胞增生李斯特菌检验n 典型菌落：典型菌落：灰白色菌落。灰白色菌落。胰酪胨大豆酵母浸膏琼脂胰酪胨大豆酵母浸膏琼脂(TSA-YE)(TSA-YE)平板菌落特征平板菌落特征n 不典型菌落：不典型菌落：淡蓝色或蓝淡蓝色或蓝灰色灰色菌落。菌落。动物检疫检验技术专业教学资源库单核细胞增生李斯特菌检验

25、单核细胞增生李斯特菌检验n 观察结果：观察结果：选择木糖阴性、鼠李糖阳性的纯培养物继续进选择木糖阴性、鼠李糖阳性的纯培养物继续进行鉴定。行鉴定。 3.3.初筛初筛动物检疫检验技术专业教学资源库单核细胞增生李斯特菌检验单核细胞增生李斯特菌检验n 染色镜检：染色镜检：李斯特氏菌为革兰氏阳性短杆菌，大小为（李斯特氏菌为革兰氏阳性短杆菌，大小为（0.4m0.4m0.5m0.5m）（0.5m0.5m2.0m2.0m）；用生理盐水制成菌悬液）；用生理盐水制成菌悬液，在油镜或相差显微镜下观察，该菌出现轻微旋转或翻滚，在油镜或相差显微镜下观察，该菌出现轻微旋转或翻滚样的运动。样的运动。 4.4.鉴定鉴定- -

26、染色镜检染色镜检动物检疫检验技术专业教学资源库单核细胞增生李斯特菌检验单核细胞增生李斯特菌检验n 试验原理：试验原理：有鞭毛的细菌可以有鞭毛的细菌可以运动。运动。 n 试验方法：试验方法：n 直接挑取出培养物接种半固体直接挑取出培养物接种半固体培养基，培养基，363611培养培养24h24h。n 观察结果：李斯特氏菌有动力观察结果：李斯特氏菌有动力，呈伞状生长或月牙状生长。，呈伞状生长或月牙状生长。 4.4.鉴定鉴定- -动力试验动力试验动物检疫检验技术专业教学资源库单核细胞增生李斯特菌检验单核细胞增生李斯特菌检验n 试验过程：试验过程：挑取纯培养的单个可疑菌落，挑取纯培养的单个可疑菌落，n

27、过氧化氢酶试验过氧化氢酶试验n 过氧化氢酶阳性过氧化氢酶阳性反应的菌落继续进行反应的菌落继续进行 糖发酵试验糖发酵试验 MR-VPMR-VP试验试验4.4.鉴定鉴定- -生化鉴定生化鉴定动物检疫检验技术专业教学资源库单核细胞增生李斯特菌检验单核细胞增生李斯特菌检验n 试验原理：试验原理：某些细菌能产生触酶，触酶能使过氧化氢快速某些细菌能产生触酶，触酶能使过氧化氢快速分解成水和氧气。分解成水和氧气。n 试验方法：试验方法：n 挑取纯培养物挑取纯培养物于一无菌管中，加于一无菌管中，加2mL2mL新配制的新配制的3%3%过氧化氢溶过氧化氢溶液，立刻观察。液，立刻观察。n 观察结果。观察结果。（1 1

28、）过氧化氢酶试验）过氧化氢酶试验动物检疫检验技术专业教学资源库单核细胞增生李斯特菌检验单核细胞增生李斯特菌检验过氧化氢酶试验结果过氧化氢酶试验结果: :李氏特菌产生过氧化氢酶，李氏特菌产生过氧化氢酶，阳性。阳性。n 液面出现气泡者为阳性液面出现气泡者为阳性反应。反应。n 无气泡者为阴性。无气泡者为阴性。动物检疫检验技术专业教学资源库单核细胞增生李斯特菌检验单核细胞增生李斯特菌检验n 试验原理：试验原理：有些细菌可以利用糖产酸，使有些细菌可以利用糖产酸，使pHpH降低，指示剂降低，指示剂颜色发生变化。溴甲酚紫指示剂的变色范围是颜色发生变化。溴甲酚紫指示剂的变色范围是PH5.2-6.8PH5.2-

