从土壤中分离纯化微生物

1、微生物分离与观察微生物分离与观察实验目的和内容n熟悉常用微生物培养基名称;n掌握微生物的分离,接种技术;n用平板划线法和稀释法分离微生物;n认识微生物存在的普遍性;实验原理n从土壤中分离纯化微生物n土壤中混杂着大量的微生物,从里面分离,得到只含有这一种微生物的纯培养;n根据某微生物对营养,温度,氧气等条件要求不同而供给它适宜的培养条件,或加入某种抑制剂造成只利于该菌生长,而抑制其他菌生长;n用稀释涂布平板法或稀释后平板划线分离,纯化;实验仪器,材料和用具n实验材料:n菌源:土样10g;n培养基:n牛肉膏蛋白胨培养基;n实验仪器:n取液器(5000 ul, 1000ul, 200ul 个一支);

2、n培养箱,摇床实验仪器,材料和用具n实验试剂:n1N NaOH, 1N HCl, n0.9% 无菌生理盐水;n250ml三角瓶中99ml,每瓶加20粒玻璃珠;n250ml三角瓶中50ml,作10倍稀释用;实验仪器,材料和用具n实验用具:n平皿35个;n无菌有帽试管7只;n无菌涂棒2根;n无菌5000ul, 1000ul, 200ul 吸头各3个;n记号笔,酒精灯;n试管架;实验步骤周围环境中微生物的观察n在牛肉蛋白胨平板上作如下实验：n分别用未洗过的手指头,用肥皂洗过的手指头(不用毛巾擦)在平板是涂抹（用力一致）;n用正在使用的毛巾,旧纸币在培养基上拖动;n放置一根头发;n用无菌接种环分别沾一

3、环自来水和河水在平板 上划线；n用无菌牙签取一点牙垢在培养基上划线；n打开培养皿置实验台上（空气中）10min;n按无菌操作要求在酒精灯火焰边打开皿盖1min.n对着培养皿上的培养基咳嗽。n稍稍打开嘴唇压在培养基上;n以上用报纸包好倒置350C培养箱里培养48小时观察结果;实验步骤从土壤中分离微生物n采土样:n选择肥沃土壤,去表层土,挖520cm深度的土壤数10g,装入已灭菌的牛皮纸袋,封好袋口,带回实验室;n倒平板;实验步骤从土壤中分离微生物n制备土壤稀释液;n称取土样1.0g， 放入盛99ml无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中，置摇床振荡5min使土壤均匀分散成为土壤悬液（10-2）。用1ml的

4、无菌吸头从中吸取0.5ml土壤悬液，注入事先分装有4.5ml无菌水的试管中，吹吸3次，振荡均匀（10-3）。然后同样方法，配置成稀释度为10-4，10-5，10-6的土壤溶液；实验步骤从土壤中分离微生物n涂布n用一支新的无菌吸头，分别由各浓度土壤稀释液中各吸取100ul，对号较均匀地放入已写好稀释度的牛肉蛋白胨培养基平板上，用无菌玻璃涂棒涂匀。每个浓度做2个平板。实验步骤从土壤中分离微生物n培养n将牛肉蛋白胨培养基平板倒置于370C温箱中培养24h；统计所长出的菌落数；n挑菌（不做）n将培养后所需要的单个菌落（要求是细菌菌落）分别挑取划线于平板上， 370C培养48h检查菌落是否单纯，也可以用

5、显微镜涂片染色镜检是否是单一的微生物；实验步骤从土壤中分离微生物n菌落计数n计算相同稀释度的平均菌落数:n 有较大片菌苔生长时,弃用,以无片菌苔生长的平皿计数;n 若成片菌苔大小不到培养皿的一半,其余一半分布均匀,将此一半计数*2;实验步骤从土壤中分离微生物n菌落计数n选择平均菌落数在30300间的平板:n 只有一个符合此范围时,以该平均菌落数乘稀释倍数即为该样品中微生物总数;n 有两个在30300间时,按两者菌落总数比值决定:比值小于2,取平均;比值大于2,取较少的菌落总数;实验步骤从土壤中分离微生物n菌落计数n所有菌落数均大于300,取稀释度最高的平均菌落数乘稀释倍数;n所有菌落数均小于30,取稀释度最低的平均菌落数乘稀释倍数;n所有菌落数均不在30300间,以最接近30或300的平均菌落数乘稀释倍数;结果与讨论n