土壤中分离尿素的细菌的分离与计数

1、 一、背景知识一、背景知识测定微生物数量的方法：测定微生物数量的方法： 直接计数法：最常用的直接计数法：最常用的显微镜直接计数法显微镜直接计数法。 先将待测样品制成悬液，然后取一定量的悬先将待测样品制成悬液，然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数。根据在显微镜下液放在显微镜下进行计数。根据在显微镜下观察到的微生物数目来计算出单位体积内的观察到的微生物数目来计算出单位体积内的微生物总数。微生物总数。优点：设备简单、能观察微生物的形态特征。优点：设备简单、能观察微生物的形态特征。缺点：难以计数微小的细菌。缺点：难以计数微小的细菌。 一般用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的一般用于纯培养悬浮液中各种单

2、细胞菌体的计数。计数。 间接计数法：最常用间接计数法：最常用稀释平板计数法稀释平板计数法。 含菌数较少的情形下，也可以完成计数。含菌数较少的情形下，也可以完成计数。实践案例实践案例土壤中好气性细菌的计数土壤中好气性细菌的计数测定土壤中的含菌量可以作为判定土壤肥力的一个测定土壤中的含菌量可以作为判定土壤肥力的一个重要指标。重要指标。活动程序：活动程序： 1、制备土壤稀释液、制备土壤稀释液 取土壤表层土样取土壤表层土样 称取称取1g土样，放入土样，放入99ml无菌水锥形瓶中，振荡无菌水锥形瓶中，振荡20min，即成，即成100倍稀释液。倍稀释液。 移液、稀释移液、稀释 1ml无菌移液管吸取无菌移液

3、管吸取100倍稀释液倍稀释液0.5，移入装有，移入装有4.5ml无菌水试管中，配制成无菌水试管中，配制成1000倍稀释液。倍稀释液。 用同样方法可制成用同样方法可制成 的系列稀释菌液。的系列稀释菌液。 5104102、取样及倒平板、取样及倒平板培养皿编号：培养皿编号： 各编号三个培养皿。各编号三个培养皿。培养皿中加入土壤稀释液：用移液管按照编号分培养皿中加入土壤稀释液：用移液管按照编号分别加入不同浓度土壤稀释液各别加入不同浓度土壤稀释液各0. 2ml。每个培养皿加入牛肉膏蛋白胨琼脂培养基每个培养皿加入牛肉膏蛋白胨琼脂培养基15ml，转动培养皿，使土壤稀释液与培养基混合均匀。转动培养皿，使土壤稀

4、释液与培养基混合均匀。410510610 3、培养培养 将平板冷却倒置放入将平板冷却倒置放入2830摄氏度的恒温培养箱中培养。摄氏度的恒温培养箱中培养。 4、观察记录观察记录 每个培养皿内菌落数不能太多或太少。细菌、放线菌每个培养皿每个培养皿内菌落数不能太多或太少。细菌、放线菌每个培养皿30300个菌落为宜，霉菌个菌落为宜，霉菌10100个为宜。个为宜。 练一练练一练 测定土壤中细菌数量一般选测定土壤中细菌数量一般选 倍的稀释液进行平板培养；倍的稀释液进行平板培养；而真菌的数量，一般选用而真菌的数量，一般选用100、1000、 倍稀释，其原因是（倍稀释，其原因是（ ） A 细菌个体小，真菌个体

5、大细菌个体小，真菌个体大 B 细菌易稀释真菌不易稀释细菌易稀释真菌不易稀释 C 细菌在土壤中含量比真菌高细菌在土壤中含量比真菌高 D 随机的，没有原因随机的，没有原因 510610410410每克土壤样品菌数每克土壤样品菌数= 某稀释倍数的菌落平均数某稀释倍数的菌落平均数稀释倍数稀释倍数细菌细菌 培养时所用的稀释液体积培养时所用的稀释液体积 练一练练一练 某同学在稀释倍数为某同学在稀释倍数为 的培养基中测得平板上菌落数的平均数的培养基中测得平板上菌落数的平均数 为为234，那么每克样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体，那么每克样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体 积为积为0.1ml

6、）( ) A.2.34 B.2.34 C.234 D.23.4 910810610 练一练练一练用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目，其结果与实际值相比（ ） A.比实际值高 B.比实际值低 C.和实际值一致 D.比实际值可能高也可能低探究活动测定特定样品中的微生物数量1.检测天然水源中细菌总数和大肠菌群数人的粪便中含有致病菌，但是因数量少而不易检测。大肠杆菌是生存于人体肠道中的正常菌群，且能够与致病菌混杂生长。如果食品和饮用水中出现大肠杆菌，就意味着食物可能被粪便污染而带上致病菌。因而常将大肠杆菌数量作为食品卫生的检测指标之一。大肠菌群是指在37摄氏度条件下，24小时内能发酵乳糖，产酸产气的一类兼性厌氧型革兰氏阴性无芽孢杆菌的总称。大肠菌群数的检测，使用乳糖胆盐蛋白胨培养基、EMB培养基、乳糖发酵管。EMB培养基与大肠杆菌代谢产物产生紫色带金属光边的菌落2.土壤中分解尿素细菌的计数有些细菌含有尿素分解酶，能将尿素琼脂培养基中的尿素分解生成氨，氨溶于水变成氢氧化铵，导致培养基变成碱性，使酚红指示剂呈现红色。下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是( ) A. KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4.7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂、水 B. KH2PO4