29、6.8，有黄色变为紫色。有黄色变为紫色。n 试验方法：试验方法：n 挑取纯培养物，接种葡萄糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖、甘露挑取纯培养物，接种葡萄糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖、甘露醇发酵管，醇发酵管，363611培养培养242448h48h。n 观察结果。观察结果。（2 2）糖发酵试验）糖发酵试验动物检疫检验技术专业教学资源库单核细胞增生李斯特菌检验单核细胞增生李斯特菌检验糖发酵结果：糖发酵结果：单增李氏菌利用葡萄糖、麦芽糖、甘单增李氏菌利用葡萄糖、麦芽糖、甘露醇，阳性。露醇，阳性。n 培养基颜色有紫色变培养基颜色有紫色变成黄色为阳性。成黄色为阳性。n 不变色为阴性。不变色为阴性。阴性（紫）、阳性（黄）阴

30、性（紫）、阳性（黄）动物检疫检验技术专业教学资源库单核细胞增生李斯特菌检验单核细胞增生李斯特菌检验(3)MR(3)MR试验试验n 试验原理：试验原理：某些细菌能分解葡萄糖产生大量酸性产物，使甲某些细菌能分解葡萄糖产生大量酸性产物，使甲基红指示剂变红。甲基红指示剂的变色范围是基红指示剂变红。甲基红指示剂的变色范围是PH4.4-6.2PH4.4-6.2。n 试验方法：试验方法：n 挑取纯培养物接种葡萄糖蛋白胨水，挑取纯培养物接种葡萄糖蛋白胨水，363611培养培养242448h48h。n 向向MRMR培养基内滴加甲基红试剂，立即观察结果。培养基内滴加甲基红试剂，立即观察结果。动物检疫检验技术专业教

31、学资源库单核细胞增生李斯特菌检验单核细胞增生李斯特菌检验MRMR试验结果：试验结果：单增李氏菌单增李氏菌MRMR阳性。阳性。n 液体呈红色者为阳性液体呈红色者为阳性n 黄色者为阴性黄色者为阴性n 橙色者为可疑橙色者为可疑-+动物检疫检验技术专业教学资源库单核细胞增生李斯特菌检验单核细胞增生李斯特菌检验(4)VP(4)VP试验试验n 试验原理：试验原理：某些细菌能分解葡萄糖产生乙酰甲基甲醇，后者某些细菌能分解葡萄糖产生乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中氧氧化为二乙酰（丁二酮），二乙在强碱环境下，被空气中氧氧化为二乙酰（丁二酮），二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物。酰与蛋白胨中的胍基生成红

32、色化合物。 n 试验方法：试验方法：n 挑取纯培养物接种葡萄糖蛋白胨水，挑取纯培养物接种葡萄糖蛋白胨水，363611培养培养242448h48h。n 向向VPVP培养基中加培养基中加6 6-萘酚萘酚- -乙醇溶液乙醇溶液0.5mL0.5mL，4040氢氧化钾氢氧化钾溶液溶液0.2mL0.2mL，充分振摇试管，观察结果。，充分振摇试管，观察结果。动物检疫检验技术专业教学资源库单核细胞增生李斯特菌检验单核细胞增生李斯特菌检验VPVP试验结果：试验结果：单增李氏菌单增李氏菌VPVP阳性。阳性。n 液体呈红色者为阳性液体呈红色者为阳性n 黄色者为阴性黄色者为阴性+接种接种前前动物检疫检验技术专业教学资源库单核细胞增生李斯特菌检验单核细胞增生李斯特菌检验n 试验步骤：试验步骤：n 将羊血琼脂平板底面划分为将羊血琼脂平板底面划分为 20 20 个个25 25 个小格个小格n 挑取纯培养的单个可疑菌落刺种到血平板上，每格刺种一挑取纯培养的单个可疑菌落刺种到血平板上，每格刺种一个菌落个菌落n 刺种阳性对照菌刺种阳性对照菌( (单增